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广西医科大学学报 2014年第4期31卷 556-559页

作者：侯伟魏红玉罗彦彦许淑茹陆俊佳畅荣妮舒伟广西医科大学基础医学院细胞生物学与遗传学教研室南宁530021 广西医科大学药学院有机化学与药物化学教研室南宁530021

目的：研究大鼠乳鼠腹主动脉血管内皮细胞的培养与鉴定方法。方法：取出生5~7d左右的大鼠乳鼠的腹主动脉血管,用组织块法在含20%胎牛血清及内皮细胞生长添加剂和肝素的DMEM培养基中培养,倒置相差显微镜观察内皮细胞形态和生长特征,免疫... 详细信息

目的：研究大鼠乳鼠腹主动脉血管内皮细胞的培养与鉴定方法。方法：取出生5~7d左右的大鼠乳鼠的腹主动脉血管,用组织块法在含20%胎牛血清及内皮细胞生长添加剂和肝素的DMEM培养基中培养,倒置相差显微镜观察内皮细胞形态和生长特征,免疫荧光方法进行血管内皮细胞Tie2相关抗原的鉴定。结果：来自于大鼠乳鼠腹主动脉的血管内皮细胞在改良的培养基中进行体外培养,能够保持增殖和传代的能力,且Tie2抗原鉴定呈阳性。结论：成功分离大鼠乳鼠腹主动脉组织并且获得体外原代培养大鼠乳鼠腹主动脉内皮细胞。用组织培养方法可以获得较满意的血管内皮细胞。

关键词：大鼠乳鼠血管内皮细胞细胞培养 Tie2

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硬皮病相关microRNA研究进展

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国际免疫学杂志 2014年第6期37卷 471-474,478页

作者：覃霞方玲吴华裕袁志刚林有坤舒伟广西医科大学第一附属医院皮肤性病科南宁530021 广西医科大学基础医学院细胞生物学与遗传学教研室

硬皮病是一种以皮肤组织和内脏器官广泛纤维化、微血管改变和免疫反应异常为特征的复杂自身免疫性疾病,其发病机制尚不明确.近年来,较多研究结果显示硬皮病、类风湿和系统性红斑狼疮等自身免疫疾病具有类似的microRNA（miRNA）调控机制... 详细信息

硬皮病是一种以皮肤组织和内脏器官广泛纤维化、微血管改变和免疫反应异常为特征的复杂自身免疫性疾病,其发病机制尚不明确.近年来,较多研究结果显示硬皮病、类风湿和系统性红斑狼疮等自身免疫疾病具有类似的microRNA（miRNA）调控机制.进一步了解近年来自身免疫疾病中具有重要作用的miRNA以及硬皮病致病机制相关的miRNA可增进对其研究进展的理解.

关键词：硬皮病致病机制 MicroRNA

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一个儿童早老症家系临床特征分析和致病基因研究

一个儿童早老症家系临床特征分析和致病基因研究

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第10届中国皮肤科医师年会

作者：覃霞林有坤舒伟 530021 广西医科大学第一附属医院皮肤科广西医科大学基础医学院细胞生物学与遗传学教研室

目的：通过对一个罕见早老症家系临床表现、实验室及影像学资料、染色体核型分析、外显子测序结果的分析,探讨该家系早老症患者的临床病理学特征和遗传学因素、致病因素.方法：首先收集一个早老症家系中3例患者的基本资料(病史及查体),... 详细信息

目的：通过对一个罕见早老症家系临床表现、实验室及影像学资料、染色体核型分析、外显子测序结果的分析,探讨该家系早老症患者的临床病理学特征和遗传学因素、致病因素.方法：首先收集一个早老症家系中3例患者的基本资料(病史及查体),对其进行临床检查并对该家系中患者手部、肺脏和下颌骨影像学资料进行分析;同时抽血3例患者外周血进行染色体核型分析,并提取DNA行外显子测序对该家系进行了LMNA基因的突变分析以进一步明确致病原因.结果：家系中的3 名患者均在半岁左右即出现皮肤硬化症,表现为四肢远端硬化、头皮、颜面部皮肤变薄,皮下脂肪萎缩表现出头皮静脉显露,突眼,无耳垂,薄唇,皮肤干皱,有色素斑及钙盐沉着斑,极度衰老面容,并表现出严重生长迟缓,智力性格无明显异常.通过对3 名患者影像学资料分析发现年长患者显示双手指骨、掌骨等多发骨质疏松,下颌骨显示严重发育不全,牙床拥挤,3 名患者肺部CT 提示小胸廓,但未见明显肺部纤维化表现.通过对该家系行家系图分析得出该病为隐性遗传病.染色体核型G 显带分析显示患者及其父母染色体核型均正常.LMNA 基因突变分析显示家系中3 名患者均为LMNA 基因的纯合突变 1579C＞T(R527C),父母均为LMNA R527C 杂合突变.结论：该早老症家系3 名患者均表现出儿童早老症表型,与国际上报到的典型儿童早老症表型极其相似.实验室检查及影像学检查结果与国际报道的儿童早老症患者有相似之处.该家系所患疾病表现为隐性遗传,且家系成员染色体核型无异常.致病原因为LMNA 基因R527C 纯合突变所致,是迄今为止国际上报道的第三例.

关键词：早老症家系分析 LMNA基因突变筛查

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曲古菌素A抑制乳腺肿瘤干细胞的自我更新

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南方医科大学学报 2013年第10期33卷 1421-1426页

作者：彭黎李福喜邵文凤熊静波南方医科大学基础医学院细胞生物学教研室广东广州510515

目的研究组蛋白乙酰化酶抑制剂曲古菌素A对乳腺肿瘤干细胞自我更新的影响;初步研究其抑制乳腺肿瘤干细胞自我更新的机制。方法悬浮培养乳腺癌细胞系MDA-MB-468、MDA-MB-231、MCF-7和SKBR3,用不同浓度曲古菌素A处理悬浮培养乳腺癌细胞7 d... 详细信息

目的研究组蛋白乙酰化酶抑制剂曲古菌素A对乳腺肿瘤干细胞自我更新的影响;初步研究其抑制乳腺肿瘤干细胞自我更新的机制。方法悬浮培养乳腺癌细胞系MDA-MB-468、MDA-MB-231、MCF-7和SKBR3,用不同浓度曲古菌素A处理悬浮培养乳腺癌细胞7 d,用0.1%DMSO作对照;用次级细胞球形成率和乳腺癌细胞初级细胞球细胞中肿瘤干细胞即CD44+/CD24-细胞群的百分比评价曲古菌素A对乳腺癌干细胞自我更新的影响;乳腺癌细胞初级细胞球细胞中CD44+/CD24-细胞群的百分比用流式细胞仪检测,凋亡细胞百分比用Annexin-V法在流式细胞仪检测,Nanog、Sox2和Oct4 mRNA的表达用定量PCR法检测。结果 100 nmol/L和500 nmol/L曲古菌素A均能部分抑制4个乳腺癌细胞系中肿瘤干细胞的自我更新,但10 nmol/L不行;500 nmol/L曲古菌素A诱导乳腺癌细胞初级细胞球细胞凋亡;曲古菌素A能下调乳腺癌细胞初级细胞球细胞Nanog和Sox2mRNA的表达。结论曲古菌素A能部分抑制乳腺癌干细胞的自我更新,其机制与其能下调乳腺癌初级细胞球细胞Nanog和Sox2表达相关联,提示临床可用低浓度组蛋白乙酰化酶抑制剂和其他抗癌药物联用以便获得较好的乳腺肿瘤干细胞自我更新抑制效果,胚胎干细胞核心转录因子Nanog和Sox2可能作为肿瘤治疗的新靶标。

关键词：肿瘤干细胞乳腺癌组蛋白乙酰化酶抑制 Nanog

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宁夏2198例男性不育患者的细胞遗传学分析

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宁夏医科大学学报 2014年第5期36卷 533-535页

作者：宋晓霞党洁焦海燕张玉玲钟慧军彭亮陆宏宁夏医科大学教育部生育力保持教育部重点实验室宁夏生殖与遗传重点实验室银川750004 宁夏医科大学基础医学院细胞生物学与医学遗传学教研室银川750004 宁夏医科大学实验中心银川750004

目的通过对宁夏2198例男性不育患者进行细胞遗传学分析,探讨染色体异常与男性不育之间的关系。方法外周血淋巴细胞培养,常规G显带进行染色体核型分析。结果 2198例男性不育患者中,异常核型232例,检出率10.56%。其中常染色体异常51例,占2... 详细信息

目的通过对宁夏2198例男性不育患者进行细胞遗传学分析,探讨染色体异常与男性不育之间的关系。方法外周血淋巴细胞培养,常规G显带进行染色体核型分析。结果 2198例男性不育患者中,异常核型232例,检出率10.56%。其中常染色体异常51例,占21.98%;性染色体异常61例(包括性反转1例),占26.29%;染色体多态性120例,占51.73%。结论染色体异常是导致男性不育的重要因素之一。对高危人群进行染色体检查,可为临床提供科学的诊断依据和治疗方案的选择。

关键词：男性不育染色体异常核型分析

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TGF-β1诱导的肿瘤细胞CSRNP1/AXUD1基因的表达及转录调节机制

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南方医科大学学报 2013年第8期33卷 1122-1126页

作者：邓凡李松玉许万福邹志鹏柯志勇曾方银南方医科大学基础医学院细胞生物学教研室广东广州510515 南方医科大学南方医院检验科广东广州510515

目的探讨TGF-β1诱导的肿瘤细胞中CSRNP1/AXUD1基因的表达及其调控机制。方法分别用不同浓度的TGF-β1或相同浓度下不同处理时间处理指数生长期的人肺腺癌细胞A549和人前列腺癌细胞PC-3,荧光定量RT-PCR检测TGF-β1对两种肿瘤细胞中半胱... 详细信息

目的探讨TGF-β1诱导的肿瘤细胞中CSRNP1/AXUD1基因的表达及其调控机制。方法分别用不同浓度的TGF-β1或相同浓度下不同处理时间处理指数生长期的人肺腺癌细胞A549和人前列腺癌细胞PC-3,荧光定量RT-PCR检测TGF-β1对两种肿瘤细胞中半胱氨酸-丝氨酸蛋白(cystein-serine-rich nuclear protein,CSRNP1)基因表达的剂量和时间依赖性效应;培养的A549细胞血清饥饿后,分别在有无TGF-β1(20 ng/ml)和环己亚胺(30μg/ml)作用下处理24 h,检测TGF-β1诱导的CSRNP1基因的表达是否需要新蛋白的合成;最后,分别将SMAD3表达质粒flag-SMAD3和显性失活突变体表达质粒(flag-SMAD3-mu转染A549细胞中,并以空质粒pcDNA3.1作为对照。血清饥饿后,进行有无TGF-β1(20 ng/ml)处理24 h,Western blot确定外源性SMAD3的过表达,荧光定量RT-PCR检测SMAD3的过表达对TGF-β1诱导的CSRNP1基因表达的影响。结果 TGF-β1以浓度和时间依赖的方式诱导肿瘤细胞中CSRNP1基因的表达,并需要新的蛋白合成。SMAD3的过表达增加TGF-β1诱导的CSRNP1的表达,而显性失活的SMAD3突变体(SMAD3-mu)的过表达则显著降低TGF-β1诱导的CSRNP1的表达。结论肿瘤细胞中TGF-β1可能通过激活SMAD3及其下游信号通路而诱导CSRNP1基因的表达。

关键词： TGF-β1 SMAD3 CSRNP1 基因表达肿瘤细胞

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稳定表达HBx的肝前体细胞株的构建及其对增殖的影响

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细胞与分子免疫学杂志 2013年第3期29卷 256-260页

作者：芦永良申利红李红丽胡代曦张锡峰胡斌冯涛黄佳祎重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 重庆医科大学细胞生物学遗传学教研室重庆400016 重庆医科大学基础医学院病理生理学教研室重庆400016

目的构建稳定表达乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)的肝前体细胞株,检测对肝前体细胞增殖,细胞周期及Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法重组质粒pSEB-Flag-HBx与包装质粒pAmpho共同转染人胚胎肾上皮细胞系293T细胞,包装获得携带HBx基因的重组... 详细信息

目的构建稳定表达乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)的肝前体细胞株,检测对肝前体细胞增殖,细胞周期及Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法重组质粒pSEB-Flag-HBx与包装质粒pAmpho共同转染人胚胎肾上皮细胞系293T细胞,包装获得携带HBx基因的重组逆转录病毒,并感染小鼠肝前体细胞HP14.5,稻瘟菌素(blasticidin)筛选出稳定表达HBx基因的细胞克隆并扩大培养(HP14.5/HBx组),设HP14.5/Rv(空质粒pSEEB-Flag感染组)及空细胞组HP14.5组为对照组。MTS比色法检测各组细胞的增殖活力,流式细胞术检测细胞周期中各时相所占的比例,荧光定量PCR检测cyclin D1和c-myc mRNA的表达量,Western blot法检测HBx、GSK3β、p-GSK3β(ser-9)、β-catenin、cyclin D1以及c-myc等蛋白的表达。结果 RT-PCR和Westernblot法检测到HBx基因和蛋白阳性表达,与对照组相比,HP14.5/HBx细胞增殖活力显著增加(P<0.05);G1细胞比例明显减少(P<0.05),S期和G2细胞比例显著升高(P<0.05);cyclin D1和c-myc mRNA的表达量显著升高(P<0.05);GSK3β蛋白水平表达无明显变化(P>0.05),p-GSK3β、β-catenin、cyclin D1和c-myc蛋白的表达水平显著升高(P<0.05)。结论成功筛选出稳定表达HBx的肝前体细胞株,HBx通过活化Wnt/β-catenin信号途径促进肝前体细胞的增殖。

关键词：乙型肝炎病毒X蛋白肝前体细胞细胞增殖 wnt β-catenin信号途径

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人核糖核苷酸酶抑制因子表达下调对膀胱癌T24细胞在体内外发生上皮间质转化的影响

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中国生物制品学杂志 2013年第8期26卷 1088-1093页

作者：熊冬梅姚雪李林舒静陈俊霞重庆医科大学基础医学院细胞生物学与遗传学教研室分子医学与肿瘤医学研究中心重庆400016

目的探讨人核糖核苷酸酶抑制因子(human ribonuclease inhibitor,hRI)表达下调对膀胱癌T24细胞在体内外发生上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响。方法干涉质粒pGensil-1-RI稳定转染T24细胞,经G418筛选阳性克隆,并设实验组、空质粒对照组及未转染对照组,RT-PCR检测各组细胞中RI基因mRNA的转录水平、细胞免疫荧光和Western blot检测RI蛋白的表达水平;HE染色检测细胞形态的变化;Western blot检测各组细胞中E-cadherin、Twist、Slug和Vimentin等相关蛋白表达水平;将3组细胞注入BALB/c裸鼠皮下,35 d后取瘤并称重;免疫组织化学检测瘤组织中RI、E-cadherin和Vimentin蛋白的表达水平。结果荧光显微镜下观察可见,干涉质粒pGensil-1-RI转染成功;实验组RI基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平较两对照组分别降低了63.31%和64.11%、49.6%和49.5%(P<0.001);实验组细胞呈梭形,核质比增大;与实验相比,两对照组E-cadhein蛋白表达水平分别增加52.76%和46.93%(P<0.001),而Twist、Slug和Vimentin蛋白分别降低了50.49%和54.63%、43.74%和51.55%、60.35%和53.77%(P<0.001);两对照组的瘤重明显低于实验组,分别低84.91%和80.89%(P<0.01),其RI和E-cadherin蛋白表达水平降低,而Vimentin蛋白表达水平则增加。结论沉默RI基因能明显增加T24细胞的转移、侵袭及EMT的能力。

关键词：核糖核苷酸抑制因子膀胱癌 T24细胞上皮间质转化

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临床医生对儿童孤独症的了解状况抽样调查

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重庆医学 2013年第17期42卷 1983-1984,1987页

作者：李佩琼章钧章远志广州医科大学基础学院医学遗传学与细胞生物学教研室 510182 中山大学附属第三医院产科实验室广州510630

目的抽样调查临床医生对儿童孤独症的了解状况。方法随机抽选中山大学附属第三医院195名临床医生,采用自编儿童孤独症知晓率调查表(共13题)对被调查医生进行问卷调查和结果分析。结果所调查的195名临床医生中,46.3%的被调查者对儿童孤... 详细信息

目的抽样调查临床医生对儿童孤独症的了解状况。方法随机抽选中山大学附属第三医院195名临床医生,采用自编儿童孤独症知晓率调查表(共13题)对被调查医生进行问卷调查和结果分析。结果所调查的195名临床医生中,46.3%的被调查者对儿童孤独症的知识缺乏全面了解,对儿童孤独症的了解程度依次为:儿科医生>精神科医生>妇产科医生>神经心内科医生>心内科医生>普外科医生。Logistic回归分析表明被调查者的博士学历、工作时间大于5年以及中高级职称者相对对儿童孤独症比较了解。结论临床医生对于儿童孤独症的总体了解程度较低,不利于儿童孤独症的早期诊断和干预。

关键词：孤独性障碍儿童临床医生问卷调查

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蛋白激酶D1在烟曲霉介导的NF-κB信号通路激活及转录活性中的作用

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南方医科大学学报 2013年第3期33卷 351-355页

作者：牛晓璐许万福李松玉柯志勇曾方银罗深秋邓凡南方医科大学基础医学院细胞生物学教研室广东广州510515 南方医科大学骨科研究所广东广州510515 南方医科大学南方医院检验科广东广州510515

目的研究蛋白激酶D1(PKD1)在烟曲霉介导的NF-κB信号通路激活及转录活性中的作用,为进一步探讨PKD1在烟曲霉感染引起的肺曲霉病中的作用及其机制奠定基础。方法首先将GFP、GFP-PKD1表达质粒分别转染人肺腺癌细胞A549和HEK293细胞中,分... 详细信息

目的研究蛋白激酶D1(PKD1)在烟曲霉介导的NF-κB信号通路激活及转录活性中的作用,为进一步探讨PKD1在烟曲霉感染引起的肺曲霉病中的作用及其机制奠定基础。方法首先将GFP、GFP-PKD1表达质粒分别转染人肺腺癌细胞A549和HEK293细胞中,分别将灭活的烟曲霉分生孢子(1×105CFU/ml)于不同时间处理上述两组细胞,Western blotting证实PKD1的过表达,并检测PKD1的磷酸化活性;其次在A549细胞中分别转染GFP-PKD1、siRNA-PKD1并以灭活的烟曲霉分生孢子处理细胞30 min,分别检测下游NF-κB通路相关信号分子的磷酸化活性;最后,将NF-κB-luc荧光素酶报告基因及内参照报告质粒海肾荧光素酶(pRL-SV40)共转染入表达GFP、GFP-PKD1的A549细胞中,两组细胞在有无烟曲霉分生孢子的作用下处理24 h,收集细胞裂解液,进行双色荧光素酶活性检测。结果 Western blotting证实PKD1的过表达时间依赖性地增强烟曲霉刺激的A549细胞和HEK293细胞中PKD1的磷酸化活性及NF-κB通路中IКB和p65(pS276)的磷酸化活性,反之,敲低PKD1的表达则抑制烟曲霉介导的NF-κB通路中IКB和p65(pS276)的磷酸化活性。过表达PKD1明显增加NF-κB-luc荧光素酶的转录激活活性。结论 PKD1可能在烟曲霉刺激的NF-κB通路的激活及转录活性中起重要作用。

关键词：蛋白激酶D1 烟曲霉分生孢子 NF-κB 转录激活磷酸化

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