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中国中药杂志 2021年第20期46卷 5247-5252页

作者：刘长征姜晓琳蔡启忠周良云杨全广东药科大学中药学院国家中医药管理局岭南药材生产与开发重点研究室国家中药材产业技术体系广州综合试验站广东省南药规范化种植与综合开发工程技术研究中心广东广州510006

该研究以何首乌根际细菌和放线菌为实验对象,采用Salkowski法筛选具有产吲哚乙酸(IAA)能力的菌株,铬天青S(CAS)平板法筛选具有产铁载体能力的菌株,PKO无机磷培养基筛选具有溶解无机磷能力的菌株,从形态学、生理生化以及16S rDNA序列分... 详细信息

该研究以何首乌根际细菌和放线菌为实验对象,采用Salkowski法筛选具有产吲哚乙酸(IAA)能力的菌株,铬天青S(CAS)平板法筛选具有产铁载体能力的菌株,PKO无机磷培养基筛选具有溶解无机磷能力的菌株,从形态学、生理生化以及16S rDNA序列分析等方法来确定菌株的分类学地位,并研究促生菌株对何首乌种子发芽和生长的影响。结果从196株菌株中得到2株同时具有产IAA、产铁载体和溶解无机磷的菌株F17、F42。菌株F17、F42产IAA的能力分别为38.65、33.64 mg·L-1;产铁载体的能力(As/Ar)分别为0.85、0.49;溶解无机磷的能力(D/d)分别为1.35、1.70。综合分析结果显示,菌株F17、F42分别鉴定为不解糖假苍白杆菌Pseudochrobactrum asaccharolyticum和阿氏芽孢杆菌Bacillus aryabhattai,并且发现2种菌株均对何首乌种子的萌发具有显著的促进作用。

关键词：根际促生菌促生特性菌株鉴定何首乌

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何首乌实时荧光定量PCR内参基因筛选

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中国中药杂志 2021年第1期46卷 80-85页

作者：王浩蔡启忠刘露杨全周良云广东药科大学中药学院国家中医药管理局岭南药材生产与开发重点研究室国家中药材产业技术体系广州综合试验站广东省南药规范化种植与综合开发工程技术研究中心广东广州510006

为筛选适宜何首乌Polygonum multiflorum不同组织基因表达分析的内参基因,从何首乌转录组数据中选取Actin,GAPDH,SAND,PP2A,TIP41常用的5个候选内参基因,设计特异性引物。通过实时荧光定量PCR,利用geNorm,NormFinder,Best-Keeper,Delta CT以及RefFinder等方法对5个候选内参基因在何首乌不同组织中的表达稳定性进行分析,为何首乌基因差异表达研究提供可靠的内参基因,以确保分析结果的可靠性。结果表明,各候选内参基因在何首乌不同组织中表达水平和稳定性有较大差异,其中对各候选内参基因的表达水平(Ct)的分布分析显示,以Actin和GAPDH基因在各组织中表达水平相对较高,而SAND,PP2A,TIP41表达水平较低;通过不同方法对各候选内参基因稳定性进行分析,geNorm分析结果以PP2A,GAPDH表达最为稳定,SAND表达稳定性最差,NormFinder和Delta CT法均以PP2A稳定性最高,SAND稳定性最低,而BestKeeper分析以Actin最稳定。通过RefFinder对候选基因稳定性进行综合评价分析得出以PP2A基因稳定性最高,其后依次为GAPDH,Actin,TIP41,SAND,以SAND基因稳定性最差。因此,PP2A基因为何首乌不同组织基因表达分析比较理想的内参基因。

关键词：何首乌内参基因实时荧光定量PCR

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何首乌糖基转移酶基因的克隆、生物信息学及表达分析

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中草药 2021年第19期52卷 6013-6022页

作者：蔡启忠周良云刘露刘长征王浩钟磊杨全广东药科大学中药学院国家中医药管理局岭南药材生产与开发重点研究室国家中药材产业技术体系广州综合试验站广东省南药规范化种植与综合开发工程技术研究中心广东广州510006

目的克隆何首乌Polygonummultiflorum糖基转移酶基因PmUGTs,并对其进行生物信息学以及差异表达分析。方法基于何首乌转录组数据,利用PCR扩增Pm UGTs全长cDNA并进行生物信息学分析;使用autodock4软件进行分子模拟对接;运用q RT-PCR检测... 详细信息

目的克隆何首乌Polygonummultiflorum糖基转移酶基因PmUGTs,并对其进行生物信息学以及差异表达分析。方法基于何首乌转录组数据,利用PCR扩增Pm UGTs全长cDNA并进行生物信息学分析;使用autodock4软件进行分子模拟对接;运用q RT-PCR检测基因在不同器官中的表达差异。结果克隆得到4条Pm UGTs,分别命名为Pm UGT1、Pm UGT2、PmUGT3、PmUGT4基因,开放阅读框(ORF)长度分别为1509、1506、1464和1476 bp;编码503、502、488与492个氨基酸;蛋白相对分子质量分别为56 940、54 780、54 350和54 620。Pm UGTs氨基酸序列中含有UGT高度保守的PSPG盒结构域,其二级结构主要由无规则卷曲与α-螺旋组成。进化树分析表明,Pm UGT1、PmUGT2、PmUGT3与拟南芥的UGT蛋白距离较近,Pm UGT4则与蒺藜苜蓿UGT亲缘关系最近。根据autodock4结果可知Pm UGT1、Pm UGT3、Pm UGT2与Pm UGT4蛋白上的残基分别可以与鹰嘴豆芽素A、罗汉果醇、白藜芦醇通过氢键连接。q RT-PCR结果表明,Pm UGTs表达量均在叶中最高。结论为进一步研究何首乌糖基转移酶基因的功能及何首乌中糖苷类化合物的生物合成途径奠定基础。

关键词：何首乌糖基转移酶基因克隆原核表达 qRT-PCR

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肉桂内生真菌Xylaria ***-1-4次级代谢产物及其抗肉桂枝枯病菌活性研究

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广东药科大学学报 2025年第1期41卷 54-60页

作者：庞亚琪吕佳黄宏杨廖沛然罗碧潘利明广东药科大学中药学院广东广州510006 国家中医药管理局岭南药材生产与开发重点研究室国家中药材产业技术体系广州综合试验站广东省南药规范化种植与综合开发工程技术研究中心广东广州510006 广州中医药大学国际中医药转化医学研究所广东广州510006

目的研究肉桂内生真菌Xylaria ***-1-4的次级代谢产物及其抗肉桂枝枯病菌的活性。方法采用现代色谱分离手段,包括反相中压层析柱色谱和半制备高效液相方法分离纯化Xylaria ***-1-4菌株的次级代谢产物;采用现代波谱技术包括紫外光谱(UV)... 详细信息

目的研究肉桂内生真菌Xylaria ***-1-4的次级代谢产物及其抗肉桂枝枯病菌的活性。方法采用现代色谱分离手段,包括反相中压层析柱色谱和半制备高效液相方法分离纯化Xylaria ***-1-4菌株的次级代谢产物;采用现代波谱技术包括紫外光谱(UV)、核磁共振光谱(NMR)、质谱(MS)等技术鉴定其结构;采用微量肉汤稀释法体外测定抗肉桂枝枯病菌的活性。结果从肉桂内生真菌Xylaria ***-1-4中分离鉴定得11个化合物,分别为Xylariaopyrone I(1)、3-(4-methoxy-2-oxo-2H-pyran-6-yl)propanoic acid(2)、nodulisporipyrones B(3)、nodulisporipyrones C(4)、nodulisporipyrones A(5)、4R,6S,9S-环(D-4-OH-L-Pro-L-Leu)(6)、环(4-OH-Pro-Phe)(7)、5-carboxymellein(8)、(2S)-butylitaconic acid(9)、邻苯二甲酸二丁酯(10)和亚油酸(11)。其中化合物4对肉桂枝枯病菌具有较强抑制作用,IC50值为(3.29±0.11)μg/mL,其他化合物表现出中等强度抑制活性(IC50<60μg/mL)。构效关系分析表明,化合物3、4和5的差别主要集中于侧链上C-8位-OH的存在与否及其相对构型,其抗枝枯病菌活性表现为化合物4>3>5,说明当侧链上C-8位存在-OH时,其抗枝枯病活性更强,且R-OH比S-OH活性更强。结论α-吡喃酮衍生物类化合物可能是炭角菌Xylaria ***-1-4的抗肉桂枝枯病菌主要特征性成分,这为进一步寻找新型环保的生物农药提供新思路。

关键词：肉桂内生真菌 Xylaria sp. 次级代谢产物抗肉桂枝枯病菌活性

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南药高良姜的分子生药学研究进展

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南方农业 2023年第5期17卷 215-218,226页

作者：潘峰唐晓敏潘利明杨全张春荣广东药科大学中药学院/国家中医药管理局岭南药材生产与开发重点研究室/国家中药材产业技术体系广州综合试验站/广东省南药规范化种植与综合开发工程技术研究中心广东广州510006

南药高良姜系姜科山姜属多年生草本植物,是亚欧国家常用的药材和香辛料,具有温胃止呕、散寒止痛的功效。目前高良姜野生资源日趋枯竭、栽培资源种源混乱和品种缺乏已经制约了高良姜产业发展。总结高良姜的系统进化、遗传多样性(AFLP分... 详细信息

南药高良姜系姜科山姜属多年生草本植物,是亚欧国家常用的药材和香辛料,具有温胃止呕、散寒止痛的功效。目前高良姜野生资源日趋枯竭、栽培资源种源混乱和品种缺乏已经制约了高良姜产业发展。总结高良姜的系统进化、遗传多样性(AFLP分子标记、SSR分子标记、ISSR分子标记)、分子鉴定(ITS序列、matK基因、rbcL基因、petN-psbM和psaJ-rpl33序列)和功能基因组学(转录组结构、叶绿体基因组结构、功能基因表达模式)等分子生药学领域的研究进展,分析当前高良姜基础理论研究中亟需解决的问题。

关键词：高良姜系统进化遗传多样性分子鉴定功能基因组学

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水蓼及其近缘植物本草考证

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中成药 2021年第1期43卷 272-276页

作者：罗露香岳玲黄嘉欢程轩轩杨全广东药科大学中药学院国家中医药管理局岭南药材生产与开发重点研究室国家中药材产业技术体系广州综合试验站广东省南药规范化种植与综合开发工程技术研究中心广东广州510006

古人所用之蓼有水蓼、青蓼、紫蓼、香蓼、马蓼等多种植物,既作药用也作菜食。本文通过查阅历代本草古籍,对水蓼及其近缘植物的名称、植物形态、图例、性味归经、功能主治及用法进行考证。结果证实,古籍中所载的水蓼、荭草、马蓼、毛蓼... 详细信息

古人所用之蓼有水蓼、青蓼、紫蓼、香蓼、马蓼等多种植物,既作药用也作菜食。本文通过查阅历代本草古籍,对水蓼及其近缘植物的名称、植物形态、图例、性味归经、功能主治及用法进行考证。结果证实,古籍中所载的水蓼、荭草、马蓼、毛蓼、紫蓼、香蓼分别为今之水蓼Polygonum hydropiper L.、红蓼Polygonum orientale L.、桃叶蓼(春蓼)Polygonum persicaria L.、毛蓼Polygonum barbatum L.、紫脉蓼Polygonum purpureonervosum和香蓼Polygonum viscosum。通过对上述植物的本草考证,旨在认清其用药历史,正本清源,以期为临床用药提供依据。

关键词：水蓼近缘植物名称植物形态功效本草考证

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基于网络药理学探究何首乌有效成分含量与抗肿瘤活性

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广东药科大学学报 2024年第3期40卷 44-53页

作者：杨茗铄孙艳涛吴继婷林子程梁丽轩潘嘉琪潘利明广东药科大学中药学院广东广州510006 国家中医药管理局岭南药材生产与开发重点研究室广东广州510006 国家中药材产业技术体系广州综合试验站广东广州510006 广东省南药规范化种植与综合开发工程技术研究中心广东广州510006 淄博市食品药品检验研究院山东淄博255086 广东药科大学药学院广东广州510006

目的基于网络药理学探究广东省不同产地的12批次何首乌主要活性成分EBYXG和蒽醌类化合物(大黄素、大黄素甲醚)的抗氧化和抗肿瘤活性机制,并通过测定化合物质量分数,对何首乌的质量进行评价。方法通过HPLC法测定12批次何首乌样品中EBYXG... 详细信息

目的基于网络药理学探究广东省不同产地的12批次何首乌主要活性成分EBYXG和蒽醌类化合物(大黄素、大黄素甲醚)的抗氧化和抗肿瘤活性机制,并通过测定化合物质量分数,对何首乌的质量进行评价。方法通过HPLC法测定12批次何首乌样品中EBYXG与大黄素、大黄素甲醚的质量分数。通过SwissTargetPrediction、SuperPred数据库筛选成分作用靶点,利用Uniprot进行校准。通过String数据库、Cytoscape3.7.2软件筛选核心靶点,绘制蛋白互作网络;通过DAVID数据库进行GO和KEGG富集分析预测药物作用机制。利用AutoDock平台进行分子对接,预测药物作用靶点程度,结合细胞及抗氧化实验,验证网络药理学分析结果。结果12批何首乌样品中EBYXG、蒽醌类化合物含量分别在1.526%~3.936%、0.129%~1.390%。找到“成分-疾病”交集基因共179个。GO与KEGG富集分析结果显示EBYXG、大黄素、大黄素甲醚主要通过PI3K-Akt、HIF-1、MAPK、cAMP等信号通路发挥抗氧化、抗肿瘤作用。分子对接结果显示,活性成分可以与靶点蛋白中心相结合。抗氧化及细胞试验证明,12批次何首乌均具有良好的抗氧化、抗肿瘤活性。结论广东省不同产地何首乌中的主要有效成分EBYXG、大黄素、大黄素甲醚质量分数均达到2020年版《中华人民共和国药典》规定。基于网络药理学及药理试验证实何首乌可通过多成分、多靶点、多信号通路产生抗氧化、抗肿瘤的功效,为何首乌在抗肿瘤领域的应用提供参考。

关键词：何首乌网络药理学抗氧化抗肿瘤 HPLC法

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何首乌-穿心莲间作对何首乌根际土壤放线菌群落结构和多样性的影响

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中国中药杂志 2020年第22期45卷 5452-5458页

作者：刘长征周良云廖沛然钟磊蔡启忠姜晓琳杨全广东药科大学中药学院国家中医药管理局岭南药材生产与开发重点研究室国家中药材产业技术体系广州综合试验站广东省南药规范化种植与综合开发工程技术研究中心广东广州510006

为探索何首乌-穿心莲间作对何首乌根际土壤放线菌的影响,该研究以原始土壤为对照,何首乌在单作和间作2种种植模式下根际土壤为处理,采用高通量测序技术研究土壤放线菌的群落结构和多样性。测序结果获得了655 221条有效序列,平均长度为40... 详细信息

为探索何首乌-穿心莲间作对何首乌根际土壤放线菌的影响,该研究以原始土壤为对照,何首乌在单作和间作2种种植模式下根际土壤为处理,采用高通量测序技术研究土壤放线菌的群落结构和多样性。测序结果获得了655 221条有效序列,平均长度为408 bp,OTU覆盖率和稀释性曲线表明该测序可以代表土壤放线菌的真实情况;由Alpha多样性分析结果可知土壤放线菌多样性的大小顺序为"原始土壤>间作土壤>单作土壤";单作和间作均显著改变了放线菌的群落结构,使优势属的相对丰度发生显著变化,其中单作改变最大;OTU主成分分析和聚类分析显示,所有土壤样本被分为具有明显区别的3组,并且原始土壤与间作土壤的相似性更高;间作还增加了北里孢菌属和分枝杆菌属等有益土壤放线菌属的相对丰度,有利于保持土壤健康,减少土传病害的发生。结果表明,何首乌-穿心莲间作可以减少何首乌单作所造成的土壤放线菌群落结构改变和多样性减小的现象,使何首乌根际土壤的放线菌群落更加接近原始土壤。

关键词：间作放线菌何首乌穿心莲群落结构多样性

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肉桂种子生物学特性及生活力研究

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种子 2021年第7期40卷 99-103页

作者：钟磊钱家萍蔡启忠王敏张慧晔杨全罗碧广东药科大学中药学院广州510006 国家中医药管理局岭南药材生产与开发重点研究室国家中药材产业技术体系广州综合试验站广东省南药规范化种植与综合开发工程技术研究中心广州510006 广州白云山和记黄埔中药有限公司广州510006

为了探究肉桂种子生物学特性及生活力测定的最适条件,对肉桂种子形态特征、千粒重、萌发特性、生活力等进行研究,探索不同萌发环境对肉桂种子发芽率的影响,并采用2,3,5-氯化三苯基氯化四氮唑(TTC)染色法测定肉桂种子生活力,通过正交设... 详细信息

为了探究肉桂种子生物学特性及生活力测定的最适条件,对肉桂种子形态特征、千粒重、萌发特性、生活力等进行研究,探索不同萌发环境对肉桂种子发芽率的影响,并采用2,3,5-氯化三苯基氯化四氮唑(TTC)染色法测定肉桂种子生活力,通过正交设计研究不同染色温度、染色时间、TTC溶液浓度对肉桂种子生活力测定的影响。结果表明,肉桂种子平均长度为10.89 mm,平均直径为7.41 mm,千粒重为262.41 g,含水量为35.99%,在湿沙条件下发芽率最高,为76.76%;极差分析表明,TTC浓度和染色温度是影响肉桂种子生活力的较重要的因素。研究表明,湿沙催芽能显著提高肉桂种子发芽率,TTC法最佳染色条件为TTC浓度为1%、染色温度为35℃、染色时间为8 h。

关键词：肉桂种子萌发种子生活力 TTC法

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广佛手黄龙病的鉴定

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中国实验方剂学杂志 2020年第5期26卷 117-122页

作者：袁蒙潘利明周良云罗碧王浩杨全广东药科大学中药学院国家中医药管理局岭南药材生产与开发重点研究室国家中药材产业技术体系广州综合试验站广东省南药规范化种植与综合开发工程技术研究中心广州510006

目的:该文从多方面进行分析、比较,及时、准确地鉴别广佛手黄龙病,以便于及时确定病害、防控病情。方法:通过性状分析,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR),酶切反应及实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测多种手段相结合,对广佛手黄龙病进行... 详细信息

目的:该文从多方面进行分析、比较,及时、准确地鉴别广佛手黄龙病,以便于及时确定病害、防控病情。方法:通过性状分析,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR),酶切反应及实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测多种手段相结合,对广佛手黄龙病进行鉴定。结果:从性状上来看,感病广佛手有典型的叶片斑驳型黄化、果相对较小,甚至畸形的特征,但并没有发现"红鼻子果"现象,这些均可以作为田间初步判别广佛手黄龙病的依据;RT-PCR检测及酶切反应结果表明,引物为OI1/OI2c时,广佛手病株有特异性条带1160 bp,且能被Xba I酶切成520 bp和640 bp,这与其他被黄龙病侵染的柑橘属植物的检测结果一致;Real-time PCR检测结果显示,被黄龙病侵染的广佛手叶片有扩增曲线和熔解曲线,熔链温度为82℃,且Ct值在24.6~28.2,而广佛手正常株没有扩增现象出现。结论:性状分析可以在田间初步判别黄龙病,但是具有一定的主观性,RTPCR及Real-time PCR检测能进一步确定广佛手黄龙病,且q PCR检测更加灵敏,还可以定量。通过性状分析以及分子鉴定的结合,能够更加及时、准确地确定广佛手黄龙病。

关键词：广佛手黄龙病叶片性状分析田间判别

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