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中国中医药现代远程教育 2018年第22期16卷 89-91,130页

作者：王艳成金乐广州中医药大学中药资源科学与工程研究中心、岭南中药资源教育部重点实验室(广州中医药大学)、国家中成药工程技术研究中心南药研发实验室广东广州510006 国家中医药管理局中药破壁饮片技术与应用重点研究室中山市中智药业集团有限公司广东中山528437

中药破壁饮片是由传统中药饮片经过气流破壁技术加工而成,已失去了原药材原有的外观性状特征,传统的鉴别方法已很难鉴别其真伪。本研究选用ITS2序列作为DNA条形码对32个中药破壁饮片品种进行研究,验证DNA条形码技术应用于中药破壁饮片... 详细信息

中药破壁饮片是由传统中药饮片经过气流破壁技术加工而成,已失去了原药材原有的外观性状特征,传统的鉴别方法已很难鉴别其真伪。本研究选用ITS2序列作为DNA条形码对32个中药破壁饮片品种进行研究,验证DNA条形码技术应用于中药破壁饮片上的可行性。通过提取32个品种的DNA、PCR扩增及双向测序获得ITS2序列,在中药材DNA条形码鉴定系统和NCBI数据库中进行比对。实验结果表明:32个品种通过改良的CTAB法均能成功提取DNA,PCR扩增及测序后均能得到高质量的ITS2序列。因此,基于ITS2序列的DNA条形码技术可有效地鉴定中药破壁饮片,为中药破壁饮片真伪鉴别提供有效手段。

关键词：中药破壁饮片 CTAB法 DNA条形码中药鉴定

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白木香气生根细胞程序性死亡与2-(2-苯乙基)色酮关系

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北方园艺 2017年第20期 157-162页

作者：赵桐周亦唐云马新业詹若挺陈蔚文广州中医药大学中药资源科学与工程研究中心岭南中药资源教育部重点实验室国家中成药工程技术研究中心南药研发实验室广东广州510006

以白木香气生根为试材,采用50μmol·L^(-1)茉莉酸甲酯(MeJA)分别处理0(CK)、3、5、7d后,通过显微观察、TUNEL检测、DNA降解和GC/MS检测方法,探讨MeJA对程序性细胞死亡(PCD)和沉香色酮产生之间的关系。结果表明:MeJA处理5、7d后检测... 详细信息

以白木香气生根为试材,采用50μmol·L^(-1)茉莉酸甲酯(MeJA)分别处理0(CK)、3、5、7d后,通过显微观察、TUNEL检测、DNA降解和GC/MS检测方法,探讨MeJA对程序性细胞死亡(PCD)和沉香色酮产生之间的关系。结果表明:MeJA处理5、7d后检测到PCD的发生,同时通过GC/MS检测到2-(2-苯乙基)色酮的产生且相对含量逐渐增加。推测白木香气生根在MeJA处理后,PCD的发生可能与2-(2-苯乙基)色酮的产生存在正相关性,为进一步研究沉香色酮的形成机制提供参考依据。

关键词：白木香气生根细胞程序性死亡 2-(2-苯乙基)色酮

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等离子体对穿心莲种子萌发、幼苗和植株生长及抗逆性的影响

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中药新药与临床药理 2017年第3期28卷 383-387页

作者：汤小婷曾湘达卓一南詹若挺何瑞童家赟广州中医药大学中药资源科学与工程研究中心岭南中药资源教育部重点实验室国家中成药工程技术研究中心南药研发实验室广东广州510006 广州中医药大学中药学院广东广州510006

目的研究低电压激发的空气等离子体处理对穿心莲种子萌发、幼苗和植株生长及其抗逆性的影响。方法考察激发电压、处理时间和处理后放置天数等3个因素,以发芽势、发芽率、发芽指数为评价指标,筛选等离子体处理穿心莲种子促进种子萌发的... 详细信息

目的研究低电压激发的空气等离子体处理对穿心莲种子萌发、幼苗和植株生长及其抗逆性的影响。方法考察激发电压、处理时间和处理后放置天数等3个因素,以发芽势、发芽率、发芽指数为评价指标,筛选等离子体处理穿心莲种子促进种子萌发的适宜条件;采用优选的条件处理种子后进行发芽和育苗试验,测定出苗率;发芽试验7 d和育苗1个月测定植物的抗氧化酶活性及丙二醛(MDA)含量;在种植2个月时测量株高、叶面积和叶绿素含量。结果 30 V电压处理3 s后放置4~6 d对种子萌发的促进作用明显;该条件处理穿心莲种子发芽势和出苗率分别提高40.2%~54.9%、80%,促进植株后期生长,处理组株高、叶面积和叶绿素含量分别高于对照组101.02%、127.85%、14.04%;提高了幼苗期及植株生长期抗氧化酶活性,其中幼苗期过氧化氢酶(CAT)活性提高12.70%、MDA含量降低10.41%,生长期CAT和过氧化物酶(POD)分别提高33.93%、33.47%。结论等离子体处理提高了穿心莲种子活力,促进幼苗和植株生长,增强植株抗逆性。

关键词：空气等离子体穿心莲种子萌发育苗抗逆性

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阳春砂单萜合酶基因AvTPS1载体构建和原核表达

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时珍国医国药 2017年第10期28卷 2524-2527页

作者：王腾王虹蒋研风羊周梅玲吴旻歆马东明杨锦芬广州中医药大学中药资源科学与工程研究中心岭南中药资源教育部重点实验室(广州中医药大学)国家中成药工程技术研究中心南药研发实验室广东广州510006 广州中医药大学中药学院广东广州510006

目的构建AvTPS1的原核表达载体并进行蛋白表达,为该基因在原核表达系统中的功能鉴定奠定基础。方法用In-Fusion方法构建AvTPS1截掉转运肽的表达载体;用Gateway方法构建AvTPS1包含完整阅读框的表达载体;两种表达载体分别转化至大肠杆菌BL... 详细信息

目的构建AvTPS1的原核表达载体并进行蛋白表达,为该基因在原核表达系统中的功能鉴定奠定基础。方法用In-Fusion方法构建AvTPS1截掉转运肽的表达载体;用Gateway方法构建AvTPS1包含完整阅读框的表达载体;两种表达载体分别转化至大肠杆菌BL21(DE3)和BL21DE3plys中进行诱导表达,用变性聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE)以及Western杂交检测蛋白的表达情况。结果构建了原核表达载体pET-32a(+)-(-tp)AvTPS1和pDEST17-AvTPS1;这两个表达载体在大肠杆菌BL21(DE3)和BL21DE3plys中均没有表达出明显的相应蛋白,但是这两个载体在大肠杆菌BL21(DE3)中大量表达后,用Western杂交检测有蛋白存在。结论成功构建了阳春砂单萜合酶基因AvTPS1的表达载体和工程菌。

关键词：阳春砂单萜合酶载体构建原核表达

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基于转录组测序的青天葵差异表达基因分析

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中药新药与临床药理 2017年第5期28卷 687-691页

作者：黄琼林何瑞詹若挺广东医科大学广东湛江524023 广州中医药大学中药资源科学与工程研究中心岭南中药资源教育部重点实验室国家中成药工程技术研究中心南药研发实验室广东广州510006

目的在青天葵球茎和叶片两个组织的转录组测序数据的基础上,进行差异表达基因(differential expressed gene,DEG)的筛选和分析。方法采用Reads Per Kb per reads(RPKM)方法计算青天葵转录组测序获得的单基因(unigene)在球茎和叶片中表达... 详细信息

目的在青天葵球茎和叶片两个组织的转录组测序数据的基础上,进行差异表达基因(differential expressed gene,DEG)的筛选和分析。方法采用Reads Per Kb per reads(RPKM)方法计算青天葵转录组测序获得的单基因(unigene)在球茎和叶片中表达量,根据球茎和叶片之间RPKM的log2倍数绝对值大于1且错误发现率小于0.01筛选DEG,将DEG归类至Nr、GO、KEGG等公共数据库获取其功能释义;并基于功能注释,挖掘参与青天葵激素合成和信号传导过程的DEG。结果筛选出符合条件的DEG共62 605条,包括了31 488条表达上调DEG和31 117条表达下调DEG。分别有51 652条和14 215条DEG在GO和KEGG数据库中获得注释,涵盖GO数据库的42个功能亚类和KEGG数据库的280条代谢途径。在挖掘到的16个与青天葵激素合成和信号传导过程的DEG中,7个为上调表达基因,9个为下调表达基因。结论通过转录组测序数据较全面地提供了青天葵球茎和叶片基因的差异表达情况,为青天葵的功能基因的克隆和功能分析等提供研究基础和理论依据。

关键词：青天葵转录组差异表达基因

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黄芪破璧饮片煎煮、冲泡与传统饮片煎煮后5种有效成分含量差异的比较研究

黄芪破璧饮片煎煮、冲泡与传统饮片煎煮后5种有效成分含量差异的...

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首届广东中医科学大会暨中美肿瘤学高峰论坛

作者：杨泽锐程翔燕邓雯成金乐广州中医药大学中药资源科学与工程研究中心/岭南中药资源教育部重点实验室(广州中医药大学)/国家中成药工程技术研究中心南药研发实验室广东广州510006 国家中医药管理局中药破壁饮片技术与应用重点研究室广东中山528437 广东省破壁粉粒工程技术研究开发中心广东中山528437 中山市中智药业集团有限公司广东中山528437

目的：比较黄芪破壁饮片煎煮、冲泡与传统饮片煎煮后有效成分含量差异,为黄芪破壁饮片临床服用方法提供参考. 方法：正交实验确定黄芪破壁饮片和传统饮片最佳煎煮料液比、煎煮次数、煎煮前浸泡时间以及破壁饮片冲泡最佳水温、料液比... 详细信息

目的：比较黄芪破壁饮片煎煮、冲泡与传统饮片煎煮后有效成分含量差异,为黄芪破壁饮片临床服用方法提供参考. 方法：正交实验确定黄芪破壁饮片和传统饮片最佳煎煮料液比、煎煮次数、煎煮前浸泡时间以及破壁饮片冲泡最佳水温、料液比以及冲泡次数,比较5种成分黄芪甲苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素在不同时间点的有效成分含量差异. 结果：黄芪破壁饮片煎煮5-10min(煎煮前不浸泡,料液比为1∶50,煎煮2次)其有效成分含量量已达到传统饮片煎煮30min(煎煮前冲泡30min,料液比为1∶50,煎煮3次)的含量;冲泡条件下有效成分可以溶出传统饮片煎煮的80-90％. 结论：本文通过研究表明,黄芪经过破壁之后可以免去煎煮前浸泡时间,减少煎煮时间、次数,显著提高煎煮效率,有效成分溶出速率更快;此外,冲泡条件下破壁饮片有效成分可以大部分溶出,说明经过细胞破壁处理后,黄芪药物利用率有了大幅度的提高,为黄芪饮片提供了更为便捷的临床应用方式.

关键词：黄芪破壁饮片传统饮片煎煮处理浸泡处理有效成分含量差异性

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凉粉草DNA条形码通用序列的筛选及其混伪品分子鉴定

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江苏农业科学 2017年第13期45卷 32-35页

作者：魏星任叶清莲马新业龙洁怡张娇严萍詹若挺陈蔚文广州中医药大学/中药资源科学与工程研究中心/岭南中药资源教育部重点试验室/国家中成药工程技术研究中心南药研发试验室广东广州510006

提取凉粉草基因组总DNA,使用通用引物扩增核基因ITS1、ITS2序列和叶绿体psbA-trnH、rbcL、matK序列并进行测序,使用CodonCode Aligner软件对完整序列进行拼接并对其进行比对,使用MEGA 7.0邻接法(neighborjoining,NJ)法构建系统聚类树。... 详细信息

提取凉粉草基因组总DNA,使用通用引物扩增核基因ITS1、ITS2序列和叶绿体psbA-trnH、rbcL、matK序列并进行测序,使用CodonCode Aligner软件对完整序列进行拼接并对其进行比对,使用MEGA 7.0邻接法(neighborjoining,NJ)法构建系统聚类树。结果表明,matK序列扩增成功率低;ITS1序列存在单一变异位点且测序成功率低;ITS2、rbcL和psbA-trnH等3个序列无变异位点,序列扩增成功率、测序成功率高,序列长度在233~671 bp,从系统聚类树上得出ITS2序列可以将凉粉草与其他3种混伪品区分开,而rbcL和psbA-trnH序列在区分时存在一定的混淆。ITS2序列可以考虑作为鉴别凉粉草的优选序列。

关键词：凉粉草 DNA条形码分子鉴定 ITS2 混伪品

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山姜属物种的ITS序列分析和分子鉴别

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时珍国医国药 2017年第6期28卷 1367-1369页

作者：黄琼林马新业詹若挺陈蔚文广东医科大学广东湛江524023 广州中医药大学中药资源科学与工程研究中心岭南中药资源教育部重点实验室国家中成药工程技术研究中心南药研发实验室广东广州510006

目的采用ITS序列对山姜属物种进行分子鉴别。方法通过PCR扩增测序或Genbank下载获取山姜属物种的ITS序列,采用DNAMAN软件对所有序列进行序列校正,使用Clustal X软件进行序列多重比对,运用MEGA 4.0软件计算遗传距离和构建系统发育树。结... 详细信息

目的采用ITS序列对山姜属物种进行分子鉴别。方法通过PCR扩增测序或Genbank下载获取山姜属物种的ITS序列,采用DNAMAN软件对所有序列进行序列校正,使用Clustal X软件进行序列多重比对,运用MEGA 4.0软件计算遗传距离和构建系统发育树。结果山姜属24个物种43条序列比对后序列为509 bp,变异位点共122个。高良姜等19个物种的种间遗传距离大于其种内遗传距离,具有明显的条形码间距,可与其他物种区别;疏花山姜等5个物种种间遗传距离小于或等于种内距离,不能完全被鉴别开来。系统聚类树显示,大多数山姜属物种各自聚成一分支,单系性较好。结论 ITS序列对24个山姜属物种具有良好的鉴别能力,为该属物种鉴定研究提供了分子依据。

关键词：山姜属 ITS 序列分析分子鉴别

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一种降脂软胶囊的制备工艺研究

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时珍国医国药 2017年第2期28卷 360-362页

作者：程翔燕杨泽锐陈勇军成金乐广州中医药大学中药资源科学与工程研究中心岭南中药资源教育部重点实验室国家中成药工程技术研究中心南药研发实验室广东广州510006 中山市中智药业集团有限公司广东中山528437

目的通过设计工艺路线,进行工艺方法和条件的筛选,以优选降脂软胶囊的最佳提取工艺与制备方法。方法丹参、三七等五味中药材,分别经95%乙醇、75%乙醇和水提取一次后,浓缩,减压干燥后粉碎,加入大豆油、蜂蜡和大豆磷脂后胶磨均匀,压制成... 详细信息

目的通过设计工艺路线,进行工艺方法和条件的筛选,以优选降脂软胶囊的最佳提取工艺与制备方法。方法丹参、三七等五味中药材,分别经95%乙醇、75%乙醇和水提取一次后,浓缩,减压干燥后粉碎,加入大豆油、蜂蜡和大豆磷脂后胶磨均匀,压制成软胶囊。结果第1次95%乙醇提取,最佳提取工艺为乙醇用量为6倍量,提取时间1.5h。第2次75%乙醇提取,最佳提取工艺为乙醇用量为10倍量,提取时间2.0h。第3次提取—水温浸工艺考察,在80℃加8倍量水温浸1.0h。软胶囊内容物的合适处方比例为:干膏粉∶大豆油=1∶0.9。蜂蜡加入量为大豆油量的3.8%,大豆磷脂加入量为大豆油量1.7%。结论所制得的软胶囊工艺稳定,质量可控,适用于工业生产。

关键词：降脂软胶囊辅助降血脂制备工艺

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黄芪破壁饮片煎煮、冲泡与传统饮片煎煮后5种有效成分溶出含量比较

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中国药房 2017年第19期28卷 2688-2692页

作者：杨泽锐程翔燕邓雯成金乐中山市中智药业集团有限公司技术中心广东中山528437 广州中医药大学中药资源科学与工程研究中心/岭南中药资源教育部重点实验室(广州中医药大学)/国家中成药工程技术研究中心南药研发实验室广州510006 国家中医药管理局中药破壁饮片技术与应用重点研究室广东中山528437 广东省破壁粉粒工程技术研究开发中心广东中山528437

目的:比较黄芪破壁饮片煎煮、冲泡与传统饮片煎煮后有效成分溶出含量的差异,为黄芪破壁饮片临床应用提供参考。方法:通过正交试验确定黄芪破壁饮片和传统饮片最优的煎煮工艺[液料比(m L/g)、煎煮次数、煎煮前浸泡时间(min)]以及破壁饮... 详细信息

目的:比较黄芪破壁饮片煎煮、冲泡与传统饮片煎煮后有效成分溶出含量的差异,为黄芪破壁饮片临床应用提供参考。方法:通过正交试验确定黄芪破壁饮片和传统饮片最优的煎煮工艺[液料比(m L/g)、煎煮次数、煎煮前浸泡时间(min)]以及破壁饮片最优冲泡工艺[水温(℃)、液料比、冲泡次数],在各自的最优工艺下比较5种成分(黄芪甲苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素)在不同煎煮/冲泡时间点的溶出含量差异。结果:黄芪破壁饮片按最优煎煮工艺(液料比50∶1,煎煮前不浸泡,煎煮2次)煎煮5~10 min时其有效成分溶出含量已达到传统饮片煎煮(煎煮前浸泡30 min,液料比50∶1,煎煮3次)30 min的溶出含量;其在最优冲泡工艺(液料比75∶1,水温100℃,冲泡3次)下有效成分可以达到传统饮片煎煮时溶出含量的80%~90%。结论:黄芪饮片经过破壁后有效成分溶出速率更快,可以免去煎煮前浸泡时间,并减少煎煮时间、次数,煎煮效率显著提高;临床使用时可采用冲泡方式。

关键词：黄芪破壁饮片传统饮片煎煮浸泡溶出含量

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