检索结果-内蒙古大学图书馆

中国病理生理杂志 2008年第5期24卷 892-895页

作者：刘爱华龚小卫魏洁明小燕王达安邓鹏罗深秋姜勇南方医科大学南方医院呼吸科广东广州510515 南方医科大学病理生理学教研室和广东省蛋白质组学重点实验室广东广州510515 南方医科大学细胞生物学教研室广东广州510515

目的:研究p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)在应激刺激诱导的细胞凋亡中的作用。方法:p38+/+和p38-/-细胞用NaAsO2刺激后,用多聚甲醛固定及DAPI染核,利用荧光显微镜观察细胞核的形态改变。NaAsO2刺激的p38+/+和p38-/-细胞用Annexin V-FITC... 详细信息

目的:研究p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)在应激刺激诱导的细胞凋亡中的作用。方法:p38+/+和p38-/-细胞用NaAsO2刺激后,用多聚甲醛固定及DAPI染核,利用荧光显微镜观察细胞核的形态改变。NaAsO2刺激的p38+/+和p38-/-细胞用Annexin V-FITC与PI双标后,用流式细胞分析仪分析细胞凋亡百分率。结果:NaAsO2刺激后,大部分p38-/-细胞产生典型的凋亡细胞形态学变化,p38+/+细胞仅少数细胞出现核固缩。而且,p38-/-细胞中凋亡细胞百分率较刺激前和p38+/+细胞都显著增加,而p38+/+细胞的凋亡率没有明显变化。结论:p38基因敲除使细胞对亚砷酸盐应激刺激的耐受性下降,容易发生凋亡;p38丝裂原活化蛋白激酶可能在提高细胞的应激适应能力上发挥着重要的作用。

关键词： p38 MAP激酶基因敲除细胞凋亡应激亚砷酸盐类

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Wee1-GFP在CTL介导的细胞毒效应中的作用研究

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细胞与分子免疫学杂志 2008年第3期24卷 303-305页

作者：胡萍吴砂李琨暨南大学医学院微生物学和免疫学教研室广东广州510632 南方医科大学免疫学教研室广东广州510515 同济大学医学院病理生理学教研室上海200092

目的:研究Wee1-GFP融合蛋白对胞毒T细胞介导的胞毒效应的影响。方法:采用脂质体将融合基因Wee1-GFP导入鼠胰岛瘤细胞(NIT-1)并检测其表达。以转染pWee1-GFP和空载体的NIT-1为靶细胞,采用ELISA凋亡试剂盒和乳酸脱氢酶法检测胞毒T细胞介... 详细信息

目的:研究Wee1-GFP融合蛋白对胞毒T细胞介导的胞毒效应的影响。方法:采用脂质体将融合基因Wee1-GFP导入鼠胰岛瘤细胞(NIT-1)并检测其表达。以转染pWee1-GFP和空载体的NIT-1为靶细胞,采用ELISA凋亡试剂盒和乳酸脱氢酶法检测胞毒T细胞介导的细胞毒效应。结果:Western blot检出Wee1-GFP融合蛋白的表达。转染Wee1-GFP的靶细胞发生凋亡及损伤的细胞数比转染空载体的靶细胞少。结论:Wee1-GFP基因转染靶细胞具有一定的抵抗CTL介导的胞毒效应的能力。

关键词：凋亡 Wee1 细胞毒效应

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ABCG2／Bcrpl可能是大鼠气管上皮干细胞的标记物

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中国病理生理杂志 2008年第5期24卷 1023-1024,1027页

作者：丁强杨扬贾心善孙善亮马小波中山大学基础医学院病理生理学教研室中国医科大学基础医学院病理学教研室中国医科大学基础医学院病理学教研室广东广州辽宁沈阳

目的：探索气管上皮干细胞的表面标记物。方法：取2周龄的Wistar大鼠，取出气管环，5-FU损伤12h后，取气管上皮涂片进行增殖细胞核抗原、ABCG2／Bcrp1抗原染色、RT-PCR检测ABCG2／Bcrp1基因表达。结果：5-FU损伤后大鼠气管上皮气管环的... 详细信息

目的：探索气管上皮干细胞的表面标记物。方法：取2周龄的Wistar大鼠，取出气管环，5-FU损伤12h后，取气管上皮涂片进行增殖细胞核抗原、ABCG2／Bcrp1抗原染色、RT-PCR检测ABCG2／Bcrp1基因表达。结果：5-FU损伤后大鼠气管上皮气管环的上皮全部脱落，残留间隔分布的裸核样细胞，基底膜完整。气管上皮涂片免疫组织化学染色可见PCNA染色阳性的细胞与阴性细胞间隔分布，间接免疫荧光染色可见ABCG2／Bcrp1阳性细胞；RT-PCR检测ABCG2／Bcrp1阳性反应产物与预计长度符合。结论：ABCG2／Bcrp1可以作为气管上皮干细胞的标记，为进一步分离纯化扩增奠定基础。

关键词：气管上皮干细胞 ABCG2／Bcrp1 氟脲嘧啶

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绿色荧光标记C-反应蛋白的原核表达和毛细管电泳检测

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贵阳医学院学报 2008年第5期33卷 441-445页

作者：陈腾祥夏高晓陈丽刘亚伟刘靖华姜勇贵阳医学院生理学教研室贵州贵阳550004 南方医科大学病理生理学教研室和广东省蛋白质组学重点实验室广东广州510515

目的:表达纯化重组的His-EGFP-CRP蛋白,通过毛细管电泳技术对该重组蛋白的生物活性进行评价。方法:用pET14b/EGFP-hCRP原核表达质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,表达的重组蛋白通过亲和色谱纯化、梯度透析,获得复性的His-EGFP-CR... 详细信息

目的:表达纯化重组的His-EGFP-CRP蛋白,通过毛细管电泳技术对该重组蛋白的生物活性进行评价。方法:用pET14b/EGFP-hCRP原核表达质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,表达的重组蛋白通过亲和色谱纯化、梯度透析,获得复性的His-EGFP-CRP蛋白;并用高效毛细管电泳(HPCE)技术对复性的蛋白进行检测,了解蛋白质的等电点及活性。结果:转化实验发现,该质粒pET14b/EGFP-hCRP在BL21(DE3)中能够被诱导表达;通过包涵体变性溶解、亲和色谱纯化可获得纯度较高的His-EGFP-CRP蛋白;HPCE分离发现复性后的His-EGFP-CRP蛋白峰为多个,其在电泳液pH值低于6时易检出,His-EGFP-CRP与THP-1细胞裂解物孵育后的检测峰增多。结论:成功地在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达重组蛋白His-EGFP-CRP,通过包涵体变性溶解及亲和色谱纯化获得该重组蛋白,复性后的His-EGFP-CRP等电点接近于6,以单体或多聚体等结构形式存在,具有结合活性,能与细胞内相关分子结合成复合物,可应用于CRP功能和内化机制的研究。

关键词： C反应蛋白基因表达蛋白质复性电泳,毛细管

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细胞信号转导的组学研究策略

细胞信号转导的组学研究策略

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中国病理生理学会受体和信号转导专业委员会暨消化专业委员会联合学术会议

作者：姜勇南方医科大学病理生理学教研室和广东省功能蛋白质组学重点实验室，广州 510515

细胞信号系统(cell signaling system)控制着细胞的代谢、增生、分化、迁移、细胞凋亡、炎症反应和应激适应等功能活动。在真核细胞，各种细胞过程往往并非单个信号转导分子或单一信号通路就能完成的，而是受到多个信号元件组成的信号... 详细信息

细胞信号系统(cell signaling system)控制着细胞的代谢、增生、分化、迁移、细胞凋亡、炎症反应和应激适应等功能活动。在真核细胞，各种细胞过程往往并非单个信号转导分子或单一信号通路就能完成的，而是受到多个信号元件组成的信号网络的精密调控。细胞的生命过程并不仅是许多独立反应的简单总和，而是由多种信号调节形式的复杂组合。经典的针对单一信号分子的研究模式，可能无法适应后基因组时代(post genome era)的综合集成式揭示生命活动机制的要求，因此，发展以系统生物学为指导思想的各种“组学(Omics)”技术和研究策略已经成为生命科学研究的必然趋势。本文集中介绍如何应用基因组学、蛋白质组学、噬菌体展示、酵母双杂交、生物信息学、生物质谱分析等技术来大规模、高通量、集成式研究蛋白信号分子的相互作用、调节机制及其生物学功能。

关键词：蛋白质组学信号分子复合物信号转导网络质谱分析

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细胞穿透肽在肿瘤治疗中的应用

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生理科学进展 2007年第4期38卷 301-306页

作者：黄劭刘亚伟姜勇南方医科大学病理生理学教研室和广东省功能蛋白质组学重点实验室广州510515

随着人类对基因组信息解读的不断深入,越来越多的生物大分子作为候选药物进入生物治疗领域。但细胞表面的脂质双层膜具有选择通透性,这种天然屏障作用在保护细胞的同时也限制了绝大多数生物大分子进入细胞内部发挥治疗效应。目前流行的... 详细信息

随着人类对基因组信息解读的不断深入,越来越多的生物大分子作为候选药物进入生物治疗领域。但细胞表面的脂质双层膜具有选择通透性,这种天然屏障作用在保护细胞的同时也限制了绝大多数生物大分子进入细胞内部发挥治疗效应。目前流行的入胞转运方式如电穿孔、脂质体转染等均存在对细胞的额外毒副作用,且作用范围局限于体外实验。细胞穿透肽是一类以非受体依赖方式,非经典内吞方式直接穿过细胞膜进入细胞的多肽。它们可以与多种生物活性物质连接并携带其进入细胞,这一特性为它们成为理想的药物载体提供了可能。本文对使用细胞穿透肽作为载体转运具有抗癌作用的生物大分子进入细胞的抗癌实验予以介绍。

关键词：肿瘤细胞穿透多肽跨膜转运

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p53基因敲除对细胞迁移的影响

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南方医科大学学报 2007年第8期27卷 1132-1135页

作者：龚小卫魏洁李煜生程蔚蔚王旭邓鹏姜勇南方医科大学病理生理学教研室和广东省蛋白质组学重点实验室广东广州510515

目的研究p53基因敲除对细胞迁移的影响。方法观察p53+/+和p53-/-细胞中血清诱导的板状伪足形成情况,以及利用Transwell细胞迁移系统观察p53基因敲除对血清诱导的细胞迁移的影响。结果在血清诱导下,p53+/+细胞能形成板状伪足和进行迁移,... 详细信息

目的研究p53基因敲除对细胞迁移的影响。方法观察p53+/+和p53-/-细胞中血清诱导的板状伪足形成情况,以及利用Transwell细胞迁移系统观察p53基因敲除对血清诱导的细胞迁移的影响。结果在血清诱导下,p53+/+细胞能形成板状伪足和进行迁移,而p53-/-细胞中板状伪足的形成和细胞迁移都被阻断。结论p53在血清诱导的细胞迁移中具有重要作用。

关键词： p53 基因敲除细胞迁移

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晚期糖基化终末产物受体真核表达载体的构建与表达

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南方医科大学学报 2007年第7期27卷 983-986页

作者：李煜生龚小卫程蔚蔚魏洁姜勇南方医科大学病理生理学教研室和广东省蛋白质组学重点实验室广东广州510515

目的构建带HA标签的晚期糖基化终末产物受体真核细胞表达载体。方法采用PCR方法从人cDNA文库中扩增RAGE基因编码区,使用常规酶切、连接方法将其重组至pcDNA3真核表达载体中,对阳性克隆进行酶切、PCR和测序鉴定。以RAGE/pcDNA3重组质粒... 详细信息

目的构建带HA标签的晚期糖基化终末产物受体真核细胞表达载体。方法采用PCR方法从人cDNA文库中扩增RAGE基因编码区,使用常规酶切、连接方法将其重组至pcDNA3真核表达载体中,对阳性克隆进行酶切、PCR和测序鉴定。以RAGE/pcDNA3重组质粒为模板,运用突变方法在RAGE氨基末端信号肽后插入HA序列。利用Western blotting在HEK293细胞中对经过测序鉴定的HA-RAGE\pcDNA3重组质粒的表达进行了检测。结果RAGE/pcDNA3重组质粒经酶切、PCR和测序鉴定正确无误,HA-RAGE\pcDNA3重组质粒可在HEK293细胞中表达。结论成功构建了带HA标签的RAGE真核细胞表达载体,该载体能在真核细胞中表达,为进一步研究RAGE在细胞信号转导途径中的作用提供了一个重要的工具。

关键词： RAGE 载体构建基因表达

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细菌脂多糖识别系统

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中国生物化学与分子生物学报 2007年第9期23卷 711-717页

作者：丁宁姜勇南方医科大学病理生理学教研室和广东省功能蛋白质组学重点实验室广州510515

细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)可激活单核/巨噬细胞、内皮细胞合成和释放多种细胞因子,导致全身性炎症反应.LPS识别及跨膜信号转导是引起细胞效应的关键.在过去的几年中,有关LPS结合蛋白家族和受体系统及其作用机制的研究突飞猛进... 详细信息

细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)可激活单核/巨噬细胞、内皮细胞合成和释放多种细胞因子,导致全身性炎症反应.LPS识别及跨膜信号转导是引起细胞效应的关键.在过去的几年中,有关LPS结合蛋白家族和受体系统及其作用机制的研究突飞猛进,大量研究表明LPS识别涉及复杂的蛋白质间相互作用.在此对LPS识别系统成员及其功能的最新研究进展进行综述,并详细介绍新近提出的"LPS受体激活簇"理论.

关键词：脂多糖脂多糖受体脓毒症蛋白质-蛋白质相互作用

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脓毒症单核巨噬细胞特异性结合肽的筛选

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中国生物化学与分子生物学报 2007年第12期23卷 1045-1050页

作者：丁宁刘承武李志杰刘靖华邓鹏姜勇南方医科大学病理生理学教研室和广东省功能蛋白质组学重点实验室广州510515

利用噬菌体随机肽库展示技术,筛选出与脓毒症单核/巨噬细胞特异性结合的短肽,探索脓毒症治疗的新方法.分别以经过脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)处理的人外周血单核细胞株(THP-1)细胞作为筛选的靶细胞,以未经LPS处理的THP-1细胞作为非... 详细信息

利用噬菌体随机肽库展示技术,筛选出与脓毒症单核/巨噬细胞特异性结合的短肽,探索脓毒症治疗的新方法.分别以经过脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)处理的人外周血单核细胞株(THP-1)细胞作为筛选的靶细胞,以未经LPS处理的THP-1细胞作为非特异性噬菌体吸附细胞,对噬菌体随机环七肽库进行4轮"差减"筛选,经过细胞ELISA验证阳性噬菌体克隆,对获得的阳性克隆进行DNA测序及生物信息学分析,并进一步利用免疫荧光实验,鉴定噬菌体克隆与LPS处理THP-1细胞的结合特异性.4轮筛选后,随机挑取的噬菌体克隆,测序后得到可与LPS处理的THP-1细胞特异性结合肽.对去冗余后的七肽进行Clustal W多序列比对分析和BlastP蛋白同源相似性分析,细胞免疫荧光检测确定获得的噬菌体展示七肽可与LPS处理的THP-1细胞特异性结合.噬菌体随机肽库技术为脓毒症单核/巨噬细胞表面靶位的筛选提供了高效、快捷的筛选体系,实验获得的多肽基序具有高度保守性和细胞特异性,这些多肽的生物活性将是下一步的研究内容.

关键词：单核,巨噬细胞脂多糖噬菌体展示肽库脓毒症

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