检索结果-内蒙古大学图书馆

广藿香(Pogostemon cablin)PatWRKY40和PatWRKY53的基因克隆与表达分析

分子植物育种 2020年第11期18卷 3555-3561页

作者：唐云吴带娣林凤如陈立凯詹若挺广州中医药大学中药资源科学与工程研究中心岭南中药资源教育部重点实验室国家中成药工程技术研究中心南药研发实验室广州510006

WRKY转录因子在转录调控、次生代谢调控和生长发育中起关键作用。为了了解WRKY转录因子在广藿香中的调控模式,本研究从广藿香转录组数据中,筛选获得WRKY家族中的PatWRKY40和PatWRKY53基因,利用PCR技术克隆得到基因的全长编码区。对PatWR... 详细信息

WRKY转录因子在转录调控、次生代谢调控和生长发育中起关键作用。为了了解WRKY转录因子在广藿香中的调控模式,本研究从广藿香转录组数据中,筛选获得WRKY家族中的PatWRKY40和PatWRKY53基因,利用PCR技术克隆得到基因的全长编码区。对PatWRKY40和PatWRKY53基因进行生物信息学分析。结果表明:PatWRKY40和PatWRKY53基因全长分别为1074 bp和1150 bp,编码213个和340个氨基残基,蛋白分子量为33.31 kD和37.79 kD,都属于亲水蛋白,预测其均定位于细胞核。此外,PatWRKY40和PatWRKY53分别属于Ⅱ类和Ⅲ类WRKY转录因子,并具有不同的蛋白结构,系统发育树分析这2个基因在不同分枝上。利用RT-PCR对PatWRKY40和PatWRKY53的表达模式进行分析,发现PatWRKY40具有组织表达差异(叶>花>茎),PatWRKY40和PatWRKY53在MeJA诱导6 h后表达量被显著上调了1.6倍和3.2倍。表明PatWRKY40和PatWRKY53明显受到JA诱导,可能介导JA信号通路参与广藿香的发育及代谢调控。本研究首次克隆广藿香的WRKY类转录因子并解析其表达模式,为后续PatWRKY40和PatWRKY53的功能鉴定及对其调控网络研究提供理论参考。

关键词：广藿香(Pogostemon cablin) PatWRKY40 PatWRKY53 克隆表达模式

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顶空-气相质谱联用技术分析凉粉草挥发性成分

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广州中医药大学学报 2021年第5期38卷 1025-1031页

作者：卢晓莹林翠清赖志明江晓鑫严萍詹若挺广州中医药大学中药资源科学与工程研究中心、岭南中药资源教育部重点实验室(广州中医药大学) 国家中成药工程技术研究中心南药研发实验室广东广州510006 广东南领药业有限公司广东平远514600

【目的】分析不同加工方式和不同栽培品种凉粉草挥发性成分差异。【方法】采用顶空-气相色谱质谱联用(HS-GC-MS)技术测定分析不同凉粉草样品挥发性成分,分析结果通过质谱标准库检索,并采用面积归一化法计算相对质量分数,比较不同样品挥... 详细信息

【目的】分析不同加工方式和不同栽培品种凉粉草挥发性成分差异。【方法】采用顶空-气相色谱质谱联用(HS-GC-MS)技术测定分析不同凉粉草样品挥发性成分,分析结果通过质谱标准库检索,并采用面积归一化法计算相对质量分数,比较不同样品挥发性成分差异。【结果】从台湾凉粉草和本地凉粉草中共鉴别出24种挥发性成分,主要为烯类成分。2种凉粉草中均含有较大比例的石竹烯,台湾凉粉草中含12.9%,本地凉粉草中含34.2%。台湾凉粉草中特有成分α-芹子烯、β-芹子烯和α-红没药醇等共占25.5%。微发汗处理对凉粉草中石竹烯类成分的影响较大。【结论】建立的HS-GC-MS联用技术可对凉粉草的挥发性成分进行快速、有效的定性分析,且本地凉粉草与台湾引种的凉粉草挥发油特征成分差异较大,可为其鉴别提供参考。

关键词：凉粉草台湾引种顶空-气相质谱联用挥发性成分石竹烯

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基于中药QbD理念的当归破壁粉质量评价研究

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中国中药杂志 2020年第5期45卷 1105-1113页

作者：罗铮邓雯张前亮方碧烟成金乐广州中医药大学中药资源科学与工程研究中心广东广州510006 中山市中智药业集团有限公司广东中山528437 国家中医药管理局中药破壁饮片技术与应用重点研究室广东中山528437 广州中医药大学岭南中药资源教育部重点实验室广东广州510006 国家中成药工程技术研究中心南药研发实验室广东广州510006

该文以当归破壁饮片的工艺中间体当归破壁粉为研究对象,以HPLC指纹图谱结合多成分含量测定(阿魏酸、洋川芎内酯Ⅰ、阿魏酸松柏酯、藁本内酯及丁烯基苯酞)、物理指纹图谱(D90、粒径分布范围、粒径分布宽度、松密度、振实密度、颗粒间孔... 详细信息

该文以当归破壁饮片的工艺中间体当归破壁粉为研究对象,以HPLC指纹图谱结合多成分含量测定(阿魏酸、洋川芎内酯Ⅰ、阿魏酸松柏酯、藁本内酯及丁烯基苯酞)、物理指纹图谱(D90、粒径分布范围、粒径分布宽度、松密度、振实密度、颗粒间孔隙率、卡尔指数、比表面积、孔体积、休止角、豪斯纳比、干燥失重及吸湿性)表征当归破壁粉的质量属性;以相似度分析、聚类分析、主成分分析及正交偏最小二乘法判别分析构建基于中药QbD"四全模式"--全息分析的质量评价方法。对不同来源的当归破壁粉进行质量评价,找出差异性指标。该质量评价方法可以科学、全面的评价当归破壁粉质量属性,可用于不同来源或不同工艺破壁粉的质量一致性评价,为中药破壁饮片的质量控制和研发提供新的思路。

关键词：当归破壁粉质量源于设计 HPLC指纹图谱物理指纹图谱多元统计分析质量评价

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玫瑰花破壁饮片HPLC指纹图谱及不同工艺样品比较研究

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现代中药研究与实践 2021年第4期35卷 56-61页

作者：徐月阳甘均龙史军杰潘均华彭丽华成金乐广州中医药大学中药资源科学与工程研究中心广东广州510006 中山市中智药业集团有限公司国家中医药管理局中药破壁饮片技术与应用重点研究室广东中山528437 广州中医药大学岭南中药资源教育部重点实验室广东广州510006 国家中成药工程技术研究中心南药研发实验室广东广州510006

目的建立玫瑰花破壁饮片HPLC指纹图谱,分析玫瑰花传统饮片(DP)、破壁粉体(UP)与破壁饮片(UGP)之间化学成分的相关性以及不同工艺破壁饮片样品的差异性,为玫瑰花破壁饮片整体质量控制提供依据。方法采用HPLC法测定65批玫瑰花样品的指纹图... 详细信息

目的建立玫瑰花破壁饮片HPLC指纹图谱,分析玫瑰花传统饮片(DP)、破壁粉体(UP)与破壁饮片(UGP)之间化学成分的相关性以及不同工艺破壁饮片样品的差异性,为玫瑰花破壁饮片整体质量控制提供依据。方法采用HPLC法测定65批玫瑰花样品的指纹图谱,建立指纹图谱共有模式,并进行相似度评价以及对35批玫瑰花破壁饮片进行聚类分析和主成分分析。结果建立了玫瑰花破壁饮片HPLC指纹图谱,标定了17个共有峰,指认其中2个化学成分。玫瑰花破壁饮片原料至成品,全谱相似度可达0.99以上。通过SIMCA分析找出造成玫瑰花破壁饮片不同工艺样品分类的主要8个差异成分。结论所建立的方法稳定、重复性好、可靠,可用于玫瑰花破壁饮片的综合评价与质量控制。

关键词：玫瑰花破壁饮片指纹图谱 HPLC 工艺

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岗梅磺酸基转移酶基因的克隆与体外表达

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中草药 2019年第11期50卷 2683-2689页

作者：林青小芸官慧儿纪晓宇徐晖广州中医药大学中药资源科学与工程研究中心岭南中药资源教育部重点实验室(广州中医药大学)国家中成药工程技术研究中心南药研发实验室

目的药用植物岗梅Ilex asprella含有多种活性磺化三萜类成分,克隆岗梅中的磺酸基转移酶编码(sulfotransferase,ST)基因,以了解其独特的磺化机制。方法利用RT-PCR技术,由岗梅叶片RNA扩增获得了2个可能的磺酸基转移酶基因IaST1和IaST2,利... 详细信息

目的药用植物岗梅Ilex asprella含有多种活性磺化三萜类成分,克隆岗梅中的磺酸基转移酶编码(sulfotransferase,ST)基因,以了解其独特的磺化机制。方法利用RT-PCR技术,由岗梅叶片RNA扩增获得了2个可能的磺酸基转移酶基因IaST1和IaST2,利用生物信息学工具对其进行分析,并将其转化至大肠杆菌E. coli进行原核表达。结果序列分析显示,IaST1与IaST2各包含1个开放阅读框,分别长1002bp和993bp,编码333和330个氨基酸,理论相对分子质量为55500和54700。二者均具有ST的5个保守结构氨基酸序列,与黄顶菊Flaveriabidentis的黄酮醇C-3磺酸基转移酶亲缘关系较近。SDS-PAGE显示在E. coli中成功表达了IaST1和IaST2蛋白。结论首次从岗梅中克隆了ST基因,为后续阐明其功能及其在岗梅三萜磺化中的作用奠定了基础。

关键词：岗梅磺酸基转移酶基因序列分析基因克隆体外表达

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毛冬青三萜C-28位氧化修饰相关CYP450基因的发掘和功能鉴定

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中国药科大学学报 2019年第4期50卷 459-467页

作者：陈媛媛赖美红贠小芸王魁徐晖广州中医药大学中药资源科学与工程研究中心岭南中药资源教育部重点实验室(广州中医药大学)国家中成药工程技术研究中心南药研发实验室

药用植物毛冬青Ilex pubescens *** Arn.含有大量的五环三萜及三萜皂苷,化学结构复杂多样。三萜类化合物骨架的修饰与其生物合成途径下游的一类关键酶——细胞色素P450单加氧酶(CYP450)密切相关。本研究通过分析毛冬青转录组数据,筛选到... 详细信息

药用植物毛冬青Ilex pubescens *** Arn.含有大量的五环三萜及三萜皂苷,化学结构复杂多样。三萜类化合物骨架的修饰与其生物合成途径下游的一类关键酶——细胞色素P450单加氧酶(CYP450)密切相关。本研究通过分析毛冬青转录组数据,筛选到1个可能具有五环三萜C-28位氧化功能的CYP450基因(IpAO2)。克隆IpAO2基因并将其通过质粒转化法导入能高效合成amyrin的酿酒酵母工程菌中,GC-MS分析重组酵母代谢产物,发现IpAO2基因编码的蛋白可以将α-amyrin和β-amyrin分别氧化为熊果酸和齐墩果酸,确定IpAO2是一个五环三萜C-28位氧化酶基因。IpAO2基因的鉴定对全面阐明毛冬青三萜及三萜皂苷的生物合成机制具有重要意义,为后期开展毛冬青活性三萜类化合物的代谢工程研究奠定了基础。

关键词：毛冬青三萜生物合成 C-28氧化酶熊果酸酿酒酵母

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凉粉草不同极性部位抗氧化及对α-葡萄糖苷酶抑制作用研究

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医药导报 2020年第3期39卷 286-291页

作者：宋晓娟卢晓莹曾唯雅伍铭坤庄伟权严萍詹若挺广州中医药大学中药资源科学与工程研究中心、岭南中药资源教育部重点实验室(广州中医药大学)、国家中成药工程技术研究中心南药研发实验室、广东省教育厅重点提升平台建设项目—岭南中药资源教育部重点实验室广州510006

目的研究凉粉草醇提物不同极性部位抗氧化活性及对α-葡萄糖苷酶抑制作用,并筛选最优部位。方法制备凉粉草醇提液,依次用石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯、水饱和正丁醇萃取得到不同极性部位,测定1,1-二苯基-2苦基肼自由基(DPPH自由基)、2,2... 详细信息

目的研究凉粉草醇提物不同极性部位抗氧化活性及对α-葡萄糖苷酶抑制作用,并筛选最优部位。方法制备凉粉草醇提液,依次用石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯、水饱和正丁醇萃取得到不同极性部位,测定1,1-二苯基-2苦基肼自由基(DPPH自由基)、2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐自由基(ABTS自由基)清除能力及铁离子抗氧化能力(FRAP)值,根据清除率计算半数抑制率(IC50值),考察不同部位抗氧化能力。通过比较不同部位对α-葡萄糖苷酶抑制能力,考察不同部位对α-葡萄糖苷酶抑制作用。测定各部位多酚含量。结果凉粉草提取物不同极性部位均有抗氧化活性,其中乙酸乙酯部位抗氧化活性最强,DPPH·清除率IC50为19.13μg·mL^-1,ABTS+清除率IC50为18.20μg·mL^-1,FRAP值平均相当于Fe2+392.07μg·mL^-1。不同部位对α-葡萄糖苷酶抑制作用比较,正丁醇部位最优。结论凉粉草提取物及不同极性部位均具有一定抗氧化活性及对α-葡萄糖苷酶的抑制作用。该研究可为凉粉草开发利用提供实验依据。

关键词：凉粉草极性部位抗氧化活性 α-葡萄糖苷酶

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不同产地红景天破壁饮片、破壁粉体和传统饮片HPLC指纹图谱相关性研究

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现代中药研究与实践 2021年第1期35卷 33-37页

作者：方碧烟甘均龙史军杰彭丽华陈炜璇成金乐广州中医药大学中药资源科学与工程研究中心广东广州510006 国家中医药管理局中药破壁饮片技术与应用重点研究室中山市中智药业集团有限公司广东中山528437 岭南中药资源教育部重点实验室(广州中医药大学) 广东广州510006 国家中成药工程技术研究中心南药研发实验室广东广州510006

目的建立红景天破壁饮片(UGP)、破壁粉体(UP)及传统饮片(DP)的HPLC指纹图谱及其分析方法,为全面评价红景天破壁饮片的质量提供参考。方法通过HPLC采集10批次红景天传统饮片、破壁粉体及破壁饮片的指纹图谱,并对其进行相似度评价、主成... 详细信息

目的建立红景天破壁饮片(UGP)、破壁粉体(UP)及传统饮片(DP)的HPLC指纹图谱及其分析方法,为全面评价红景天破壁饮片的质量提供参考。方法通过HPLC采集10批次红景天传统饮片、破壁粉体及破壁饮片的指纹图谱,并对其进行相似度评价、主成分分析(PCA)和系统聚类分析(HCA)。结果建立了红景天破壁饮片、破壁粉体和传统饮片的HPLC指纹图谱,确定了18个共有峰;同一批次的红景天破壁饮片、破壁粉体及其传统饮片之间的指纹图谱相似度达0.99以上;通过PCA和HCA分析,可将不同产地红景天样品分为3类。结论所建立的指纹图谱分析方法稳定、可靠、重复性好,可为红景天破壁饮片的质量控制及评价提供参考依据。

关键词：红景天传统饮片破壁粉体破壁饮片指纹图谱不同产地

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阳春砂萜类合酶AvTPS1启动子的克隆及其活性分析

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中草药 2019年第9期50卷 2181-2187页

作者：王虹李萌马东明叶鹏詹若挺杨锦芬广州中医药大学中药资源科学与工程研究中心岭南中药资源教育部重点实验室(广州中医药大学)国家中成药工程技术研究中心南药研发实验室广东广州510006

目的获得药用植物阳春砂Amomumvillousm的萜类合酶基因Av TPS1的启动子并进行活性分析。方法从阳春砂叶片基因组DNA(g DNA)中克隆获得Av TPS1基因,再通过FPNI-PCR的方法从阳春砂叶片g DNA中克隆Av TPS1的启动子并进行序列分析,构建由该... 详细信息

目的获得药用植物阳春砂Amomumvillousm的萜类合酶基因Av TPS1的启动子并进行活性分析。方法从阳春砂叶片基因组DNA(g DNA)中克隆获得Av TPS1基因,再通过FPNI-PCR的方法从阳春砂叶片g DNA中克隆Av TPS1的启动子并进行序列分析,构建由该启动子驱动β-葡萄糖苷酸酶基因(GUS)的重组表达载体p CAM-Av TPS1p,利用农杆菌介导法注射侵染烟草Nicotianabenthamiana叶片进行瞬时表达来验证Av TPS1启动子的活性。结果获得Av TPS1的g DNA序列长度为2444 bp,经过序列比对发现Av TPS1含有7个外显子和6个内含子;通过FPNI-PCR成功获得568bp的Av TPS1启动子序列,其含有10种顺式作用元件,包括保守元件TATA-box和CAAT-box,以及可被转录因子MYC结合的G-box等;通过GUS染色发现Av TPS1启动子启动了GUS基因的表达,使转基因烟草叶片呈现蓝色。结论 Av TPS1启动子被成功克隆,且通过实验验证其具有启动基因表达的功能,为进一步研究Av TPS1在萜类合成途径的功能及其受转录因子调节的机制奠定了基础。

关键词： AvTPS1 启动子阳春砂瞬时表达 FPNI-PCR

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盐胁迫下的3代白木香离体根的转录因子表达分析

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中草药 2019年第10期50卷 2442-2451页

作者：方泽蘅李文月马新业詹若挺广州中医药大学中药资源科学与工程研究中心岭南中药资源教育部重点实验室国家中成药工程技术研究中心南药研发实验室广东广州510006

目的研究3代白木香Aquilaria sinensis离体根在盐胁迫条件下的转录因子表达模式差异,对响应盐胁迫的各代转录因子家族差异基因的变化规律进行分析。方法以组织培养的白木香离体根为材料,采用IlluminaHiseq4000双端PE150测序方法,将所有... 详细信息

目的研究3代白木香Aquilaria sinensis离体根在盐胁迫条件下的转录因子表达模式差异,对响应盐胁迫的各代转录因子家族差异基因的变化规律进行分析。方法以组织培养的白木香离体根为材料,采用IlluminaHiseq4000双端PE150测序方法,将所有白木香Unigene序列与植物转录因子数据库(PlantTFDB)进行比对,对盐胁迫组与对照组间的3代差异转录因子进行重点分析。结果 3代白木香离体根转录组测序片段经de novo拼接共获得48 286条Unigene序列,含有1 156个潜在的白木香转录因子,分布于54个转录因子家族。其中bHLH、ERF、NAC家族是富集最多的3个家族。在第1、2、3代盐胁迫白木香根中分别筛选出290、277、349个差异表达转录因子,NAC、MYB以及WRKY家族上调表达的差异表达基因(DEG)数量随胁迫代数增加而增多,而GRAS家族上调表达的DEG数量随胁迫代数增加而减少。3代共有的差异转录因子有70个,其中8个基因的下调表达倍数随盐胁迫代数增加而递增。结论盐胁迫对白木香转录因子表达影响主要以下调为主。盐胁迫组与对照组的差异转录因子数量随着盐胁迫代数增加而增加。不同转录因子家族基因受盐胁迫诱导表达情况不同,一些基因可能参与了胁迫记忆的传递。该研究有助于在整体水平加深了解白木香转录因子表达特性,为进一步研究白木香胁迫记忆及白木香盐胁迫响应分子机制提供参考。

关键词：盐胁迫白木香转录因子离体根转录组

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