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中国组织工程研究 2017年第18期21卷 2881-2889页

作者：周勇贾兆锋刘威朱伟民崔家鸣何勇陈洁琳王大明彭亮权王大平广州医科大学广东省广州市510182 深圳市组织工程重点实验室广东省深圳市518035 深圳市第二人民医院运动医学科广东省深圳市518035

背景:混合技术可增强材料的热敏性、机械性能、黏弹性和结构性能,还可改善混合材料的生物降解性、生物相容性和其他生物医学性质。目的:制备聚乙烯醇/壳聚糖多孔水凝胶材料,观察其修复软骨缺损的效果。方法:在加入与不加入表面活性剂聚... 详细信息

背景:混合技术可增强材料的热敏性、机械性能、黏弹性和结构性能,还可改善混合材料的生物降解性、生物相容性和其他生物医学性质。目的:制备聚乙烯醇/壳聚糖多孔水凝胶材料,观察其修复软骨缺损的效果。方法:在加入与不加入表面活性剂聚山梨酯80的情况下,通过冷冻-解冻循环及乳化发泡-冷冻冰晶相分离法制备不同组分的聚乙烯醇/壳聚糖多孔水凝胶材料(聚乙烯醇与壳聚糖的质量比分别为5∶5、6∶4、7∶3、8∶2及9∶1),以含水率、溶胀度、热行为、力学性能及细胞相容性实验筛选聚乙烯醇与壳聚糖最佳质量比,进行动物体内实验。取18只新西兰大白兔,制作双侧膝关节软骨缺损模型,随机分3组干预,实验组缺损处植入负载骨髓间充质干细胞的聚乙烯醇/壳聚糖多孔水凝胶材料,对照组植入聚乙烯醇/壳聚糖水凝胶,空白对照组未植入任何材料,植入12周后,组织学观察修复效果。结果与结论:(1)成功制备了聚乙烯醇/壳聚糖多孔复合水凝胶,以加入聚山梨酯80、聚乙烯醇与壳聚糖质量比为6∶4的水凝胶含水量≥90%,力学性能良好,理化性能稳定,孔隙率≥90%,内部疏松多孔的网状结构更利于细胞生长增殖,具有良好细胞相容性,选择其进行动物体内植入实验;(2)空白对照组软骨缺陷完全没有再生,表面只有一层薄薄的纤维覆盖;对照组软骨缺陷由类软骨组织填充,表面欠光滑,填充不完整,但可见大量类软骨细胞长入;实验组修复效果最好,表面平整,由大量细胞填充;(3)结果表明,复合骨髓间充质干细胞的聚乙烯醇/壳聚糖多孔水凝胶材料可促进软骨缺损的修复。

关键词：生物材料软骨生物材料水凝胶聚乙烯醇壳聚糖骨髓间充质干细胞软骨修复组织工程软骨

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直接共培养诱导人脐带间充质干细胞向软骨细胞的分化

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中国组织工程研究 2017年第1期21卷 18-24页

作者：李兴福段莉梁宇杰朱伟民王大平广州医科大学广东省广州市510182 深圳市组织工程重点实验室深圳市第二人民医院广东省深圳市518035 北京大学深圳研究生院广东省深圳市518035

背景:软骨细胞和间充质干细胞都可用于构建组织工程化软骨,但体外培养的软骨细胞容易发生去分化,表型难以维持,以致其临床应用受到限制。目的:探讨人脐带间充质干细胞与人关节软骨细胞直接共培养对人脐带间充质干细胞成软骨诱导分化的影... 详细信息

背景:软骨细胞和间充质干细胞都可用于构建组织工程化软骨,但体外培养的软骨细胞容易发生去分化,表型难以维持,以致其临床应用受到限制。目的:探讨人脐带间充质干细胞与人关节软骨细胞直接共培养对人脐带间充质干细胞成软骨诱导分化的影响,以及直接共培养的最佳比例。方法:分离培养人脐带间充质干细胞并通过流式细胞仪鉴定表面标志。实验分为6组:直接共培养组按照人脐带间充质干细胞与人关节软骨细胞比例为1∶1,3∶1及5∶1(人脐带间充质干细胞∶人关节软骨细胞)进行共培养;阳性对照组用转化生长因子β1细胞因子诱导;人关节软骨细胞空白对照组和人脐带间充质干细胞空白对照组。免疫荧光细胞化学检测Ⅱ型胶原(COL2A1)的表达水平;Western blot检测细胞SOX9Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原蛋白表达水平;实时荧光定量qRT-PCR检测SOX9、Col1a1、Col2a1 m RNA表达。结果与结论:(1)成功分离并鉴定人脐带间充质干细胞;(2)人脐带间充质干细胞与软骨细胞共培养28 d后,共培养组及单独药物诱导的阳性对照组Ⅱ型胶原免疫荧光检测均呈阳性;(3)阳性对照组的Col2a1 mRNA表达水平高于共培养组,但Ⅱ型胶原蛋白表达总量低于共培养组,1∶1共培养组的Col2a1 mRNA表达水平高于3∶1和5∶1共培养组。阳性对照组和共培养组的Col1a1 m RNA表达水平和Ⅰ型胶原蛋白表达水平均低于人关节软骨细胞空白对照组。(4)结果说明,人脐带间充质干细胞和人关节软骨细胞直接共培养可明显促进人脐带间充质干细胞向软骨样细胞诱导分化,并有效抑制细胞纤维化,从缩减软骨细胞用量方面看,直接共培养体系的适宜比例为5∶1。采用直接共培养诱导人脐带间充质干细胞向软骨细胞分化的成本较低,是一种较为经济合理的诱导方法。

关键词：干细胞脐带脐血干细胞共培养人脐带间充质干细胞人关节软骨细胞软骨细胞分化国家自然科学基金

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HSNGLPL短肽修饰的聚氨酯的体内反应性分析

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中国临床解剖学杂志 2017年第3期35卷 271-275,281页

作者：肖将尉史丹丹术蓉谷瑞彩吴刚廖华南方医科大学解剖学教研室广东省组织构建与检测重点实验室广州510515 华南理工大学材料科学与工程学院广州510641

目的研究短肽HSNGLPL修饰的聚氨酯在体内与体外的生物相容性与生物活性。方法将单纯的HSNGLPL短肽溶液、三种不同浓度HSNGLPL短肽修饰的聚氨酯(P-PU)及聚氨酯(BDOPU)注射或种植在小鼠体内或在体外与C2C12细胞共培养,通过H&E检测体... 详细信息

目的研究短肽HSNGLPL修饰的聚氨酯在体内与体外的生物相容性与生物活性。方法将单纯的HSNGLPL短肽溶液、三种不同浓度HSNGLPL短肽修饰的聚氨酯(P-PU)及聚氨酯(BDOPU)注射或种植在小鼠体内或在体外与C2C12细胞共培养,通过H&E检测体内局部炎症渗出、免疫荧光检测体内单核/巨噬细胞渗出凋亡和肌纤维的再生以及通过细胞增殖毒性反应检测体外共培养结果。结果在体外,BDO-PU、L-P-PU和M-P-PU是合格的生物材料,具有优良的生物相容性;在体内,BDO-PU只在材料28d诱发持久的单核/巨噬细胞的渗出和肌纤维的坏死,而P-PU在肌肉内诱发的炎症、坏死反应比BDO-PU更加复杂、持久,持续时间甚至超过56d。对于细胞凋亡而言,P-PU材料周围凋亡的巨噬细胞数却明显的低于BDO-PU组。结论 HSNGLPL修饰的聚氨酯在体内与体外具有生物活性及优良的生物相容性。

关键词：聚氨酯 HSNGLPL短肽炎症反应免疫渗出

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通过生物信息学分析来筛选与探索骨关节炎致病机制中的枢纽基因

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中国科技期刊数据库医药 2020年第1期 00096-00098页

作者：胡啸天邓志钦段莉李文翠王大平安徽医科大学深圳二院临床学院安徽合肥230000 深圳市组织工程重点实验室广东省智能化数字骨科工程技术研究中心深圳市第二人民医院(深圳大学附属第一医院)广东深圳518035 深圳市第二人民医院周围神经手足外科广东深圳518035

骨关节炎(OA)是世界范围内最常见的退行性疾病。许多研究者正在研究OA的发病机制。OA相关枢纽基因的筛选与验证是探索其潜在分子机制的重要内容。因此,本研究的目的是利用生物信息学来筛选与研究枢纽基因在OA发病机制中可能起到的作用... 详细信息

骨关节炎(OA)是世界范围内最常见的退行性疾病。许多研究者正在研究OA的发病机制。OA相关枢纽基因的筛选与验证是探索其潜在分子机制的重要内容。因此,本研究的目的是利用生物信息学来筛选与研究枢纽基因在OA发病机制中可能起到的作用机制。我们从基因表达集合 (GEO)中收集了GSE55457的芯片数据集,共20个样本,分为10个OA膝关节样本和22个正常膝关节样本。生物信息学被用来筛选差异表达基因(DEGs)。共筛选得到314个DEGs。后通过构建蛋白-蛋白相互作用网络(PPI)分为289个上调基因以及下调基因25个。其功能和通路的富集分析分为生物过程(BP)、细胞成分(CC)和分子功能(MF)三大类。此外,我们通过模块分析鉴定出了5个枢纽基因,分别是PRPF6、CD44、PTPN11、UBR2和NR5A1。并且它们都是上调基因。综上所述,本研究阐明了OA发病机制中枢纽基因的表达变化以及可能的作用机理。

关键词：骨关节炎差异表达基因蛋白质相互作用网络基因本体论 KEGG通路

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利用海藻酸水凝胶构建仿肝板肝组织三维共培养模型

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重庆医学 2017年第17期46卷 2305-2308页

作者：王高尚贾志栋李阳彭青高毅南方医科大学珠江医院肝胆二科/国家重点实验室器官衰竭协同创新中心/广东省人工器官与组织工程研究中心广州510282

目的利用海藻酸水凝胶构建一种新的肝细胞三维共培养模型。方法利用海藻酸钠、微流控芯片,以及肝细胞C3A和脐静脉内皮细胞***926制备出海藻酸钠水凝胶微纤维,实验组为仿肝板组,同时制备出混合无序水凝胶微纤维作为对照组。利用活细胞双... 详细信息

目的利用海藻酸水凝胶构建一种新的肝细胞三维共培养模型。方法利用海藻酸钠、微流控芯片,以及肝细胞C3A和脐静脉内皮细胞***926制备出海藻酸钠水凝胶微纤维,实验组为仿肝板组,同时制备出混合无序水凝胶微纤维作为对照组。利用活细胞双荧光标记验证微纤维内两种细胞排列结构,将微纤维培养1周,每天观察微纤维形态,检测肝细胞活力及清蛋白(Alb)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH-L)、α1抗胰蛋白酶(α1AT)、凝血因子Ⅶ(FⅦ)、谷胱甘肽S转移酶α1(GSTα1)、细胞色素P450氧化酶1A2(CYP1A2)的水平。结果仿肝板组水凝胶内C3A细胞在中间,有2~3排,***926细胞位于C3A细胞两侧,呈现肝板结构排布;对照组水凝胶内两种细胞则混杂在一起呈无序状态;大约3d肝组织条索形成;两组水凝胶微纤维直径随时间变化差异无统计学意义(P>0.05);仿肝板组肝细胞活力在第5天达到最大值,对照组在第6天达到最大值,两组除第1天较接近外,其余各天仿肝板组均高于对照组;两组清蛋白分泌水平变化趋势基本相同,在第3天达到最大值,第4天开始下降;仿肝板组ALT、AST、LDH-L在第3天下降到最小值,第4天以后变化趋势和对照组相同;两组α1AT除第5天外其余各时间点比较差异均有统计学意义(P<0.05);两组GSTα1分泌量随时间持续上升,仿肝板组各时间点明显高于对照组(P<0.05);仿肝板组FⅦ分泌量前7d逐渐升高,对照组于第2天持续下降,仿肝板组第3天开始明显高于对照组(P<0.05);对照组细胞内CYP1A2水平随时间变化不明显,仿肝板组从第4天开始明显高于对照组(P<0.05)。结论成功构建出一种仿肝板肝组织三维共培养模型,肝细胞功能有望得到长时间维持。

关键词：海藻酸钠水凝胶微流体肝细胞肝板三维共培养

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维生素C对大鼠背根神经节神经元突起生长的影响

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中国临床解剖学杂志 2016年第3期34卷 308-311页

作者：李媛媛文锦坤潘梦婕李莉霞王祥海钱长晖郭家松南方医科大学基础医学院组织学与胚胎学教研室广州510515 广东省组织工程构建与检测重点实验室广州510515

目的研究维生素C(Vitamin C,Vit.C)对大鼠背根神经节神经元轴突生长的影响,为探讨神经再生新策略提供基础。方法取新生SD大鼠背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)进行神经元分离培养。在培养液中加入不同浓度的维生素C(0,100,200,400... 详细信息

目的研究维生素C(Vitamin C,Vit.C)对大鼠背根神经节神经元轴突生长的影响,为探讨神经再生新策略提供基础。方法取新生SD大鼠背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)进行神经元分离培养。在培养液中加入不同浓度的维生素C(0,100,200,400μmol/L)处理24 h后通过βIII tubulin,Rho A免疫组化以及鬼笔环肽染色对神经元突起的数量和长度、生长锥伪足数量、神经元胞体大小及其内Rho A表达强度进行分析。结果神经元突起的数量、长度,生长锥伪足的数量以及神经元胞体面积均随维生素C的浓度增高而增长,而神经元内Rho A表达强度则相应降低。结论维生素C可促进体外大鼠背根节神经元突起的生长,这可能与Rho A表达下调相关。

关键词：维生素C 神经元突起生长 RhoA

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Ⅱ型胶原水凝胶在软骨损伤修复中的研究进展

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组织工程与重建外科杂志 2017年第4期13卷 228-231页

作者：梁仟朱飞燕黄江鸿王大平熊建义汕头大学医学院广东省汕头市515041 深圳市第二人民医院国家重点骨科、深圳市组织工程重点实验室、深圳市数字骨科技术工程实验室广东省深圳市518035

作为一类新型的天然细胞支架,Ⅱ型胶原水凝胶具有良好的生物特性和理化性质,对软骨损伤修复具有很大的研究意义和临床应用价值。本文综述了近年来国内外Ⅱ型胶原水凝胶在软骨损伤修复中的研究进展,为软骨组织工程细胞支架的选择提供参考。

关键词： Ⅱ型胶原水凝胶支架材料种子细胞软骨组织工程

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不同应激条件下分化抑制因子Id2在成肌细胞C2C12中的表达与分布

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中国临床解剖学杂志 2017年第2期35卷 172-176页

作者：赖桂华胡晓芳张翔卢兴浩俞鹏余磊蚌埠医学院人体解剖学教研室安徽蚌埠233030 遵义医学院珠海校区人体解剖学教研室广东珠海519041 广州医科大学中华生物医学工程杂志编辑部广州511436 南方医科大学人体解剖学教研室广东省组织构建与检测重点实验室广州510515

目的观察在不同应激条件下成肌细胞C2C12中Id2的表达与细胞分布情况,并探讨其表达与分布变化的机制。方法体外培养C2C12细胞,分别采用不同浓度H2O2氧化应激诱导细胞增殖或凋亡,不同浓度的促炎症信号LPS诱导细胞增殖,以及2%马血清诱导细... 详细信息

目的观察在不同应激条件下成肌细胞C2C12中Id2的表达与细胞分布情况,并探讨其表达与分布变化的机制。方法体外培养C2C12细胞,分别采用不同浓度H2O2氧化应激诱导细胞增殖或凋亡,不同浓度的促炎症信号LPS诱导细胞增殖,以及2%马血清诱导细胞分化。利用RT-PCR比较不同应激条件下Id2 mRNA的表达,同时利用免疫荧光检测Id2蛋白的表达强度和细胞分布。结果25μmol/l和50μmol/l的H_2O_2诱导下,Id2 mRNA表达比对照组分别增高80.5%和55.5%,荧光显著增强,Id2呈现细胞核与细胞质均匀分布。100 ng/ml和500 ng/ml的LPS亦诱导Id2 mRNA表达,较对照组增高21.7%和40.2%,荧光增强,但此时Id2以细胞核分布为主,细胞质少量分布。在2%马血清诱导成肌细胞分化后,Id2 mRNA表达显著降低,荧光显著减弱,并以细胞质分布为主。结论不同应激条件下Id2在成肌细胞中呈现不同的表达和分布,与其对骨骼肌损伤后再生的调控作用密切相关,表明Id2是骨骼肌损伤后再生的重要调控分子。

关键词：成肌细胞 Id2 应激条件表达分布

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细胞间相互作用影响iPSc来源肝细胞的成熟

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中国细胞生物学学报 2016年第11期38卷 1344-1350页

作者：王鼎郭丽媛李伟强广州医科大学附属第三医院妇产科研究所实验部广东省生殖与遗传重点实验室广州510150 中山大学干细胞与组织工程中心教育部重点实验室广州510080

获得功能性的肝细胞可用于研究肝细胞再生机理,并可为细胞移植和药物筛选提供生物材料。该研究采用四步法诱导多能干细胞分化成肝细胞,比较传代和不传代分化细胞的形态和肝细胞特异标志的差异表达。结果发现,利用诱导多能干细胞分化可... 详细信息

获得功能性的肝细胞可用于研究肝细胞再生机理,并可为细胞移植和药物筛选提供生物材料。该研究采用四步法诱导多能干细胞分化成肝细胞,比较传代和不传代分化细胞的形态和肝细胞特异标志的差异表达。结果发现,利用诱导多能干细胞分化可获得白蛋白(albumin,ALB)阳性的成熟肝细胞,不传代法获得的细胞更接近于肝细胞形态,两组均获得甲胎蛋白(alphafetoprotein,AFP)和ALB阳性表达的细胞;GATA6(GATA binding protein 6)和HNF4A(hepatocyte nuclear factor 4 alpha)表达水平没有显著性差异,但不传代法分化细胞的AFP和ALB表达量高于传代法,存在显著性差异。结果提示,细胞因子与细胞间、多细胞间相互作用等因素影响多能干细胞的分化,细胞间相互作用有利于肝细胞定向诱导分化过程中肝细胞的成熟。

关键词：诱导多能干细胞诱导分化细胞连接肝细胞肝细胞成熟

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新型3D打印PLGA/Ⅰ型胶原复合材料支架用于软骨再生

新型3D打印PLGA/Ⅰ型胶原复合材料支架用于软骨再生

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2017中国生物材料大会

作者：刘威何勇陈洁琳段莉黄江鸿朱伟民熊建义刘黎军王大平深圳市第二人民医院广东省深圳市 518000 深圳市第二人民医院深圳市组织工程重点实验室 518000 深圳市第二人民医院创伤骨科 518000 深圳市第二人民医院广东省深圳市 518000 深圳市第二人民医院深圳市组织工程重点实验室 518000 深圳市第二人民医院广东省深圳市 518000 深圳市第二人民医院创伤骨科 518000

运动损伤、炎症、退变等导致的关节软骨损伤是临床常见病,也是治疗难点.由于软骨缺少血管及神经,软骨细胞软骨细胞又被限制在一个由胶原和蛋白多糖组成的致密陷窝里,活动严重受限,导致软骨再生及自我修复能力极为有限.本实验尝试采用新... 详细信息

运动损伤、炎症、退变等导致的关节软骨损伤是临床常见病,也是治疗难点.由于软骨缺少血管及神经,软骨细胞软骨细胞又被限制在一个由胶原和蛋白多糖组成的致密陷窝里,活动严重受限,导致软骨再生及自我修复能力极为有限.本实验尝试采用新型溶剂系统溶液溶质，进而使用LDM进行制备复合支架，并对所制备的支架进行材料学和体外生物相容性等一系列表征，研究其应用于软骨再生的可能性。

关键词：软骨再生复合支架聚乳酸-羟基乙酸共聚物 Ⅰ型胶原低温快速成型

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