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安徽医科大学学报 2017年第8期52卷 1137-1141页

作者：闫德俊尹胜丁圣刚沈兵杜鹃安徽医科大学基础医学院生理学教研室合肥230032 安徽医科大学第一附属医院儿科合肥230022

目的探讨钙库操纵钙内流(SOCE)和钠钙交换体(NCX)在卡巴胆碱引起的气管平滑肌收缩中的作用。方法采用小鼠离体气管实验,观察NCX特异性阻断剂KBR7943、电压依赖型钙通道阻断剂尼非地平、Orai1阻断剂BTP2对卡巴胆碱引起的气管收缩的抑制... 详细信息

目的探讨钙库操纵钙内流(SOCE)和钠钙交换体(NCX)在卡巴胆碱引起的气管平滑肌收缩中的作用。方法采用小鼠离体气管实验,观察NCX特异性阻断剂KBR7943、电压依赖型钙通道阻断剂尼非地平、Orai1阻断剂BTP2对卡巴胆碱引起的气管收缩的抑制效应。结果 KBR7943和BTP2显著阻断了累积浓度卡巴胆碱引起的小鼠气管收缩和卡巴胆碱引起的SOCE介导的气管收缩,而尼非地平未显著阻断卡巴胆碱引起的气管收缩。结论 NCX和Orai1都参与介导卡巴胆碱引起的气管平滑肌收缩,Orai1主要参与卡巴胆碱引起的起始阶段的瞬时收缩,NCX主要参与后期的持续收缩,而起始阶段的Orai1介导的钙内流可能是激活NCX的前提条件,阻断Orai1的同时也会导致后期NCX引起的收缩阻断,两者共同参与介导卡巴胆碱引起的收缩。

关键词：气管平滑肌钠钙交换体钙库操纵的钙内流卡巴胆碱

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异丙酚对热打击后内皮细胞线粒体氧化应激损伤的保护作用

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解放军医学杂志 2017年第6期42卷 500-505页

作者：李莉古正涛何旋邹志敏潘志国赵明苏磊南方医科大学第三附属医院重症医学科广州510630 南方医科大学第一临床医学院广州510515 广州军区广州总医院重症医学科、全军热区创伤救治与组织修复重点实验室广州510010 南方医科大学基础医学院病理生理学教研室、广东省休克微循环重点实验室广州510515

目的探讨热损伤过程中异丙酚对内皮细胞的抗氧化作用以及对线粒体的保护效应。方法采用43℃培养2h后37℃、5%CO2常规培养6h的方法建立人脐静脉内皮细胞(HUVECs)热打击模型;实验分为37℃组、37℃+脂肪乳组(阴性对照组)、37℃+异丙酚组、4... 详细信息

目的探讨热损伤过程中异丙酚对内皮细胞的抗氧化作用以及对线粒体的保护效应。方法采用43℃培养2h后37℃、5%CO2常规培养6h的方法建立人脐静脉内皮细胞(HUVECs)热打击模型;实验分为37℃组、37℃+脂肪乳组(阴性对照组)、37℃+异丙酚组、43℃组、43℃+异丙酚组、H2O2+异丙酚组(阳性对照组)6组,其中异丙酚、脂肪乳均于热打击或H2O2作用前先行与细胞孵育。应用CCK-8法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞内活性氧(ROS)、线粒体膜电位(ΔΨm)以及线粒体通透性转换孔(MPTP)的变化;荧光素-荧光素酶法检测ATP含量;Caspase活性试剂盒检测caspase-9和caspase-3活性的变化。结果热打击后,HUVECs活力明显降低,线粒体功能受损(P<0.05);经异丙酚预处理的HUVECs在热打击后保持了细胞活力,胞内ROS水平较单纯43℃热打击组明显降低(P<0.05),线粒体膜电位下降的细胞占比(JC-1单体所占比例)明显减少(P<0.05),线粒体通透性转换孔开放,细胞内ATP含量明显升高(P<0.05),同时线粒体损伤相关的caspase-9/3所介导的线粒体凋亡通路的激活也被抑制。结论异丙酚在热损伤过程中具有抗氧化损伤、抗凋亡以及线粒体保护作用。

关键词：中暑内皮细胞氧化性应激

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白细胞介素-17通过信号传导与转录激活因子3诱导类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞释放炎症及骨侵蚀因子

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中华风湿病学杂志 2017年第5期21卷 338-341页

作者：吕英姿高薇锦州医科大学基础医学院病理生理学教研室 121000 锦州医科大学附属第一医院风湿免疫科

目的研究IL-17对RA患者成纤维样滑膜细胞（FLSs）释放IL-6、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）、IL-8及骨侵蚀因子NF-κB受体活化因子配体（RANKL）、骨保护素的调控作用，并探究其作用是否有信号传导与转录激活因子（STAT）3信号... 详细信息

目的研究IL-17对RA患者成纤维样滑膜细胞（FLSs）释放IL-6、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）、IL-8及骨侵蚀因子NF-κB受体活化因子配体（RANKL）、骨保护素的调控作用，并探究其作用是否有信号传导与转录激活因子（STAT）3信号通路的参与。方法原代培养RA患者FLSs，培养细胞分为3组：正常培养FLSs（对照组），IL-17处理组，靶向沉默STAT3后IL-17处理组。蛋白质印迹法检测RANKL和骨保护素在各组FLSs的表达；ELISA检测FLSs生成IL-6、GM-CSF、IL-8的含量。采用单因素方差分析及LSD-t组间两两比较。结果IL-17促进FLSs释放IL-6、GM-CSF、IL-8增多（t=2.135，P〈0.01），促进FLSs生成RANKL增多（t=2.105，P〈0.01），抑制FLSs生成骨保护素（t=2.502，P〈0.01），而靶向沉默STAT3的表达可抑制IL-17对FLSs的调控作用[对照组：IL-6（512±18）pg/ml；GM-CSF（591±25）pg/ml；IL-8（473±10）pg/ml；RANKL（2.310±0.096）；骨保护素（0.614±0.311）；IL-17处理组：IL-6（1 630±39）pg/ml；GM-CSF（1 825±18）pg/ml；IL-8（2 804±41）pg/ml；RANKL（4.010±0.256）；骨保护素（0.131±0.101）；STAT3靶向沉默后IL-17处理组：IL-6（405±21）pg/ml；GM-CSF（451±12）pg/ml；IL-8（370±9）pg/ml；RANKL（0.850±0.298）；骨保护素（1.120±0.342）]。结论STAT3信号通路参与IL-17对FLSs释放炎症及骨侵蚀因子的调控作用，IL-17可通过STAT3诱导RA关节滑膜的炎症及骨侵蚀病变。

关键词：关节炎,类风湿成纤维样滑膜细胞白细胞介素-17 炎症

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血清反应因子全长及N端片段过表达慢病毒载体的构建及其对心脏干细胞分化的影响

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临床与实验病理学杂志 2017年第10期33卷 1109-1115页

作者：雷洪王可可哈艳平贾亚楠李汝佳申志华郭峻莉揭伟广东医科大学基础医学院病理学系湛江524023 广东医科大学基础医学院病理生理学教研室湛江524023 海南医学院第一附属医院心血管研究所海口570102

目的探讨血清反应因子全长(SRF-Full)及N端片段(SRF-N,1-254aa)对TGF-β1诱导c-Kit+心脏干细胞(cardiac stem cell,CSC)分化的影响。方法从c DNA文库扩增大鼠SRF-Full及SRF-N表达序列并克隆入酶切线性化慢病毒载体GV358(Ubi-MCS-3FLAG-SV40-EGFP-IRES-puromycin),转化感受态细胞筛选出阳性克隆并测序鉴定。将SRF-Full及SRF-N过表达质粒与病毒包装辅助质粒共转染工具细胞HEK293T,包装慢病毒。磁激活细胞分选法分离乳SD大鼠c-Kit+CSC,将SRF-Full及SRF-N过表达慢病毒感染CSC并经TGF-β1诱导,定量PCR分析下游分化基因mRNA水平的变化。结果成功扩增出SRF-Full及SRF-N编码序列并正确连接入线性化载体,获得的阳性转化子经测序无误。将转化子质粒与病毒包装辅助质粒共转染HEK293T后,获得滴度为2×108TU/m L的慢病毒颗粒,Western blot检测到预期Flag融合蛋白。重组慢病毒感染CSC后细胞核中见e GFP信号。TGF-β1诱导CSC出现心肌细胞分化基因(Nkx2.5、Gata4、c Tn I)及平滑肌细胞分化基因(SM22α)的表达,内皮细胞分化(v WF)无影响,SRF-Full促进CSC的心肌细胞分化,而SRF-N则抑制这种分化。结论成功构建SRFFull及SRF-N过表达重组慢病毒质粒。SRF-Full促进而SRF-N减弱TGF-β1诱导CSC的心肌细胞分化。

关键词：血清反应因子血清反应因子N端片段质粒构建心脏干细胞细胞分化

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染料木黄酮对氨诱导的星形胶质细胞NF-κB活化的影响

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中国病理生理杂志 2017年第9期33卷 1598-1601页

作者：杨丹贾桂枝楚明会戴红良锦州医科大学附属第一医院院辽宁锦州121001 锦州医科大学基础医学院生理学教研室院辽宁锦州121001 锦州医科大学护理学院辽宁锦州121001

目的:探讨染料木黄酮对氨所致星形胶质细胞NF-κB活化的影响及其机制。方法:以氯化铵刺激原代培养的星形胶质细胞,建立高血氨模型,Western blot检测星形胶质细胞中ERK、Akt及核因子κB(NF-κB)的活化。结果:AG1478及染料木黄酮可显著抑... 详细信息

目的:探讨染料木黄酮对氨所致星形胶质细胞NF-κB活化的影响及其机制。方法:以氯化铵刺激原代培养的星形胶质细胞,建立高血氨模型,Western blot检测星形胶质细胞中ERK、Akt及核因子κB(NF-κB)的活化。结果:AG1478及染料木黄酮可显著抑制氨诱导的星形胶质细胞ERK及Akt的活化。LY294002、染料木黄酮及AG1478可显著抑制氨诱导的星形胶质细胞NF-κB核转位。结论:染料木黄酮可显著抑制氨诱导的星形胶质细胞ERK活化和Akt介导的NF-κB活化,这可能是该天然物质抑制星形胶质细胞水肿的重要机制。

关键词：染料木黄酮氨星形胶质细胞核因子κB

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基于酵母双杂交的EgSmadE表达载体构建及自激活检测

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中国病原生物学杂志 2017年第6期12卷 535-539页

作者：李静李亮张传山叶建蔚毕晓娟吕国栋林仁勇新疆医科大学基础医学院生理学教研室新疆乌鲁木齐830011 新疆医科大学第一附属医院/临床医学研究院新疆包虫病基础医学重点实验室

目的构建细粒棘球蚴SmadE(Echinococcos granulosus SmadE)基因的酵母双杂交真核表达载体,并检测其表达重组蛋白的毒性和自激活活性。方法以PCR技术获得EgSmadE基因片段,并克隆至酵母双杂交载体pGADT7及pGBKT7。应用PEG/LiAc法将重组载... 详细信息

目的构建细粒棘球蚴SmadE(Echinococcos granulosus SmadE)基因的酵母双杂交真核表达载体,并检测其表达重组蛋白的毒性和自激活活性。方法以PCR技术获得EgSmadE基因片段,并克隆至酵母双杂交载体pGADT7及pGBKT7。应用PEG/LiAc法将重组载体导入Y2HGold酵母感受态细胞,利用固体培养基表型筛选对其毒性和自激活活性进行检测。结果扩增EgSmadE基因全长1 129bp,与酵母双杂交重组载体连接后获得pGADT7-EgSmadE和pGBKT7-EgSmadE,经PCR、限制性内切酶双酶切和测序均正确;连接产物转化酵母菌后经培养基表型鉴定与对照组菌落大小一致,表明重组载体表达产物对酵母菌无毒性;SD/-Trp和SD/-Leu培养基均有白色菌落生长,而SD/-Leu/X/A和SD/-Trp/X/A无菌落生长,表明重组载体表达产物对下游报告基因无自激活活性。结论成功构建酵母双杂交载体pGADT7-EgSmadE及pGBKT7-EgSmadE,可用于鉴定EgSmadE蛋白质,为宿主与棘球蚴相互作用的分子机制研究奠定基础。

关键词：细粒棘球蚴 EgSmadE 酵母双杂交自激活毒性检测

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Apelin-17对脑缺血性脑卒中后侧支循环的作用

Apelin-17对脑缺血性脑卒中后侧支循环的作用

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第十八届全国神经精神药理学学术会议

作者：姜婉胡伟叶立田仰华赵韧杜鹃沈兵汪凯安徽医科大学第一附属医院神经内科安徽合肥230000 安徽省立医院神经内科安徽合肥230000 安徽医科大学第一附属医院心内科安徽合肥230000 安徽医科大学基础医学院生理学教研室安徽合肥230000

目的通过研究血浆中apelin-17水平和侧支循环之间关联的影响，并使用血管张力检测apelin-17对脑动脉收缩和动物模型中其对缺血性脑卒中的作用，探讨apelin-17在脑缺血再灌注损伤中的作用及相关机制。

关键词：脑卒中 apelin-17 一氧化氮血管张力

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Rock2和Wnt11在食管癌细胞系中的表达及意义

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医学研究生学报 2017年第1期30卷 10-13页

作者：宁超马遇庆杜靖新疆医科大学基础医学院生理学教研室乌鲁木齐理学硕士研究生830011 新疆医科大学第一附属医院病理科乌鲁木齐830054

目的早期食管癌临床症状常不明显,肿瘤标志物的深入研究对食管癌早期诊断极为重要。文中通过研究体外特定细胞株[Eca-109及人食管正常上皮细胞(HEEC)]中Rock2和Wnt11蛋白表达量,分析各蛋白的表达与食管癌的关系。方法培养Eca-109和HEEC... 详细信息

目的早期食管癌临床症状常不明显,肿瘤标志物的深入研究对食管癌早期诊断极为重要。文中通过研究体外特定细胞株[Eca-109及人食管正常上皮细胞(HEEC)]中Rock2和Wnt11蛋白表达量,分析各蛋白的表达与食管癌的关系。方法培养Eca-109和HEEC细胞株,RT-q PCR和Western blot技术检测Rock2和Wnt11在细胞株中的表达水平。结果RT-q PCR检测结果显示,与HEEC相比,Eca-109中Rock2 mRNA、Wnt11 mRNA表达水平明显升高[(1.000±0.000)vs(4.955±0.539),(1.000±0.000)vs(2.925±0.230),P<0.01]。Western blot检测显示Rock2和Wnt11蛋白在Eca-109中的表达较HEEC均升高[(955.000±21.628)vs(778.844±102.193),(2 175.316±145.623)vs(1 312.233±50.734),P<0.05]。结论 Rock2和Wnt11表达增高可能是食管鳞状细胞癌转移的标志。

关键词：食管癌细胞 Rock2 Wnt11

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fMRI技术在探索原发性三叉神经痛患者静息态下脑功能变化的研究

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安徽医科大学学报 2017年第7期52卷 1029-1032页

作者：崔曼曼王霁蕾肖芳莉吴川任少毓丁思勰曹志慧宋阳王海宝王烈成王元银安徽医科大学口腔医学院合肥230032 安徽医科大学第一附属医院疼痛科合肥230022 安徽医科大学第一附属医院放射科合肥230022 安徽医科大学基础医学院生理学教研室合肥230032

目的利用功能性核磁共振成像(f MRI)技术评估三叉神经痛患者处于静息状态下大脑自发性功能活动变化。方法选择原发性三叉神经痛(ITN)患者组26例,健康对照组22例,受试者静息态下进行功能性核磁共振扫描。利用DPARSF软件对图像进行处理,... 详细信息

目的利用功能性核磁共振成像(f MRI)技术评估三叉神经痛患者处于静息状态下大脑自发性功能活动变化。方法选择原发性三叉神经痛(ITN)患者组26例,健康对照组22例,受试者静息态下进行功能性核磁共振扫描。利用DPARSF软件对图像进行处理,得到两组人员的全脑平均低频振幅率(mf ALFF)值。使用SPM12和SPSS 17.0软件分析数据。结果两组受试人员在年龄、受教育程度和男女比例上差异无统计学意义;ITN患者组部分脑区mf ALFF值明显高于健康对照组,分别是:左侧枕中回(BA18)、枕下回(BA19)、三角部额下回(BA47)、梭状回(BA37)、小脑脚1区、距状裂周围皮层、中央旁回,右侧背外侧额上回(BA8),差异有统计学意义(P<0.01)。结论 ITN患者多个相关脑区的mf ALFF值增高,提示患者在静息状态下,部分脑区的活动改变可能与疼痛的调节或感觉的整合有关。

关键词：原发性三叉神经痛静息态功能性核磁共振脑功能

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TLR4/NLRP3炎症复合体介导对比剂诱导的肾小管上皮细胞炎症和损伤

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中国病理生理杂志 2017年第12期33卷 2252-2258页

作者：林燕林佳琼谢楚莉管小凤谭学贤黄泽娜广州医科大学附属第三医院肾内科广东广州510150 广州医科大学附属第三医院病理科广东广州510150 南方医科大学基础医学院医学遗传学教研室广东广州510515 中山大学中山医学院生理学教研室广东广州510080 中山大学孙逸仙纪念医院超声科广东广州510120 广东省人民医院急危重症医学部广东省医学科学院广东广州510080

目的:探讨Toll样受体4(TLR4)/Nod样受体蛋白3(NLRP3)炎症复合体是否介导了对比剂(CM)引起的肾小管上皮细胞炎症和损伤。方法:本研究运用碘普罗胺作用于大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E建立损伤模型。应用CCK-8法测定细胞存活率;Western blot... 详细信息

目的:探讨Toll样受体4(TLR4)/Nod样受体蛋白3(NLRP3)炎症复合体是否介导了对比剂(CM)引起的肾小管上皮细胞炎症和损伤。方法:本研究运用碘普罗胺作用于大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E建立损伤模型。应用CCK-8法测定细胞存活率;Western blot测定TLR4、NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、caspase-1和cleaved caspase-3的蛋白水平;ELISA法检测炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)和IL-18的水平;Hoechst 33258核染色法检测凋亡率;JC-1染色法测定线粒体膜电位。用小干扰RNA沉默NLRP3表达。结果:CM可降低NRK-52E细胞的存活率并上调cleaved caspase-3的蛋白水平(P<0.05);此外,CM可上调细胞TLR4/NLRP3炎症复合体的表达并促进炎症因子IL-1β和IL-18的分泌(P<0.05)。沉默NLRP3可以对抗CM诱导的炎症因子分泌;TLR4抑制剂TAK-242及沉默NLRP3能减轻CM引起的细胞凋亡和线粒体功能损伤。结论:TLR4/NLRP3炎症复合体参与了CM致急性肾损伤的发病机制,并介导了CM诱导的肾小管上皮细胞损伤和炎症。

关键词：对比剂肾损伤炎症 Toll样受体4 Nod样受体蛋白3炎症复合体

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