检索结果-内蒙古大学图书馆

中国人兽共患病学报 2012年第6期28卷 549-554,565页

作者：行李琳倪淑媛李煜生南方医科大学第一临床医学院广州510515 南方医科大学南方医院急诊科广州510515 南方医科大学基础医学院病理生理学教研室教育部重大疾病的转录组和蛋白质组学重点实验室和广东省蛋白质组学重点实验室广州510515

目的探讨呼吸道合胞病毒(RSV)感染呼吸道上皮细胞后表达上调的粘蛋白1(MUC1)是否可以通过物理屏障作用阻止RSV接近并感染呼吸道上皮细胞,进而抑制炎症反应。方法我们通过向两种呼吸道上皮细胞系(A549和HEp-2)中转染MUC1真核表达载体pcDN... 详细信息

目的探讨呼吸道合胞病毒(RSV)感染呼吸道上皮细胞后表达上调的粘蛋白1(MUC1)是否可以通过物理屏障作用阻止RSV接近并感染呼吸道上皮细胞,进而抑制炎症反应。方法我们通过向两种呼吸道上皮细胞系(A549和HEp-2)中转染MUC1真核表达载体pcDNA3.1-MUC1的方法过表达MUC1,再应用相同感染复数的RSV分别感染过表达MUC1和转染对照质粒pcDNA3.1的呼吸道上皮细胞,最后比较感染两种细胞内RSV的滴度。结果 RSV成功感染体外培养的两种呼吸道上皮细胞,且RSV在HEp-2细胞内形成的空斑较A549细胞内形成的空斑易于计数。过表达MUC1和转染对照质粒pcDNA3.1的呼吸道上皮细胞内病毒滴度无显著差异。结论呼吸道上皮细胞过表达的MUC1不能抑制RSV接近并感染呼吸道上皮细胞,即MUC1不是通过物理屏障作用抑制RSV诱导炎症反应。

关键词：呼吸道合胞病毒呼吸道上皮细胞粘蛋白1 抑制炎症物理屏障

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腺病毒5型和7型感染诱导呼吸道上皮细胞黏蛋白1表达的差异性研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2012年第2期32卷 172-177页

作者：张梦雯倪淑媛李煜生南方医科大学第一临床医学院广州510515 南方医院急诊科广州510515 南方医科大学基础医学院病理生理学教研室广东省蛋白质组学重点实验室教育部重大疾病的转录组与蛋白组学重点实验室广州510515

目的为探讨人类呼吸道腺病毒感染自限性的分子机制，对人类常见呼吸道腺病毒5型（AdS）和7型（Ad7）感染对呼吸道上皮细胞抑炎分子——黏蛋白1（MUC1）表达的影响进行初步研究，并探讨两者差异性。方法分别用Ad7和AdS感染呼吸道上皮细胞... 详细信息

目的为探讨人类呼吸道腺病毒感染自限性的分子机制，对人类常见呼吸道腺病毒5型（AdS）和7型（Ad7）感染对呼吸道上皮细胞抑炎分子——黏蛋白1（MUC1）表达的影响进行初步研究，并探讨两者差异性。方法分别用Ad7和AdS感染呼吸道上皮细胞A549构建感染模型。qRT-PCR和Westernblot分别检测感染后MUC1mRNA转录水平及蛋白表达水平变化。结果Ad5感染A549细胞后MUCImRNA转录水平及MUC1蛋白表达水平均可见上调，且呈一定的时间效应；而Ad7感染后未观察到此现象，延长Ad7感染时间后，仍未观察到MUC1mRNA转录上调。结论人类呼吸道AdS感染呼吸道上皮细胞初期，可诱导上调抑炎分子MUC1表达，提示MUC1全部或部分参与到Ad5感染的自限性过程。但Ad7感染不能诱导上调MUC1表达，其感染的自限性来源于其他机制。

关键词：腺病毒5型腺病毒7型呼吸道上皮细胞黏蛋白1 炎症调控

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双特异性磷酸酶1：炎症反应的负调控因子

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国际免疫学杂志 2012年第5期35卷 338-340页

作者：殷为梅柱中南方医科大学病理生理学教研室广东省蛋白质组学重点实验室广州510515

炎症是机体对外界刺激的一种防御性反应，通常情况下对机体是有益的，但其失调则可导致对机体自身组织的攻击而产生病变，因此炎症反应必定要受到机体内外环境的严密调控以保证其正常进行。正常情况下，炎症刺激如病原微生物感染可激活... 详细信息

炎症是机体对外界刺激的一种防御性反应，通常情况下对机体是有益的，但其失调则可导致对机体自身组织的攻击而产生病变，因此炎症反应必定要受到机体内外环境的严密调控以保证其正常进行。正常情况下，炎症刺激如病原微生物感染可激活细胞内的多条信号通路，而丝裂原激活的丝裂原激活的蛋白激酶（MAPK）信号传导通路是其中最为重要的一种。双特异性磷酸酶1（DUSP1，又称为MKP1）可特异性地抑制MAPK家族成员p38、JNK和ERK等的活性，是细胞中介导炎症反应的自限以及促进炎症消退的重要调控因子。

关键词：双特异性磷酸酶1 丝裂原激活的蛋白激酶炎症反应

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妊娠期糖尿病合并妊娠期高血压疾病血清差异蛋白的鉴定

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南方医科大学学报 2011年第7期31卷 1224-1227页

作者：王硕石胡水旺钟梅南方医科大学南方医院妇产科广东广州510515 南方医科大学病理生理学教研室广东省蛋白质组学重点实验室广东广州510515

目的寻找妊娠期糖尿病合并妊娠期高血压疾病的分子标记物,为筛查及防治该类疾病提供分子生物学基础。方法收集妊娠期高血压疾病、妊娠期糖尿病、妊娠期糖尿病合并妊娠期高血压疾病患者的静脉血清标本各4份,去除高丰度的免疫球蛋白和白... 详细信息

目的寻找妊娠期糖尿病合并妊娠期高血压疾病的分子标记物,为筛查及防治该类疾病提供分子生物学基础。方法收集妊娠期高血压疾病、妊娠期糖尿病、妊娠期糖尿病合并妊娠期高血压疾病患者的静脉血清标本各4份,去除高丰度的免疫球蛋白和白蛋白。应用十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)技术将可溶性血清总蛋白分离。切取在不同样品中显示明显差异的蛋白条带,酶解后使用质谱技术对所得的差异蛋白进行鉴别。运用生物信息学分析差异蛋白的生物学功能。结果将上述去除高丰度蛋白的标本进行3次重复的SDS-PAGE,确定了显示显著差异的蛋白条带。质谱分析结果表明这些差异性蛋白分别为:结合珠蛋白、SMG8蛋白和凋亡诱导因子-1。结论为建立妊娠期代谢性疾病的蛋白质数据库提供了基础性数据。鉴定了与该疾病显著相关的部分蛋白,为进一步预防该疾病、改善妊娠结局以及阐明该疾病的分子机制提供了可参考的实验依据。

关键词：妊娠期糖尿病合并妊娠期高血压疾病妊娠期高血压疾病妊娠期糖尿病差异蛋白质谱

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眼镜蛇毒组分抑制人神经胶质瘤U251细胞增殖及其机制研究

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中国病理生理杂志 2011年第7期27卷 1309-1314页

作者：卢康荣孔天翰董伟华南方医科大学教育部和广东省共建重大疾病的转录组和蛋白质组学重点实验室广东广州510515 广州医学院病理生理学教研室广东广州510182

目的:探讨眼镜蛇毒组分对人神经胶质瘤U251细胞增殖抑制作用及其机制。方法:采用MTT法比较各种蛇毒组分对U251细胞增殖的抑制效果并筛选出高效组分,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期,激光共聚焦显微镜和电子显微镜观察蛇毒组分作用U... 详细信息

目的:探讨眼镜蛇毒组分对人神经胶质瘤U251细胞增殖抑制作用及其机制。方法:采用MTT法比较各种蛇毒组分对U251细胞增殖的抑制效果并筛选出高效组分,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期,激光共聚焦显微镜和电子显微镜观察蛇毒组分作用U251细胞后的形态学变化。结果:11种眼镜蛇毒组分对体外培养的神经胶质瘤细胞U251均有不同程度的生长抑制作用,其中组分KDⅡ-3对肿瘤细f胞的抑制作用呈现剂量和时间依赖性。不同浓度(1、3.75、7.5、15 mg/L)KDⅡ-3作用细胞24 h后,其凋亡率分别为13.3%、17.7%、20.0%、22.4%,且可见到"亚G1期"峰。KDⅡ-3还将U251的细胞周期阻滞在G0/G1期。7.5 mg/L KDⅡ-3作用U251细胞24h后激光共聚焦显微镜观察显示细胞膜皱缩,染色质浓缩、碎裂,透射电镜观察显示细胞核固缩,染色质凝聚。结论:眼镜蛇毒组分KDⅡ-3可抑制神经胶质瘤细胞U251的增殖,促进细胞凋亡。

关键词：中华眼镜蛇毒神经胶质瘤细胞增殖凋亡

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Rac1-GTPase慢病毒的构建及生物学活性鉴定

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南方医科大学学报 2010年第2期30卷 197-201页

作者：王斌李娟张磊张琳张璐南方医科大学病理生理学教研室/广东省功能蛋白质组学重点实验室广东广州510515 南方医科大学组织学与胚胎学教研室广东广州510515

目的构建携带绿色荧光蛋白的Rac1-GTPase显性负效突变体(Rac1N17)和组成型活性突变体(Rac1L61)的慢病毒。方法构建Rac1N17和Rac1L61慢病毒表达质粒,并以酶切和测序等方法鉴定。利用ViraPowerTM慢病毒表达系统包装制备Rac1-GTPase突变体... 详细信息

目的构建携带绿色荧光蛋白的Rac1-GTPase显性负效突变体(Rac1N17)和组成型活性突变体(Rac1L61)的慢病毒。方法构建Rac1N17和Rac1L61慢病毒表达质粒,并以酶切和测序等方法鉴定。利用ViraPowerTM慢病毒表达系统包装制备Rac1-GTPase突变体慢病毒上清,用其感染大鼠前皮质神经元,分别进行Rac1生物学活性检测、细胞转染效率鉴定与神经元形态学观察。结果构建的Rac1N17和Rac1L61慢病毒表达质粒经酶切与测序鉴定正确,包装的慢病毒滴度为1×106TU/ml。用制备的慢病毒上清感染原代培养的前皮质神经元,Rac1生物学活性检测结果显示Rac1N17慢病毒显著抑制表皮生长因子诱导的Rac1活性的升高,而Rac1L61慢病毒感染神经元Rac1活性显著升高。感染效率鉴定显示病毒上清可感染80%以上的前皮质神经元。形态学观察显示经慢病毒感染后的神经元其胞体与树突分支清晰可见。结论成功制备了Rac1N17和Rac1L61慢病毒,并成功实现了慢病毒感染前皮质神经元,为进一步研究Rho蛋白家族信号通路提供了一个重要工具。

关键词： Rac1-GTPase 慢病毒绿色荧光蛋白生物学活性

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髓样相关蛋白8真核表达载体的构建及其细胞内定位

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实用医学杂志 2010年第6期26卷 907-909页

作者：伍丽琼吴翠玲王娟徐佳邓鹏姜勇南方医科大学病理生理学教研室广东省蛋白质组学重点实验室广州市510515

目的:构建小鼠髓样相关蛋白8(MRP8)的真核表达载体,观察其在NIH3T3细胞中的表达定位情况。方法:提取BALB/c小鼠肝脏组织的总RNA,通过逆转录-聚合酶链反应扩增得到MRP8编码序列,并将其克隆到带有血凝素(HA)标记的载体pcDNA3-HA上,随后将... 详细信息

目的:构建小鼠髓样相关蛋白8(MRP8)的真核表达载体,观察其在NIH3T3细胞中的表达定位情况。方法:提取BALB/c小鼠肝脏组织的总RNA,通过逆转录-聚合酶链反应扩增得到MRP8编码序列,并将其克隆到带有血凝素(HA)标记的载体pcDNA3-HA上,随后将重组质粒瞬时转染NIH3T3细胞,利用荧光显微镜观察结果。结果:重组质粒经聚合酶链反应、酶切和测序鉴定证明构建正确,并且该质粒能够在NIH3T3细胞的胞浆、胞核中广泛表达,表达产物主要定位在细胞核中。结论:成功构建带有HA标签的MRP8真核表达载体。该载体能在哺乳动物细胞中有效表达并正确定位,为进一步研究MRP8作用细胞的信号通路提供了一个重要的工具。

关键词：髓样相关蛋白8 血凝素类转染细胞内定位载体构建

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人晚期糖基化产物受体在前列腺癌和正常前列腺组织的表达差异

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中华男科学杂志 2010年第5期16卷 405-409页

作者：陆斌宋先璐贾立永宋方丽赵善超姜勇南方医科大学附属南方医院泌尿外科广东广州510515 广州医学院附属肿瘤医院放疗科广东广州510095 南方医科大学附属南方医院检验科广东广州510515 南方医科大学病理生理学教研室广东省蛋白质组学重点实验室广东广州510515

目的:研究人晚期糖基化产物受体(receptor for advanced glycation end product,RAGE)在前列腺癌和正常前列腺组织中的表达差异,为进一步研究RAGE在前列腺癌发病机制中的作用奠定基础。方法:以同一患者的前列腺癌组织和正常前列腺组织... 详细信息

目的:研究人晚期糖基化产物受体(receptor for advanced glycation end product,RAGE)在前列腺癌和正常前列腺组织中的表达差异,为进一步研究RAGE在前列腺癌发病机制中的作用奠定基础。方法:以同一患者的前列腺癌组织和正常前列腺组织配对作比较,采用免疫组化染色法、免疫印迹法、实时荧光定量PCR等方法分别从组织水平、蛋白质水平、mRNA水平检测10例患者前列腺癌和正常前列腺组织中RAGE的表达。结果:免疫组化结果显示RAGE在前列腺癌组织中的表达水平明显高于正常前列腺组织,Western印迹检测发现前列腺癌组织RAGE的表达量是正常前列腺组织的2.13倍(Р<0.05),荧光定量PCR检测前列腺癌中RAGE的mRNA表达水平是正常前列腺组织的4.2倍(Р<0.05)。结论:RAGE在前列腺癌的发生和发展过程中可能起重要作用。

关键词：晚期糖基化产物受体前列腺癌表达差异免疫组织化学实时荧光定量PCR

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植烷酸氧化酶真核表达载体的构建及其细胞内定位

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热带医学杂志 2010年第5期10卷 495-497,501,F0002页

作者：孙明晶胡水旺夏高晓姜勇南方医科大学病理生理学教研室广东省蛋白质组学重点实验室广州510515

目的构建小鼠植烷酸氧化酶(Phyh)真核表达载体,并观察其在NIH3T3细胞中的表达定位情况。方法提取BALB/c小鼠肝脏组织的总RNA,通过RT-PCR扩增得到Phyh编码序列,将其克隆到真核表达载体pcDNA3上;对阳性克隆进行PCR、酶切和测序鉴定,利用... 详细信息

目的构建小鼠植烷酸氧化酶(Phyh)真核表达载体,并观察其在NIH3T3细胞中的表达定位情况。方法提取BALB/c小鼠肝脏组织的总RNA,通过RT-PCR扩增得到Phyh编码序列,将其克隆到真核表达载体pcDNA3上;对阳性克隆进行PCR、酶切和测序鉴定,利用脂质体转染方法转染NIH3T3细胞;使用细胞免疫化学技术对重组质粒pcDNA3/HA-Phyh在NIH3T3细胞中的表达及蛋白定位进行分析。结果 PCR、双酶切和测序鉴定表明,pcDNA3/HA-Phyh真核表达质粒构建正确;转染实验发现,该质粒能够在NIH3T3细胞中表达,表达产物主要定位在细胞质中。结论成功构建了带HA标签的小鼠Phyh真核表达载体,该载体能够在哺乳动物细胞NIH3T3中表达,为进一步研究Phyh的细胞内生物学功能提供了一个重要的工具。

关键词：植烷酸氧化酶载体构建蛋白定位

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SARS冠状病毒S2蛋白胞外段的原核表达及其细胞膜融合效应研究

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南方医科大学学报 2009年第3期29卷 381-386页

作者：刘芸刘爱华邓鹏吴向玲李涛刘亚伟徐佳姜勇南方医科大学病理生理学教研室广东省功能蛋白质组学重点实验室广东广州510515 南方医科大学南方医院呼吸科广东广州510515

目的构建SARS冠状病毒S2蛋白胞外段(S2ED)和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的融合蛋白表达质粒,获得在原核细胞中表达的目的蛋白。方法在生物信息学预测基础上,利用PCR方法扩增S2ED和EGFP的编码序列,插入到质粒pET-14b中构建融合表达载体,在... 详细信息

目的构建SARS冠状病毒S2蛋白胞外段(S2ED)和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的融合蛋白表达质粒,获得在原核细胞中表达的目的蛋白。方法在生物信息学预测基础上,利用PCR方法扩增S2ED和EGFP的编码序列,插入到质粒pET-14b中构建融合表达载体,在大肠杆菌中诱导表达融合蛋白His-S2ED-EGFP。采用Ni-NTA亲和树脂纯化融合蛋白可溶部分,利用SDS-PAGE和免疫印迹的方法鉴定纯化后的蛋白,通过荧光显微镜考察S2ED与Hela细胞胞膜能否发生融合效应。结果重组质粒pET-14b-S2ED-EGFP的构建正确无误,并能够在BL21(DE3)中高效表达。纯化后的蛋白与Hela细胞孵育后,未观察到蛋白通过膜融合的过程内化进入细胞。结论S2ED的绿色荧光蛋白融合表达载体构建成功,并在原核细胞中获得了部分可溶的表达和有效的纯化。虽然原核表达的重组蛋白未能在Hela细胞上发挥预期的生物学效应,但是该工作将为加深S2蛋白介导的胞膜融合过程的认识以及未来进行以特异性细胞结合肽为基础的定向靶细胞转运系统研究奠定重要的基础。

关键词： SARS冠状病毒 S2蛋白胞外段蛋白表达细胞膜融合

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