检索结果-内蒙古大学图书馆

病毒学报 2017年第4期33卷 494-500页

作者：黄文波刘振卫周荣李潇曾军李小锋苏晓波广州医科大学生命科学学院医学遗传学与细胞生物学教研室广州511436 广州呼吸疾病研究所呼吸疾病国家重点实验室广州医科大学广州510230 广东和信健康科技有限公司广州510663

获得稳定表达乙型流感病毒血凝素蛋白的HEK-293-HA细胞株。采用RT-PCR方法扩增乙型流感病毒的HA基因,将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)上,构建pcDNA3.1(+)-HA重组质粒。将已鉴定正确的pcDNA3.1(+)-HA质粒与辅助质粒PLV-EF1a-EGFP(2A)P... 详细信息

获得稳定表达乙型流感病毒血凝素蛋白的HEK-293-HA细胞株。采用RT-PCR方法扩增乙型流感病毒的HA基因,将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)上,构建pcDNA3.1(+)-HA重组质粒。将已鉴定正确的pcDNA3.1(+)-HA质粒与辅助质粒PLV-EF1a-EGFP(2A)Puro通过脂质体介导法共转染HEK293细胞,经嘌呤霉素筛选后得到重组细胞株HEK293-HA,通过流式细胞术法(FCM)来检测细胞中HA的表达情况。所得到的重组细胞经扩大培养后再连续培养15代,采用间接免疫荧光法(IFA)和蛋白免疫印迹法(WB)来检测HA蛋白表达的稳定性。结果表明重组质粒pcDNA3.1(+)-HA经双酶切及测序鉴定正确;共获得3株高表达阳性细胞株。细胞扩大培养后连续传代培养15代后进行Western blot和IFA检测结果表明,重组细胞的HA蛋白得到稳定的表达。已成功获得了能稳定表达乙型流感病毒血凝素蛋白的HEK-293-HA细胞,可为乙型流感病毒HA蛋白的进一步研究提供良好的基础。

关键词：乙型流感病毒血凝素(HA)蛋白细胞株

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人3型腺病毒纤突的原核表达及其免疫原性分析

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热带医学杂志 2016年第1期16卷 22-24,30页

作者：蒋再学王芳田新贵朱蔚云苏晓波广州医科大学基础学院医学遗传学与细胞生物学教研室广东广州511436 广州医科大学基础学院生物学实验中心广东广州511436

目的克隆表达人3型腺病毒（HAdV-3）的纤毛蛋白纤突片段（knob）,分析其免疫原性,为腺病毒临床诊断试剂及新型疫苗的研发奠定基础。方法 PCR扩增knob基因片段,克隆到表达载体pGEX-4T-3中进行诱导表达,SDSPAGE电泳分析表达产物,包涵体溶... 详细信息

目的克隆表达人3型腺病毒（HAdV-3）的纤毛蛋白纤突片段（knob）,分析其免疫原性,为腺病毒临床诊断试剂及新型疫苗的研发奠定基础。方法 PCR扩增knob基因片段,克隆到表达载体pGEX-4T-3中进行诱导表达,SDSPAGE电泳分析表达产物,包涵体溶解复性后亲和层析纯化融合蛋白,Western blot鉴定,纯化的蛋白免疫小鼠制备抗血清,间接ELISA法检测小鼠血清的效价,Western blot鉴定抗血清特异性。结果成功构建了重组原核表达质粒pGEX-Ad3 knob,其在大肠杆菌中高效表达并纯化重组knob融合蛋白,融合蛋白免疫小鼠抗血清效价高达10~7,Western Blot证实此抗血清可识别人3型腺病毒纤维蛋白。结论成功获得了重组HAdV-3 knob蛋白,其具有强免疫原性,可以作为研发人3型腺病毒入侵机制研究、诊断试剂及疫苗研发的原料。

关键词：人3型腺病毒纤毛蛋白纤突重组表达多克隆抗体

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1型登革病毒抗原表位嵌合人3型腺病毒六邻体重组病毒的构建及免疫学鉴定

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中华微生物学和免疫学杂志 2015年第6期35卷 464-468页

作者：招穗珊周志超李潇樊晔廖小红周荣苏晓波广州医科大学附属第一医院、呼吸疾病国家重点实验室 510120 广州医科大学基础学院、医学遗传与细胞生物学教研室 511436

目的构建六邻体嵌入1型登革病毒（DENVI）抗坂表位的人3型重组腺病毒，鉴定其抗原性。方法以人3型腺病毒骨架质粒pBRAd△E3GFP为模板，overlap PCR在六邻体高变区HVR1插入DENV1的抗原表位，突变的六邻体片段克隆到穿梭载体，酶切后与线... 详细信息

目的构建六邻体嵌入1型登革病毒（DENVI）抗坂表位的人3型重组腺病毒，鉴定其抗原性。方法以人3型腺病毒骨架质粒pBRAd△E3GFP为模板，overlap PCR在六邻体高变区HVR1插入DENV1的抗原表位，突变的六邻体片段克隆到穿梭载体，酶切后与线性化的3型腺病毒骨架质粒pBRAd△E3GFP在大肠杆菌BJ5183同源重组，获得阳性重组腺病毒质粒pBRAd△E3GFP-DENV1。线性化后转染AD293细胞拯救重组腺病毒rAd△E3GFP-DENV1并大量培养。纯化后腺病毒免疫BALB／c小鼠，通过ELISA和Western blot检测小鼠的体液免疫应答。结果在人3型腺病毒六邻体成功插入DENV1抗坂表位并包装出重组腺病毒，ELISA和Westernblot结果显示小鼠免疫后能产生血清识别DENV1。结论成功构建六邻体HVR1嵌入DENV1抗原表位的重组腺病毒，为多价登革病毒疫苗的研究奠定了基础。

关键词：腺病毒六邻体高变区登革病毒抗原表位

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抗戾解毒汤体内抑制小鼠高致病性禽流感病毒H5N1增殖

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中国老年学杂志 2015年第6期35卷 1607-1609页

作者：李佩琼章钧曾军王芳田琪广州医科大学基础学院医学遗传与细胞生物学教研室广东广州510182 中山大学附属第三医院产科实验室

目的探讨抗戾解毒汤体内抑制高致病性禽流感病毒H5N1增殖的效果。方法小鼠麻醉后使用高致病性禽流感病毒H5N1的鼠适应株滴鼻以感染,感染后120 min内,实验组给予抗戾解毒汤灌胃,奥司他韦组给予奥司他韦溶液腹腔注射,对照组给予PBS缓冲液... 详细信息

目的探讨抗戾解毒汤体内抑制高致病性禽流感病毒H5N1增殖的效果。方法小鼠麻醉后使用高致病性禽流感病毒H5N1的鼠适应株滴鼻以感染,感染后120 min内,实验组给予抗戾解毒汤灌胃,奥司他韦组给予奥司他韦溶液腹腔注射,对照组给予PBS缓冲液灌胃,之后观察体重变化和死亡率,并通过实时PCR方法检测肺部病毒负载水平。结果实验组存活率(80%)较奥司他韦组(53.3%)和对照组(3.3%)显著提高(P<0.01),实验组体重下降也低于其他两组;实验组肺部病毒负载水平较对照组显著降低(P<0.01),和奥司他韦组无明显差异(P>0.05)。结论抗戾解毒汤对感染H5N1病毒的小鼠的病毒增殖抑制作用明显,且保护作用强,可以作为流感病毒的备选或者辅助药物。

关键词：抗戾解毒汤 H5N1 增殖

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胃癌BGC-823细胞增殖与NOTCH1和HES1表达的关系

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宁夏医科大学学报 2015年第8期37卷 906-909,封4页

作者：张竞文徐方胡以平秦憬张建中宁夏医科大学基础医学院医学遗传学与细胞生物学系生育力保持教育部重点实验室银川750004 第二军医大学细胞生物学教研室上海200433 宁夏医科大学总医院病理科银川750004

目的探讨HES1蛋白在胃癌细胞增殖中的作用。方法在5%CO2、37℃、饱和湿度条件下培养胃癌BGC-823细胞和肝干细胞系(LEPC),MTT法检测细胞增殖活性,免疫细胞化学检测HES1和NOTCH1表达。结果培养48h时,BGC-823和LEPC细胞生长良好,MTT比色法... 详细信息

目的探讨HES1蛋白在胃癌细胞增殖中的作用。方法在5%CO2、37℃、饱和湿度条件下培养胃癌BGC-823细胞和肝干细胞系(LEPC),MTT法检测细胞增殖活性,免疫细胞化学检测HES1和NOTCH1表达。结果培养48h时,BGC-823和LEPC细胞生长良好,MTT比色法检测显示,BGC-823细胞组增殖能力明显强于LEPC组,BGC-823组培养24、48和72h的OD值(分别为0.67±0.17、1.02±0.14和1.22±0.24)均明显高于LEPC组(分别为0.36±0.16、0.35±0.07和0.38±0.14)(P均<0.05)。免疫细胞化学染色可见,少数BGC-823细胞核HES1阳性,比较多的BGC-823细胞核周胞质呈HES1阳性,少数细胞阳性着色见于细胞质和细胞核;HES1阳性以弥漫性表达为主,细胞质表达明显多于细胞核,巨细胞表达更加明显。LEPC组部分细胞HES1免疫组化染色阳性,阳性着色主要见于细胞核。在培养48和72h,BGC-823组HES1蛋白免疫细胞化学染色平均光密度值(OD)均明显高于LEPC组(P<0.05)。BGC-823大多数细胞NOTCH1阴性,少数阳性。LEPC组可见部分细胞NOTCH1免疫组化染色阳性。在培养24、48和72h,BGC-823组NOTCH1平均OD值与LEPC组的差异无统计学意义(P>0.05)。结论 HES1高表达与BGC-823细胞增殖能力较强有关。

关键词： HES1,Notch信号通路 BGC-823细胞肝干细胞系,增殖

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利用靶向二代测序技术对一个Alport综合征家系进行基因突变分析

利用靶向二代测序技术对一个Alport综合征家系进行基因突变分析

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第十四次全国医学遗传学学术会议

作者：陈晨卢超霞王琼曹丽华罗阳张学中国医科大学医学基因组学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础医学院医学遗传学系

目的:Alport综合征(Alport syndrome,AS)是一种遗传性肾病,以血尿,进行性肾功能衰竭,感音神经性耳聋和眼部异常为主要特征,其致病基因是分别编码Ⅳ型胶原α3,α4和α5链的COL4A3,COL4A4和COL4A5基因。Ⅳ型胶原是肾小球基底膜的主要成分... 详细信息

目的:Alport综合征(Alport syndrome,AS)是一种遗传性肾病,以血尿,进行性肾功能衰竭,感音神经性耳聋和眼部异常为主要特征,其致病基因是分别编码Ⅳ型胶原α3,α4和α5链的COL4A3,COL4A4和COL4A5基因。Ⅳ型胶原是肾小球基底膜的主要成分,因此上述基因的突变,均可影响Ⅳ型胶原的折叠、分泌及基质形成等分子生物学功能,从而引起AS。方法:我们利用Ion AmpliseqTM Inherited Disease Panel,通过靶向二代测序技术进行包括COL4A3,COL4A4和COL4A5基因在内的328个基因的突变筛查,针对可疑突变进行Sanger测序验证及进一步的RNA水平分析。结果:靶向二代测序区域未直接检测到致病突变,但我们在分析原始数据中发现COL4A5基因外显子4,10,17,20,21,37和45未被Disease Panel的探针完全覆盖,Sanger测序验证以上区域,发现先证者COL4A5基因内含子9存在剪接突变c.547-3C>A,其母亲该位点为杂合突变。经RNA提取及cDNA测序分析显示先证者发生COL4A5基因外显子1 0跳跃,整码缺失21个氨基酸。结论:本研究首次发现COL4A5基因的一个新剪接突变,导致外显子10缺失,据此分析在蛋白水平Ⅳ型胶原α5链将丢失7个典型的Gly—X-Y结构,很可能影响胶原分子的构象、弹性及组装。综上,我们利用二代测序技术检测到X连锁Alport综合征家系的致病突变,并在RNA水平验证了该突变导致的外显子跳跃,帮助确定临床诊断,并为后续的遗传咨询和产前诊断提供可靠依据。

关键词：先证者靶向二代测序 Alport 综合征基因突变分析

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抗戾解毒汤体内抑制小鼠高致病性禽流感病毒H5N1增殖

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中国老年学杂志 2014年第6期35卷 1607-1609页

作者：李佩琼章钧曾军王芳田琪广州医科大学基础学院医学遗传与细胞生物学教研室广东广州510182 中山大学附属第三医院产科实验室

目的探讨抗戾解毒汤体内抑制高致病性禽流感病毒H5N1增殖的效果.方法小鼠麻醉后使用高致病性禽流感病毒H5N1的鼠适应株滴鼻以感染,感染后120 min内,实验组给予抗戾解毒汤灌胃,奥司他韦组给予奥司他韦溶液腹腔注射,对照组给予PBS缓冲... 详细信息

目的探讨抗戾解毒汤体内抑制高致病性禽流感病毒H5N1增殖的效果.方法小鼠麻醉后使用高致病性禽流感病毒H5N1的鼠适应株滴鼻以感染,感染后120 min内,实验组给予抗戾解毒汤灌胃,奥司他韦组给予奥司他韦溶液腹腔注射,对照组给予PBS缓冲液灌胃,之后观察体重变化和死亡率,并通过实时PCR方法检测肺部病毒负载水平.结果实验组存活率(80％)较奥司他韦组(53.3％)和对照组(3.3％)显著提高(P＜0.01),实验组体重下降也低于其他两组;实验组肺部病毒负载水平较对照组显著降低(P＜0.01),和奥司他韦组无明显差异(P＞0.05).结论抗戾解毒汤对感染H5N1病毒的小鼠的病毒增殖抑制作用明显,且保护作用强,可以作为流感病毒的备选或者辅助药物.

关键词：抗戾解毒汤 HSN1 增殖

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宁夏2198例男性不育患者的细胞遗传学分析

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宁夏医科大学学报 2014年第5期36卷 533-535页

作者：宋晓霞党洁焦海燕张玉玲钟慧军彭亮陆宏宁夏医科大学教育部生育力保持教育部重点实验室宁夏生殖与遗传重点实验室银川750004 宁夏医科大学基础医学院细胞生物学与医学遗传学教研室银川750004 宁夏医科大学实验中心银川750004

目的通过对宁夏2198例男性不育患者进行细胞遗传学分析,探讨染色体异常与男性不育之间的关系。方法外周血淋巴细胞培养,常规G显带进行染色体核型分析。结果 2198例男性不育患者中,异常核型232例,检出率10.56%。其中常染色体异常51例,占2... 详细信息

目的通过对宁夏2198例男性不育患者进行细胞遗传学分析,探讨染色体异常与男性不育之间的关系。方法外周血淋巴细胞培养,常规G显带进行染色体核型分析。结果 2198例男性不育患者中,异常核型232例,检出率10.56%。其中常染色体异常51例,占21.98%;性染色体异常61例(包括性反转1例),占26.29%;染色体多态性120例,占51.73%。结论染色体异常是导致男性不育的重要因素之一。对高危人群进行染色体检查,可为临床提供科学的诊断依据和治疗方案的选择。

关键词：男性不育染色体异常核型分析

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临床医生对儿童孤独症的了解状况抽样调查

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重庆医学 2013年第17期42卷 1983-1984,1987页

作者：李佩琼章钧章远志广州医科大学基础学院医学遗传学与细胞生物学教研室 510182 中山大学附属第三医院产科实验室广州510630

目的抽样调查临床医生对儿童孤独症的了解状况。方法随机抽选中山大学附属第三医院195名临床医生,采用自编儿童孤独症知晓率调查表(共13题)对被调查医生进行问卷调查和结果分析。结果所调查的195名临床医生中,46.3%的被调查者对儿童孤... 详细信息

目的抽样调查临床医生对儿童孤独症的了解状况。方法随机抽选中山大学附属第三医院195名临床医生,采用自编儿童孤独症知晓率调查表(共13题)对被调查医生进行问卷调查和结果分析。结果所调查的195名临床医生中,46.3%的被调查者对儿童孤独症的知识缺乏全面了解,对儿童孤独症的了解程度依次为:儿科医生>精神科医生>妇产科医生>神经心内科医生>心内科医生>普外科医生。Logistic回归分析表明被调查者的博士学历、工作时间大于5年以及中高级职称者相对对儿童孤独症比较了解。结论临床医生对于儿童孤独症的总体了解程度较低,不利于儿童孤独症的早期诊断和干预。

关键词：孤独性障碍儿童临床医生问卷调查

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Varp过表达降低腺病毒感染细胞效率的研究

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激光生物学报 2013年第5期22卷 436-440页

作者：王芳苏晓波张岚广州医科大学医学遗传学及细胞生物学教研室广东广州510182

目的:探讨Varp蛋白对腺病毒感染细胞效率的影响。方法:构建稳定表达Varp蛋白的HEK293细胞株,用携带EGFP基因的腺病毒载体感染细胞,通过荧光显微镜观察及Western Blotting等方法检测腺病毒对不同细胞感染效率的差别。结果:腺病毒对稳定... 详细信息

目的:探讨Varp蛋白对腺病毒感染细胞效率的影响。方法:构建稳定表达Varp蛋白的HEK293细胞株,用携带EGFP基因的腺病毒载体感染细胞,通过荧光显微镜观察及Western Blotting等方法检测腺病毒对不同细胞感染效率的差别。结果:腺病毒对稳定过表达Varp蛋白的细胞的感染效率较对照细胞明显下降。结论:Varp蛋白在细胞中稳定过表达能够降低腺病毒感染细胞的效率。

关键词： Varp 腺病毒增强型绿色荧光蛋白 HEK293细胞

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