检索结果-内蒙古大学图书馆

热带作物学报 2025年第4期46卷 820-830页

作者：庄婷婷李佳欣詹若挺马新业广州中医药大学中药学院/岭南中药资源教育部重点实验室/国家中成药工程技术研究中心南药研发实验室广东广州510006

本研究以白木香离体根为材料,在经过连续三代盐胁迫处理后,使用EASYspin Plus植物快速提取试剂盒提取样品的总RNA,利用HiSeq 2500高通量测序平台进行测序,旨在探讨miRNA在白木香三代离体根盐胁迫中发挥的作用及可能参与调控的代谢途径,... 详细信息

本研究以白木香离体根为材料,在经过连续三代盐胁迫处理后,使用EASYspin Plus植物快速提取试剂盒提取样品的总RNA,利用HiSeq 2500高通量测序平台进行测序,旨在探讨miRNA在白木香三代离体根盐胁迫中发挥的作用及可能参与调控的代谢途径,为揭示白木香抵御盐胁迫机制的研究提供参考。取白木香三代盐胁迫的离体根为材料,通过使用高通量测序平台及生物信息学技术,获得第一代、第二代、第三代的miRNA表达谱,筛选三代离体根中的差异miRNA,对差异miRNA进行靶基因预测,之后进行靶基因分析,从而获得可能参与白木香次生代谢产物及响应盐胁迫相关的miRNA。结果显示:第一代样品中共检测出508个已知miRNA和764个新预测miRNA,第二代样品中共检测出444个已知miRNA和673个新预测miRNA,第三代样品中共检测出904个已知miRNA和1100个新预测miRNA。三代样品中共获得59个差异表达miRNA及275个靶基因,上调的miRNA靶基因主要参与类黄酮生物合成、谷胱甘肽代谢等信号通路,下调的miRNA靶基因则主要涉及苯丙烷类生物合成、植物激素信号传导、植物病原相互作用等信号通路。选取关键miRNA进行NR注释,结果发现,miR8020-x和novel-m0628-5p可能参与白木香离体根次生代谢产物合成;miR7494-y、miR477-y、miR5185-y、miR7757-y、miR408-z和novel-m0628-5p可能响应白木香离体根盐胁迫。本研究利用高通量测序得到白木香离体根盐胁迫的miRNA表达谱,并利用生物信息学分析得到可能参与白木香次生代谢产物及响应盐胁迫相关的miRNA,研究结果将有助于增强对白木香在盐胁迫条件下miRNA调控机制的认识,并为白木香次生代谢产物合成提供新的途径。

关键词：白木香胁迫记忆 miRNA HiSeq 2500高通量测序

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阳春砂与海南砂BPPS启动子比较及GCN4-motif正调控作用的鉴定

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中草药 2022年第19期53卷 6159-6166页

作者：林晓静梁慧琳赵海莹吴清文黄琳璇伍思容杨锦芬广州中医药大学中药学院中药资源科学与工程研究中心岭南中药资源教育部重点实验室(广州中医药大学)国家中成药工程技术研究中心南药研发实验室广东广州510006

目的龙脑基二磷酸合酶(bornyl diphosphate synthase,BPPS)是砂仁药效萜类合成途径中的关键酶,获得海南砂AlBPPS的启动子并与阳春砂AvBPPS启动子进行调控元件和瞬时表达的比较,以期解析AvBPPS在种子中高表达的分子机制。方法通过FPNI-PC... 详细信息

目的龙脑基二磷酸合酶(bornyl diphosphate synthase,BPPS)是砂仁药效萜类合成途径中的关键酶,获得海南砂AlBPPS的启动子并与阳春砂AvBPPS启动子进行调控元件和瞬时表达的比较,以期解析AvBPPS在种子中高表达的分子机制。方法通过FPNI-PCR的方法从海南砂gDNA中克隆AlBPPS的启动子,并与阳春砂AvBPPS启动子进行序列比较,对启动子相似区域进行截短,获得其相应的截短片段;对AvBPPS启动子截短片段中的GCN4-motif进行突变;构建由上述启动子驱动β-葡萄糖苷酸酶基因(β-glucuro-nidase gene,GUS)的重组表达载体,利用农杆菌介导法注射侵染本氏烟草叶片进行瞬时表达,验证启动子的活性和GCN4-motif的功能。结果克隆获得365 bp的AlBPPS启动子序列,3’端约300 bp的序列与AvBPPS启动子的相应序列相似度高达93%,但AlBPPS启动子不含有AvBPPS启动子的GCN4-motif。构建成功与GUS报告基因融合的系列启动子重组载体——VBP∷GUS(AvBPPS启动子全长)、VBPT∷GUS(AvBPPS启动子截短至320 bp)、VBPT-GM∷GUS(截短AvBPPS启动子且突变GCN4-motif)和LBP∷GUS(AlBPPS启动子全长)、LBPT∷GUS(AlBPPS启动子截短至305 bp)。通过GUS染色发现虽然上述启动子均具有驱动GUS基因转录的活性,然而,含有GCN4-motif的启动子,包括全长或截短的AvBPPS启动子(VBP∷GUS和VBPT∷GUS)的活性均高于GCN4-motif突变(VBPT-GM∷GUS)或无GCN4-motif的启动子(LBP∷GUS和LBPT∷GUS)。结论GCN4-motif对基因转录具有正调控作用,为进一步探究AvBPPS启动子的调控机制奠定了基础。

关键词：启动子龙脑基二磷酸合酶阳春砂海南砂 GCN4-motif 瞬时表达

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阳春砂3个萜类合酶基因启动子的克隆及其参与萜类调控的分析

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中草药 2021年第4期52卷 1117-1127页

作者：赵海莹李萌林晓静赵圆圆梁慧琳叶泽萍杨锦芬广州中医药大学中药资源科学与工程研究中心岭南中药资源教育部重点实验室(广州中医药大学)国家中成药工程技术研究中心南药研发实验室广东广州510006 广州中医药大学中药学院广东广州510000

目的获得药用植物阳春砂Amomum villosum萜类合酶基因Av BPPS(bornyl diphosphate synthase)、AvLIS(linalool synthase)和AvHUS(humulene synthase)的启动子,探究其顺式作用调控元件参与萜类合成的调控。方法从阳春砂叶片基因组DNA(genomic DNA,gDNA)中分别克隆获得AvBPPS、AvLIS和AvHUS的gDNA序列,据此设计特异引物,再通过FPNI-PCR(fusion primer and nested integrated PCR,FPNI-PCR)方法分别克隆其启动子并进行生物信息学分析,结合转录组及对应萜类含量数据,分析其较为关键的顺式作用调控元件与萜类调控的关系。结果获得Av BPPS、AvLIS和AvHUS的gDNA长度分别为2374、2295、2362 bp,均包含相应基因的完整编码区和7个外显子。进一步克隆获得470、934、762 bp的启动子。AvBPPS启动子含有参与胚乳表达的顺式作用调控元件GCN4-motif,结合基因表达量的分析,该顺式作用调控元件调控了AvBPPS在阳春砂药用部位种子中的特异表达,进而影响了主要药效萜类成分龙脑、乙酸龙脑酯等在种子中的积累。AvLIS和AvHUS启动子均含有参与茉莉酸甲酯(methyl jasmonate,MeJA)反应的顺式作用调控元件,转录组和萜类含量的分析显示AvLIS响应高浓度MeJA的诱导,而AvHUS没有表现出对MeJA的响应。结论首次从药用植物阳春砂的启动子中发现了参与胚乳表达和MeJA反应的调控元件,为深入探究萜类合成关键酶的种子表达特异性和对MeJA响应的机制提供了基础,为萜类代谢的调控提供了操作元件。

关键词：启动子阳春砂萜类合酶萜类化合物茉莉酸甲酯

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基于转录组测序的越南安息香根、茎和叶基因表达分析

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中草药 2021年第8期52卷 2392-2399页

作者：王小敏许婳婳詹若挺马新业广州中医药大学中药资源科学与工程研究中心岭南中药资源教育部重点实验室国家中成药工程技术研究中心南药研发实验室广东广州510006 广州中医药大学中药学院广东广州510006

目的对越南安息香Styrax tonkinensis进行转录组测序,获得其根、茎和叶的转录组信息特征。方法以越南安息香的根、茎和叶作为研究对象,使用Illumina HiSeq^(TM)2000进行越南安息香根、茎和叶的转录组测序分析。结果转录组测序根、茎和... 详细信息

目的对越南安息香Styrax tonkinensis进行转录组测序,获得其根、茎和叶的转录组信息特征。方法以越南安息香的根、茎和叶作为研究对象,使用Illumina HiSeq^(TM)2000进行越南安息香根、茎和叶的转录组测序分析。结果转录组测序根、茎和叶共获得53835045条高质量序列(clean reads),Trinity de novo组装获得69151条Unigenes,平均长度778.51nt。BLAST分析表明分别有41412(59.89%)、31189(45.10%)、25539(36.93%)、16749(24.22%)个Unigenes在Nr、Swiss-port、KOG、KEGG数据库中得到注释,可归入GO分类的细胞组分、生物过程和分子功能3大类46分支,涉及129条KEGG标准代谢通路,其中有31个次生代谢标准通路。蛋白编码框序列3461个,涉及高等植物转录因子54个家族。使用MISA软件挖掘10974个简单重复序列(SSRs),二碱基重复SSRs数量最为丰富,有6282个(57.24%),五碱基重复SSRs最少,占2.45%。结论利用高通量技术和生物信息分析获得了越南安息香根、茎和叶的转录组信息特征,为后期越南安息香基因功能鉴定、次生代谢途径解析及调控机制的研究奠定基础。

关键词：越南安息香转录组功能基因代谢通路简单重复序列

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青天葵中SKP1同源基因的克隆及原核表达

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中草药 2021年第11期52卷 3383-3390页

作者：黎斯敏左紫梅詹若挺何瑞广州中医药大学中药学院(中医药数理工程研究院)广州中医药大学中药资源科学与工程研究中心岭南中药资源教育部重点实验室国家中成药工程技术研究中心南药研发实验室广东广州510006

目的从青天葵Nervilia fordii克隆SKP1的同源基因NSKs,并对编码的蛋白进行生物信息学分析及原核表达,为了深入研究青天葵中SCF复合体的功能奠定基础。方法从青天葵转录组中筛选得到5条SKP1同源基因序列(NSK2、NSK3、NSK5、NSK7、NSK11)... 详细信息

目的从青天葵Nervilia fordii克隆SKP1的同源基因NSKs,并对编码的蛋白进行生物信息学分析及原核表达,为了深入研究青天葵中SCF复合体的功能奠定基础。方法从青天葵转录组中筛选得到5条SKP1同源基因序列(NSK2、NSK3、NSK5、NSK7、NSK11),构建pGEX-4T-NSKs原核表达载体于大肠杆菌Rosetta (DE3)中诱导表达GST-NSKs融合蛋白并进行纯化。结果 NSK2、NSK3、NSK5、NSK7、NSK11的开放阅读框(ORF)分别为495、483、489、498和486 bp,编码164、160、162、165和161个氨基酸,蛋白相似性达到73.65%,均属于SKP1蛋白家族,具F-box和Cullin蛋白结合位点。亚细胞定位预测NSK2、NSK3和NSK5定位于细胞核,而NSK7和NSK11定位于细胞质和细胞核。系统进化树结果表明,NSK2、NSK3和NSK5聚为一簇,与小麦和玉米等的同源性较高;NSK7和NSK11聚为一簇,与多头绒泡菌的同源性较高。通过构建原核表达载体,确定了在大肠杆菌Rosetta (DE3)中的有利诱导条件,成功诱导表达并纯化得到5个GST-NSKs重组蛋白。结论成功克隆5个SKP1同源基因NSKs,获得NSKs蛋白,为深入研究青天葵中SCF复合体的功能提供了一定的基础。

关键词：青天葵 NSK 基因克隆生物信息学分析原核表达

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青天葵F-box基因的克隆及其与ASK1蛋白互作分析

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中药新药与临床药理 2021年第6期32卷 845-852页

作者：黎斯敏左紫梅詹若挺何瑞广州中医药大学中药学院中药资源科学与工程研究中心岭南中药资源教育部重点实验室国家中成药工程技术研究中心南药研发实验室广东广州510006

目的从濒危药用植物青天葵(Nervilia fordii)中克隆F-box基因,为寻找解决青天葵资源紧缺的方法提供依据。方法从青天葵转录组中筛选得到2个F-box基因的核心片段,以RACE技术获得基因的全长并克隆其编码区;通过荧光定量PCR(qRT-PCR)进行... 详细信息

目的从濒危药用植物青天葵(Nervilia fordii)中克隆F-box基因,为寻找解决青天葵资源紧缺的方法提供依据。方法从青天葵转录组中筛选得到2个F-box基因的核心片段,以RACE技术获得基因的全长并克隆其编码区;通过荧光定量PCR(qRT-PCR)进行组织表达模式分析;利用酵母双杂交实验验证F-box蛋白的F-box区域与拟南芥ASK1蛋白的互作情况。结果从青天葵中克隆到F-box基因NfFBL3和NfFBL4,它们的开放阅读框(open reading frames,ORF)分别长1974、1833 bp,分别编码657、611个氨基酸。二者均包含F-box保守功能结构域,C端具有多个重复亮氨酸序列(Leucine rich repeats,LRRs);NfFBL3和NfFBL4蛋白均为不稳定的疏水蛋白,定位于细胞核,无信号肽及切割位点。系统进化分析表明,NfFBL3和NfFBL4分别与F-box/LRR-repeat protein 3蛋白、F-box/LRR-repeat protein 4蛋白聚在一起。二者均在青天葵的块茎中表达量较高。酵母双杂交实验中NfFBL3的F-box区域能与拟南芥ASK1蛋白互作,而NfFBL4不与ASK1蛋白互作。结论该研究从青天葵中克隆得到2个F-box基因,其中NfFBL3编码的蛋白可与拟南芥ASK1蛋白发生互作,为进一步研究青天葵中Skp1-Cullin-F-box(SCF)复合体的功能提供科学依据。

关键词：青天葵 F-box 生物信息学表达模式分析 RACE技术酵母双杂交实验

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基于DNA条形码的芦荟属6种植物的分子鉴定

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中草药 2016年第11期47卷 1950-1955页

作者：韩洁黄琼林吴文如马新业杨锦芬詹若挺广州中医药大学中药资源科学与工程研究中心岭南中药资源教育部重点实验室国家中成药工程技术研究中心南药研发实验室广东广州510006 广东医学院广东湛江524023 广州中医药大学中药学院广东广州510006

目的筛选出适合芦荟属6种植物的DNA条形码序列。方法采用试剂盒法提取芦荟属6个品种基原植物的18份样本基因组DNA,应用通用引物扩增其核基因ITS2序列和叶绿体psb A-trn H、rbc L、mat K基因序列并进行双向测序,采用Sequencher 4.1.4... 详细信息

目的筛选出适合芦荟属6种植物的DNA条形码序列。方法采用试剂盒法提取芦荟属6个品种基原植物的18份样本基因组DNA,应用通用引物扩增其核基因ITS2序列和叶绿体psb A-trn H、rbc L、mat K基因序列并进行双向测序,采用Sequencher 4.1.4软件对测序峰图进行校对拼接,应用MEGA 5.0软件分析不同候选序列的特征,计算物种的种内、种间Kimura 2-Parameter（K2P）遗传距离,比较其种内、种间变异的大小,评估序列的条形码间距（barcoding gap）,采用邻接法（neighbor-joining,NJ）构建系统聚类树。结果共获得72条序列,ITS2、psb A-trn H、rbc L、mat K基因序列各18条,测序成功率均为100%。比对后序列长度为255~723 bp,GC量范围为30.6%~68.2%。psb A-trn H基因序列的最大种内遗传距离均小于最小种间遗传距离,有明显的barcoding gap,ITS2、rbc L、mat K序列的种内变异和种间变异有一些重叠,没有明显的barcoding gap。基于psb A-trn H序列的发育树能将芦荟属6个品种完全区分,而其他3个序列在区分这些芦荟属品种时存在模糊鉴定。结论 DNA条形码技术可以准确鉴别芦荟属植物,psb A-trn H序列可以作为鉴别芦荟属植物的优选序列。

关键词：芦荟属 DNA条形码分子鉴别 ITS2 psb A-trn H rbc L mat K

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氯化钠对白木香离体根生长、生理和化学成分的影响

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中药新药与临床药理 2018年第4期29卷 502-507页

作者：李文月潘晓琪马新业詹若挺广州中医药大学中药资源科学与工程研究中心岭南中药资源教育部重点实验室国家中成药工程技术研究中心南药研发实验室广东广州510006 广州中医药大学中药学院广东广州510006

目的以白木香离体根为材料,研究NaCl浓度及处理时间对白木香离体根的生长、生理和化学成分的影响,为白木香耐盐性研究提供参考。方法通过次代根的生根率、侧根条数、侧根根长和侧根直径考察盐胁迫对白木香离体根生长的影响,通过脯氨酸... 详细信息

目的以白木香离体根为材料,研究NaCl浓度及处理时间对白木香离体根的生长、生理和化学成分的影响,为白木香耐盐性研究提供参考。方法通过次代根的生根率、侧根条数、侧根根长和侧根直径考察盐胁迫对白木香离体根生长的影响,通过脯氨酸和抗氧化酶含量考察盐胁迫下的生理变化,利用GC-MS分析不同盐处理下化学成分的变化情况。结果随NaCl浓度的增加,次代根的生根率和侧根条数下降,侧根直径和侧根根长呈增加趋势。脯氨酸含量随处理浓度的增加先增后降,抗氧化酶含量在低浓度时随处理时间增加而升高,中高浓度时则呈现先增后降的趋势。化学成分分析显示,与对照组相比,处理组产生了6种新物质。结论低浓度NaCl处理能促进白木香离体根侧根的生长,使脯氨酸和抗氧化酶的含量升高并产生新的化合物;高浓度NaCl严重影响离体根的再生。

关键词：盐胁迫白木香离体根气相色谱-质谱联用

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等离子体对穿心莲种子萌发、幼苗和植株生长及抗逆性的影响

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中药新药与临床药理 2017年第3期28卷 383-387页

作者：汤小婷曾湘达卓一南詹若挺何瑞童家赟广州中医药大学中药资源科学与工程研究中心岭南中药资源教育部重点实验室国家中成药工程技术研究中心南药研发实验室广东广州510006 广州中医药大学中药学院广东广州510006

目的研究低电压激发的空气等离子体处理对穿心莲种子萌发、幼苗和植株生长及其抗逆性的影响。方法考察激发电压、处理时间和处理后放置天数等3个因素,以发芽势、发芽率、发芽指数为评价指标,筛选等离子体处理穿心莲种子促进种子萌发的... 详细信息

目的研究低电压激发的空气等离子体处理对穿心莲种子萌发、幼苗和植株生长及其抗逆性的影响。方法考察激发电压、处理时间和处理后放置天数等3个因素,以发芽势、发芽率、发芽指数为评价指标,筛选等离子体处理穿心莲种子促进种子萌发的适宜条件;采用优选的条件处理种子后进行发芽和育苗试验,测定出苗率;发芽试验7 d和育苗1个月测定植物的抗氧化酶活性及丙二醛(MDA)含量;在种植2个月时测量株高、叶面积和叶绿素含量。结果 30 V电压处理3 s后放置4~6 d对种子萌发的促进作用明显;该条件处理穿心莲种子发芽势和出苗率分别提高40.2%~54.9%、80%,促进植株后期生长,处理组株高、叶面积和叶绿素含量分别高于对照组101.02%、127.85%、14.04%;提高了幼苗期及植株生长期抗氧化酶活性,其中幼苗期过氧化氢酶(CAT)活性提高12.70%、MDA含量降低10.41%,生长期CAT和过氧化物酶(POD)分别提高33.93%、33.47%。结论等离子体处理提高了穿心莲种子活力,促进幼苗和植株生长,增强植株抗逆性。

关键词：空气等离子体穿心莲种子萌发育苗抗逆性

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等离子体处理对不同含水量穿心莲种子萌发的影响

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种子 2019年第1期38卷 54-59页

作者：童家赟唐诗韵汤小婷何瑞广州中医药大学中药学院广东广州510006 广州中医药大学中药资源科学与工程研究中心岭南中药资源教育部重点实验室国家中成药工程技术研究中心南药研发实验室广东广州510006

为探究大气压等离子体处理对不同含水量穿心莲(Andrographis paniculata)种子萌发的影响,通过调节穿心莲种子含水量分别为6.3%、8.6%、12.9%、18.6%、24.0%和33.4%,再进行等离子体处理,经过发芽试验,以发芽势、发芽率、发芽指数、胚根... 详细信息

为探究大气压等离子体处理对不同含水量穿心莲(Andrographis paniculata)种子萌发的影响,通过调节穿心莲种子含水量分别为6.3%、8.6%、12.9%、18.6%、24.0%和33.4%,再进行等离子体处理,经过发芽试验,以发芽势、发芽率、发芽指数、胚根长、活力指数、霉变率、正常幼苗百分比等指标,比较不同含水量的种子受到等离子体处理后的萌发效果。结果表明,穿心莲种子的含水量在12.9%、18.6%、24.0%时,经过大气等离子体处理后种子发芽率、发芽指数得到显著提高;同时种子和幼苗霉变坏死率显著下降,正常幼苗百分比提高。然而,对含水量为6.3%、8.6%和33.4%的种子进行处理,达不到促进萌发的效果。因此,不同含水量穿心莲种子的萌发对等离子体处理的响应不同,说明含水量是影响处理效果的重要因素。结合前期研究结果,在农业生产中,建议以含水量为11.6%～24.0%的穿心莲种子进行等离子体处理效果最佳。本研究为实际播种前处理和进一步研究等离子体技术在农业生产中的应用提供参考。

关键词：穿心莲种子含水量等离子体萌发

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