检索结果-内蒙古大学图书馆

生物技术通报 2019年第12期35卷 10-15页

作者：钟李婷陈秀珍唐云李俊仁王小兵刘彦婷周璇璇詹若挺陈立凯广州中医药大学中药资源科学与工程研究中心岭南中药资源教育部重点实验室(广州中医药大学)国家中成药工程技术研究中心南药研发实验室

对广藿香的法尼基焦磷酸酶(PatFPPS)进行重组蛋白的原核表达,并筛选与之互相作用的蛋白。利用PCR扩增PatFPPS编码区并连接到pGEX-6P-1表达载体,测序验证后将质粒转化BL21(DE3)表达菌株,并用IPTG诱导表达蛋白,最终得到带有GST标签的PatF... 详细信息

对广藿香的法尼基焦磷酸酶(PatFPPS)进行重组蛋白的原核表达,并筛选与之互相作用的蛋白。利用PCR扩增PatFPPS编码区并连接到pGEX-6P-1表达载体,测序验证后将质粒转化BL21(DE3)表达菌株,并用IPTG诱导表达蛋白,最终得到带有GST标签的PatFPPS融合蛋白。利用GST Pull-Down技术,将GST-PatFPPS融合蛋白分别与广藿香叶片总蛋白进行体外孵育,洗脱得到蛋白复合物,经SDS-PAGE及LC-MS/MS鉴定。结果表明,PatFPPS原核表达体系成功建立,获得纯化重组蛋白,并且筛选得到一些候选PatFPPS互作蛋白。利用优化的原核表达体系,可获得可溶性的PatFPPS蛋白,并鉴定得到与之互作的候选蛋白。

关键词：广藿香蛋白表达广藿香醇互作蛋白茉莉酸甲酯

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青天葵独脚金内酯信号转导关键基因D14的克隆与亚细胞定位分析

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热带作物学报 2019年第3期40卷 504-513页

作者：李炎坤卓一南曾湘达何瑞广州中医药大学中药资源科学与工程研究中心/岭南中药资源教育部重点实验室/国家中成药工程技术研究中心南药研发实验室广东广州510006

D14基因是独脚金内酯信号转导途径的关键基因,其编码的蛋白能够使SLs释放出活性小分子物质而发挥调节腋芽起始的功能。本研究根据其他物种的D14基因从青天葵转录组数据中筛选获得2条高度同源的片段,命名为NfD14a和NfD14b。应用RT-PCR和R... 详细信息

D14基因是独脚金内酯信号转导途径的关键基因,其编码的蛋白能够使SLs释放出活性小分子物质而发挥调节腋芽起始的功能。本研究根据其他物种的D14基因从青天葵转录组数据中筛选获得2条高度同源的片段,命名为NfD14a和NfD14b。应用RT-PCR和RACE技术,克隆获得NfD14a和NfD14b的cDNA全长序列,GenBank登录号分别为MH028026、MH028027。NfD14a基因全长1206 bp,ORF为861 bp,编码286个氨基酸;NfD14b基因全长1082 bp,ORF为813bp,编码270个氨基酸。对NfD14的编码蛋白序列进行了生物信息学分析,结果表明:NfD14a和NfD14b均属于a/b折叠蛋白水解酶超家族成员(Abhydrolase superfamily),但系统进化分析结果表明两者同源性不高。利用一步快速克隆的方法构建了植物表达载体35S::NfD14a-EGFP和35S::NfD14b-EGFP,并分别获得其工程菌。瞬时表达结果表明,NfD14a和NfD14b均定位在烟草原生质体的细胞核和细胞质。本研究通过对NfD14基因全长cDNA序列的克隆与亚细胞定位分析,为青天葵独脚金内酯信号转导途径调控植物分枝生长发育机制的研究奠定基础。

关键词：青天葵独脚金内酯 D14 RACE克隆

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阳春砂WRKY40的克隆、分析及原核表达

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分子植物育种 2019年第6期17卷 1843-1852页

作者：李萌王虹赵海莹黄韵萍杨锦芬国家中成药工程技术研究中心南药研发实验室岭南中药资源教育部重点实验室(广州中医药大学)广州中医药大学中药资源科学与工程研究中心广州510006

转录因子可有效调控植物次生代谢产物的生物合成,本研究从姜科药用植物阳春砂(Amomum villosum Lour.)中克隆获得两个WRKY转录因子基因,命名为AvWRKY 40-1和AvWRKY 40-2。两个基因的编码框分别为852 bp和885 bp,分别编码283和294个氨基... 详细信息

转录因子可有效调控植物次生代谢产物的生物合成,本研究从姜科药用植物阳春砂(Amomum villosum Lour.)中克隆获得两个WRKY转录因子基因,命名为AvWRKY 40-1和AvWRKY 40-2。两个基因的编码框分别为852 bp和885 bp,分别编码283和294个氨基酸。Av WRKY 40-1和Av WRKY 40-2编码的蛋白序列一致性为75%,在GenBank中均比对上拟南芥的WRKY 40,且均含有WRKY转录因子家族所共有的WRKKYGQK七肽序列及CX5CX23HNH锌指结构域。系统发育进化树表明:Av WRKY 40-1和Av WRKY 40-2与菠萝(Ananas comosus)的AcWRKY 71亲缘关系最近,且与单子叶植物的WRKY聚为一支。两个基因在阳春砂果皮和种子团中的表达有差异,并且与阳春砂转录组中筛选出来的萜类合酶基因表达相关性也存在差异,AvWRKY 40-1表现出与萜类合酶基因更高的相关性。成功构建了两个基因的重组表达载体pDEST 17-Av WRKY 40-1和pDEST 17-Av WRKY 40-2,经诱导表达得到其融合蛋白。本研究首次克隆阳春砂的WRKY类转录因子基因并获得其融合蛋白,为后续Av WRKY 40-1和Av WRKY 40-2的功能鉴定及其对萜类的代谢调控研究提供基础。

关键词：阳春砂 WRKY转录因子基因克隆序列分析原核表达

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毛冬青三萜C-28位氧化酶基因的克隆与功能研究

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时珍国医国药 2019年第2期30卷 303-307页

作者：覃嘉良贠小芸纪晓宇詹若挺徐晖广州中医药大学中药资源科学与工程研究中心岭南中药资源教育部重点实验室(广州中医药大学)国家中成药工程技术研究中心南药研发实验室广东广州510006

目的对毛冬青三萜C-28位氧化酶基因进行挖掘与功能鉴定。方法在前期获得的毛冬青转录组数据中,筛选出1个可能参与毛冬青三萜C-28位氧化的CYP基因(IpAO1),将IpAO1与毛冬青三萜合酶IpAS1共转化酿酒酵母,验证IpAO1的功能。结果 Western Blo... 详细信息

目的对毛冬青三萜C-28位氧化酶基因进行挖掘与功能鉴定。方法在前期获得的毛冬青转录组数据中,筛选出1个可能参与毛冬青三萜C-28位氧化的CYP基因(IpAO1),将IpAO1与毛冬青三萜合酶IpAS1共转化酿酒酵母,验证IpAO1的功能。结果 Western Blot结果表明,重组酵母能够表达与预期大小相符的IpAS1蛋白和IpAO1蛋白。GC-MS分析结果显示,仅表达IpAS1基因的重组酵母产生了α-香树脂醇和β-香树脂醇,而共表达IpAS1和IpAO1基因的重组酵母合成了熊果酸和齐墩果酸。结论来源于毛冬青的IpAO1是编码一个α-香树脂醇/β-香树脂醇的C-28位氧化酶。

关键词：毛冬青三萜生物合成齐墩果酸熊果酸 C-28氧化酶异源表达

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当归破壁粉制备工艺优化及物理指纹图谱评价研究

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中草药 2019年第24期50卷 5980-5987页

作者：罗铮邓雯张前亮成金乐广州中医药大学中药资源科学与工程研究中心广东广州510006 中山市中智药业集团有限公司广东中山528437 国家中医药管理局中药破壁饮片技术与应用重点研究室广东中山528437 岭南中药资源教育部重点实验室(广州中医药大学) 广东广州510006 国家中成药工程技术研究中心南药研发实验室广东广州510006

目的优选当归破壁粉的制备工艺,并进行质量评价。方法建立当归中5种活性成分阿魏酸、洋川芎内酯I、阿魏酸松柏酯、藁本内酯和丁烯基苯酞的HPLC测定方法;采用Box-Behnken响应面设计法对粉碎时间、粉碎温度和投料量进行考察,以当归破壁粉... 详细信息

目的优选当归破壁粉的制备工艺,并进行质量评价。方法建立当归中5种活性成分阿魏酸、洋川芎内酯I、阿魏酸松柏酯、藁本内酯和丁烯基苯酞的HPLC测定方法;采用Box-Behnken响应面设计法对粉碎时间、粉碎温度和投料量进行考察,以当归破壁粉的粒径分布(D90,累计粒度分布数达到90%时所对应的粒径)和5种活性成分含量值作为响应值来构建响应面模型,在D90<45μm前提下,对5种活性成分含量做最大值求算,确定最优的当归破壁粉制备工艺参数;以D90、不均匀系数、粒径分布宽度、松装密度、振实密度、颗粒间孔隙度、卡尔指数、比表面积、孔体积、豪斯纳比、休止角、干燥失重和吸湿性13个物理指标构建当归破壁粉的物理指纹图谱,评价最优工艺制备的3批当归破壁粉的相似度。结果5种活性成分HPLC测定方法的精密度、重复性和稳定性等方法学考察结果符合指导原则要求。Box-Behnken响应面优选的工艺参数为粉碎时间35 min、粉碎温度−10℃,投料量580 g。最优工艺制备的3批当归破壁粉5种活性成分含量和响应面拟合结果之间的RSD值均小于3%,物理指纹图谱相似度均在0.994以上。结论Box-Behnken优选的当归破壁粉制备工艺方法在保留活性成分尤其是挥发性成分含量方面具有明显优势,物理指纹图谱作为评价中药粉体物理属性质量一致性的工具有较好的实际效果,两者结合应用有助于实现更高的中药破壁粉生产质量控制水平。

关键词：当归破壁粉物理指纹图谱质量评价阿魏酸洋川芎内酯I 阿魏酸松柏酯藁本内酯丁烯基苯酞 Box-Behnken响应面设计 HPLC 粒径分布松装密度振实密度颗粒间孔隙度卡尔指数比表面积孔体积豪斯纳比休止角干燥失重吸湿性

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岗梅根和茎超临界CO_2萃取物中低极性挥发性成分比较及其对IEC-6细胞增殖活性的影响

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中国药房 2019年第8期30卷 1056-1060页

作者：马洪艳汪天呈李武国刘嘉炜广州中医药大学中药资源科学与工程研究中心/岭南中药资源教育部重点实验室/国家中成药工程技术研究中心南药研发实验室广州510006

目的:比较岗梅根和茎的超临界CO_2萃取物中的低极性挥发性化学成分及其体外对大鼠小肠隐窝上皮细胞IEC-6增殖活性的影响,为充分利用岗梅野生资源和扩大其药用部位提供参考。方法:采用超临界CO_2萃取法提取岗梅根和茎中的低极性挥发性化... 详细信息

目的:比较岗梅根和茎的超临界CO_2萃取物中的低极性挥发性化学成分及其体外对大鼠小肠隐窝上皮细胞IEC-6增殖活性的影响,为充分利用岗梅野生资源和扩大其药用部位提供参考。方法:采用超临界CO_2萃取法提取岗梅根和茎中的低极性挥发性化学成分,通过气质联用法(GC-MS)分析其化学成分组成。以IEC-6细胞为对象,采用不同质量浓度的岗梅根或茎超临界CO_2萃取物(0、1、5、10、20、40、60、80、100μg/mL)处理细胞,以MTT法检测细胞相对活力,绘制细胞增殖曲线图并计算各萃取物的半数有效浓度(EC_(50))。结果:通过GC-MS分析技术从岗梅根和茎超临界CO2萃取物中分别鉴定出62、46个低极性挥发性化学成分,其中共有成分24个,主要为壬酸(根、茎中分别含14.18%、6.14%)、辛酸(根、茎中分别含10.59%、4.35%)、己酸(根、茎中分别含8.63%、10.86%)、丹皮酚(根、茎中分别含7.79%、6.00%)、2-甲基-3-苯基-丙醇(根、茎中分别含6.30%、0.58%)、乙酸(根、茎中分别含1.72%、33.77%)等。细胞体外试验结果显示,岗梅根和茎超临界CO_2萃取物质量浓度较低(≤60μg/mL)时,能显著促进IEC-6细胞增殖,EC_(50)分别为16.35、20.20μg/mL;而当质量浓度较高(≥80μg/mL)时,则表现出细胞毒活性,对IEC-6细胞增殖呈抑制作用。结论:岗梅根和茎中的低极性挥发性化学成分种类相似,其萃取物对IEC-6细胞的体外生物活性也相似;短链脂肪酸很可能是其促进细胞增殖的活性成分,而丹皮酚则可能是其细胞毒活性成分。

关键词：岗梅根茎低级性挥发性成分超临界CO2萃取气质联用 IEC-6细胞细胞增殖

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等离子体处理对不同含水量穿心莲种子萌发的影响

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种子 2019年第1期38卷 54-59页

作者：童家赟唐诗韵汤小婷何瑞广州中医药大学中药学院广东广州510006 广州中医药大学中药资源科学与工程研究中心岭南中药资源教育部重点实验室国家中成药工程技术研究中心南药研发实验室广东广州510006

为探究大气压等离子体处理对不同含水量穿心莲(Andrographis paniculata)种子萌发的影响,通过调节穿心莲种子含水量分别为6.3%、8.6%、12.9%、18.6%、24.0%和33.4%,再进行等离子体处理,经过发芽试验,以发芽势、发芽率、发芽指数、胚根... 详细信息

为探究大气压等离子体处理对不同含水量穿心莲(Andrographis paniculata)种子萌发的影响,通过调节穿心莲种子含水量分别为6.3%、8.6%、12.9%、18.6%、24.0%和33.4%,再进行等离子体处理,经过发芽试验,以发芽势、发芽率、发芽指数、胚根长、活力指数、霉变率、正常幼苗百分比等指标,比较不同含水量的种子受到等离子体处理后的萌发效果。结果表明,穿心莲种子的含水量在12.9%、18.6%、24.0%时,经过大气等离子体处理后种子发芽率、发芽指数得到显著提高;同时种子和幼苗霉变坏死率显著下降,正常幼苗百分比提高。然而,对含水量为6.3%、8.6%和33.4%的种子进行处理,达不到促进萌发的效果。因此,不同含水量穿心莲种子的萌发对等离子体处理的响应不同,说明含水量是影响处理效果的重要因素。结合前期研究结果,在农业生产中,建议以含水量为11.6%～24.0%的穿心莲种子进行等离子体处理效果最佳。本研究为实际播种前处理和进一步研究等离子体技术在农业生产中的应用提供参考。

关键词：穿心莲种子含水量等离子体萌发

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三叉苦质量标准的研究

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中成药 2019年第3期41卷 511-515页

作者：甘杰华严萍马庆韩正洲詹若挺广州中医药大学中药资源科学与工程研究中心岭南中药资源教育部重点实验室国家中成药工程技术研究中心南药研发实验室广东广州510006 华润三九医药股份有限公司广东深圳518002

目的建立三叉苦Melicope pteleifolia(Champion ex Bentham) ***的质量标准。方法 TLC法定性鉴别20批样品;《中国药典》方法测定水分、浸出物、总灰分、酸不溶性灰分含有量;HPLC法测定N-反式-对香豆酰酪胺、茵芋碱、白鲜碱、吴茱萸春碱... 详细信息

目的建立三叉苦Melicope pteleifolia(Champion ex Bentham) ***的质量标准。方法 TLC法定性鉴别20批样品;《中国药典》方法测定水分、浸出物、总灰分、酸不溶性灰分含有量;HPLC法测定N-反式-对香豆酰酪胺、茵芋碱、白鲜碱、吴茱萸春碱含有量。结果 TLC斑点清晰,分离度良好;20批样品中水分、浸出物、总灰分、酸不溶性灰分含有量范围分别为3.68%～8.83%、3.28%～7.29%、0.89%～1.41%、0.02%～0.13%;4种成分在各自范围内线性关系良好(r≥0.999 7),平均加样回收率96.95%～103.16%,RSD 1.60%～1.92%。结论该方法稳定可靠,可用于三叉苦的质量控制。

关键词：三叉苦 N-反式-对香豆酰酪胺茵芋碱白鲜碱吴茱萸春碱 TLC HPLC

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黄芪破壁饮片4种黄酮类成分分析及重金属含量测定

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安徽医药 2020年第2期24卷 247-251页

作者：王艳郑夏生李文康成金乐广州中医药大学中药资源科学与工程研究中心、岭南中药资源教育部重点实验室(广州中医药大学)、国家中成药工程技术研究中心南药研发实验室广东广州510006 国家中医药管理局中药破壁饮片技术与应用重点研究室中山市中智药业集团有限公司广东中山528437 中医药数理工程研究院广州中医药大学广东广州510006

目的评价黄芪破壁饮片的有效性和安全性。方法利用高效液相色谱法建立一种可以同时测定黄芪破壁饮片中4种黄酮类成分(毛蕊异黄酮葡萄糖苷、刺芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素)含量的方法,同时采用电感耦合等离子体质谱法对黄芪破壁饮片... 详细信息

目的评价黄芪破壁饮片的有效性和安全性。方法利用高效液相色谱法建立一种可以同时测定黄芪破壁饮片中4种黄酮类成分(毛蕊异黄酮葡萄糖苷、刺芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素)含量的方法,同时采用电感耦合等离子体质谱法对黄芪破壁饮片中5种重金属(Cd、Cu、Pb、Hg、As)的含量进行监测。结果黄芪破壁饮片中4种黄酮类成分的线性关系良好(r≥0.999 5),加样回收率在98.6%~106.3%之间,方法的重复性和稳定性良好,表明该方法可用于黄芪破壁饮片的4种黄酮类成分含量的同时监测,可为黄芪质量控制提供更全面的参考;10批黄芪破壁饮片中5种重金属[镉(Cd)、铜(Cu)、铅(Pb)、汞(Hg)、砷(As)]的含量均符合相关限量规定。结论同时进行4种黄酮类成分分析及重金属含量测定,可以从有效物质基础和有害元素多个角度综合评价黄芪的质量和安全性。

关键词：黄芪黄酮类饮片色谱法,高压液相重金属残留

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阳春砂转录因子AvMYC4b的克隆及原核表达

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中草药 2018年第6期49卷 1390-1397页

作者：王虹马东明蒋研风羊罗子俊杨锦芬广州中医药大学中药资源科学与工程研究中心岭南中药资源教育部重点实验室(广州中医药大学)国家中成药工程技术研究中心南药研发实验室广东广州510006

目的阳春砂是中药砂仁的主要来源植物,其转录组中已筛选出预测与萜类合成相关的候选转录因子unigene,对其进行克隆、序列分析和原核表达,以进一步认识阳春砂药效物质萜类合成的调控元件。方法根据阳春砂转录组数据中预测为AvMYC4b的Unig... 详细信息

目的阳春砂是中药砂仁的主要来源植物,其转录组中已筛选出预测与萜类合成相关的候选转录因子unigene,对其进行克隆、序列分析和原核表达,以进一步认识阳春砂药效物质萜类合成的调控元件。方法根据阳春砂转录组数据中预测为AvMYC4b的Unigene0074125序列设计特异引物,提取阳春砂叶片RNA并反转录成c DNA,以此为模板经PCR扩增得到AvMYC4b的核心片段,再通过RACE技术获得全长c DNA,然后进行编码区全长的GATEWAY TOPO克隆。通过LR反应构建原核表达载体,转化大肠杆菌Rosetta(DE3)细胞,以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)和阿拉伯糖在16℃下培养诱导融合蛋白表达,收集菌体,经过裂解、超声、纯化,用SDS-PAGE检测蛋白表达结果。结果克隆获得的AvMYC4b全长有2 579 bp,包含195 bp的5’UTR,1 995 bp的ORF和389 bp的3’UTR,编码664个氨基酸,预测蛋白相对分子质量为72 211。经过生物信息学分析,AvMYC4b氨基酸序列与其他植物的MYC相似,含有转录因子MYC家族的保守结构域,预测可定位于细胞核中。成功构建重组表达载体p DEST17-AvMYC4b并转化Rosetta(DE3)细胞,经诱导表达得到AvMYC4b融合蛋白,SDS-PAGE结果显示蛋白相对分子质量约80 000,与预测相符。结论从阳春砂中克隆得到b HLH家族转录因子AvMYC4b,并建立了AvMYC4b原核表达系统,为该转录因子的生物功能研究奠定了基础。

关键词：阳春砂 AvMYC4b 转录因子序列分析原核表达

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