检索结果-内蒙古大学图书馆

基于巨噬细胞极化调控心肌细胞代谢重塑探讨暖心康改善心肌梗死小鼠心肌纤维化的机制

中药新药与临床药理 2024年第11期35卷 1637-1644页

作者：林祉均何欢陈梓欣陈洁方红城王陵军中医证候全国重点实验室广州中医药大学第一附属医院广东广州510405 深圳市中西医结合医院广东深圳518104

目的基于巨噬细胞极化调控心肌细胞代谢重塑探讨暖心康(红参、毛冬青)改善心肌梗死小鼠心肌纤维化的机制。方法(1)将C57BL/6J雄性小鼠随机分为3组:假手术组、模型组、暖心康组(1.65 g·kg^(-1)),每组10只。采用结扎冠状动脉术复制... 详细信息

目的基于巨噬细胞极化调控心肌细胞代谢重塑探讨暖心康(红参、毛冬青)改善心肌梗死小鼠心肌纤维化的机制。方法(1)将C57BL/6J雄性小鼠随机分为3组:假手术组、模型组、暖心康组(1.65 g·kg^(-1)),每组10只。采用结扎冠状动脉术复制心肌梗死小鼠模型。灌胃给药,每日1次,连续4周。采用Masson染色法检测心肌组织纤维化;qPCR法检测心脏组织中LDHA、HK2、CD36、CPT-1A、PPAR-γ、PGC-1α、Ndufa8、SDHd、Cyc1、Cox4i2、CD86、iNOS、TNF-αmRNA表达水平;ELISA法检测血清炎症因子IL-1β的水平。(2)采用脂多糖诱导RAW264.7巨噬细胞向促炎型巨噬细胞极化,制备促炎型巨噬细胞上清液,将其作用于HL-1心肌细胞模型。HL-1心肌细胞分组与RAW264.7巨噬细胞分组相同:空白血清对照组(含5%空白血清+5%胎牛血清的培养基)、暖心康含药血清组(含5%暖心康含药血清+5%胎牛血清的培养基)、脂多糖组(含5%空白血清+5%胎牛血清的培养基+200μg·mL^(-1)脂多糖)和暖心康含药血清+脂多糖组(含5%暖心康含药血清+5%胎牛血清的培养基+200μg·mL^(-1)脂多糖),均干预24 h。采用油红O染色检测心肌细胞中脂质分布情况;DCFH-DA荧光探针检测细胞ROS水平。结果(1)与模型组比较,暖心康组小鼠心脏组织胶原沉积面积显著减少(P<0.01),且梗死区域局部室壁损伤程度减轻;心脏组织中LDHA、HK2、CD36、CPT-1A、PPAR-γ、Ndufa8、SDHd、Cyc1、Cox4i2、CD86、iNOS、TNF-αmRNA表达水平显著降低(P<0.05,P<0.01,P<0.001),PGC-1αmRNA表达水平明显升高(P<0.05);血清IL-1β水平显著降低(P<0.001)。(2)与脂多糖组比较,暖心康含药血清+脂多糖组HL-1心肌细胞胞浆内的脂滴沉积明显减少(P<0.05),ROS水平显著降低(P<0.001)。结论暖心康能够减轻心肌梗死小鼠的心肌纤维化及心室重构,其作用机制可能与抑制促炎型巨噬细胞极化,降低炎症水平,减少ROS生成,降低心脏组织糖酵解水平,改善氧化磷酸化和脂肪酸代谢有关。

关键词：暖心康心肌梗死心肌纤维化巨噬细胞极化炎症反应氧化应激能量代谢重塑小鼠 RAW264.7巨噬细胞 HL-1心肌细胞

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清咳平喘颗粒联合西医常规治疗成人社区获得性肺炎痰热壅肺证的多中心随机对照研究

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中草药 2024年第12期55卷 4099-4107页

作者：金少涵朱梦婷罗胜刘兴华范斐婷肖晶旻吴蕾林琳陈远彬中医证候全国重点实验室/呼吸科广州中医药大学第二附属医院(广东省中医院)广东广州510000 广州中医药大学第二临床医学院广东广州510405 广州市番禺区中医医院广东广州511400 东莞市中西医结合医院广东东莞523819

目的观察清咳平喘颗粒联合西医常规治疗成人社区获得性肺炎(community acquired pneumonia,CAP)痰热壅肺证患者的疗效和安全性。方法采用多中心、随机双盲、安慰剂平行对照临床试验设计,纳入成人CAP痰热壅肺证患者80例,按1∶1比例随机... 详细信息

目的观察清咳平喘颗粒联合西医常规治疗成人社区获得性肺炎(community acquired pneumonia,CAP)痰热壅肺证患者的疗效和安全性。方法采用多中心、随机双盲、安慰剂平行对照临床试验设计,纳入成人CAP痰热壅肺证患者80例,按1∶1比例随机分为治疗组和对照组,在西医常规治疗基础上,治疗组给予清咳平喘颗粒,对照组给予清咳平喘颗粒模拟剂,两组疗程均为10 d。观察两组患者的临床疗效,比较两组患者治疗前后肺炎影像学吸收评价得分、咳嗽和咳痰症状消失的患者比例和时间、咳嗽和咳痰评估问卷(cough and sputum assessment questionnaire,CASA-Q)、CURB-65(confusion,urea,respiratory rate blood pressure,age 65)评分、血白细胞计数、中性粒细胞百分比、C反应蛋白、抗感染治疗天数及不良事件发生率的差异。结果治疗后,治疗组的总有效率为94.87%,明显高于对照组的74.36%,具有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组患者肺炎影像学吸收评分较治疗前明显降低(P<0.05);但两组患者肺炎影像学吸收评分和肺炎总吸收率的差异无统计学意义(P>0.05);针对咳痰严重程度进行亚组分析,治疗组中重度咳痰患者的肺炎影像学吸收评分明显低于对照组(P<0.05)。治疗组平均抗感染治疗天数、咳痰症状消失时间均短于对照组(P<0.05)。治疗后,两组患者CASA-Q评分较治疗前显著升高、血炎症指标显著降低(P<0.05);但两组咳嗽症状消失时间、CASA-Q评分、CURB-65评分、血炎症指标比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。试验期间未发生严重不良事件,两组不良事件发生率无差异。结论在西医常规治疗基础上,清咳平喘颗粒能有效减少CAP抗感染治疗天数,改善咳痰症状,缩短咳痰症状消失时间,且安全性良好。

关键词：社区获得性肺炎痰热壅肺证清咳平喘颗粒随机对照试验中西医结合

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胱抑素A是预测股骨头坏死的一个潜在生物标志物

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中国全科医学 2024年

作者：田佳庆彭鹏韦雨柔肖方骏何宪顺林锟陆舜何敏聪刘良燕魏秋实广州中医药大学广东省中医骨伤研究院关节中心揭西县中医医院博士工作站骨科中医证候全国重点实验室/骨科

背景股骨头坏死（ONFH）是一种临床难治性骨科疾病，发病率较高，预后差。目前磁共振成像（MRI是诊断ONFH的“金指标”，但其检查流程繁琐，费用较高，无法作为常规筛查的工具。因此，亟待研发新型分子生物标志物用于ONFH的诊断。目的 ... 详细信息

背景股骨头坏死（ONFH）是一种临床难治性骨科疾病，发病率较高，预后差。目前磁共振成像（MRI是诊断ONFH的“金指标”，但其检查流程繁琐，费用较高，无法作为常规筛查的工具。因此，亟待研发新型分子生物标志物用于ONFH的诊断。目的研究ONFH患者血清胱抑素A(CSTA)水平，评估其作为ONFH生物标志物的诊断价值。方法选取2023年5—11月于广州中医药大学第三附属医院就诊的21例ONFH患者为实验组，同期招募33例健康志愿者为对照组。收集受试者血清和股骨头组织样本（包括实验组17例ONFH患者，同期因股骨颈骨折手术的6例患者为FNF组），采用酶联免疫吸附法（ELISA）检查血清CSTA水平；采用苏木精-伊红（HE）染色观察骨组织形态，并使用Micro CT扫描检测骨微结构；应用Trap染色评估不同骨组织中破骨细胞分化能力；通过免疫组化、免疫荧光和Western Blot评估骨组织CSTA的表达水平；采用Spearman秩相关分析CSTA水平与国际骨循环研究协会（ARCO）分期之间的相关性；绘制受试者工作特征（ROC）曲线评估CSTA诊断价值。结果血清CSTA检测结果显示，实验组高于对照组，且随着ARCO分期的进展，CSTA蛋白表达水平也逐渐增高，差异有统计学意义（P<0.05）;HE染色结果显示ARCOⅡ、Ⅲ、Ⅳ组空骨陷窝率高于FNF组，ARCOⅣ高于ARCOⅡ期，差异有统计学意义（P<0.05）;MicroCT定量分析结果显示，ARCOⅡ、Ⅲ组骨体积分数（BV/TV）、骨小梁厚度（***）、骨梁数量（Tb.N）低于FNF组，骨小梁分离度（***）高于FNF组（P<0.05）;Trap染色结果显示：ARCOⅡ、Ⅲ组Trap阳性细胞区域面积高于FNF组，且ARCOⅡ高于ARCOⅣ期，差异均有统计学意义（P<0.05）；骨组织CSTA检测结果显示，ARCOⅡ、Ⅲ和Ⅳ期组CSTA表达高于FNF组，且ARCOⅣ高于ARCOⅡ期，差异均有统计学意义（P<0.05）；血清CSTA水平诊断ONFH的ROC曲线下面积（AUC）为0.9394 (P<0.001)，敏感性为78.79%，特异性为95.24%。结论 CSTA蛋白可通过调控破骨细胞的形成来影响股骨头内坏死骨的修复，在股骨头坏死患者中，CSTA表达升高与疾病的严重程度呈正相关。

关键词：股骨头坏死 CSTA 破骨细胞生物标志物 ARCO分期

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基于药效物质基础的中药药物发现策略及其迭代发展

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Acupuncture and Herbal Medicine 2023年第3期3卷 158-179页

作者：葛楠闫广利孙晖杨乐孔玲孙野韩莹赵琦琦康舒宇王喜军黑龙江中医药大学经方与现代中药融合创新全国重点实验室国家中医药管理局中医方证代谢组学研究中心中药血清药物化学重点研究室广州中医药大学第二附属医院省部共建中医湿证国家重点实验室天津中医药大学现代中医药海河实验室

中药药效物质基础发现是中药新药创制的重要途径,青蒿素、黄连素和麻黄碱等国际知名药物均是由此途径陆续被发现及开发出来。然而,由于中医药理论及实践的复杂性,中药药效物质基础发现技术仍然不能完全满足创新药物的需要,仍然是制约中... 详细信息

中药药效物质基础发现是中药新药创制的重要途径,青蒿素、黄连素和麻黄碱等国际知名药物均是由此途径陆续被发现及开发出来。然而,由于中医药理论及实践的复杂性,中药药效物质基础发现技术仍然不能完全满足创新药物的需要,仍然是制约中药创新药物的关键科学问题。中医临床是以多味中药组成方剂作为药物针对证候而表达临床疗效,而方剂的复杂性和证候的模糊性使得与临床疗效相关的中药体内药效物质基础发现充满挑战性。几十年来,中医药研究人员不断地建立及发展多项交叉学科的技术和方法,努力去发现发挥疗效的中药药效物质基础。本文回顾总结了中药药效物质基础发现的策略及其迭代发展历史,主要包括植物化学方法,即经典的系统分离筛选法(提取、分离、纯化、结构鉴定和药理活性测试);生物活性导向分离;中药血清药物化学方法;以及将体内成分与证候生物标志物关联分析的中医方证代谢组学方法。而中医方证代谢组学是近年来出现的一种符合中医药理论与特点的药效物质基础发现策略,该方法基于证候标记物与方剂体内显效成分关联分析,揭示方剂发挥疗效的体内药效物质及作用靶点与通路,推动基于临床疗效的创新药物研发及先导化合物的发现,促进中医药的现代化及产业化发展。

关键词：中医方证代谢组学中药药效物质基础新药开发策略中药血清药物化学中医药现代化

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人工智能结合生物网络对“养血清脑制剂”和“逍遥丸”组方的优化及验证

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中药药理与临床 2024年第4期40卷 27-33页

作者：赵倩魏宇郭凯敏王文佳周水平孙鹤方坚松胡蕴慧天士力医药集团股份有限公司天津300410 现代中药创制全国重点实验室天津300193 广州中医药大学科技创新中心广州510405

目的:利用人工智能和大数据探寻符合中医药传统的复方中药组方优化思路,为复方中药二次开发提供参考。方法:围绕“君臣佐使”理论,基于中药材安全性预测模型,预测养血清脑制剂、逍遥丸中佐药和使药的安全性:(1)剔除安全性低的药材后获... 详细信息

目的:利用人工智能和大数据探寻符合中医药传统的复方中药组方优化思路,为复方中药二次开发提供参考。方法:围绕“君臣佐使”理论,基于中药材安全性预测模型,预测养血清脑制剂、逍遥丸中佐药和使药的安全性:(1)剔除安全性低的药材后获得改良方;(2)保留安全性高的药材,结合中药材成分吸收、分布、代谢和排泄性质(ADME)及靶点网络分析获得改良方。随机游走算法计算养血清脑制剂改良方、逍遥丸改良方与其原方的相关性。取ICR小鼠112只,随机分为模型对照组、阿司匹林肠溶片0.2 g/kg组、养血清脑制剂原方7、14、28 g/kg组和改良方7、14、28 g/kg组,每组14只。末次给药后1 h各小鼠腹腔注射0.6%醋酸溶液,观察药物对小鼠扭体反应的影响。随机将78只SD大鼠分为正常对照组、盐酸氟西汀0.01 g/kg组、慢性不可预知温和刺激(CUMS)结合孤养抑郁大鼠模型对照组、逍遥丸原方4.34 g/kg组、改良方4.44 g/kg和4.40 g/kg组,每组13只。在试验第0、7、14、21、28、35、42、49、56、63 d分别称体质量,进行糖水消耗试验和敞箱试验;采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测大鼠海马中多巴胺(DA)、去甲肾上腺素(NE)、5-羟色胺(5-HT)、脑源性神经营养因子(BDNF)的含量。结果:养血清脑制剂改良方和原发性头痛显著相关(Z score=11.95);与模型对照组相比,养血清脑制剂原方7、14、28 g/kg组和改良方7、14、28 g/kg组均能明显抑制醋酸所致小鼠扭体次数,呈现明显镇痛作用(P<0.05或P<0.01)。逍遥丸改良方与抑郁症显著相关(Z score=23.61);与正常对照组相比,第63 d模型对照组大鼠出现显著抑郁症状(P<0.01);与模型对照组相比,逍遥丸改良方(减薄荷和茯苓)4.40 g/kg组显著改善模型大鼠的抑郁症状(P<0.01),大鼠海马中DA、NE、5-HT、BDNF的含量显著增加(P<0.01),优于逍遥丸原方4.34 g/kg组和改良方(减薄荷)4.44 g/kg组。结论:养血清脑制剂改良方镇痛作用与原方相当,逍遥丸改良方(减薄荷和茯苓)通过改善抑郁症状和增加DA、NE、5-HT、BDNF的含量发挥抗抑郁作用,且优于原方。该方法可为复方中药二次开发提供参考。

关键词：养血清脑制剂逍遥丸人工智能君臣佐使组方优化验证

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肩袖损伤辨证分型及中医证候规范化研究的思路与方法

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中华中医药杂志 2024年第3期39卷 1153-1157页

作者：张献泉曾令烽周光辉古卓栩罗明辉窦耀星梁桂洪刘军中医证候全国重点实验室/广州中医药大学第二临床医学院广州510405 广东省中医药防治难治性慢病重点实验室/广东省中医院(广州中医药大学第二附属医院) 广州510120 广东省中医药科学院骨与关节退变及损伤研究团队广州510120 广东省第二中医院(广东省中医药工程技术研究院) 广州510095

中医证候规范化是中医实现现代化及顺应社会发展的必然趋势。肩袖损伤在临床中发病率较高,中医药疗法在治疗肩袖损伤方面具有独特的优势。然而迄今肩袖损伤的辨证分型及中医证候仍不规范,使临床医生在诊治过程中产生了一定的困扰,不利... 详细信息

中医证候规范化是中医实现现代化及顺应社会发展的必然趋势。肩袖损伤在临床中发病率较高,中医药疗法在治疗肩袖损伤方面具有独特的优势。然而迄今肩袖损伤的辨证分型及中医证候仍不规范,使临床医生在诊治过程中产生了一定的困扰,不利于实现中医现代化。因此,为了推动中医在肩袖损伤领域的规范化和标准化,有必要对现有的辨证分型和证候进行规范化的研究和探讨。文章主要阐述肩袖损伤辨证分型及中医证候规范化研究现状及问题,提出肩袖损伤辨证分型及中医证候规范化研究的思路与方法,以期为后续的研究提供参考。

关键词：肩袖损伤辨证论治证候规范述评

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岭南经方家黎庇留、易巨荪运用温阳法特点探析

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广州中医药大学学报 2024年第11期41卷 3091-3096页

作者：黄婕贾金金杨忠奇广州中医药大学中医证候全国重点实验室广东广州510006 广州中医药大学第一附属医院广东广州510405

黎庇留与易巨荪是近代岭南著名经方家,分别著有临床医案著作《黎庇留经方医案》和《集思医案》。通过研习此两本医案,发现两位医家均重视阳气、善用温阳法,且学术思想相近,具体表现为:方证辨证,在运用温阳法时尤为突出,不仅据证定方,还... 详细信息

黎庇留与易巨荪是近代岭南著名经方家,分别著有临床医案著作《黎庇留经方医案》和《集思医案》。通过研习此两本医案,发现两位医家均重视阳气、善用温阳法,且学术思想相近,具体表现为:方证辨证,在运用温阳法时尤为突出,不仅据证定方,还根据方证病机延伸经方的应用范围;注重望神,通过望神辨知脏腑阳气虚损情况;重视胃气,以胃气知阳气、判病势;强调守阳,通过守方、守法以守阳;阴阳两伤,以补阳为要,补阳可化阴,阴分可渐自生。黎庇留与易巨荪两位医家重温阳、善温阳,其有别于岭南多数医家忌用温法的治疗思路,可为现代中医临床提供借鉴。

关键词：黎庇留易巨荪《黎庇留经方医案》《集思医案》温阳法经方岭南医家

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中国中医药指南与共识的科学性、透明性和适用性评价(2022年)

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中国循证医学杂志 2024年第8期24卷 959-966页

作者：张娈王洋洋王旭谢润生李肃陈耀龙李慧广州中医药大学第二临床医学院广州510120 广东省中医院广州510120 中医证候全国重点实验室/中医药标准化研究团队广州中医药大学第二附属医院广州510006 重庆医科大学附属儿童医院重庆400014 兰州大学健康数据科学研究院兰州730000 世界卫生组织指南实施与知识转化合作中心兰州730000

目的对中医药指南与共识进行评价,以期反映中医药指南与共识的质量及现状,促进中医药指南与共识的质量提升。方法系统收集2022年医学期刊发表的中医药领域指南与共识,采用科学性、透明性和适用性评级工具(STAR)进行评价,分析得分率(%)情... 详细信息

目的对中医药指南与共识进行评价,以期反映中医药指南与共识的质量及现状,促进中医药指南与共识的质量提升。方法系统收集2022年医学期刊发表的中医药领域指南与共识,采用科学性、透明性和适用性评级工具(STAR)进行评价,分析得分率(%)情况,通过对比、分层等方法分析指南与共识的质量水平与影响因素。结果共纳入130篇中医药指南与共识。指南得分率较高的领域依次为推荐意见(65.3%)、证据(55.9%)、工作组(54.2%)。共识得分率较高的领域依次是推荐意见(38.7%)、工作组(37.0%)、资助(30.0%)。中医药指南总得分率高于全国指南,共识低于全国共识;中医药指南的各领域得分率均高于共识;分层分析提示在各发表期刊、发布机构之间的指南得分率差异有统计学意义,在各发表期刊、制订机构、学科专业及资助类别之间的共识得分率差异有统计学意义。结论中医药指南与共识的数量与质量持续提高,且中医药指南质量水平高于共识。中医药指南总体质量高于全国指南,并重点关注指南制订的科学性,共识总体质量低于全国共识;不同发表期刊、制订机构、学科专业及资助类别等是影响中医药指南与共识质量的潜在因素。

关键词：中医药指南共识评价

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从炎症免疫角度探究心阳片改善尿毒症心肌病的作用和机制

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环球中医药 2024年第7期17卷 1267-1273页

作者：倪世豪刘东华何星灵欧阳小露张小娇李锦陈星伶陈梓欣王陵军冼绍祥汪朝晖廖慧丽鲁路杨忠奇中医证候全国重点实验室、广州中医药大学第一附属医院 510405

目的从炎症免疫角度探究心阳片对尿毒症心肌病的治疗作用及其机制。方法采用5/6肾切除术建立尿毒症心肌病小鼠模型,随机分为模型组和心阳片组,每组15只;另设15只假手术小鼠作为假手术组。心阳片组术后给予心阳片0.34 g/(kg·d)灌胃8... 详细信息

目的从炎症免疫角度探究心阳片对尿毒症心肌病的治疗作用及其机制。方法采用5/6肾切除术建立尿毒症心肌病小鼠模型,随机分为模型组和心阳片组,每组15只;另设15只假手术小鼠作为假手术组。心阳片组术后给予心阳片0.34 g/(kg·d)灌胃8周,假手术组和模型组给予等量0.9%氯化钠溶液灌胃8周。通过心脏转录组数据结合生物信息学手段分析尿毒症心肌病小鼠的心脏炎症免疫状态及心阳片的调节效果和作用机制。通过实时荧光定量PCR(Real-time Quantitative PCR,qPCR)法检测各组小鼠心脏中炎症因子和炎症免疫细胞相关标记物的mRNA表达水平。通过免疫荧光法观察各组小鼠心脏中炎症免疫细胞的浸润情况。结果心脏转录组GO富集分析结果显示,心阳片可能参与抑制尿毒症心肌病的多个炎症免疫相关生物过程。心脏转录组分析结果显示,心阳片抑制了心脏炎症因子(白细胞介素-1β、白细胞介素-6、白细胞介素-18、肿瘤坏死因子)和炎症免疫细胞相关标记物(CD_(86)、CD_(72)、淋巴细胞抗原6c1、整合素β2)水平,且减少了炎症免疫细胞(中性粒细胞、单核细胞、CD_(86)+巨噬细胞、CD_(72)hi巨噬细胞)的浸润。qPCR结果显示,与模型组相比,心阳片组小鼠心脏中白细胞介素-1β、白细胞介素-6、白细胞介素-18、肿瘤坏死因子mRNA水平均显著下调(P<0.05)。免疫荧光结果显示,与模型组相比,心阳片组中心脏中性粒细胞、单核细胞、CD_(72)hi巨噬细胞的浸润均显著减少。此外,基因集富集分析结果显示,心阳片组核因子-κB、c-Jun氨基末端激酶、细胞外调节蛋白激酶1/2和p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路被明显抑制(富集评分分别为-0.55、-0.54、-0.43、-0.50)。结论心阳片可能通过抑制心脏的炎症免疫反应以改善尿毒症心肌病。

关键词：尿毒症心肌病心阳片炎症免疫反应免疫细胞

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尖音库蚊复合体蚊虫DNA甲基化水平分析

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2024年第4期42卷 502-511页

作者：郭思含黄新安徐寒黎李春晓刘康康邢丹赵腾广州中医药大学青蒿研究中心广东广州510006 病原微生物生物安全全国重点实验室北京100071 北京交通大学生命科学与生物工程研究院北京100091

目的分析比较尖音库蚊复合体中淡色库蚊、致倦库蚊、骚扰库蚊的DNA甲基化水平以及致倦库蚊吸血前后DNA甲基化水平。方法采集羽化后5 d且未吸血的3个库蚊亚种和吸血3 d的致倦库蚊,提取DNA,超声切割为约250 bp的片段后进行测序,测序数据... 详细信息

目的分析比较尖音库蚊复合体中淡色库蚊、致倦库蚊、骚扰库蚊的DNA甲基化水平以及致倦库蚊吸血前后DNA甲基化水平。方法采集羽化后5 d且未吸血的3个库蚊亚种和吸血3 d的致倦库蚊,提取DNA,超声切割为约250 bp的片段后进行测序,测序数据与致倦库蚊基因组序列(Taxonomy:ID7176)进行比对,获取全基因组胞嘧啶碱基甲基化信息。从基因组、染色体和染色体元件水平分析3个库蚊亚种的甲基化水平(甲基化水平高于3%定义为高甲基化)。比较未吸血的3个库蚊亚种间以及吸血前后致倦库蚊的甲基化水平差异,P<0.001且甲基化差异绝对值>5的位点记为差异甲基化位点;Q<0.05且甲基化差异绝对值>3的区域记为差异甲基化区域(DMR)。将距离DMR最近的转录起始位点(TSS)所在基因记为DMR相关基因,对其进行基因本体论(GO)富集分析。结果淡色库蚊、骚扰库蚊和致倦库蚊全基因组甲基化水平分别为0.454%~0.672%、0.491%~0.649%和0.499%~0.655%(均低于3%),CHH位点甲基化水平分别为0.631%、0.618%和0.624%,均高于CHG位点的0.567%、0.559%、0.559%(t=7.14、83.43、6.87,均P<0.05)和CG/CpG位点的0.508%、0.505%、0.505%(t=10.59、12.52、13.33,均P<0.05);3个库蚊亚种共有的高甲基化位点有56个、高甲基化区域有11个。淡色库蚊、骚扰库蚊和致倦库蚊之间全基因组甲基化水平差异无统计学意义(F=0.07,P>0.05),1号染色体(0.568%、0.562%、0.565%)、2号染色体(0.573%、0.564%、0.566%)、3号染色体(0.575%、0.566%、0.569%)的甲基化水平差异均无统计学意义(F=0.05、0.11、0.13,均P>0.05),启动子(0.567%、0.552%、0.556%)、外显子(0.562%、0.556%、0.558%)、内含子(0.561%、0.550%、0.555%)和TSS(0.579%、0.506%、0.621%)的甲基化水平差异均无统计学意义(F=0.37、0.06、0.06、0.16,均P>0.05)。淡色库蚊和骚扰库蚊间筛选出178个差异甲基化位点、4个DMR,淡色库蚊和致倦库蚊间筛选出209个差异甲基化位点、8个DMR,骚扰库蚊和致倦库蚊间筛选出215个差异甲基化位点、11个DMR。GO富集结果显示,DMR相关基因主要富集于对辐射反应、对光刺激反应和对非生物刺激反应等生物过程。致倦库蚊吸血后全基因组甲基化水平从0.602%升高至0.617%,但差异无统计学意义(t=1.21,P>0.05);吸血前1、2、3号染色体的甲基化水平分别为0.569%、0.569%和0.572%,吸血后上升为0.596%、0.597%和0.600%,但差异均无统计学意义(t=1.31、1.33、1.30,均P>0.05);吸血前启动子、外显子、内含子和TSS的甲基化水平分别为0.557%、0.561%、0.560%、0.552%,吸血后上升为0.585%、0.584%、0.584%、0.594%,但差异均无统计学意义(t=1.48、1.35、1.20、1.69,均P>0.05)。致倦库蚊吸血前后基因组间有6个DMR。GO富集结果显示,DMR相关基因在细胞组分上主要富集于内体、囊泡等,在分子功能上主要富集于蛋白结合、小GTP酶结合等。结论淡色库蚊、致倦库蚊、骚扰库蚊全基因组甲基化水平较低,两两亚种间的DMR相关基因主要与对非生物刺激反应生物过程相关。吸血后的致倦库蚊甲基化水平略有升高,吸血前后的DMR相关基因主要和蛋白结合相关。

关键词：尖音库蚊复合体 DNA甲基化全基因组亚硫酸氢盐测序技术

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