检索结果-内蒙古大学图书馆

中草药 2022年第19期53卷 6159-6166页

作者：林晓静梁慧琳赵海莹吴清文黄琳璇伍思容杨锦芬广州中医药大学中药学院中药资源科学与工程研究中心岭南中药资源教育部重点实验室(广州中医药大学)国家中成药工程技术研究中心南药研发实验室广东广州510006

目的龙脑基二磷酸合酶(bornyl diphosphate synthase,BPPS)是砂仁药效萜类合成途径中的关键酶,获得海南砂AlBPPS的启动子并与阳春砂AvBPPS启动子进行调控元件和瞬时表达的比较,以期解析AvBPPS在种子中高表达的分子机制。方法通过FPNI-PC... 详细信息

目的龙脑基二磷酸合酶(bornyl diphosphate synthase,BPPS)是砂仁药效萜类合成途径中的关键酶,获得海南砂AlBPPS的启动子并与阳春砂AvBPPS启动子进行调控元件和瞬时表达的比较,以期解析AvBPPS在种子中高表达的分子机制。方法通过FPNI-PCR的方法从海南砂gDNA中克隆AlBPPS的启动子,并与阳春砂AvBPPS启动子进行序列比较,对启动子相似区域进行截短,获得其相应的截短片段;对AvBPPS启动子截短片段中的GCN4-motif进行突变;构建由上述启动子驱动β-葡萄糖苷酸酶基因(β-glucuro-nidase gene,GUS)的重组表达载体,利用农杆菌介导法注射侵染本氏烟草叶片进行瞬时表达,验证启动子的活性和GCN4-motif的功能。结果克隆获得365 bp的AlBPPS启动子序列,3’端约300 bp的序列与AvBPPS启动子的相应序列相似度高达93%,但AlBPPS启动子不含有AvBPPS启动子的GCN4-motif。构建成功与GUS报告基因融合的系列启动子重组载体——VBP∷GUS(AvBPPS启动子全长)、VBPT∷GUS(AvBPPS启动子截短至320 bp)、VBPT-GM∷GUS(截短AvBPPS启动子且突变GCN4-motif)和LBP∷GUS(AlBPPS启动子全长)、LBPT∷GUS(AlBPPS启动子截短至305 bp)。通过GUS染色发现虽然上述启动子均具有驱动GUS基因转录的活性,然而,含有GCN4-motif的启动子,包括全长或截短的AvBPPS启动子(VBP∷GUS和VBPT∷GUS)的活性均高于GCN4-motif突变(VBPT-GM∷GUS)或无GCN4-motif的启动子(LBP∷GUS和LBPT∷GUS)。结论GCN4-motif对基因转录具有正调控作用,为进一步探究AvBPPS启动子的调控机制奠定了基础。

关键词：启动子龙脑基二磷酸合酶阳春砂海南砂 GCN4-motif 瞬时表达

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顶空-气质联用法比较不同品种橘红胎挥发性成分差异

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中药新药与临床药理 2023年第2期34卷 241-248页

作者：莫穗芬方媛杨惠琳倪晨詹若挺严萍广州中医药大学中药学院广东广州510006 广州中医药大学中药资源科学与工程研究中心、岭南中药资源教育部重点实验室(广州中医药大学) 国家中成药工程技术研究中心南药研发实验室广东广州510006 岭南现代农业科学与技术广东省实验室茂名分中心广东茂名525099

目的建立快速分析橘红胎中挥发性成分的方法,比较不同品种橘红胎挥发性成分的差异。方法采用静态顶空-气质联用(HS-GC-MS)技术分析橘红胎样品。采用质谱标准库(NIST17、WILEY275)检索,确定不同品种橘红胎中挥发性成分并比较差异,通过... 详细信息

目的建立快速分析橘红胎中挥发性成分的方法,比较不同品种橘红胎挥发性成分的差异。方法采用静态顶空-气质联用(HS-GC-MS)技术分析橘红胎样品。采用质谱标准库(NIST17、WILEY275)检索,确定不同品种橘红胎中挥发性成分并比较差异,通过主成分分析、聚类分析对不同品种橘红胎进行归类。结果共鉴定出橘红胎中49个挥发性成分,包括有烯类、醛类、醇类等,其中以烯类成分含量最高,超过总挥发性成分50%。副毛橘红胎中含有较高的乙酸龙脑酯,此成分在以柚类作为砧木的密叶红肉正毛、密叶黄龙正毛橘红胎中亦有检出,但含量较低。主成分分析和聚类分析均可将橘红胎按品种区分,两者的结果相一致。结论不同品种的橘红胎挥发性成分有较大差异。所建立的HS-GC-MS分析方法稳定可靠,可用于橘红胎中挥发性成分的测定。

关键词：橘红胎挥发性成分顶空-气相色谱-质谱联用主成分分析聚类分析品种差异

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橘红胎商品规格等级评价

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中成药 2023年第1期45卷 148-154页

作者：方媛杨惠琳莫穗芬袁丽娴严萍詹若挺广州中医药大学中药学院广东广州510006 广州中医药大学中药资源科学与工程研究中心岭南中药资源教育部重点实验室(广州中医药大学)国家中成药工程技术研究中心南药研发实验室广东广州510006 岭南现代农业科学与技术广东省实验室茂名分中心广东茂名525099

目的对橘红胎的性状特征及黄酮类成分进行测定,为制定橘红胎商品规格等级划分提供参考。方法收集54批样品,观察其果实形状特征,测定总黄酮、柚皮苷、野漆树苷、柚皮素含量。通过相关性分析、主成分分析、聚类分析探究橘红胎状特征与其... 详细信息

目的对橘红胎的性状特征及黄酮类成分进行测定,为制定橘红胎商品规格等级划分提供参考。方法收集54批样品,观察其果实形状特征,测定总黄酮、柚皮苷、野漆树苷、柚皮素含量。通过相关性分析、主成分分析、聚类分析探究橘红胎状特征与其黄酮类成分的相关性。结果K-均值聚类分析可将橘红胎分为一等、二等、三等,其中一等品果实直径<20.00 mm,质量<5.00 g,总黄酮、柚皮苷、柚皮素、野漆树苷含量分别大于38.00%、35.00%、1.12%、0.09%;二等品果实直径20.00~50.00 mm,质量5~25 g,4种成分含量分别为38.00%~30.00%、35.00%~25.00%、1.12%~0.99%、0.09%~0.08%;三等品果实直径>50.00 mm,果实质量>25.00 g,4种成分含量分别为30.00%~10.00%、25.00%~7.49%、0.99%~0.47%、0.08%~0.04%。结论本实验将橘红胎形状特征与黄酮类成分含量相结合,可为该药材商品等级评价提供参考。

关键词：橘红胎商品规格等级形状特征黄酮

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具胁迫“记忆”特征的白木香离体根的转录组分析

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分子植物育种 2023年

作者：刘雪洁秦雪莲李文月詹若挺马新业广州中医药大学中药学院中药资源科学与工程研究中心岭南中药资源教育部重点实验室(广州中医药大学)国家中成药工程技术研究中心南药研发实验室岭南现代农业科学与技术广东省实验室茂名分中心

为探究白木香离体根在连续三代盐胁迫下的胁迫响应机制，本研究以白木香离体根为材料，对一代、二代、三代盐胁迫下处理组和对照组的离体根进行脯氨酸含量测定和转录组测序。结果表明，离体根中脯氨酸的含量在连续三代盐胁迫下持续上升... 详细信息

为探究白木香离体根在连续三代盐胁迫下的胁迫响应机制，本研究以白木香离体根为材料，对一代、二代、三代盐胁迫下处理组和对照组的离体根进行脯氨酸含量测定和转录组测序。结果表明，离体根中脯氨酸的含量在连续三代盐胁迫下持续上升，尤其是在第三代具有极显著的上升趋势，说明白木香离体根在连续三代盐胁迫下具有胁迫“记忆”。转录组分析表明，白木香离体根在一代、二代、三代盐胁迫处理下分别获得11 422、10 815、11 799个差异表达基因。GO富集分析表明，差异基因显著富集在细胞壁、细胞外围、胞外区域和氧化还原酶活性等GO条目。KEGG富集分析表明，白木香离体根通过激素信号转导网络、谷胱甘肽代谢和脯氨酸代谢途径来响应连续三代的盐胁迫，其中脯氨酸的积累通过脯氨酸合成相关酶基因的上调和脯氨酸羟基酶基因的下调实现。本研究探讨了具胁迫“记忆”特征的白木香离体根在连续三代盐胁迫下的分子响应机制，为明确白木香的胁迫防御机制奠定基础。

关键词：白木香脯氨酸胁迫记忆转录组差异表达基因

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基于植物代谢组学和网络药理学分析预测鸡骨草药材的质量标志物

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世界科学技术-中医药现代化 2023年第6期25卷 1972-1986页

作者：徐月阳史军杰彭丽华方碧烟陈炜璇成金乐广州中医药大学中药学院广州510006 广州中医药大学中药资源科学与工程研究中心/岭南中药资源教育部重点实验室广州510006 国家中成药工程技术研究中心、南药研发实验室广州510006 中山市中智药业集团有限公司中山528437

目的基于植物代谢组学分析鸡骨草药材的次生代谢产物,并结合多元统计学和网络药理学预测分析鸡骨草药材的质量标志物(Q-Marker)。方法建立UPLC-Q-TOF-MS分析方法,分析11批次鸡骨草药材的化学成分,确定其共有成分。通过聚类分析(HCA)、... 详细信息

目的基于植物代谢组学分析鸡骨草药材的次生代谢产物,并结合多元统计学和网络药理学预测分析鸡骨草药材的质量标志物(Q-Marker)。方法建立UPLC-Q-TOF-MS分析方法,分析11批次鸡骨草药材的化学成分,确定其共有成分。通过聚类分析(HCA)、主成分分析(PCA)和偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)确认造成11批次鸡骨草药材分类的主要差异成分,再运用网络药理学构建“核心成分-核心靶点-核心通路”网络,筛选预测鸡骨草药材的潜在Q-Marker,并进行分子对接验证其活性。结果11批次鸡骨草药材中含有39个共有成分,主要为三萜皂苷类、黄酮类、生物碱类等。经聚类分析和主成分分析显示11批次鸡骨草药材分为4类,后经偏最小二乘判别分析发现其中9个化学成分在分类中起重要作用。网络药理学分析结果表明,以上9个成分为活性成分,作用于166个靶点,通过蛋白质互作(PPI)筛选得到29个核心靶点,其中4个化学成分相思子碱、下箴刺桐碱、大豆皂苷Ⅰ、精氨酸与核心靶点的关联度高,结合QMarker理念及分子对接结果,初步预测相思子碱和下箴刺桐碱为鸡骨草药材的Q-Marker。结论利用植物代谢组学结合多元统计学和网络药理学预测分析鸡骨草药材的Q-Marker,为鸡骨草药材的质量控制与评价提供数据参考,为进一步科学开发鸡骨草药材提供研究思路。

关键词：鸡骨草药材质量标志物植物代谢组学网络药理学相思子碱下箴刺桐碱

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青天葵中SKP1同源基因的克隆及原核表达

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中草药 2021年第11期52卷 3383-3390页

作者：黎斯敏左紫梅詹若挺何瑞广州中医药大学中药学院(中医药数理工程研究院)广州中医药大学中药资源科学与工程研究中心岭南中药资源教育部重点实验室国家中成药工程技术研究中心南药研发实验室广东广州510006

目的从青天葵Nervilia fordii克隆SKP1的同源基因NSKs,并对编码的蛋白进行生物信息学分析及原核表达,为了深入研究青天葵中SCF复合体的功能奠定基础。方法从青天葵转录组中筛选得到5条SKP1同源基因序列(NSK2、NSK3、NSK5、NSK7、NSK11)... 详细信息

目的从青天葵Nervilia fordii克隆SKP1的同源基因NSKs,并对编码的蛋白进行生物信息学分析及原核表达,为了深入研究青天葵中SCF复合体的功能奠定基础。方法从青天葵转录组中筛选得到5条SKP1同源基因序列(NSK2、NSK3、NSK5、NSK7、NSK11),构建pGEX-4T-NSKs原核表达载体于大肠杆菌Rosetta (DE3)中诱导表达GST-NSKs融合蛋白并进行纯化。结果 NSK2、NSK3、NSK5、NSK7、NSK11的开放阅读框(ORF)分别为495、483、489、498和486 bp,编码164、160、162、165和161个氨基酸,蛋白相似性达到73.65%,均属于SKP1蛋白家族,具F-box和Cullin蛋白结合位点。亚细胞定位预测NSK2、NSK3和NSK5定位于细胞核,而NSK7和NSK11定位于细胞质和细胞核。系统进化树结果表明,NSK2、NSK3和NSK5聚为一簇,与小麦和玉米等的同源性较高;NSK7和NSK11聚为一簇,与多头绒泡菌的同源性较高。通过构建原核表达载体,确定了在大肠杆菌Rosetta (DE3)中的有利诱导条件,成功诱导表达并纯化得到5个GST-NSKs重组蛋白。结论成功克隆5个SKP1同源基因NSKs,获得NSKs蛋白,为深入研究青天葵中SCF复合体的功能提供了一定的基础。

关键词：青天葵 NSK 基因克隆生物信息学分析原核表达

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基于转录组测序的越南安息香根、茎和叶基因表达分析

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中草药 2021年第8期52卷 2392-2399页

作者：王小敏许婳婳詹若挺马新业广州中医药大学中药资源科学与工程研究中心岭南中药资源教育部重点实验室国家中成药工程技术研究中心南药研发实验室广东广州510006 广州中医药大学中药学院广东广州510006

目的对越南安息香Styrax tonkinensis进行转录组测序,获得其根、茎和叶的转录组信息特征。方法以越南安息香的根、茎和叶作为研究对象,使用Illumina HiSeq^(TM)2000进行越南安息香根、茎和叶的转录组测序分析。结果转录组测序根、茎和... 详细信息

目的对越南安息香Styrax tonkinensis进行转录组测序,获得其根、茎和叶的转录组信息特征。方法以越南安息香的根、茎和叶作为研究对象,使用Illumina HiSeq^(TM)2000进行越南安息香根、茎和叶的转录组测序分析。结果转录组测序根、茎和叶共获得53835045条高质量序列(clean reads),Trinity de novo组装获得69151条Unigenes,平均长度778.51nt。BLAST分析表明分别有41412(59.89%)、31189(45.10%)、25539(36.93%)、16749(24.22%)个Unigenes在Nr、Swiss-port、KOG、KEGG数据库中得到注释,可归入GO分类的细胞组分、生物过程和分子功能3大类46分支,涉及129条KEGG标准代谢通路,其中有31个次生代谢标准通路。蛋白编码框序列3461个,涉及高等植物转录因子54个家族。使用MISA软件挖掘10974个简单重复序列(SSRs),二碱基重复SSRs数量最为丰富,有6282个(57.24%),五碱基重复SSRs最少,占2.45%。结论利用高通量技术和生物信息分析获得了越南安息香根、茎和叶的转录组信息特征,为后期越南安息香基因功能鉴定、次生代谢途径解析及调控机制的研究奠定基础。

关键词：越南安息香转录组功能基因代谢通路简单重复序列

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阳春砂3个萜类合酶基因启动子的克隆及其参与萜类调控的分析

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中草药 2021年第4期52卷 1117-1127页

作者：赵海莹李萌林晓静赵圆圆梁慧琳叶泽萍杨锦芬广州中医药大学中药资源科学与工程研究中心岭南中药资源教育部重点实验室(广州中医药大学)国家中成药工程技术研究中心南药研发实验室广东广州510006 广州中医药大学中药学院广东广州510000

目的获得药用植物阳春砂Amomum villosum萜类合酶基因Av BPPS(bornyl diphosphate synthase)、AvLIS(linalool synthase)和AvHUS(humulene synthase)的启动子,探究其顺式作用调控元件参与萜类合成的调控。方法从阳春砂叶片基因组DNA(genomic DNA,gDNA)中分别克隆获得AvBPPS、AvLIS和AvHUS的gDNA序列,据此设计特异引物,再通过FPNI-PCR(fusion primer and nested integrated PCR,FPNI-PCR)方法分别克隆其启动子并进行生物信息学分析,结合转录组及对应萜类含量数据,分析其较为关键的顺式作用调控元件与萜类调控的关系。结果获得Av BPPS、AvLIS和AvHUS的gDNA长度分别为2374、2295、2362 bp,均包含相应基因的完整编码区和7个外显子。进一步克隆获得470、934、762 bp的启动子。AvBPPS启动子含有参与胚乳表达的顺式作用调控元件GCN4-motif,结合基因表达量的分析,该顺式作用调控元件调控了AvBPPS在阳春砂药用部位种子中的特异表达,进而影响了主要药效萜类成分龙脑、乙酸龙脑酯等在种子中的积累。AvLIS和AvHUS启动子均含有参与茉莉酸甲酯(methyl jasmonate,MeJA)反应的顺式作用调控元件,转录组和萜类含量的分析显示AvLIS响应高浓度MeJA的诱导,而AvHUS没有表现出对MeJA的响应。结论首次从药用植物阳春砂的启动子中发现了参与胚乳表达和MeJA反应的调控元件,为深入探究萜类合成关键酶的种子表达特异性和对MeJA响应的机制提供了基础,为萜类代谢的调控提供了操作元件。

关键词：启动子阳春砂萜类合酶萜类化合物茉莉酸甲酯

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四倍体和二倍体野菊茎的miRNA比较分析

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分子植物育种 2022年

作者：秦雪莲刘雪洁马东明韩正洲詹若挺马新业广州中医药大学中药学院中药资源科学与工程研究中心岭南中药资源教育部重点实验室(广州中医药大学)国家中成药工程技术研究中心南药研发实验室岭南现代农业科学与技术广东省实验室茂名分中心华润三九医药股份有限公司

利用生物信息学手段分析两种倍型野菊茎的miRNA差异表达信息。使用EASYspin Plus植物快速提取试剂盒提取四倍体、二倍体野菊茎的总RNA，利用Illumina HiSeqTM2000二代高通量测序平台进行Small RNA测序。对测序结果进行注释和筛选，得到...

利用生物信息学手段分析两种倍型野菊茎的miRNA差异表达信息。使用EASYspin Plus植物快速提取试剂盒提取四倍体、二倍体野菊茎的总RNA，利用Illumina HiSeqTM2000二代高通量测序平台进行Small RNA测序。对测序结果进行注释和筛选，得到两样品中的已知miRNA和未知miRNA。筛选差异表达的miRNA，并对差异表达miRNA的靶基因进行生物信息学分析，探究其主要的生物学功能和可能参与的信号通路。四倍体样品中共鉴定出321个已知miRNA和74个未知miRNA；二倍体样品中共鉴定出228个已知miRNA和66个未知miRNA。两样品中差异表达的miRNA为98个，差异miRNA靶基因70个。GO功能注释和KEGG Pathway富集分析显示，差异miRNA靶基因主要参与了细胞过程、代谢过程、细胞、细胞部分、结合和催化等生物学过程，涉及次生代谢产物的生物合成、植物病原相互作用、核糖体等生物代谢和信号转导途径。本实验以茎为对象探讨了四倍体、二倍体野菊的种内miRNA表达差异，丰富了野菊种内多样性理解。

关键词：

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青天葵F-box基因的克隆及其与ASK1蛋白互作分析

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中药新药与临床药理 2021年第6期32卷 845-852页

作者：黎斯敏左紫梅詹若挺何瑞广州中医药大学中药学院中药资源科学与工程研究中心岭南中药资源教育部重点实验室国家中成药工程技术研究中心南药研发实验室广东广州510006

目的从濒危药用植物青天葵(Nervilia fordii)中克隆F-box基因,为寻找解决青天葵资源紧缺的方法提供依据。方法从青天葵转录组中筛选得到2个F-box基因的核心片段,以RACE技术获得基因的全长并克隆其编码区;通过荧光定量PCR(qRT-PCR)进行... 详细信息

目的从濒危药用植物青天葵(Nervilia fordii)中克隆F-box基因,为寻找解决青天葵资源紧缺的方法提供依据。方法从青天葵转录组中筛选得到2个F-box基因的核心片段,以RACE技术获得基因的全长并克隆其编码区;通过荧光定量PCR(qRT-PCR)进行组织表达模式分析;利用酵母双杂交实验验证F-box蛋白的F-box区域与拟南芥ASK1蛋白的互作情况。结果从青天葵中克隆到F-box基因NfFBL3和NfFBL4,它们的开放阅读框(open reading frames,ORF)分别长1974、1833 bp,分别编码657、611个氨基酸。二者均包含F-box保守功能结构域,C端具有多个重复亮氨酸序列(Leucine rich repeats,LRRs);NfFBL3和NfFBL4蛋白均为不稳定的疏水蛋白,定位于细胞核,无信号肽及切割位点。系统进化分析表明,NfFBL3和NfFBL4分别与F-box/LRR-repeat protein 3蛋白、F-box/LRR-repeat protein 4蛋白聚在一起。二者均在青天葵的块茎中表达量较高。酵母双杂交实验中NfFBL3的F-box区域能与拟南芥ASK1蛋白互作,而NfFBL4不与ASK1蛋白互作。结论该研究从青天葵中克隆得到2个F-box基因,其中NfFBL3编码的蛋白可与拟南芥ASK1蛋白发生互作,为进一步研究青天葵中Skp1-Cullin-F-box(SCF)复合体的功能提供科学依据。

关键词：青天葵 F-box 生物信息学表达模式分析 RACE技术酵母双杂交实验

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