检索结果-内蒙古大学图书馆

p70/p85核糖体蛋白S6激酶1重组真核表达载体的构建及其在人乳腺癌MCF-7细胞内功能的初步鉴定

中国肿瘤生物治疗杂志 2014年第4期21卷 459-463页

作者：赵莉侯敬申白晓春贾春宏广州医科大学药学院广州蛇毒研究所广东广州510182 南方医科大学基础医学院细胞生物学教研室广东广州510515 广州医科大学附属第二医院急诊外科广东广州510260

目的:构建p70核糖体蛋白S6激酶1(p70 ribosomal protein S6 kinase 1,p70 S6K1)及p85 S6K1基因的真核表达载体pcDNA3.1(-)-flag-p70 S6K1和pcDNA3.1(-)-flag-p85 S6K1,并鉴定其在人乳腺癌MCF-7细胞内的表达及功能。方法:以pRK7-HA-S6K1为模板,采用PCR扩增出目的基因片段p70 S6K1、p85 S6K1,克隆入真核表达载体pcDNA3.1(-)-flag构建重组表达载体pcDNA3.1(-)-flag-p70 S6K1和pcDNA3.1(-)-flag-p85 S6K1,采用PCR、双酶切和DNA测序鉴定。将重组载体转染MCF-7细胞,24 h后采用Western blotting方法检测细胞内p70 S6K1、p85 S6K1蛋白的表达;同时向转染细胞内加入1 mmol/L H2O2处理36 h,观察p70 S6K1、p85 S6K1蛋白对H2O2诱导的细胞死亡的影响。结果:成功扩增得到p70 S6K1、p85 S6K1基因片段并构建重组真核表达载体pcDNA3.1(-)-flag-p70 S6K1和pcDNA3.1(-)-flag-p85 S6K1,重组载体经PCR、双酶切鉴定均出现p70 S6K1和p85S6K1预期条带,DNA测序结果显示其全长基因阅读框完整、正确。重组载体在MCF-7细胞中高效表达flag-p70 S6K1和flag-p85S6K1,且p85 S6K1能增强H2O2诱导的细胞死亡。结论:成功构建重组真核表达载体pcDNA3.1(-)-flag-p70 S6K1和pcDNA3.1(-)-flag-p85 S6K1,均能在MCF-7细胞中高效表达,且p85 S6K1能够增强H2O2诱导的细胞死亡。

关键词：核糖体蛋白S6激酶1 基因重组载体构建真核表达细胞死亡乳腺癌 MCF-7细胞

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腺病毒介导的Wnt10b对HaCaT细胞迁移的作用及机制

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现代生物医学进展 2015年第3期15卷 429-432页

作者：陶元王瑞敏唐萄杨恬彭惠民郭海英星懿展第三军医大学学员十五营重庆400038 重庆医科大学基础医学院细胞生物学及遗传学教研室重庆400016 中铁十七局集团有限公司中心医院重症医学科山西太原030032 第三军医大学学员七营重庆400038 第三军医大学基础部细胞生物学教研室重庆400038

目的:探讨Wnt10b对Ha Ca T表皮细胞迁移的影响及机制。方法:分别用重组腺病毒Ad-GFP、Ad-GFP-Wnt10b感染Ha Ca T表皮细胞,利用细胞免疫荧光技术检测腺病毒Ad-GFP-Wnt10b感染细胞后的过表达情况;采用细胞划痕实验,于不同时间点观察并记录... 详细信息

目的:探讨Wnt10b对Ha Ca T表皮细胞迁移的影响及机制。方法:分别用重组腺病毒Ad-GFP、Ad-GFP-Wnt10b感染Ha Ca T表皮细胞,利用细胞免疫荧光技术检测腺病毒Ad-GFP-Wnt10b感染细胞后的过表达情况;采用细胞划痕实验,于不同时间点观察并记录经Wnt10b处理后,Ha Ca T细胞体外迁移功能的改变;进一步采用Westen blot技术检测不同腺病毒处理后,Ha Ca T细胞中Wnt信号关键分子β-catenin、细胞粘附分子E-cadherin表达的改变情况。结果:1Ad-GFP-Wnt10b感染Ha Ca T细胞48 h后,细胞内GFP表达上调,细胞免疫荧光染色显示Wnt10b处理组高表达Wnt10b蛋白;2Ha Ca T细胞经Ad-GFP-Wnt10b处理后,细胞创面愈合速度明显增快;3Wnt10b处理组细胞β-catenin蛋白表达水平显著高于对照组,而E-cadherin蛋白表达水平显著低于对照组。结论:Wnt10b能促进Ha Ca T细胞迁移,且该效应涉及经典Wnt/β-catenin信号的激活及由E-cadherin介导的细胞粘附性的减弱。

关键词： Wnt10b 经典Wnt信号 HaCaT细胞迁移

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利用靶向二代测序技术对一个Alport综合征家系进行基因突变分析

利用靶向二代测序技术对一个Alport综合征家系进行基因突变分析

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第十四次全国医学遗传学学术会议

作者：陈晨卢超霞王琼曹丽华罗阳张学中国医科大学医学基因组学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础医学院医学遗传学系

目的:Alport综合征(Alport syndrome,AS)是一种遗传性肾病,以血尿,进行性肾功能衰竭,感音神经性耳聋和眼部异常为主要特征,其致病基因是分别编码Ⅳ型胶原α3,α4和α5链的COL4A3,COL4A4和COL4A5基因。Ⅳ型胶原是肾小球基底膜的主要成分... 详细信息

目的:Alport综合征(Alport syndrome,AS)是一种遗传性肾病,以血尿,进行性肾功能衰竭,感音神经性耳聋和眼部异常为主要特征,其致病基因是分别编码Ⅳ型胶原α3,α4和α5链的COL4A3,COL4A4和COL4A5基因。Ⅳ型胶原是肾小球基底膜的主要成分,因此上述基因的突变,均可影响Ⅳ型胶原的折叠、分泌及基质形成等分子生物学功能,从而引起AS。方法:我们利用Ion AmpliseqTM Inherited Disease Panel,通过靶向二代测序技术进行包括COL4A3,COL4A4和COL4A5基因在内的328个基因的突变筛查,针对可疑突变进行Sanger测序验证及进一步的RNA水平分析。结果:靶向二代测序区域未直接检测到致病突变,但我们在分析原始数据中发现COL4A5基因外显子4,10,17,20,21,37和45未被Disease Panel的探针完全覆盖,Sanger测序验证以上区域,发现先证者COL4A5基因内含子9存在剪接突变c.547-3C>A,其母亲该位点为杂合突变。经RNA提取及cDNA测序分析显示先证者发生COL4A5基因外显子1 0跳跃,整码缺失21个氨基酸。结论:本研究首次发现COL4A5基因的一个新剪接突变,导致外显子10缺失,据此分析在蛋白水平Ⅳ型胶原α5链将丢失7个典型的Gly—X-Y结构,很可能影响胶原分子的构象、弹性及组装。综上,我们利用二代测序技术检测到X连锁Alport综合征家系的致病突变,并在RNA水平验证了该突变导致的外显子跳跃,帮助确定临床诊断,并为后续的遗传咨询和产前诊断提供可靠依据。

关键词：先证者靶向二代测序 Alport 综合征基因突变分析

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广西壮族、汉族系统性红斑狼疮与Toll样受体9基因多态性研究

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中华皮肤科杂志 2014年第6期47卷 404-408页

作者：温斯健吴飞云林有坤方玲广西医科大学第一附属医院皮肤性病科南宁530021 广西医科大学基础医学院细胞生物学与遗传学教研室

目的探讨TLR9单核苷酸多态性与广西系统性红斑狼疮（sLE）患者发病的相关性，以及其在壮族、汉两个民族间的差异。方法聚合酶链反应-限制性酶切技术、聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析技术（PCR—RFLP）对97例广西SLE患者和202例... 详细信息

目的探讨TLR9单核苷酸多态性与广西系统性红斑狼疮（sLE）患者发病的相关性，以及其在壮族、汉两个民族间的差异。方法聚合酶链反应-限制性酶切技术、聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析技术（PCR—RFLP）对97例广西SLE患者和202例广西健康对照者的TLR9基因多态性进行检测，分析其基因型和等位基因频率与SLE部分临床实验室指标的关联性，并比较两民族间的差异。结果TLR9rs352140CC、CT、TT基因型频率在汉族SLE组与汉族对照组中分别为42．9％、41．1％、16．1％和38．3％、55．8％、5．8％，差异有统计学意义（P〈0．05），其C、T等位基因频率差异无统计学意义（P〉0．05）。TLR9rs352140C／T基因型频率和等位基因频率在壮族SLE组与壮族健康对照组间、壮族SLE组与汉族SLE组间差异无统计学意义（均P〉0．05）。TLR9rs352140Tr基因型频率在ds-DNA阳性组比阴性组高（P〈0．05），而T等位基因频率在两组间差异无统计学意义（P〉0．05）。TLR9rs352140TT基因型频率和T等位基因的频率在SLEDAI≥9组比SLEDAI〈9组高，差异有统计学意义（均P〈0．05）。TLR9rs352140TT基因型频率和T等位基因的频率在ANA阳性组与阴性组间差异无统计学意义（均P〉0．05）。结论TLR9rs352140基因多态性可能与广西汉族人SLE的易感性有关，TLR9基因多态性与部分SLE指标可能具有相关性。

关键词：红斑狼疮系统性 Toll样受体9 多态性单核苷酸壮族汉族

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miR-451调控早期糖尿病肾病小鼠肾小球肥大的机制

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重庆医科大学学报 2014年第11期39卷 1584-1589页

作者：彭睿周吉李天驹孙艳尹频彭惠民张政重庆医科大学基础医学院生物信息学教研室重庆400016 重庆医科大学基础医学院细胞生物学及遗传学教研室重庆400016 重庆医科大学第一附属医院感染科重庆400016 重庆医科大学实验教学中心重庆400331

目的:观察mi R-451对早期糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)db/db小鼠肾脏形态学影响,探讨mi R-451在DN发病机制中的作用。方法:采用24只7周龄雄性db/db小鼠和8只正常对照db/m小鼠依次分为未处理组、空质粒组、mi R-451组及对照组。... 详细信息

目的:观察mi R-451对早期糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)db/db小鼠肾脏形态学影响,探讨mi R-451在DN发病机制中的作用。方法:采用24只7周龄雄性db/db小鼠和8只正常对照db/m小鼠依次分为未处理组、空质粒组、mi R-451组及对照组。腹腔注射法进行质粒注射处理2周后,光镜下观察肾小球形态学变化,实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测肾脏组织mi R-451的表达水平,Western blot和激光共聚焦检测肾脏组织中mi R-451的靶基因酪氨酸-3单氧化酶/色氨酸单氧化酶活化蛋白(tyrosine3-monooxy-genase/tryptophan 5-monooxygenase activation protein,Ywhaz)及其相关的丝裂原激活蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)途径中p38丝裂原激活的蛋白激酶(p38MAPK)及其上游激酶MKK3(MAPK kinase3)的表达水平。结果:7周龄db/db小鼠未处理组相比对照组出现高血糖且尿白蛋白排泄率(urinary albumin excretion rate,UAE)增加,提示进入早期DN阶段,给予30 mg/(kg·d)质粒注射实验2周。光镜观察和肾小球直径测量发现,mi R-451处理组肾小球形态减小(P=0.000)。Real-time PCR检测显示mi R-451组小鼠肾脏组织中mi R-451的表达水平增高1.79倍(P=0.002),Western blot和激光共聚焦结果显示,mi R-451组较未处理组和空质粒组肾脏组织Ywhaz的表达受到下调,同时p38MAPK及上游激酶MKK3蛋白表达水平减少(P均=0.000)。结论:mi R-451可能通过直接靶向Ywhaz基因,调控MAPK途径中关键蛋白p38MAPK、MKK3的表达,从而抑制肾小球肥大,在DN发病机制中可能起着重要的作用。

关键词：糖尿病肾病微小RNA 酪氨酸-3单氧化酶/色氨酸单氧化酶活化蛋白 p38丝裂原激活的蛋白激酶

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sFRP5抑制Wnt3a对黑素细胞黑素形成作用的初步研究

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第三军医大学学报 2014年第3期36卷 228-231页

作者：汤寅虹杨珂杨恬叶吉星刘鹏连小华郭海英彭惠民重庆医科大学细胞生物学及遗传学教研室重庆400016 第三军医大学基础医学部细胞生物学教研室重庆400038 重庆大学生物工程学院重庆400044 重庆医科大学附属口腔医院放射科重庆400015

目的研究sFRP5抑制Wnt3a对黑素细胞黑素形成的作用。方法以永生化的黑素细胞为模型,利用腺病毒表达载体,设置Control组、Wnt3a处理组、Wnt3a+sFRP5处理组进行以下实验:L-DOPA测定酪氨酸酶(tyrosinase,TYR)活性;Masson-Fontanas银染色法... 详细信息

目的研究sFRP5抑制Wnt3a对黑素细胞黑素形成的作用。方法以永生化的黑素细胞为模型,利用腺病毒表达载体,设置Control组、Wnt3a处理组、Wnt3a+sFRP5处理组进行以下实验:L-DOPA测定酪氨酸酶(tyrosinase,TYR)活性;Masson-Fontanas银染色法观察黑素形成情况;RT-PCR检测酪氨酸酶相关蛋白1(tyrosinase-related protein 1,TRP-1)、TYR基因的表达;Western blot检测TRP-1、TYR蛋白的表达水平。结果 L-DOPA测定酪氨酸酶活性结果显示Wnt3a+sFRP5处理组TYR活性低于Wnt3a处理组,差异有统计学意义(P<0.05);Masson-Fontanas银染色法显示Wnt3a+sFRP5处理组形成的黑素明显低于Wnt3a处理组;RT-PCR检测结果显示Wnt3a+sFRP5处理组能下调TRP-1、TYR基因的表达(P<0.05);Western blot检测结果显示Wnt3a+sFRP5处理组能下调TRP-1、TYR蛋白的表达水平(P<0.05)。结论 sFRP5能抑制Wnt3a对黑素细胞黑素生成的作用。

关键词： sFRP5 Wnt3a 黑素细胞

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Notch信号通路在DC介导的细粒棘球蚴重组抗原***免疫过程中的作用研究

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中国病原生物学杂志 2014年第12期9卷 1098-1103页

作者：吕士玉高富李子华王强赵巍王娅娜宁夏医科大学检验学院宁夏银川750004 宁夏医科大学医学科学研究所宁夏医科大学基础学院宁夏医科大学细胞生物学与遗传学教研室

目的初步探索Notch信号对树突状细胞(dendritic cell,DC)介导的抗寄生虫感染免疫反应的影响。方法体外培养骨髓来源的小鼠DC细胞,利用γ-分泌酶抑制剂N-[N-(3,5-Difluorophenacetyl)-L-alanyl]-S-phenylglycine tbutyl ester,DAPT于不同时间段处理细胞,阻断DC的Notch信号通路,培养第7d时收集DC,用细粒棘球蚴重组抗原铁蛋白(ferritin protein of Echinococcus granulosus,***)体外刺激DC,利用扫描电镜观察DC形态的改变,采用流式细胞术检测DC表面分子MHCⅡ、CD40及CD80/CD86的表达情况。结果 DC细胞数量随DAPT浓度的增高而降低;经不同浓度DAPT于不同时间段处理后,DC细胞中Notch1mRNA的表达受到抑制,以50μmol/L DAPT在第0d处理DC,对Notch1mRNA的抑制效果更显著(P<0.05);***和LPS均能刺激DC细胞表面树突的生成及表面分子MHCⅡ、CD40及CD80/CD86的表达,且***比LPS的刺激作用更显著(P<0.05),而加入DAPT后,DC细胞表面树突的生成减少,各表面分子的表达水平降低(P<0.05),并削弱了***和LPS的刺激作用。结论***能促进DC细胞的分化成熟,而阻断Notch信号通路会影响DC细胞的分化成熟,并降低DC细胞对***的反应能力。其分子机制涉及Notch信号通路。

关键词： Notch信号通路 DAPT 细粒棘球蚴重组抗原Eg.ferritin 树突状细胞(DC)

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沉默整合素连接激酶基因对TCA8113舌癌细胞移植瘤生长的影响

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第三军医大学学报 2014年第19期36卷 1996-2000页

作者：幸宇齐进邓世雄陈俊霞重庆医科大学基础医学院法医生物信息学研究室重庆400016 细胞生物学及遗传学教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆医科大学附属口腔医院牙体牙髓科重庆400015

目的研究沉默TCA8113舌癌细胞整合素连接激酶(integrin-linked kinase,ILK)基因的表达,对其下游底物Akt和GSK3β磷酸化状态及对移植瘤生长和自发性转移的影响。方法通过Lipofectamine 2000介导将特异性siILK表达载体和无同源性的对照载... 详细信息

目的研究沉默TCA8113舌癌细胞整合素连接激酶(integrin-linked kinase,ILK)基因的表达,对其下游底物Akt和GSK3β磷酸化状态及对移植瘤生长和自发性转移的影响。方法通过Lipofectamine 2000介导将特异性siILK表达载体和无同源性的对照载体,稳定转染人舌鳞癌TCA8113细胞,分为TCA8113组、TCA8113 vector组和TCA8113 siILK组,将3组细胞分别注入裸鼠皮下构建移植瘤模型,5周后检测瘤质量,对裸鼠肺及瘤组织形态学行常规病理学检查,使用免疫荧光技术检测体外和体内癌细胞p-Akt和p-GSK3β等的表达,并观察瘤组织内血管生成情况。结果 TCA8113组、TCA8113 vector组肺组织均发生自发性转移瘤,TCA8113 siILK组肺组织未发现自发性转移瘤;TCA8113 siILK组移植瘤细胞形态较其他2组体积减小,核分裂象较少,核浆比例缩小;TCA8113 siILK组在体内和体外实验中的p-Akt和p-GSK3β表达较其他2组均明显下降(P<0.05);TCA8113 siILK组移植瘤质量较其他2组显著降低(P<0.05),抑瘤率分别为84%和92%;TCA8113 siILK组移植瘤血管生成较其他2组也明显减少(P<0.05)。结论沉默TCA8113舌癌细胞ILK表达可抑制其下游信号传导分子Akt和GSK3β的磷酸化,并抑制移植瘤血管生成,从而抑制移植瘤的生长。

关键词：整合素连接激酶人舌鳞癌细胞移植瘤生长微血管

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高脂饮食诱导的2型糖尿病模型小鼠的生化及病理分析

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南方医科大学学报 2014年第8期34卷 1115-1120页

作者：曾位森黄源坚邵聪文梁宝焕魏铖许万福苏亚茹南方医科大学基础医学院细胞生物学教研室广东广州510515 佛山市第二人民医院普外科广东佛山528000 深圳市人民医院消化内科广东深圳518020

目的分析高脂饮食结合小剂量链脲佐菌素（STZ）注射方法制备的2型糖尿病（T2DM）模型小鼠的生化及病理改变。方法将C57BL/6J实验小鼠随机分成3组：正常饮食组（NC组）,高脂饮食组（HC组）和高脂饮食加STZ组（HC＋STZ组）。HC＋STZ组高... 详细信息

目的分析高脂饮食结合小剂量链脲佐菌素（STZ）注射方法制备的2型糖尿病（T2DM）模型小鼠的生化及病理改变。方法将C57BL/6J实验小鼠随机分成3组：正常饮食组（NC组）,高脂饮食组（HC组）和高脂饮食加STZ组（HC＋STZ组）。HC＋STZ组高脂高糖饲料饲养1个月后,按40 mg/kg剂量腹腔注射STZ,24 h后再注射1次;HC组高脂高糖饲养,NC组一直用普通饲料饲养,两组注射等量的柠檬酸缓冲液作为对照。注射STZ后每周测定空腹血糖,持续4周;1个月后进行口服葡萄糖试验（OGTT）;然后处死小鼠,对血浆进行相关的生化检测,免疫组化检测胰岛形态结构,病理分析肝脏,肾脏的结构形态情况。结果（1）注射STZ 1周后,有75%的小鼠空腹血糖超过阈值（13.89 mmol/L）;2周后除1只小鼠死亡外,其余小鼠空腹血糖均超过阈值,造模成功率为91.3%;HC组空腹血糖比NC组略有升高,但尚在正常值范围内;（2）高脂饮食的HC＋STZ组和HC组小鼠体质量均显著高于NC组（P〈0.01）,STZ注射后体质量增加不明显;（3）OGTT结果显示,HC＋STZ组口服葡萄糖后0.5~2 h的血糖都显著高于NC组和HC组（P〈0.01）;HC组0.5~2 h的血糖也高于NC组,但只有1.5 h血糖有显著差异;HC＋STZ组AUC（曲线下面积）显著高于NC组或HC组（P〈0.01）;HC组AUC略高于NC组（P〈0.05）;（4）生化检测显示,HC＋STZ组血浆中的肌酐（CR）含量显著高于NC组（P〈0.01）和HC组（P〈0.05）;（5）胰岛的免疫组化染色显示,HC组胰岛结构完整,细胞排列规整,胰岛素的分泌较NC组减少;HC＋STZ组胰岛萎缩,细胞排列紊乱,可见许多空泡状和纤维化结构,胰岛素的分泌明显减少。病理检测显示肝脏有轻度的脂肪肝,肾脏的形态结构未见明显改变。结论高脂饮食结合低剂量STZ多次注射制备的T2DM模型小鼠与人类T2DM有非常相似的病理结构和生化改变,伴有脂肪肝等并发症。

关键词： 2型糖尿病链脲佐菌素动物模型病理分析

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广西巴马地区长寿人群5-羟色胺转运体基因启动子区多态性研究

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广西医科大学学报 2014年第1期31卷 31-34页

作者：孙临侠罗桓吴华裕钟艳华吴巾魏贞刘承武潘尚领黄敏广西医科大学基础医学院病理生理学教研室南宁530021 广西医科大学基础医学院广西医科大学基础医学院细胞生物学与遗传学教研室广西医科大学公共卫生学院

目的：探讨广西巴马地区长寿群体与5-羟色胺转运体启动子区基因多态性（5-HTTLPR/rs25531）的关系.方法：选取379例广西巴马地区90岁以上壮族长寿老人作为长寿组和284例同地区60岁以上普通健康壮族老人作为对照组,采用PCR-RFLP技术检测... 详细信息

目的：探讨广西巴马地区长寿群体与5-羟色胺转运体启动子区基因多态性（5-HTTLPR/rs25531）的关系.方法：选取379例广西巴马地区90岁以上壮族长寿老人作为长寿组和284例同地区60岁以上普通健康壮族老人作为对照组,采用PCR-RFLP技术检测多态性,分析基因型在长寿中的作用.结果：①长寿组5-HTTLPR基因型频率分别为SS 55.67％、SL34.83％、LL 9.50％,等位基因S和L频率分别为73.09％和26.91％（LA =20.45％,LG=6.46％）,与对照组比较,差异均有统计学意义（P＜o.01）.3个等位基因（S,LA,LG）的频率分布与对照组比较差异明显（P=0.001）.②单因素Logistic回归分析显示LL分别和SS、SL存在统计学联系（P=0.001,OR=2.226,95％CI 1.374～3.608;P=0.039,OR=1.695,95％CI1.028～2.796）.结论：5-HTTLPR多态在广西巴马地区的分布,可能是该流域长寿的遗传学基础之一.

关键词： 5-HTTLPR 基因多态性长寿广西巴马地区

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