检索结果-内蒙古大学图书馆

解剖学报 2006年第6期37卷 650-655页

作者：彭燕陈海滨苏中静陈玲张锦许丽艳广东省免疫病理学重点实验室汕头515041 汕头大学医学院组织学胚胎学教研室汕头515041

目的观察EZH2蛋白在食管鳞癌和腺癌组织中的表达,探讨EZH2蛋白与侵袭、转移程度不同的食管鳞癌及不同病理分级、组织类型食管癌之间的关系。方法采用免疫组织化学染色法、免疫印迹法,分析检测食管癌标本中EZH2蛋白的表达。结果食管癌组... 详细信息

目的观察EZH2蛋白在食管鳞癌和腺癌组织中的表达,探讨EZH2蛋白与侵袭、转移程度不同的食管鳞癌及不同病理分级、组织类型食管癌之间的关系。方法采用免疫组织化学染色法、免疫印迹法,分析检测食管癌标本中EZH2蛋白的表达。结果食管癌组织标本均高表达EZH2蛋白,阳性染色定位于细胞核;部分正常组织、癌旁组织也有弱阳性着色。免疫印迹分析表明,食管鳞癌组织EZH2蛋白的表达明显高于癌旁及正常黏膜组织(P<0.01)。癌旁组织高于正常黏膜组织(P<0.05)。浸润、转移性食管鳞癌EZH2蛋白表达明显上调,与未发生浸润、转移的相比,差异有显著性(P<0.05)。高分化鳞癌EZH2蛋白表达低于中、低分化者;但食管腺癌则相反,高分化腺癌的表达高于中、低分化者。结论EZH2蛋白在食管癌高表达,并与其组织类型、侵袭和转移特性密切相关。

关键词： EZH2蛋白食管癌免疫组织化学免疫印迹法人

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抑制性消减杂交法筛选植入人发角蛋白与单纯脊髓损伤大鼠基因表达的差异

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中国临床康复 2006年第8期10卷 85-88页

作者：徐锡金林新华霍霞朴仲贤朴英杰汕头大学医学院细胞生物学与遗传学教研室广东省汕头市515041 汕头大学医学院中心实验室广东省汕头市515041 南方医科大学组织胚胎学教研室广东省广州市510515

目的:采用抑制性消减杂交筛选植入人发角蛋白大鼠损伤脊髓基因性差异表达。方法:实验于2004-11在汕头大学中心实验室进行。分别从植入人发角蛋白损伤组与单一损伤对照组4thw组织中提取mRNA,反转录成双链cDNA,经RsaI酶切、接头连接、两... 详细信息

目的:采用抑制性消减杂交筛选植入人发角蛋白大鼠损伤脊髓基因性差异表达。方法:实验于2004-11在汕头大学中心实验室进行。分别从植入人发角蛋白损伤组与单一损伤对照组4thw组织中提取mRNA,反转录成双链cDNA,经RsaI酶切、接头连接、两次消减杂交和两次抑制性聚合酶链扩增,而后将消减cDNA产物进行T/A克隆和测序分析。结果:所获植入人发角蛋白脊髓损伤组织差异表达基因的消减cDNA产物散布在280～800bp范围。经蓝白筛选和酶切鉴定,共得到232个阳性克隆。对其中20个做测序分析获得了氨基酸转运蛋白系统A2(Ata2)、细胞色素氧化酶Ⅲ(COXⅢ)、抗过氧化物蛋白5(Prd5)、Tap1蛋白和半胱氨酸蛋白酶抑制剂(Cst3)等5个表达蛋白。结论:prd5、Ata2和COXⅢ分别通过参与脊髓损伤后抗氧化损伤过程,起到抑制自由基、兴奋性氨基酸的产生,减轻Ca离子紊乱的程度,降低了继发性损害对脊髓组织的二次损伤程度;而Tap1蛋白和Cst3则参与人发角蛋白的降解过程。

关键词：脊髓损伤角蛋白基因抑制性消减杂交法筛选植入人发角蛋白基因表达大鼠

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一种基于RNA结合蛋白的RNA loop检测方法

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医学分子生物学杂志 2018年第2期15卷 93-95页

作者：苏中静张田伟刘广宇黄东阳汕头大学医学院组织学与胚胎学教研室广东省汕头市515041 汕头大学医学院细胞生物学教研室广东省汕头市515041

目的探索检测细胞内RNA loop存在的实验方法。方法活细胞状态下交联蛋白核酸复合物、RNA免疫沉淀后在RNA不同位置设计引物，通过定量PCR结果间接检测RNA loop;另外，活细胞状态下交联蛋白核酸复合物后超声断裂核酸片段，相邻断端RNA连... 详细信息

目的探索检测细胞内RNA loop存在的实验方法。方法活细胞状态下交联蛋白核酸复合物、RNA免疫沉淀后在RNA不同位置设计引物，通过定量PCR结果间接检测RNA loop;另外，活细胞状态下交联蛋白核酸复合物后超声断裂核酸片段，相邻断端RNA连接后通过反向PCR的方法直接检测活细胞内RNA loop。结果RNA结合蛋白在RNA的5’端和3’端结合水平高而中间段低，提示有可能存在RNA loop。反向PCR扩增测序获得远距离RNA片段的相连直接证实RNA loop的存在。结论活细胞状态下交联蛋白核酸复合物然后检测RNA loop的技术，期望能为研究的RNA的高级结构和功能提供新的方法。

关键词： RNA loop RNA结合蛋白 RNA免疫沉淀反向PCR

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鼠胚胎期和出生后毛囊下段启动再生表达的Wnt5a

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中国组织工程研究 2020年第31期24卷 5018-5022页

作者：蔡博治陈先才倪娜林伟深袁燕平林常敏黄铿汕头大学医学院第一附属医院分子心脏病学实验室广东省汕头市515041 广西贵港市贵港华美医疗美容门诊部广西壮族自治区贵港市537100 汕头大学医学院临床技能中心广东省汕头市515041 汕头大学医学院第二附属医院急诊科广东省汕头市515041 江西省九江学院附属医院病理科江西省九江市332000 汕头大学医学院组织与胚胎学教研室广东省汕头市515041

背景:Wnt5a是唯一在真皮高表达,与毛囊真皮成分发生密切相关的信号分子。目的:通过观察E12.5-E15.5胎龄的大鼠胚胎皮肤和大鼠触须毛囊上段裸鼠移植诱导毛乳头再生过程Wnt5a的表达,初步研究毛乳头胚胎发生和体外再生的启动机制。方法:将... 详细信息

背景:Wnt5a是唯一在真皮高表达,与毛囊真皮成分发生密切相关的信号分子。目的:通过观察E12.5-E15.5胎龄的大鼠胚胎皮肤和大鼠触须毛囊上段裸鼠移植诱导毛乳头再生过程Wnt5a的表达,初步研究毛乳头胚胎发生和体外再生的启动机制。方法:将孕SD大鼠在E12.5、E13.5、E14.5、E15.5麻醉后处死,取出完整胚胎制作石蜡切片;另取单个SD大鼠触须毛囊切除毛乳头,毛囊上段拔除毛干后移植至Nu/Nu裸鼠背部皮肤;分别取以上胎龄的大鼠胚胎皮肤及裸鼠背部移植部位的毛囊标本,用酶标免疫组化法观察Wnt5a在大鼠胚胎皮肤及大鼠触须毛囊上段裸鼠移植诱导毛乳头再生过程的表达,苏木精-伊红染色观察大鼠触须毛囊上段移植后毛囊下段的再生情况。动物实验均已获得汕头大学医学院动物伦理委员会批准。结果与结论:①E12.5 Wnt5a在表皮细胞表达;E13.5 Wnt5a在表皮细胞表达增强;E14.5 Wnt5a表达由表皮转移至真皮,在真皮细胞浆明显表达;E15.5 Wnt5a表达在真皮结缔组织明显增强,在表皮的表达消失;②大鼠触须毛囊上段移植后第3天开始至第9天,毛囊上段向下形成新的毛球部,恢复完整毛囊结构,再生过程相关组织Wnt5a均呈强阳性表达;③Wnt5a在胚胎毛囊发生前后和毛囊下段再生模型毛乳头形成的部位呈现高表达,说明Wnt信号通路与毛乳头再生有密切的关系,其中Wnt5a可能扮演了非常主要的角色。

关键词：毛囊毛乳头真皮胚胎通路鼠实验再生

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人发角蛋白植入大鼠损伤脊髓部位的电镜观察

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中国临床康复 2003年第4期7卷 562-563,T001页

作者：徐锡金朴英杰霍霞汕头大学医学院中心实验室广东省汕头市515041 解放军第一军医大学人体解剖学与组织胚胎学教研室广东省广州市510515

目的:脊髓外伤后的继发性病理改变,是影响脊髓神经组织再生修复的重要因素。采用人发角蛋白(humanhairkeratin,HHK)植入脊髓损伤(spinalcordinjury,SCI)部位,以期达到减轻继发性损害,诱导和促进损伤脊髓组织的再生。方法:采用改制Ⅱ型... 详细信息

目的:脊髓外伤后的继发性病理改变,是影响脊髓神经组织再生修复的重要因素。采用人发角蛋白(humanhairkeratin,HHK)植入脊髓损伤(spinalcordinjury,SCI)部位,以期达到减轻继发性损害,诱导和促进损伤脊髓组织的再生。方法:采用改制Ⅱ型纽约大学(NewYorkUniversity,NYU)装置,在建立大鼠脊髓损伤模型基础上,将经过特殊处理后能在体内降解的HHK植入大鼠损伤脊髓部位,对植入后1,4,12,26周的损伤脊髓组织进行电镜观察。结果:第1周为急性炎症时期,HHK周围结构紊乱,集聚大量的炎症细胞,灰质出现坏死;第4周时,炎症细胞减少,巨噬细胞吞噬髓鞘,胶质细胞增生;第12周时,多核巨噬细胞出现在HHK周围,HHK开始崩解,崩解物被多核巨细胞所吞噬;第26周时,神经轴突沿HHK间隙排列生长,灰质中神经元数量增加,HHK周边细胞有序生长。结论:植入的人发角蛋白具有诱导神经胶质细胞增生,阻止脊髓空洞的形成,从而减轻了脊髓损伤组织的继发性伤害的程度,改善了神经元再生的外环境,并可以桥接诱导神经轴突定向再生的作用。

关键词：脊髓损伤损伤部位人发角蛋白植入大鼠电镜观察

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低温冻存脐血来源EBV-LMP2树突状细胞疫苗CD86与CD83的表达

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中华医学实践杂志 2004年第9期3卷 769-771页

作者：黄阳亮莫雪莲李洁赵云开陈林兴张锦堃广东省汕头市汕头大学医学院2000级实验班科研组 515041 广东省汕头市汕头大学医学院第二附属医院 515041 广东省汕头市汕头大学医学院组织学与胚胎学教研室 515041

目的制备低温冻存后转染EBV-LMP2、来源于人脐血的树突状细胞(dendritic cell,DC)疫苗,观察分析疫苗的形态和表型.方法采用CD34+干细胞试剂盒,经MACS分选人脐血CD34+干细胞,GM-CSF和TNF-α诱导14天分化扩增为DC,低温冻存,再用包含EBV-L... 详细信息

目的制备低温冻存后转染EBV-LMP2、来源于人脐血的树突状细胞(dendritic cell,DC)疫苗,观察分析疫苗的形态和表型.方法采用CD34+干细胞试剂盒,经MACS分选人脐血CD34+干细胞,GM-CSF和TNF-α诱导14天分化扩增为DC,低温冻存,再用包含EBV-LMP2基因的重组腺病毒感染DC制备EBV-LMP2-DC疫苗.倒置显微镜动态观察DC的形态,流式细胞仪检测EBV-LMP2-DC疫苗的CD86和CD83表型.结果 CD34+细胞在体外分化扩增过程中,数量逐渐增多,细胞形态由圆形逐渐变为不规则的毛刺状,并聚集成簇,发育为典型的成熟DC形态;冻存复温后,细胞回收率>85%;制备的EBV-LMP2-DC疫苗保持典型的成熟DC形态,细胞表型表达率CD86为71.69%,CD83为61.17%.结论人脐血来源的DC,低温冻存复温后制备的EBV-LMP2-DC疫苗仍保持功能成熟DC形态和表型,为下一步应用EBV-LMP2-DC疫苗防治鼻咽癌的临床研究提供理想的疫苗和实验依据.

关键词：树突状细胞基因转染表型脐血低温冻存

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人肝癌细胞冷冻保存方法研究

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世界华人消化杂志 2000年第6期8卷 714-714页

作者：周燕琼刘小辉刘幸平曾自立汕头大学医学院组织学与胚胎学教研室广东省汕头市515031

有关利用普通冰箱-18℃冷冻保存组织及细胞,迄今未见报道.本实验对-18℃冷冻保存人肝癌细胞株 Bel-7402进行实验研究,现报告如下:1 材料和方法人肝癌细胞株 Bel-7402引自中山医科大学实验动物中心,置于含100 mL/L新生牛血清的 RPMI 164... 详细信息

有关利用普通冰箱-18℃冷冻保存组织及细胞,迄今未见报道.本实验对-18℃冷冻保存人肝癌细胞株 Bel-7402进行实验研究,现报告如下:1 材料和方法人肝癌细胞株 Bel-7402引自中山医科大学实验动物中心,置于含100 mL/L新生牛血清的 RPMI 1640培养液中,在37℃,50 mL/L CO2,饱湿条件下传代培养,细胞贴壁生长.将处于对数生长期的细胞经 D-Hank’s 液洗2次,后用2.5 g/L 胰蛋白酶消化,再用含100mL/L 新生牛血清的1640液洗涤1次.后分别用含0mL/L,5mL/L,10mL/L,15mL/L,20mL/L DMSO的完全培养基（含100mL/L 新生牛血清1640）重新制成细胞悬液.细胞浓度保持在1×106/mL 左右.将细胞悬液置于2mL的硬塑料冻存管中,加盖密封,做好标记.直接迅速地放入-18℃冰箱中冻存.每种浓度各分装12支冻存管,每管装1 mL 悬液.于1 wk,1 mo,2 mo,3 mo 后分别进行融冻.将上述的冻存管,直接从-18℃冰箱中取出,迅速投入40℃水浴中使之迅速完全融化（约1min 左右）.迅速倒入已备好的RPMI 1640营养液中,并用 RPMI 1640洗涤冻存管2次.后离心,再用 RPMI 1640洗涤细胞2次,置瓶培养;同时制成一定量的细胞悬液,取其中0.5mL 的细胞悬液加入4mL/L 台盼蓝染液0.5 mL,混匀,取少许滴于计数板的计数池内,静置2min 后计算细胞存活率（不着蓝色的细胞为活细胞）.细胞存活率=（活细胞数）/（活细胞数+死细胞数）×100%观察指标:①存活率:台盼蓝拒染试验计数;②冻存后复苏的细胞接种入培养瓶,置于含100mL/L 新生牛血清的 RPMI1640培养基中,于37℃,50 mL/L CO2,饱湿培养箱中培养,24 h 后半保留换液,每天观察.2 结果-18℃条件下用不同浓度的 DMSO 为冷冻保护剂,冻存Bel-7402 1 wk,1 mo,2 mo 及3 mo 后细胞存活率及镜下观察到的生长状况见表1.表1 不同浓度 DMSO 对 Bel-7402的影响DMSO 浓度细胞存活率（%）接种后见细胞贴壁生长天数（mL/L） 1 wk 1 mo 2 mo 3mo 1 wk 1 mo 2 mo 3 mo0 22.1 17.2 8.2 5.6 ————50 84.3 82.3 78.1 70.1 ————100 90.3 86.5 84.1 79.2 1 2 3 5150 89.8 85.3 83.9 78.9 1 2 3 4200 85.1 81.6 78.3 74.0 1 3 4

关键词：冷冻保存二甲基亚砜 Bel-7402 肝癌细胞

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