检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：刘冯欢张菁王欢左斌李婉宜王保宁李明远李燕四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室成都中医药大学医学技术学院

目的:构建甲型流感病毒核蛋白(nucleoprotein,NP)的原核表达表达载体,诱导NP融合蛋白在大肠杆菌中的表达与鉴定;预测人NP蛋白的B细胞抗原表位。方法:以pcDNA3.1(+)/NP为模板,利用PCR方法扩增目的片段NP,再将此片段插入原核表达载体pET32... 详细信息

目的:构建甲型流感病毒核蛋白(nucleoprotein,NP)的原核表达表达载体,诱导NP融合蛋白在大肠杆菌中的表达与鉴定;预测人NP蛋白的B细胞抗原表位。方法:以pcDNA3.1(+)/NP为模板,利用PCR方法扩增目的片段NP,再将此片段插入原核表达载体pET32a(+),并进行PCR鉴定、酶切鉴定和测序鉴定,将鉴定正确的质粒转入表达菌Rosetta-gami(2)中,用异丙基-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导融合蛋白的表达,用SDS-PAGE和Western Blot检测表达产物。按Chou-Fasman和Gami er-Robson方法预测其编码蛋白的二级结构,采用Karplns-Schulz方法预测蛋白骨架区的柔韧性;用KyteDoolittle方法预测其亲水性、Emini方法预测蛋白质表面可能性及Jameson-Wolf方法预测抗原性指数。结果:成功构建了流感病毒核蛋白(NP)的原核表达载体,经SDSPAGE检测NP蛋白得到了表达,Western Blot证明表达的重组蛋白具有免疫活性。在蛋白质第6-11、79-91、241-248和319-326区段附近很可能为B细胞表位优势区域。结论:流感病毒核蛋白的表达及B细胞表位的预测为流感病毒的快速诊断试剂的研发工作提供了基础。

关键词：甲型流感病毒核蛋白细胞表位流感病毒

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重组MBD2体内抗不可分型流感嗜血杆菌机制的初步研究

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西部医学 2011年第5期23卷 807-810页

作者：丰锋姚锋李婉宜李燕张强李明远邵京京四川大学华西基础医学与法医学院微生物教研室四川成都610041 成都中医药大学医学技术学院四川成都610041

目的观察实验小鼠体内注射重组鼠β防御素2(MBD2)后细胞因子的变化,评价重组MBD2对不可分型流感嗜血杆菌(NTHi)感染小鼠的治疗效果,并对其抗感染机制进行初步探讨。方法重组MBD2蛋白注射实验小鼠,利用PCR半定量检测小鼠肺组织中TLR2、I... 详细信息

目的观察实验小鼠体内注射重组鼠β防御素2(MBD2)后细胞因子的变化,评价重组MBD2对不可分型流感嗜血杆菌(NTHi)感染小鼠的治疗效果,并对其抗感染机制进行初步探讨。方法重组MBD2蛋白注射实验小鼠,利用PCR半定量检测小鼠肺组织中TLR2、IL-1β、TNF-α、MBD2和β-Actine mRNA的表达;重组MBD2治疗NTHi肺部感染小鼠,通过肺指数、肺组织病理切片及肺部荷菌数检测,对其治疗效果进行评价。结果体内注射重组MBD2可显著提高实验小鼠肺组织TLR2、IL-1β、TNF-α及MBD2等细胞因子的表达量;重组MBD2的应用能显著降低NTHi肺部感染小鼠的肺指数及肺组织内的NTHi荷菌数,并能减轻感染小鼠肺组织的炎性浸润程度,明显改善其肺部病变。结论重组MBD2在体内对NTHi感染有较好的治疗效果,其作用机制可能与重组MBD2对机体特异性免疫应答的诱导密切相关,为防御素抗感染机制的进一步完善奠定了良好的实验基础。

关键词：重组鼠β防御素-2 不可分型流感嗜血杆菌细胞因子

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Survivin基因启动子的克隆及在乳腺癌细胞MCF7中的特异转录活性研究

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河北医科大学学报 2011年第2期32卷 134-137页

作者：金红婷张珊珊王宝利李晓霞浙江中医药大学骨伤研究所浙江杭州310053 天津医科大学代谢病医院内分泌研究所生化与分子生物学研究室天津300070 天津医科大学基础医学院微生物学教研室天津300070

目的研究Survivin基因启动子在乳腺癌细胞MCF7中的特异转录活性。方法采用非限制酶方法获得具有酶切黏性末端的Survivin最小启动子,将其克隆到含有报告基因增强绿色荧光蛋白(enhanced greenfluorescent protein,EGFP)的载体pEGFP-1和含... 详细信息

目的研究Survivin基因启动子在乳腺癌细胞MCF7中的特异转录活性。方法采用非限制酶方法获得具有酶切黏性末端的Survivin最小启动子,将其克隆到含有报告基因增强绿色荧光蛋白(enhanced greenfluorescent protein,EGFP)的载体pEGFP-1和含有荧光素酶Luciferase的质粒载体pGL3-Basic,经脂质体分别转染人正常乳腺上皮细胞系HBL-100和乳腺癌细胞MCF-7,荧光显微镜下观察EGFP的表达情况,同时测定2种细胞中荧光素酶表达的差异。结果 Smvivin启动子在MCF7细胞中呈现高转录活性;而在HBL100细胞中转录活性极低。结论 Survivin启动子在肿瘤细胞MCF7中具有很强的特异性,为进一步开发肿瘤特异性基因治疗奠定了实验基础。

关键词：乳腺肿瘤启动区(遗传学) 克隆,生物

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黄芩苷对脂多糖诱导巨噬细胞一氧化氮和一氧化氮合酶表达的影响

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广东医学 2010年第6期31卷 675-677页

作者：李岩邝枣园李明王宏敏陈伟强广州中医药大学基础医学院微生物学与寄生虫学教研室广州510006 广东药学院病理生理学教研室广州510006

目的研究黄芩苷对小鼠巨噬细胞一氧化氮(NO)生成和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响。方法体外培养小鼠巨噬细胞RAW264.7,取生长良好的细胞分别加入LPS(终浓度1μg/mL)和不同浓度黄芩苷(终浓度10、50、100μmol/L)进行干预,并设空白... 详细信息

目的研究黄芩苷对小鼠巨噬细胞一氧化氮(NO)生成和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响。方法体外培养小鼠巨噬细胞RAW264.7,取生长良好的细胞分别加入LPS(终浓度1μg/mL)和不同浓度黄芩苷(终浓度10、50、100μmol/L)进行干预,并设空白对照组。取培养24 h细胞上清,用Griess法检测NO生成量;取培养8 h和24 h细胞,分别提取细胞总RNA和蛋白,用RT-PCR法和Western Blot法检测iNOS基因和蛋白水平表达情况。结果与空白对照组相比,LPS明显促进了RAW 264.7细胞iNOS表达和NO的生成;加入黄芩苷可抑制LPS诱导的RAW264.7细胞iNOS mRNA和蛋白表达,减少NO的生成,与LPS组差异有统计学意义。结论黄芩苷可明显降低LPS诱导的巨噬细胞iNOS表达和NO生成,这可能是其抗动脉粥样硬化斑块形成的作用机制之一。

关键词：黄芩苷巨噬细胞一氧化氮诱导型一氧化氮合酶内毒素

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急性上呼吸道感染的病毒检测与中医证候相关性研究

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辽宁中医杂志 2010年第2期37卷 234-235页

作者：周宏肖建林长春中医药大学微生物免疫教研室吉林长春130117 吉林大学基础医学院吉林长春130021

目的:探讨病毒感染所引起的急性上呼吸道感染在不同年龄、不同季节的发病率及与中医证型的相关性。方法:取静脉血3mL,分离血清,经ELISA法进行IgM的检测。结果:在323例上呼吸道感染患者中,共检出病毒抗体阳性血清223例,占受检人数的69.0... 详细信息

目的:探讨病毒感染所引起的急性上呼吸道感染在不同年龄、不同季节的发病率及与中医证型的相关性。方法:取静脉血3mL,分离血清,经ELISA法进行IgM的检测。结果:在323例上呼吸道感染患者中,共检出病毒抗体阳性血清223例,占受检人数的69.04%,其中男性感染率高于女性,1～6岁组高于其他年龄组,冬季感染率高于春、秋和夏季(P<0.05),中医证型在不同病毒中的分布有显著差异(P<0.05)。结论:上呼吸道感染主要以病毒感染为主,病与证相结合,对揭示中医"证"的本质及提高临床诊治均有重要意义,反映了中西医结合、中医现代化的发展方向。

关键词：急性上呼吸道感染病毒感染中医证型

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毛头鬼伞多糖对免疫抑制小鼠体液免疫功能的影响

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吉林中医药 2010年第3期30卷 260-261页

作者：王岩关洪全马贤德辽宁中医药大学基础医学院免疫与微生物教研室辽宁沈阳110032

目的:研究毛头鬼伞多糖对免疫抑制小鼠体液免疫功能的影响。方法:灌胃给予低、中、高3个不同剂量的毛头鬼伞多糖[225 mg/(kg·d),450 mg/(kg·d),900 mg/(kg·d)],对照组给予香菇多糖[5 mg/(kg·d)],模型、空白对照组... 详细信息

目的:研究毛头鬼伞多糖对免疫抑制小鼠体液免疫功能的影响。方法:灌胃给予低、中、高3个不同剂量的毛头鬼伞多糖[225 mg/(kg·d),450 mg/(kg·d),900 mg/(kg·d)],对照组给予香菇多糖[5 mg/(kg·d)],模型、空白对照组均给予等量生理盐水。每天给药1次,连续14 d后,采用MTT法检测小鼠的脾B淋巴细胞增殖能力;采用定量溶血法检测对抗体形成细胞的影响。结果:中、高剂量组毛头鬼伞多糖可以促进免疫抑制小鼠B淋巴细胞的增殖能力,提高免疫抑制小鼠抗体形成细胞的数量。结论:毛头鬼伞多糖能显著提高免疫抑制小鼠体液免疫功能。

关键词：毛头鬼伞多糖小鼠免疫抑制体液免疫

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穿心莲内酯对巨噬细胞环氧化酶2及其产物表达的影响

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中国医药指南 2010年第22期8卷 5-6页

作者：李明陈伟强李岩广东省广州市药学院病理生理学教研室 510006 广东省广州中医药大学基础医学院微生物学与寄生虫学教研室 510006

目的研究穿心莲内酯对巨噬细胞环氧化酶2(COX-2)表达及其主要产物前列腺素E2(PGE2)生成的影响。方法取生长良好的小鼠巨噬细胞RAW264.7,加入不同浓度的穿心莲内酯(终浓度1、10、50μmol/L)进行预干预,1h后再加入脂多糖(LPS,终浓度1μg/... 详细信息

目的研究穿心莲内酯对巨噬细胞环氧化酶2(COX-2)表达及其主要产物前列腺素E2(PGE2)生成的影响。方法取生长良好的小鼠巨噬细胞RAW264.7,加入不同浓度的穿心莲内酯(终浓度1、10、50μmol/L)进行预干预,1h后再加入脂多糖(LPS,终浓度1μg/mL)刺激,并设空白组和穿心莲内酯单独作用组作为对照组。取培养18h细胞上清,用Elisa法检测PGE2生成量;取培养24h细胞,提取总蛋白,用WesternBlot法检测穿心莲内酯对COX-2蛋白表达的影响。结果 LPS可以显著诱导RAW264.7细胞COX-2表达和PGE2的生成,与对照组比较P<0.01;穿心莲内酯预干预可以抑制LPS诱导的COX-2蛋白表达,下调PGE2的生成。结论穿心莲内酯可通过降低LPS诱导的巨噬细胞COX-2表达和PGE2生成,发挥抗炎作用,这可能是其抗炎的作用机制之一。

关键词：穿心莲内酯巨噬细胞环氧化酶2 前列腺素E2 内毒素

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原癌基因HCCR mRNA、FBI-1 mRNA在肝癌相关患者血液中的表达及意义

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广州中医药大学学报 2010年第2期27卷 195-200页

作者：张韧李娟邝枣园欧志英王宁宁计勇何蕴韶广州中医药大学基础医学院微生物与寄生虫教研室广东广州510006 中山大学达安基因诊断中心广东广州510080 中山大学公共卫生学院广东广州510080 中山大学附属第一医院广东广州510080

【目的】探讨原癌基因HCCR mRNA、FBI-1 mRNA在肝癌相关患者血液中的表达及其与临床指标的关系。【方法】采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术,检测41例肝细胞癌、3例肝硬化患者术前血液标本及10例健康者血液标本中HCCR mRNA、FBI-1 mRN... 详细信息

【目的】探讨原癌基因HCCR mRNA、FBI-1 mRNA在肝癌相关患者血液中的表达及其与临床指标的关系。【方法】采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术,检测41例肝细胞癌、3例肝硬化患者术前血液标本及10例健康者血液标本中HCCR mRNA、FBI-1 mRNA含量,分析其与临床指标的关系。【结果】肝细胞癌患者血液中HCCR mRNA、FBI-1 mRNA水平高于肝硬化患者,健康者血液中未发现两基因的mRNA表达。同时发现,血液中FBI-1 mRNA与甲胎蛋白(AFP)水平显著相关(P<0.01),FBI-1 mRNA与HCCR mRNA的表达水平显著相关(P<0.01)。【结论】肝细胞癌、肝硬化患者血液中HCCR mRNA、FBI-1 mRNA表达异常增高,FBI-1 mRNA表达与AFP水平显著相关。

关键词：肝肿瘤基因表达相关分析

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复方小柴胡汤调控microRNA抑制鼻咽癌细胞增殖

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分子诊断与治疗杂志 2010年第5期2卷 323-327页

作者：潘运宝夏洪平杨惠玲黄红中王涛陈泽雄吴珏珩中山大学中山医学院病理生理学教研室广东广州510080 中山大学附属第一医院广东广州510080 广州中医药大学广东广州510405 中山大学中山医学院微生物学教研室广东广州510080

目的观察复方小柴胡汤(FFXCHT)对高分化鼻咽癌细胞CNE-1和低分化鼻咽癌细胞CNE-2增殖的抑制作用,探讨其调控CNE-2细胞microRNA的差异表达。方法通过磺基罗丹明B(SRB)法检测FFXCHT对CNE-1和CNE-2细胞增殖的影响;采用μParafloTM MicroRN... 详细信息

目的观察复方小柴胡汤(FFXCHT)对高分化鼻咽癌细胞CNE-1和低分化鼻咽癌细胞CNE-2增殖的抑制作用,探讨其调控CNE-2细胞microRNA的差异表达。方法通过磺基罗丹明B(SRB)法检测FFXCHT对CNE-1和CNE-2细胞增殖的影响;采用μParafloTM MicroRNA芯片检测,激光扫描器收集杂交的图像,经LOWESS滤器规范信号后比较数据,分析FFXCHT处理前后CNE-2细胞microRNA表达的差异。结果 FFXCHT可抑制CNE-1和CNE-2细胞增殖,且呈剂量依赖性;FFXCHT处理CNE-1细胞24h、48h、72h,其IC50分别为12.23mg/mL,4.63mg/mL和4.97mg/mL;其对CNE-2细胞IC50分别为9.67mg/mL,4.33mg/mL,3.09mg/mL。microRNA芯片检测结果显示FFXCHT处理CNE-2细胞后,在检测的326个microRNA中,有10个microRNA上调,1个microRNA下调,其中检测量绝对值在1000以上且两者相差log2(Sample B signal/Sample A signal)>1的microRNA有hsa-miR-513、hsa-miR-498、hsa-miR-210和hsa-miR-602。结论该FFXCHT可抑制高低分化鼻咽癌细胞的增殖,其抑瘤作用可能与microRNA的差异表达有关。

关键词：中药鼻咽癌细胞增殖 microRNA

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黄连素抗Tg和Fuc诱导的小鼠巨噬细胞凋亡的实验研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2009年第12期29卷 1065-1068页

作者：陆丽明邝枣园罗振亮林洁涛陈晓瑜曾婧纯广州中医药大学第一临床医学院 510405 广州中医药大学微生物与寄生虫学教研室

目的研究黄连素抗小鼠巨噬细胞凋亡的作用，初步确定其抗凋亡的浓度，探讨其治疗动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）的机制。方法以0．5μmol/L的毒胡萝卜素（Tg）和50μg／ml的墨角藻聚糖（Fuc）诱导RAW264．7巨噬细胞凋亡为实验模... 详细信息

目的研究黄连素抗小鼠巨噬细胞凋亡的作用，初步确定其抗凋亡的浓度，探讨其治疗动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）的机制。方法以0．5μmol/L的毒胡萝卜素（Tg）和50μg／ml的墨角藻聚糖（Fuc）诱导RAW264．7巨噬细胞凋亡为实验模型，通过细胞毒性试验（MTT）法检测细胞存活率，AnnexinV—FITC／PI流式细胞术检测细胞凋亡率。结果浓度为800μg／ml的黄连素组与正常对照组细胞存活率相比差异有统计学意义（P〈0．01）；随着黄连素浓度的下降，细胞凋亡率呈现下降的趋势，黄连素（0．02～0．63μg／ml）能有效抑制Tg和Fuc诱导的小鼠巨噬细胞凋亡。结论黄连素对RAW267．4细胞的增殖影响不大。黄连素能有效抑制他和Fuc诱导的小鼠巨噬细胞凋亡。

关键词：黄连素巨噬细胞凋亡动脉粥样硬化

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