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龟甲提取物干扰NF-κB-NLRP3炎症体正反馈回路改善老年性骨质疏松的研究

中华中医药杂志 2023年第5期38卷 2437-2443页

作者：陈弘林余富勇尚奇张鹏朱广晔陈桂锋刘宇沈耿杨任辉江晓兵广州中医药大学广州510405 广州中医药大学岭南医学研究中心广州510405 广州中医药大学第一附属医院广州510405

目的:探讨龟甲提取物对NF-κB-NLRP3炎症体正反馈回路的调节作用及改善老年性骨质疏松的起效机制。方法:超高效液相联用质谱技术完成龟甲水提液中有效成分的鉴定。体外实验中,TRAP染色法检测龟甲提取物对骨髓源性巨噬细胞破骨分化的影响... 详细信息

目的:探讨龟甲提取物对NF-κB-NLRP3炎症体正反馈回路的调节作用及改善老年性骨质疏松的起效机制。方法:超高效液相联用质谱技术完成龟甲水提液中有效成分的鉴定。体外实验中,TRAP染色法检测龟甲提取物对骨髓源性巨噬细胞破骨分化的影响,使用NF-κB信号通路激动剂与抑制剂验证龟甲提取物对NF-κB信号通路的影响,使用NLRP3炎症体激动剂与抑制剂验证龟甲提取物对NLRP3炎症体活性的影响,RT-qPCR检测Nfatc1、Ctsk基因的表达量,Western Blot法检测p50、p-p50、NLRP3、IL-1β、pro-IL-1β的表达量。体内实验中,将6只3月龄C57BL/6小鼠作为对照组,12只22月龄自然衰老小鼠随机分为老年性骨质疏松模型组、龟甲提取物干预组,每组6只,连续干预8周。结果:筛选出龟甲水提液有效成分肉豆蔻酸。体外实验:与对照组比较,肉豆蔻酸显著抑制破骨分化(P<0.01),Nfatc1、Ctsk基因的表达量被显著抑制(P<0.05,P<0.01),p-p50、NLRP3、IL-1β、pro-IL-1β的表达量显著下调(P<0.01)。体内实验:与模型组比较,肉豆蔻酸有效提高骨体积分数(P<0.05),抑制骨髓腔中炎症体的表达量(P<0.01)。结论:龟甲提取物肉豆蔻酸改善老年性骨质疏松可能与干扰NF-κB-NLRP3炎症体正反馈回路,抑制破骨细胞形成相关。

关键词：核因子-κB NLRP3炎症体破骨分化龟甲提取物肉豆蔻酸老年性骨质疏松

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基于m^(6)A甲基化修饰探讨减味寿胎丸对自然流产滋养细胞黏附功能的影响

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中华中医药杂志 2022年第5期37卷 2501-2506页

作者：曾丽华周月希赖裕玲谢宝珍郜洁罗颂平广州中医药大学广州510405 广州中医药大学岭南医学研究中心广州510405 广州中医药大学第一附属医院广州510405

目的:探讨自然流产的发生与m^(6)A甲基化修饰的相关性及减味寿胎丸对滋养细胞m^(6)A甲基化修饰的影响。方法:临床研究收集自然流产患者(SA组)及正常妊娠女性(NP组)绒毛组织(各15例),细胞实验以米非司酮诱导损伤的HT R-8/S Vneo滋养细胞... 详细信息

目的:探讨自然流产的发生与m^(6)A甲基化修饰的相关性及减味寿胎丸对滋养细胞m^(6)A甲基化修饰的影响。方法:临床研究收集自然流产患者(SA组)及正常妊娠女性(NP组)绒毛组织(各15例),细胞实验以米非司酮诱导损伤的HT R-8/S Vneo滋养细胞为流产细胞模型,分为对照组、模型组、减味寿胎丸组及孕酮组,药物或基础培养基干预24 h。m^(6)A甲基化定量试剂盒检测m^(6)A整体水平,Western Blot法检测METTL3、WTAP、YTHDF2、ALKBH5及FN1蛋白的表达,qRT-PCR检测FN1 mRNA的表达,划痕实验检测各组细胞迁移能力,Transwell实验检测各组细胞侵袭能力。结果:临床研究:与NP组比较,SA组绒毛组织中m^(6)A整体水平降低(P<0.01),ALKBH5表达显著升高(P<0.01),FN1表达显著降低(P<0.01,P<0.05)。细胞实验:与对照组比较,模型组滋养细胞METTL3、WTAP及FN1表达显著降低(P<0.01,P<0.05),ALKBH5表达显著升高(P<0.05),细胞迁移能力和侵袭能力显著下降(P<0.01,P<0.05);与模型组比较,减味寿胎丸组METTL3、WTAP、YTHDF2及FN1表达显著升高(P<0.01,P<0.05),ALKBH5表达降低(P<0.01),细胞迁移能力和侵袭能力显著增强(P<0.01,P<0.05)。结论:自然流产的发生与滋养细胞m^(6)A甲基化修饰缺陷相关,减味寿胎丸治疗自然流产可能与上调滋养细胞中FN1的m^(6)A甲基化修饰,促进滋养细胞黏附功能相关。

关键词： N6-甲基腺嘌呤(m^(6)A甲基化) 纤维连接蛋白自然流产滋养细胞补肾法减味寿胎丸肾主生殖

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基于外周血免疫细胞转录组系统探索慢性心力衰竭阴虚证的炎症免疫环境

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中华中医药杂志 2022年第11期37卷 6742-6747页

作者：倪世豪刘晴晴康锦花龙文杰王陵军冼绍祥鲁路杨忠奇广州中医药大学第一附属医院广州510405 广州中医药大学岭南医学研究中心广州510405

目的:基于外周血免疫细胞转录组,系统探索慢性心力衰竭患者阴虚证与免疫炎症的联系,并建立阴虚型心力衰竭免疫判别模型。方法:根据阴虚相关证候积分对慢性心力衰竭患者进行评分分组,分为低、高阴虚积分组,每组10例,应用倾向性评分配对... 详细信息

目的:基于外周血免疫细胞转录组,系统探索慢性心力衰竭患者阴虚证与免疫炎症的联系,并建立阴虚型心力衰竭免疫判别模型。方法:根据阴虚相关证候积分对慢性心力衰竭患者进行评分分组,分为低、高阴虚积分组,每组10例,应用倾向性评分配对。通过外周血免疫细胞的转录组学检测数据、富集分析、免疫评分评估高、低阴虚积分组患者的炎症信息差异,寻找阴虚相关免疫细胞亚群,并构建判别模型。结果:Pearson系数显示,慢性心力衰竭患者阴虚积分与明尼苏达生活质量评分呈正相关(R=0.31),与6分钟步行试验、左室射血分数呈负相关(R=-0.53,R=-0.21);qPCR和转录组学检测结果显示,高阴虚积分组炎症因子水平更高,免疫信号被进一步激活;免疫细胞指数显示,经典型单核细胞、CD8+T细胞和CD4+T细胞在高阴虚积分组患者中特异性上升,可以作为阴虚证心力衰竭的判别标志物。结论:阴虚积分与免疫炎症水平密切相关,其中经典型单核细胞、CD8+T细胞和CD4+T细胞可作为慢性心力衰竭阴虚证的判别标记物。

关键词：慢性心力衰竭阴虚证转录组炎症免疫细胞经典型单核细胞 CD8+T细胞 CD4+T细胞

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岭南罗氏妇科望诊法在多囊卵巢综合征望诊中的应用

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中医杂志 2021年第19期62卷 1740-1743页

作者：曾蕾金婷林欣仪陈燕芬曾宇华罗颂平广州中医药大学第一附属医院 515000 岭南医学研究中心广州中医药大学

岭南罗氏妇科认为多囊卵巢综合征病机责于“肾-天癸-冲任-胞宫”生殖轴功能紊乱,结合岭南地区气候特点及人群体质特征,在中医诊断学基础上推崇四诊合参,首重望诊,以别阴阳。基于岭南罗氏妇科望诊法对多囊卵巢综合征的辨证分析,提出望神... 详细信息

岭南罗氏妇科认为多囊卵巢综合征病机责于“肾-天癸-冲任-胞宫”生殖轴功能紊乱,结合岭南地区气候特点及人群体质特征,在中医诊断学基础上推崇四诊合参,首重望诊,以别阴阳。基于岭南罗氏妇科望诊法对多囊卵巢综合征的辨证分析,提出望神色可辨虚实情志,腹型肥胖、四肢肌肉不结实多为肝、脾、肾之不足;唇周候冲任虚损与痰凝瘀血阻滞之机;生殖障碍常形诸于耳及二阴;痤疮及面斑可察热、瘀、虚;望手掌爪甲可知脾肾气血是否充足。

关键词：多囊卵巢综合征望诊岭南罗氏妇科

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补肾法促干细胞归巢在骨质疏松中的应用

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中国骨质疏松杂志 2021年第11期27卷 1711-1716页

作者：余富勇余翔乡晓岚沈耿杨尚奇陈文敏汤凯陈桂锋王晓文江晓兵任辉广州中医药大学广东广州510400 广州中医药大学岭南医学研究中心广东广州510405 广州中医药大学第一附属医院广东广州510405

通过对相关文献的整理和总结,对干细胞归巢在防治骨质疏松的作用机制与中医“补肾法”进行相关性分析,从细胞和分子水平来探讨“补肾法”与防治骨质疏松的关系。干细胞归巢在抗骨质疏松中起到了重要作用,现代研究也证实,补肾中药治疗骨... 详细信息

通过对相关文献的整理和总结,对干细胞归巢在防治骨质疏松的作用机制与中医“补肾法”进行相关性分析,从细胞和分子水平来探讨“补肾法”与防治骨质疏松的关系。干细胞归巢在抗骨质疏松中起到了重要作用,现代研究也证实,补肾中药治疗骨质疏松的机制与干细胞的归巢有着紧密的联系。SDF-1/CXCR4轴是促干细胞归巢的关键信号轴,与干细胞治疗骨质疏松密切相关。中医补肾法中认为“阳化气,阴成形”。干细胞归巢与中医补肾法中“阳化气”功能有着相似内涵,SDF-1/CXCR4轴可能是补肾法“阳化气”功能在分子水平上的具体表现形式,通过激活SDF-1/CXCR4轴增强干细胞“阳化气”功能促进归巢,归巢后的干细胞可通过调节骨免疫、抗凋亡等途径为具有“阴成形”特征的骨形成创造有利环境或成骨分化直接参与成骨防治骨质疏松。该文对补肾法与干细胞归巢的关系进行探讨,丰富了补肾法防治骨质疏松的理论内涵,总结了中医补肾法促干细胞归巢防治骨质疏松研究存在的问题和今后可能的发展方向,为中医中药联合干细胞防治骨质疏松提供理论参考。

关键词：补肾干细胞归巢迁移骨质疏松中医中药

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从少火生气理论探讨肾气丸促巨噬细胞M2型极化影响成骨的作用

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中国骨质疏松杂志 2023年第9期29卷 1346-1353页

作者：颜先伟招文华张堂堂伍子贤尚奇周泽霖沈耿杨陈弘林陈桂锋陈星达甘延池张友谭日威张学来梁德任辉江晓兵广州中医药大学广东广州510405 广州中医药大学第一附属医院广东广州510405 广州中医药大学岭南医学研究中心广东广州510405

目的基于少火生气理论探讨肾气丸原组方(SQW)和肾气丸去除桂枝、附子(SQQ)诱导巨噬细胞M2型极化对小鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)成骨分化作用的效果差异。方法采用CCK8法分别检测SQW、SQQ对RAW264.7细胞存活率的影响,以确定药物干预的安... 详细信息

目的基于少火生气理论探讨肾气丸原组方(SQW)和肾气丸去除桂枝、附子(SQQ)诱导巨噬细胞M2型极化对小鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)成骨分化作用的效果差异。方法采用CCK8法分别检测SQW、SQQ对RAW264.7细胞存活率的影响,以确定药物干预的安全作用浓度。将RAW264.7细胞分为CON组、IL-4组、IL-4+SQW组、IL-4+SQQ组。将不同药物组诱导巨噬细胞M2型极化后分泌的细胞上清液作为条件培养基培养BMSC,评估BMSC成骨分化的能力。用碱性磷酸酶染色法(ALP)及茜素红染色法(ARS)检测各组BMSC成骨分化能力;使用免疫荧光技术(IF)检测BMSC成骨标志蛋白骨形态发生蛋白4(BMP4)、骨保护素(OPG)的分布和表达;使用蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测M2型巨噬细胞极化相关的精氨酸酶1(ARG1)、白细胞介素10(IL-10)的表达以及BMSC成骨相关的BMP4、RUNT相关转录因子2(RUNX2)的表达。结果与IL-4+SQQ组相比,IL-4+SQW组更加显著促进M2型巨噬细胞极化相关因子ARG1、IL-10上调(P<0.01),且其条件培养基培养的BMSC的ALP及ARS染色增强,成骨蛋白BMP4、OPG、RUNX2表达升高(P<0.05)。结论肾气丸原组方与肾气丸去除桂枝、附子两味药相比,具备更强的促进巨噬细胞M2型极化与增强BMSC成骨分化能力,为少火生气理论提供了实验依据。

关键词：少火生气肾气丸巨噬细胞M2型极化成骨分化

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黄芩素通过BMP-2/Smad通路促进MC3T3-E1成骨作用的实验研究

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中国骨质疏松杂志 2022年第10期28卷 1442-1447页

作者：陈桂锋尚奇李娟敏陈弘林招文华余富勇张鹏余蝶崔健超沈耿杨任辉江晓兵广州中医药大学广东广州510405 广州中医药大学第一附属医院广东广州510405 广州中医药大学岭南医学研究中心广东广州510405

目的探讨黄芩素(BAI)对小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1)成骨分化的作用及其分子机制。方法将MC3T3-E1分为对照组(正常培养)和BAI组(以Baicalein处理),在成骨分化条件培养下采用CCK-8检测BAI对MC3T3-E1细胞增殖的影响;分别以碱性磷... 详细信息

目的探讨黄芩素(BAI)对小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1)成骨分化的作用及其分子机制。方法将MC3T3-E1分为对照组(正常培养)和BAI组(以Baicalein处理),在成骨分化条件培养下采用CCK-8检测BAI对MC3T3-E1细胞增殖的影响;分别以碱性磷酸酶染色(ALP)、茜素红染色(ARS)检测MC3T3-E1细胞成骨分化水平与矿化能力,实时荧光定量PCR检测成骨标志基因ALP、COL1A1、RUNX2、OSX的mRNA表达水平,通过免疫印迹法(Western-blot)检测MC3T3-E1细胞中BMP-2、Smad1、p-Smad1蛋白表达水平,通过免疫荧光技术(IF)检测RUNX2、COL1A1表达水平。结果与对照组比较,BAI干预1 d后发现,BAI组COL1A1(P<0.001)、RUNX2(P<0.05)、OSX(P<0.05)mRNA表达水平在成骨分化中表达上升;干预3 d后发现,与对照组比较,BAI组ALP(P<0.05)、RUNX2(P<0.001)mRNA表达上升;干预7 d后发现,与对照组比较,BAI组COL1A1(P<0.05)mRNA表达水平较对照组上升,BMP-2、p-Smad1/Smad1蛋白表达水平上升(P<0.05)。免疫荧光中成骨标志蛋白RUNX2、COL1A1表达增多(P<0.05)。结论BAI可通过激活BMP-2/Smad通路促进MC3T3-E1成骨分化。

关键词：黄芩素成骨分化 MC3T3-E1 BMP-2/Smad通路骨质疏松症

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膈下逐瘀汤对四氯化碳诱导的肝纤维化大鼠Wnt/β-catenin通路的影响

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中成药 2022年第6期44卷 1945-1950页

作者：孙旭熊芬黄育生闫雪蔡庆群丘振文广州中医药大学第一附属医院广东广州510405 广州中医药大学岭南医学研究中心广东广州510405

目的探讨膈下逐瘀汤对肝纤维化大鼠Wnt/β-catenin通路的影响。方法 48只成年大鼠随机分为正常组、模型组、秋水仙碱组(0.11 mg/kg)、膈下逐瘀汤组(7.29 g/kg),每组12只。采用四氯化碳改良法制备肝纤维化模型,造模成功后连续灌胃给药8... 详细信息

目的探讨膈下逐瘀汤对肝纤维化大鼠Wnt/β-catenin通路的影响。方法 48只成年大鼠随机分为正常组、模型组、秋水仙碱组(0.11 mg/kg)、膈下逐瘀汤组(7.29 g/kg),每组12只。采用四氯化碳改良法制备肝纤维化模型,造模成功后连续灌胃给药8周,每天1次,8周后处死大鼠,取肝脏拍照并计算肝脏指数。HE染色观察大鼠肝脏组织病理形态,检测大鼠血清中ALT、AST、HA、LN、PCⅢ、CⅣ水平,RT-qPCR法检测Wnt-1、β-catenin、GSK-3β mRNA表达,Western blot法检测Wnt-1、β-catenin、p-GSK-3β、GSK-3β蛋白表达。结果与模型组比较,秋水仙碱组和膈下逐瘀汤组大鼠血清ALT、AST、HA、LN、PCⅢ、CⅣ水平降低(P<0.01),肝细胞坏死及脂肪变性减少,纤维化程度减轻,大鼠肝组织Wnt-1、β-catenin mRNA和蛋白表达降低(P<0.01),GSK-3βmRNA和蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01),p-GSK-3β/GSK-3β蛋白表达降低(P<0.05)。结论膈下逐瘀汤可以降低大鼠肝纤维程度,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin通路活化相关。

关键词：膈下逐瘀汤肝纤维化 Wnt/β-catenin信号通路

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围术期穴位电刺激对脊柱手术大鼠树突状细胞成熟的影响

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中华麻醉学杂志 2020年第12期40卷 1464-1467页

作者：姜梦婷李思蓓曲波张瑜玲陈璐莹王佳佳王勇马武华黎玉辉广州中医药大学 510006 广州中医药大学岭南医学研究中心 510006 广州中医药大学第一附属医院麻醉科 510400

目的评价围术期穴位电刺激对脊柱手术大鼠树突状细胞(cDC)成熟的影响。方法SPF级健康雄性SD大鼠40只,7~8周龄,体重300~350 g,采用随机数字表法分为5组(n=8):对照组(C组)、手术组(S组)、疏密波组(D组)、连续波组(W组)和非经非穴组(N组)。... 详细信息

目的评价围术期穴位电刺激对脊柱手术大鼠树突状细胞(cDC)成熟的影响。方法SPF级健康雄性SD大鼠40只,7~8周龄,体重300~350 g,采用随机数字表法分为5组(n=8):对照组(C组)、手术组(S组)、疏密波组(D组)、连续波组(W组)和非经非穴组(N组)。D组和W组麻醉后立即电刺激双侧足三里和三阴交穴10 min,随后行脊柱手术并维持电针刺激至手术结束,手术时间约20 min。术后24和48 h电刺激双侧内关穴和太冲穴30 min。D组使用2/15 Hz疏密波,W组使用15 Hz连续波,N组使用2/15 Hz疏密波,但刺激部位为双侧髂嵴最高点连线上方15 mm,后正中线左右各旁开20 mm处。于术后48 h电刺激大鼠后处死,取脾并制备脾脏组织细胞悬液,采用流式细胞仪检测CD103+、CD11c+、MHC-Ⅱ+、CD80+和CD86+cDC百分比。结果与C组比较,D组和W组各指标差异均无统计学意义(P>0.05),S组MHC-Ⅱ+和CD86+cDC百分比降低,CD103+和CD80+cDC百分比升高,N组MHC-Ⅱ+、CD86+、CD11c+和CD103+cDC百分比降低(P<0.05);与S组比较,D组MHC-Ⅱ+、CD86+和CD103+cDC百分比升高,CD80+cDC百分比降低,W组MHC-Ⅱ+cDC百分比升高,CD80+cDC百分比降低,N组CD86+和CD11c+cDC百分比降低(P<0.05);与D组比较,W组各指标差异无统计学意义(P>0.05),N组CD86+和CD11c+cDC百分比降低(P<0.05)。结论围术期穴位电刺激可减轻脊柱手术对大鼠cDC成熟的抑制作用。

关键词：电刺激脊柱外科手术树突细胞

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补肾安胎法调控Piezo1改善肾虚-黄体抑制病证结合流产大鼠母胎界面血管生成的机制

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中华中医药杂志 2023年第7期38卷 3065-3071页

作者：谢宝珍黄煦格余兆吉陈誉之王然曾粤睿刘紫嫣郜洁罗颂平广州中医药大学第一临床医学院广州510405 广州中医药大学岭南医学研究中心广州510405 广州中医药大学第一附属医院广州510405

目的:阐明补肾安胎法介导Piezo1改善病证结合大鼠母胎界面血管重铸的作用机制。方法:构建肾虚-黄体抑制病证结合流产S D大鼠,将8~10周龄孕鼠随机分为6组,每组9只:空白对照(C o n t r o l)组、模型(Model)组(羟基脲45 mg/mL+米非司酮0.4 ... 详细信息

目的:阐明补肾安胎法介导Piezo1改善病证结合大鼠母胎界面血管重铸的作用机制。方法:构建肾虚-黄体抑制病证结合流产S D大鼠,将8~10周龄孕鼠随机分为6组,每组9只:空白对照(C o n t r o l)组、模型(Model)组(羟基脲45 mg/mL+米非司酮0.4 mg/mL)、模型+地屈孕酮(Progesterone)组(地屈孕酮0.31 mg/mL)、模型+减味寿胎丸(JSP)低剂量(JSP-L)组(JSP 82.23 mg/mL)、模型+减味寿胎丸中剂量(JSP-M)组(JSP 164.46 mg/mL)、模型+减味寿胎丸高剂量(JSP-H)组(JSP 328.92 mg/mL)。体视镜分析各组孕鼠胚胎及胚胎血管发育情况;小动物超声比较各组孕鼠子宫动脉血流阻力;小动物光声成像比较各组孕鼠胎盘血氧饱和度差异;苏木素-伊红(HE)染色观察各组孕鼠卵巢黄体数目、黄体血管及胎盘血管丰富度;免疫组织化学染色(IHC)和蛋白免疫印迹法(WB)检测各组孕鼠胎盘Piezo1及血管生成相关分子VEGFR2、VEGFR1及VEGFA的分布、表达及蛋白水平表达。结果:与Control组比较,Model组孕鼠子宫及胚胎湿重下降(P<0.05),胚胎直径缩小(P<0.05),流产率升高至65.73%(P<0.001);子宫动脉搏动指数PI及阻力指数RI升高(P<0.01);胎盘血氧饱和度下降(P<0.05);HE示妊娠黄体数目下降,妊娠黄体血管密度及胎盘血管丰富度不足;IHC示Model组孕鼠胎盘Piezo1及VEGFA表达降低(P<0.001),血管生成因子受体VEGFR2及VEGFR1表达升高(P<0.001);Western Blot检测示Model组孕鼠胎盘Piezo1表达下降(P<0.01),VEGFR2及VEGFR1表达升高(P<0.05)。与Model组比较,Progesterone组及JSP各剂量组流产率均下降(P<0.01);子宫动脉PI及RI下降(P<0.05);JSP-L及JSP-M组血氧饱和度升高(P<0.01);HE示Progesterone组及JSP各剂量组妊娠黄体及胎盘血管丰富度增加;IHC检测示JSP各剂量组孕鼠胎盘Piezo1及VEGFA表达升高(P<0.001);Western Blot检测示JSP-M组孕鼠胎盘Piezo1及VEGFR2表达增加(P<0.01)。结论:补肾安胎中药复方减味寿胎丸通过调控机械敏感性离子通道Piezo1介导VEGFA促进母胎界面的血管生成,降低母体子宫动脉血流阻力,增加母胎界面血流灌注,改善母胎界面的血氧物质交换,从而发挥降低流产的作用。

关键词：补肾安胎法减味寿胎丸 Piezo1 血管生成自然流产病证结合模型

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