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pemt2-cDNA的转染抑制大鼠CBRH-7919肝癌细胞c-Met及Bcl-2的表达并诱发凋亡

中国生物化学与分子生物学报 2001年第5期17卷 661-665页

作者：邹伟李兆育李亚丽马克里夏泉崔肇春辽宁师范大学生命科学学院大连116029 大连医科大学生物化学与分子生物学教研室大连116027

为探讨磷脂酰乙醇胺 N 甲基转移酶 2 (phosphatidylethanolamine N methyltransferase 2 ,PEMT2 )的转染抑制大鼠肝癌CBRH 7919细胞增殖的分子机理 ,构建了带有完整的pemt2 cDNA基因质粒载体 ,经转染和鉴定 ,确知其在大鼠肝癌细胞系CB... 详细信息

为探讨磷脂酰乙醇胺 N 甲基转移酶 2 (phosphatidylethanolamine N methyltransferase 2 ,PEMT2 )的转染抑制大鼠肝癌CBRH 7919细胞增殖的分子机理 ,构建了带有完整的pemt2 cDNA基因质粒载体 ,经转染和鉴定 ,确知其在大鼠肝癌细胞系CBRH 7919细胞中稳定高表达 .用细胞培养、免疫细胞化学、Western印迹、流式细胞仪和琼脂糖凝胶电泳等技术研究c Met(HGF的受体 )及抗凋亡蛋白Bcl 2在此过程中的表达和是否诱发凋亡 .免疫组织化学及Western印迹分析显示在转染高表达细胞中 ,c Met及Bcl 2的表达下调 .流式细胞仪分析表明 ,在转染pemt2 cDNA的高表达细胞中 ,G1期细胞增加 ,S期细胞减少 ,并在G0 期出现一个凋亡峰 .琼脂糖凝胶电泳谱显示梯状条带 .结果表明 :pemt2的转染可使大鼠肝癌细胞的c Met及Bcl 2的表达下调 ,并发生凋亡 .

关键词：磷脂酰乙醇胺-N-甲基转移酶-2 PEMT2 磷脂酰胆碱肝癌细胞凋亡 c-Met Bcl-2 转染表达抑制

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N端缺失突变对核糖核酸酶抑制因子活性的影响

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中国生物化学与分子生物学报 2004年第6期20卷 773-777页

作者：吴毓赵宝昌王继红任风吴妍宁赵鹏崔秀云辽宁师范大学生命科学学院大连116029 大连医科大学生物化学与分子生物学教研室大连116027

人胎盘核糖核酸酶抑制因子(HRI)是一种存在于细胞浆中的50 kD的酸性蛋白质，富含亮氨酸和半肤氨酸.作为胞浆蛋白可保护细胞不受外来胰RN白s。侵袭.HRI主要结构是由7个富含亮氨酸的重复序列组成，7个亮氨酸重复单位有规律环状排列使N端、... 详细信息

人胎盘核糖核酸酶抑制因子(HRI)是一种存在于细胞浆中的50 kD的酸性蛋白质，富含亮氨酸和半肤氨酸.作为胞浆蛋白可保护细胞不受外来胰RN白s。侵袭.HRI主要结构是由7个富含亮氨酸的重复序列组成，7个亮氨酸重复单位有规律环状排列使N端、c端在空间上较为接近.用PcR方法在HRI cl〕NAS，端去除30个核普酸，并将此缺失突变的HRI的cl〕NA片段构建于质粒pPIcgK，电击转化入毕赤酵母(Pi峨i。 Pasto汀S)Gslls中，进行分泌型表达.对表达产物进行亲和层析纯化.实验结果表明，N端缺失突变的HRI与RN白s。A的亲合力较野生型HRI降低1倍，但依然具有竞争性抑制RNas。A的活性，表明HRIN端10个氨基酸残基缺失后并未丧失其抑制活性.

关键词：核糖核酸酶抑制因子缺失突变毕赤酵母蛋白质-蛋白质相互作用

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外源前列腺特异性膜抗原纯化及位点特异性N-糖基化修饰谱分析

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中华肿瘤防治杂志 2021年第23期28卷 1792-1797,1804页

作者：杜文倩张萌唐语彤林晓蕊潘慕垚刘宝琴中国医科大学生命科学学院生物化学与分子生物学教研室辽宁沈阳110122 中国医科大学临床二系辽宁沈阳110122

目的构建前列腺特异性膜抗原(PSMA)真核表达重组载体pcDNA3-FOLH1,293细胞系中过表达PSMA蛋白,纯化外源过表达PSMA蛋白,分析其位点特异性N-糖基化修饰谱。方法聚合酶链式反应(PCR)扩增叶酸水解酶1(FOLH1)全长基因,利用重组技术将FOLH1... 详细信息

目的构建前列腺特异性膜抗原(PSMA)真核表达重组载体pcDNA3-FOLH1,293细胞系中过表达PSMA蛋白,纯化外源过表达PSMA蛋白,分析其位点特异性N-糖基化修饰谱。方法聚合酶链式反应(PCR)扩增叶酸水解酶1(FOLH1)全长基因,利用重组技术将FOLH1基因连接到真核表达载体pcDNA3;双酶切鉴定及测序无误后,利用转染技术将真核表达载体转染进293细胞系,肽-N-糖苷酶F(PNGase F)酶切鉴定PSMA蛋白;免疫沉淀技术纯化293细胞系外源过表达PSMA蛋白,质谱分析位点特异性N-糖基化修饰谱。结果成功构建PSMA蛋白真核表达重组载体pcDNA3-FOLH1;293细胞系中外源过表达PSMA蛋白,PNGase F未处理PSMA蛋白相对分子质量为100×10^(3),酶切处理之后其相对分子质量约为85×10^(3),符合预期。免疫纯化获得外源过表达PSMA蛋白之后,LC-MS揭示重组PSMA蛋白中的大多数N-糖基化修饰位点都有寡糖链占位,且高甘露糖型、杂合型及复合型组成有一定差异。结论成功完成PSMA蛋白真核表达载体的构建、表达、纯化及位点特异性N-糖基化修饰谱分析,为后续靶向PSMA的肿瘤治疗提供基础科研数据。

关键词：前列腺特异性膜抗原 N-糖基化修饰叶酸水解酶1 位点特异性N-糖基化修饰分析前列腺癌

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G蛋白β_3基因多态性同维吾尔族人群高血压的关联分析

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复旦学报（医学版） 2006年第4期33卷 433-436页

作者：经剑颖王丹焦谊王笑峰温浩林仁勇金建中金力河南省洛阳大学环境与化学工程学院生物教研室洛阳471000 复旦大学生命科学学院遗传学研究所上海200433 新疆医科大学生物化学暨分子生物学教研室

目的研究G蛋白β3亚单位(G-proteinβ3Subunit,GNB3)基因第10外显子C825T多态性同中国维吾尔族人群高血压之间的关联性。方法采用较大样本巢式病例-对照研究(n=738),用聚合酶链式反应(PCR)及限制性片段长度多态性(RFLP)技术对354例高血... 详细信息

目的研究G蛋白β3亚单位(G-proteinβ3Subunit,GNB3)基因第10外显子C825T多态性同中国维吾尔族人群高血压之间的关联性。方法采用较大样本巢式病例-对照研究(n=738),用聚合酶链式反应(PCR)及限制性片段长度多态性(RFLP)技术对354例高血压患者及384例正常血压者GNB3基因C825T多态进行检测。结果GNB3基因C825T多态3种基因型CC、TT、CT分布频率在病例组为27.2%、42.9%、29.9%,在正常对照组为27.7%、42.4%、29.9%,基因型分布在组间的差异无统计学意义(2χ=0.026 2,P=0.99)。T等位基因分布频率在病例组为51.4%、在正常对照组为51.2%,组间的差异也无统计学意义(χ2=0.001 6,P=0.97)。对病例组在不同基因型间进行比较,未发现CC、CT、TT基因型间收缩压、舒张压、体重指数、血糖、血脂水平有统计学差异。结论GNB3C825CT多态可能与维吾尔族人群高血压无关联。

关键词：维吾尔族高血压 G蛋白多态

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脆弱拟杆菌Pif1解旋酶的表达纯化与晶体生长

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生物技术通报 2021年第9期37卷 180-190页

作者：曹汝菲李泽轩许欢张莎张敏敏戴枫段晓雷遵义医科大学生物化学教研室遵义563000 遵义医科大学检验医学院遵义563000 西北农林科技大学生命科学学院杨凌712100

获得可用于X射线衍射的B.f Pif1单晶以用于探究B.f Pif1结构与功能。构建原核表达载体pET15b-SUMO-B.f Pif1,并进行B.f Pif1重组蛋白的诱导表达;经镍柱亲和层析、SUMO酶切、DEAE交换层析与S200凝胶过滤层析等一系列纯化;并利用Stopped-f... 详细信息

获得可用于X射线衍射的B.f Pif1单晶以用于探究B.f Pif1结构与功能。构建原核表达载体pET15b-SUMO-B.f Pif1,并进行B.f Pif1重组蛋白的诱导表达;经镍柱亲和层析、SUMO酶切、DEAE交换层析与S200凝胶过滤层析等一系列纯化;并利用Stopped-flow技术检测纯化蛋白的活性;使用结晶机器人及多种试剂盒进行结晶条件筛选与优化培养,并进行初步的X射线衍射分析。获得高纯度(>98.5%)与高浓度(17 mg/mL)的B.f Pif1蛋白,动力学结果显示其解旋活性良好。结晶实验表明:在0.1 mol/L Bis-Tris乙酸(pH 8.3),0.05 mol/L碳酸氢钠,5%甘油和0.015 mol/L亚精胺条件下培养出形态较好的单晶,其X射线衍射分辨率达到3.5?。成功表达纯化与结晶培养出具有较高分辨率的B.f Pif1蛋白的单晶。

关键词： Pif1解旋酶脆弱拟杆菌重组表达纯化蛋白结晶

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人血管抑制素在酿酒酵母中的分泌表达和活性鉴定

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中国生物化学与分子生物学报 2002年第2期18卷 156-160页

作者：卢文菊罗进贤张晓实李文清广州医学院临床生物化学教研室广州510182 中山大学生命科学学院广州510275 中山医科大学肿瘤研究所广州510060

将酵母交配因子 (MF)α1信号肽编码序列和人血管抑制素 (hAGN)cDNA融合序列插入穿梭载体pYADE4 ,构建得到分泌型重组表达质粒pYADEMA18.转化酿酒酵母JG110 7后 ,用 2 %乙醇和2 %甘油联合诱导表达 .ELISA分析表明 ,在诱导 14h～ 30h期间 ... 详细信息

将酵母交配因子 (MF)α1信号肽编码序列和人血管抑制素 (hAGN)cDNA融合序列插入穿梭载体pYADE4 ,构建得到分泌型重组表达质粒pYADEMA18.转化酿酒酵母JG110 7后 ,用 2 %乙醇和2 %甘油联合诱导表达 .ELISA分析表明 ,在诱导 14h～ 30h期间 ,hAGN获得了表达并分泌至细胞外 .发酵上清液经 75 %饱和度硫酸铵沉淀、CM 5 2纤维素离子交换层析和Superdex 75凝胶过滤层析纯化 .SDS PAGE分析显示 ,表达产物重组人血管抑制素 (rhAGN)相对分子质量约 5 0kD ,电泳纯度达到 94 %.生物活性分析证明 ,rhAGN在 0 0 1mg L～ 3 0mg L浓度范围内能够抑制人真皮内皮细胞株HDMEC增殖 ,抑制作用随剂量的增加而增强 .

关键词：人血管抑制素酿酒酵母分泌表达活性鉴定

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ATRA通过抑制铁死亡缓解脂多糖诱导的小鼠急性心肌损伤

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安徽医科大学学报 2023年第3期58卷 373-378页

作者：但章勇束传林施晓蕊周青汪渊任梦飞王怡朱华庆安徽医科大学生物化学与分子生物学教研室安徽医科大学分子生物学实验室合肥230032 安徽医科大学生命科学学院合肥230032 安徽医科大学生命科学学院生物工程系合肥230032

目的研究全反式维甲酸(ATRA)对脂多糖(LPS)诱导C57BL/6小鼠急性心肌损伤的影响及机制。方法20只C57BL/6雄性小鼠随机均分成正常组、模型组、ATRA组、ferrostatin-1组。ATRA组和ferrostatin-1组小鼠分别腹腔注射ATRA[15 mg/kg·d]、f... 详细信息

目的研究全反式维甲酸(ATRA)对脂多糖(LPS)诱导C57BL/6小鼠急性心肌损伤的影响及机制。方法20只C57BL/6雄性小鼠随机均分成正常组、模型组、ATRA组、ferrostatin-1组。ATRA组和ferrostatin-1组小鼠分别腹腔注射ATRA[15 mg/kg·d]、ferrostatin-1[2 mg/(kg·d)],正常组和模型组给予溶剂,持续给药一周后,模型组、ATRA组、ferrostatin-1组腹腔注射LPS(6 mg/kg),6 h后处死所有小鼠。检测小鼠血清中丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)含量;qPCR检测心脏组织IL-6、TNF-α的mRNA水平;苏木精-伊红(HE)染色观察小鼠心脏组织变化;透射电子显微镜(TEM)观察小鼠心肌线粒体的结构;蛋白质印迹法(Western blot)检测铁死亡标志物[谷胱甘肽过氧化酶4(GPX4)、铁蛋白重链1(FTH1)、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、长链脂酰辅酶A合成酶4(ACSL4)]以及相关调控蛋白[核因子E2相关因子2(NRF2)、kelch样ECH关联蛋白1(KEAP1)]的表达。结果与正常组小鼠相比,模型组小鼠血清中MDA含量上升、GSH含量下降、还原型谷胱甘肽和氧化型谷胱甘肽的比值(GSH/GSSG)下降,ATRA组和ferrostatin-1组逆转以上变化;与正常组小鼠相比,模型组小鼠心脏组织IL-6、TNF-α的mRNA水平增高,与模型组相比ATRA组和ferrostatin-1组mRNA水平降低;各组小鼠心肌组织HE染色无明显差异;TEM显示与正常组相比,模型组心肌线粒体出现嵴减少或消失的现象,与模型组相比,ATRA组和ferrostatin-1组心肌线粒体嵴数量增多;Western blot显示,与正常组相比,模型组小鼠心肌组织中GPX4、FTH1、SLC7A11、NRF2蛋白表达减少,ACSL4、KEAP1蛋白表达增加,ATRA组、ferrostatin-1组逆转以上变化。结论ATRA通过抑制铁死亡缓解脂多糖引起的小鼠急性心肌损伤。

关键词：全反式维甲酸铁死亡核因子E2相关因子2 脂多糖

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呼吸道苦味信号转导抑制与小鼠哮喘相关

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中国生物化学与分子生物学报 2021年第3期37卷 347-353页

作者：郭雪冬李秀娟仪慧兰山西大学生命科学学院太原030006 山西医科大学生物化学与分子生物学教研室山西省出生缺陷与细胞再生重点实验室太原030001

鉴于哮喘病患病人数众多,约有一半的病人病情得不到较好的控制,急需新的治疗方法和药物。最近研究发现,苦味受体(bitter taste receptors,T2Rs)在多个组织中表达,且苦味剂对哮喘有治疗潜力,T2Rs有可能成为哮喘治疗的新靶点。本文选C57B... 详细信息

鉴于哮喘病患病人数众多,约有一半的病人病情得不到较好的控制,急需新的治疗方法和药物。最近研究发现,苦味受体(bitter taste receptors,T2Rs)在多个组织中表达,且苦味剂对哮喘有治疗潜力,T2Rs有可能成为哮喘治疗的新靶点。本文选C57BL/6小鼠随机分为对照组、二氧化硫(sulfur dioxide,SO_(2))组、卵清蛋白(ovalbumin,OVA)组和OVA+SO_(2)组,通过建立哮喘模型分析哮喘病发生和演进与苦味信号转导的关系。研究发现:与对照组相比,OVA组和OVA+SO_(2)组小鼠肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中白细胞总数和分类细胞数(嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、淋巴细胞和巨噬细胞)显著增加(P<0.05),气管黏蛋白Muc5ac基因表达上调(P<0.01),肺组织病理性损伤,表现哮喘样特征;SO_(2)组无明显炎症反应;小鼠气管和肺中T2rs及其下游信号转导分子味导素α亚基(gusducin-α,α-gust)和瞬时电位阳离子通道M5(transient receptor potential cation channel subfamily M member 5,Trpm5)基因的转录,因呼吸道炎症和疾病而改变,其中OVA组和OVA+SO_(2)组肺内T2r108、T2r135和T2r137表达下调,Trpm5转录受到抑制(P<0.05),表明哮喘发生与呼吸道T2rs及下游信号转导分子转录抑制有关,OVA+SO_(2)联合暴露能增强哮喘小鼠呼吸道苦味信号转导途径抑制,与该组呼吸道炎症和损伤加重的结果相一致。研究结果表明,哮喘性疾病的发生和演进与呼吸道苦味信号转导抑制有关,选择适合的激动剂激活呼吸道苦味信号转导途径,可能对哮喘病的预防和治疗有积极的作用。

关键词：哮喘小鼠苦味受体转录抑制气管黏蛋白

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乳源免疫调节肽通过泛素-蛋白酶体途径抑制卵巢癌耐药性及其机制研究

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安徽医科大学学报 2018年第7期53卷 989-993页

作者：阮昕汪慎燚徐恰席浩薛绍礼秦宜德安徽医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室合肥230032 安徽医科大学生命科学学院生物工程教研室合肥230032

目的研究乳源免疫调节肽(PGPIPN)抑制卵巢癌耐药性及其机制。方法 MTT法检测PGPIPN与抗癌药顺铂(DDP)联合用药抑制人卵巢癌敏感细胞株(SKOV_3)、耐药细胞株(SKOV_3-DDP)和原代卵巢癌细胞的半数抑制浓度(IC_(50))和细胞增殖抑制率,PCR法... 详细信息

目的研究乳源免疫调节肽(PGPIPN)抑制卵巢癌耐药性及其机制。方法 MTT法检测PGPIPN与抗癌药顺铂(DDP)联合用药抑制人卵巢癌敏感细胞株(SKOV_3)、耐药细胞株(SKOV_3-DDP)和原代卵巢癌细胞的半数抑制浓度(IC_(50))和细胞增殖抑制率,PCR法和Western blot法检测人卵巢癌细胞株和原代卵巢癌细胞用药情况下泛素-蛋白酶体途径相关基因的表达。结果 PGPIPN和DDP联合用药细胞增殖抑制率显著高于单独DDP组或PGPIPN组,差异有统计学意义(P<0.05),PCR和Western blot结果表明PGPIPN通过调节泛素-蛋白酶体途径相关基因表达降低卵巢癌细胞的耐药性。PGPIPN促进SIAH和PSMA1表达,降低β-catenin基因的表达(P<0.05,P<0.01),且有剂量依赖性。结论 PGPIPN通过泛素-蛋白酶体途径降低卵巢癌细胞对DDP的耐药性。

关键词：卵巢癌乳源免疫调节肽顺铂泛素-蛋白酶体途径

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ATPR通过促进自噬缓解脂多糖诱导的小鼠急性肝损伤

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安徽医科大学学报 2024年第2期59卷 200-206页

作者：束传林施晓蕊朱如梦周青汪渊王怡朱华庆安徽医科大学生物化学与分子生物学教研室、分子生物学实验室合肥230032 安徽医科大学生命科学学院生物工程系合肥230032

目的研究4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯(ATPR)对脂多糖(LPS)诱导C57BL/6小鼠急性肝损伤的影响及相关机制。方法6周龄的雄性C57BL/6品系小鼠15只随机均分为正常组、模型组和ATPR组。ATPR组小鼠腹腔注射ATPR[15 mg/(kg·d)],正常组... 详细信息

目的研究4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯(ATPR)对脂多糖(LPS)诱导C57BL/6小鼠急性肝损伤的影响及相关机制。方法6周龄的雄性C57BL/6品系小鼠15只随机均分为正常组、模型组和ATPR组。ATPR组小鼠腹腔注射ATPR[15 mg/(kg·d)],正常组和模型组给予溶剂,持续给药1周后,模型组和ATPR组腹腔注射LPS(6 mg/kg),6 h后处死所有小鼠。检测小鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)含量;qPCR检测肝脏组织白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的mRNA水平;苏木精-伊红(HE)染色观察小鼠肝脏组织形态学变化;透射电子显微镜(TEM)观察小鼠肝细胞超微结构变化;Western blot检测线粒体损伤相关蛋白FUNDC1、OPA1和自噬相关蛋白LC3B、P62、Beclin1、ATG5的表达水平。结果与正常组相比,模型组小鼠血清中ALT、AST含量上升,肝脏组织IL-6、TNF-α的mRNA水平升高,ATPR组逆转这一变化。HE染色显示正常组小鼠肝小叶结构正常,肝索呈放射状排列,无充血和炎性细胞浸润,肝细胞边界清晰;模型组小鼠肝脏细胞间隙增大,肝索排列发生紊乱,出现炎性细胞浸润;ATPR组肝脏细胞间隙、肝索结构有所恢复,炎性细胞浸润较少。TEM显示与正常组相比,模型组小鼠肝细胞中受损线粒体和脂滴堆积,ATPR组小鼠肝细胞中线粒体形态和数量、脂滴数量趋于正常。Western blot显示与正常组相比,模型组小鼠肝脏组织中FUNDC1蛋白表达增多,OPA1蛋白表达减少,LC3BⅡ和LC3BⅠ的比值(LC3BⅡ/Ⅰ)下降,P62蛋白表达增多,Beclin1和ATG5蛋白表达减少,ATPR组逆转以上变化。结论ATPR通过促进自噬缓解脂多糖引起的小鼠急性肝损伤。

关键词： 4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯自噬脂多糖

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