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高压氧通过p38丝裂原激活蛋白激酶信号通路调节大鼠脑claudin-3蛋白的表达及血脑屏障的通透性

中华航海医学与高气压医学杂志 2011年第5期18卷 292-295页

作者：张倩茹赵红卢晓梅张海鹏陈学新中国医科大学基础医学院机能实验中心沈阳110001 中国医科大学基础医学院病理生理教研室沈阳110001 中国医科大学附属第一临床医院高压氧科

目的探讨高压氧（hyperbaric oxygen，HBO）通过p38丝裂原激活蛋白激酶（p38MAPK）信号通路调节大鼠脑缺血再灌注紧密连接蛋白claudin-3的表达及血脑屏障的通透性。方法240只雄性Wistar大鼠，按数字表法随机分成5组：假手术（sham）组... 详细信息

目的探讨高压氧（hyperbaric oxygen，HBO）通过p38丝裂原激活蛋白激酶（p38MAPK）信号通路调节大鼠脑缺血再灌注紧密连接蛋白claudin-3的表达及血脑屏障的通透性。方法240只雄性Wistar大鼠，按数字表法随机分成5组：假手术（sham）组、脑缺血再灌注（ischemia repeffusion，IR）组、脑缺血再灌注＋HBO（IR＋HBO）组、脑缺血再灌注＋SB203580（IR＋SB203580）组、HBO＋脑缺血再灌注＋SB203580（IR＋HBO＋SB203580）组，每组48只。复制局灶性脑缺血再灌注模型，IR＋SB203580组和IR＋HBO＋SB203580组于脑缺血再灌注前30min经侧脑室注射100μl p38 MAPK信号传导通路抑制剂SB203580，IR＋HBO组与IR＋HBO＋SB203580组于再灌注期间行0．25MPaHBO治疗5次，在处死动物前1h经尾静脉注射2％伊文思蓝（Evans blue，EB），采用EB法检测缺血再灌注后血脑屏障通透性的变化。分别应用免疫组织化学的方法和Western blot法观察缺血再灌注72h后脑组织中claudin-3蛋白的分布及表达水平的变化。结果与sham组相比，其他4组再灌注后72hclaudin-3蛋白表达显著降低，差异有统计学意义（P〈0．01），同时伴有脑组织EB的含量显著增高，差异有统计学意义（P〈0．01）。IR＋HBO组（平均面密度值：0．330±0．12）和IR＋SB203580组（平均面密度值0．190±0．011）与IR组（平均面密度值：0．120±0．08）比较脑组织elaudin-3蛋白表达水平明显增加，脑组织EB的含量显著降低；与IR＋HBO组相比IR＋HBO＋SB203580组（平均面密度值：0．240±0．011）脑组织中claudin-3蛋白表达明显减少；脑组织EB的含量明显增加，差异均有统计学意义（P〈0．01，P〈0．05）。IR＋HBO＋SB203580组与IR＋SB203580组比较claudin-3含量明显增加，EB的含量明显减少，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论HBO从蛋白水平可明显增加脑缺血再灌注脑组织中紧密连接相关蛋白claudin一3的表达，从而降低血脑屏障通透性。p38MAPK信号传导通路可能是其发挥作用的机制之一。

关键词：高压氧血脑屏障脑缺血再灌注 Claudin-3 SB203580

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siRNA干扰HIF-1α表达对高糖高胰岛素诱导的肥大心肌细胞的影响

siRNA干扰HIF-1α表达对高糖高胰岛素诱导的肥大心肌细胞的影响

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第17届世界灾难及急救医学学术会议暨第14次全国急诊医学学术年会

作者：吴伟于艳秋中国医科大学附属第一医院急诊科中国医科大学基础医学院病理生理学教研室

目的研究胰岛素受体底物1(insul in receptorsubstrate 1,IRS1)和缺氧诱导因子1a(hypoxiainducible factor 1a,HIF-1a)在高糖高胰岛素诱导的肥大心肌细胞中的表达及其之间的关系;观察siRNA沉默HIF-1a基因对高糖高胰岛素诱导的心肌细胞... 详细信息

目的研究胰岛素受体底物1(insul in receptorsubstrate 1,IRS1)和缺氧诱导因子1a(hypoxiainducible factor 1a,HIF-1a)在高糖高胰岛素诱导的肥大心肌细胞中的表达及其之间的关系;观察siRNA沉默HIF-1a基因对高糖高胰岛素诱导的心肌细胞肥大的影响。方法新生大鼠心肌细胞培养48h后,换用无血清DMEM培养液并分别加入高糖高胰岛素、高糖高胰岛素+HIF-1a-siRNA培养48h,未加入任何药物的心肌细胞在无血清DMEM培养液中继续培养48h作为对照。通过心肌细胞表面积、总蛋白含量指标检测心肌细胞肥大,并利用Real timePCR检测转染前后HIF-1a mRNA表达变化及免疫细胞化学方法检测HIF-1a及IRS1蛋白水平的表达。结果高糖高胰岛素可增加心肌细胞表面积、总蛋白含量、HIF-1a mRNA以及HIF-1a表达,并降低IRS1表达。转染siRNA后使HIF-1a基因的表达下降,能部分抑制心肌细胞的肥大,降低心肌细胞表面积和总蛋白含量,但对IRS1表达的影响不明显。在对正常对照组和高糖高胰岛素组中IRS1表达量与HIF-1a表达量进行相关分析表明,两者的表达量成负相关。结论靶向HIF-1a的siRNA技术通过对HIF-1a有效沉默可明显地抑制高糖高胰岛素诱导大鼠乳鼠心肌细胞肥大,并且这种作用可能是通过作用于IRS1/PI3K/Akt/MTOR途径来实现的。

关键词：高糖高胰岛素 HIF-1 肥大心肌细胞 siRNA

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电刺激大脑岛叶对大鼠心率变异的影响

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解剖科学进展 2011年第4期17卷 381-384页

作者：李亘松孙娇李森邓欣王洋中国医科大学基础医学院生理学教研室辽宁沈阳110001 中国医科大学基础医学院机能实验中心辽宁沈阳110001 中国医科大学附属第一临床医院神经内科辽宁沈阳110001

目的研究电刺激大脑岛叶对大鼠心率变异(Heart Rate Variability,HRV)的影响。方法检测麻醉状态下大鼠的心电图(ECG),将动物分成未处理组、假手术组、500以及1000μA点刺激组,对各组大鼠进行ECG数据的采集,对各组大鼠心率变异的频域指... 详细信息

目的研究电刺激大脑岛叶对大鼠心率变异(Heart Rate Variability,HRV)的影响。方法检测麻醉状态下大鼠的心电图(ECG),将动物分成未处理组、假手术组、500以及1000μA点刺激组,对各组大鼠进行ECG数据的采集,对各组大鼠心率变异的频域指标进行分析。结果 HRV各参数值发生变化,表现为心动周期的标准差(standard deviation of R-R intervals,SDNN)和相邻正常心动周期差值的均方根(the root mean square successive differences in milliseconds,RMSSD)下降,而LF/HF(Low frequency/high frequency,低频/高频)升高,与假手术对照组之间比较,差异有显著意义,且1000μA电刺激比500μA时HRV参数下降幅度更大。结论 LF/HF的明显升高提示电刺激大脑岛叶使交感和迷走神经功能失调而发生HRV改变。

关键词：心率变异(HRV) 岛叶电刺激大鼠

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高压氧对局灶性脑缺血再灌注大鼠紧密连接蛋白及血脑屏障通透性的影响

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中华航海医学与高气压医学杂志 2011年第2期18卷 89-92页

作者：赵红张倩茹卢晓梅张海鹏陈学新中国医科大学基础医学院机能实验中心沈阳110001 中国医科大学病理生理教研室沈阳110001 中国医科大学附属第一临床医院高压氧科

目的探讨高压氧（HBO）对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织中紧密连接蛋白occludin、ZO-1蛋白表达及血脑屏障通透性的影响。方法雄性Wistar大鼠，随机分成假手术组、脑缺血再灌注组、HBO＋脑缺血再灌注组、HBO组。复制局灶性脑缺血再灌注... 详细信息

目的探讨高压氧（HBO）对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织中紧密连接蛋白occludin、ZO-1蛋白表达及血脑屏障通透性的影响。方法雄性Wistar大鼠，随机分成假手术组、脑缺血再灌注组、HBO＋脑缺血再灌注组、HBO组。复制局灶性脑缺血再灌注模型，并于再灌注期间行0．25MPaHBO治疗5次，在处死动物前1h经尾静脉注射2％伊文思蓝（Evansblue，EB），采用EB法检测缺血再灌注后血脑屏障通透性的变化。应用免疫组织化学的方法观察缺血再灌注后脑组织中occludin蛋白的分布，再采用WesternBlot法检测再灌注72h后脑组织中occludin、ZO-1蛋白表达水平的变化。结果脑缺血再灌注组较假手术组脑组织EB含量显著增高（P〈0．01），其中EB的渗出以4h最为明显（1．14±0．07）U／mg。HBO＋脑缺血再灌注组较脑缺血再灌注组脑组织中EB含量显著降低（P〈0．01），HBO组与假手术组相比脑组织中EB含量变化不明显（P〉0．05）。Occludin蛋白的表达0h时相比于再灌注后4、12、24、48、72h时显著降低（P〈0．01）。现灌注72h时，HBO＋脑缺血再灌注组较脑缺血再灌注组脑组织中occludin、ZO-1蛋白表达水平于再灌注72h明显增加（P〈0．01）；HBO组与假手术组相比脑组织中occludin、ZO-1蛋白表达变化不显著（P〉0．05）。结论HBO可明显增加脑缺血再灌注脑组织中紧密连接相关蛋白occludin、ZO-1的表达，从而降低血脑屏障通透性。

关键词：高压氧血脑屏障脑缺血再灌注 occludin ZO-1 大鼠

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母婴分离对大鼠发育过程中自发活动的影响

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中国实用医药 2011年第22期6卷 231-232页

作者：张建龙秦丽娜秦马丽赵虎新疆医科大学基础医学院生理教研室乌鲁木齐830054 新疆医科大学基础医学院病理教研室乌鲁木齐830054 广东省湛江市霞山区广东医学院第一附属医院胃肠外科广东省广州市越秀区中山大学北校区中山医学院法医学系

目的研究母婴分离对子代大鼠发育过程中自发活动的影响。方法将新生大鼠随机分为母婴分离组和正常对照组。分别在22日龄、60日龄及90日龄进行开场试验,观察其自发活动。结果 22日龄母婴分离组大鼠自发活动总路程和周边路程较对照组显著... 详细信息

目的研究母婴分离对子代大鼠发育过程中自发活动的影响。方法将新生大鼠随机分为母婴分离组和正常对照组。分别在22日龄、60日龄及90日龄进行开场试验,观察其自发活动。结果 22日龄母婴分离组大鼠自发活动总路程和周边路程较对照组显著增多(P<0.05);60日龄母婴分离组大鼠自发活动中央路程明显减少(P<0.05);90日龄母婴分离组大鼠自发活动总路程、周边路程、中央时间和周边时间均差异有统计学意义(P<0.05)。结论生命早期应激(母婴分离)导致大鼠行为学发育受到一定的影响,动物表现为焦虑和抑郁样行为。

关键词：母婴分离开场实验生命早期应激

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不同胎龄人脐带血间充质干细胞研究

不同胎龄人脐带血间充质干细胞研究

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“细胞活动生命活力”——中国细胞生物学学会全体会员代表大会暨第十二次学术大会

作者：马兰兰施萍庞希宁中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室干细胞与再生医学研究室中国医科大学基础医学院生理教研室中国医科大学附属第一医院全科医学教研室

目的:比较不同胎龄脐带血中MSCs数量和生长特性的差别,分析脐带血成功培养山MSCs的影响因素,探讨脐带血MSCs生物学特性。方法:应用单管多色荧光技术分析了不同胎龄脐带血中CD44、CD105阳性而CD34、CD45阴性细胞的数量,并提取脐带血中单... 详细信息

目的:比较不同胎龄脐带血中MSCs数量和生长特性的差别,分析脐带血成功培养山MSCs的影响因素,探讨脐带血MSCs生物学特性。方法:应用单管多色荧光技术分析了不同胎龄脐带血中CD44、CD105阳性而CD34、CD45阴性细胞的数量,并提取脐带血中单个核细胞进行培养和培养后免疫荧光染色。结果:52例脐带血中CD44(+)、CD105(+)/CD34(-)、CD45(-)细胞在10例28周～30周脐带血中的数量为15±0.2个/百万有核细胞;在12例31周～33周脐带血中为11±0.3个/百万有核细胞;在10例34周～36周脐带血中为10±0.1个/百万有核细胞;在10例37周～39周脐带血中为6±0.5个/百万有核细胞;在10例40周～42周脐带血中,为2±0.3个/百万有核细胞。37周～40周脐带血12份,28周～36周脐带血12例培养分别有1份和3份出现旋涡状排列的间充质样的细胞且免疫荧光染色呈CD45(-)和CD90(+)。结论:脐血中含有MSCs,随胎龄增加数量减少:胎龄小脐带血MSCs接种成功率高于胎龄大脐带血的接种成功率。

关键词：脐带血间充质干细胞流式细胞术

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血管紧张素Ⅱ对大鼠心率和心率变异的影响

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解剖科学进展 2011年第4期17卷 364-367页

作者：李亘松邓欣罗丹章小芳李森王洋中国医科大学基础医学院生理学教研室辽宁沈阳110001 中国医科大学机能实验中心辽宁沈阳110001 中国医科大学计算机教研室辽宁沈阳110001 中国医科大学附属第一临床医院神经内科辽宁沈阳110001

目的研究血管紧张Ⅱ(AngⅡ)对大鼠心率以及变异(HRV)的影响及其机制。方法大鼠股静脉注射5%葡萄糖然后输注AngⅡ作为实验组,股静脉注射AT1受体(Angiotensin Ⅱ receptorⅠ)阻断剂氯沙坦(Losartan,LOS)然后输注AngⅡ作为对照组。对各组... 详细信息

目的研究血管紧张Ⅱ(AngⅡ)对大鼠心率以及变异(HRV)的影响及其机制。方法大鼠股静脉注射5%葡萄糖然后输注AngⅡ作为实验组,股静脉注射AT1受体(Angiotensin Ⅱ receptorⅠ)阻断剂氯沙坦(Losartan,LOS)然后输注AngⅡ作为对照组。对各组大鼠进行心电图(ECG)和BP(血压)数据的采集,对各组大鼠HRV的频域指标进行分析。结果与实验组相比,对照组频域指标低频(LF)和LF/HF明显降低而高频(HF)明显升高(P<0.05),而心率(HR)没有显著变化(P>0.05)。结论 AngⅡ对大鼠的HRV作用是通过AT1受体实现的。

关键词：心率变异(HRV) 血管紧张素Ⅱ AT1受体大鼠

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面肩肱型肌营养不良实时荧光定量PCR诊断方法的影响因素分析

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军医进修学院学报 2011年第7期32卷 748-751页

作者：苏全喜李婉仪张成熊符洪铭范刘爱群田素娟广东药学院附属第一医院神经内科广州510080 东莞市人民医院神经内科东莞523018 中山大学附属第一医院神经科广州510080 南方医科大学基础医学院医学遗传学教研室广州510515 广东药学院生命科学与生物制药学院广州510006

目的分析探讨面肩肱型肌营养不良(FSHD)实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)诊断方法的影响因素。方法通过改变镁离子终浓度、PCR扩增中退火温度、退火时间或延伸时间、RNase H酶用量和活性等,确定FQ-PCR诊断FSHD的最佳反应条件。结果退... 详细信息

目的分析探讨面肩肱型肌营养不良(FSHD)实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)诊断方法的影响因素。方法通过改变镁离子终浓度、PCR扩增中退火温度、退火时间或延伸时间、RNase H酶用量和活性等,确定FQ-PCR诊断FSHD的最佳反应条件。结果退火温度55℃、时间20s、镁离子终浓度5.0mM、RNase H酶用量100U、RNase H酶在95℃下灭活8min为最佳反应条件,其中RNase H的活性选择对FSHD诊断的特异性影响较大。结论通过降低RNase H酶的活性可提高诊断的特异性,最终确立了FSHD的FQ-PCR基因诊断最佳反应条件。

关键词：肌营养不良面肩肱型实时荧光定量PCR RNase H酶活性

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Paxillin在高、低转移潜能乳腺癌中的表达及意义

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四川大学学报（医学版） 2010年第1期41卷 91-94页

作者：蔡辉张涛汤为学李少林重庆医科大学基础医学院放射医学教研室重庆400016 重庆医科大学附属第一医院肿瘤科重庆400016 重庆医科大学基础医学院病理生理学教研室重庆400016

目的研究paxillin在人高、低转移潜能乳腺癌细胞亚系中的表达以及对肿瘤转移、黏附的影响。方法以乳腺癌细胞系MDA-MB-435S为研究对象,利用细胞穿透人工基底膜能力的差异筛选出高、低转移潜能的乳腺癌细胞系,利用免疫组化、免疫印迹(Wes... 详细信息

目的研究paxillin在人高、低转移潜能乳腺癌细胞亚系中的表达以及对肿瘤转移、黏附的影响。方法以乳腺癌细胞系MDA-MB-435S为研究对象,利用细胞穿透人工基底膜能力的差异筛选出高、低转移潜能的乳腺癌细胞系,利用免疫组化、免疫印迹(Western blot)、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测paxillin在高、低转移潜能乳腺癌细胞中的表达。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞黏附率。结果免疫组化、Western blot、RT-PCR检测显示在高转移潜能乳腺癌细胞中paxillin在基因和蛋白水平的表达均高于低转移潜能乳腺癌细胞,差异具有统计学意义(P均<0.01)。MTT法检测高转移潜能乳腺癌细胞的黏附率高于低转移潜能乳腺癌细胞,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论Paxillin在人乳腺癌转移和黏附过程中发挥重要作用,可能成为抑制肿瘤增殖和转移的关键性分子。

关键词：乳腺癌 Paxillin 肿瘤转移

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PI3K催化亚基p110α小干扰RNA对小鼠受精卵发育的影响

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生殖与避孕 2010年第9期30卷 577-581,587页

作者：徐小燕于艳秋张哲宿文辉于秉治中国医科大学基础医学院病理生理学教研室沈阳110001 中国医科大学附属第一医院泌尿科沈阳110001 中国医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室沈阳110001

目的:利用特异性小发夹RNA(shRNA)表达质粒,研究IA型磷脂酰肌醇3-激酶(PI3Ks)催化亚基p110α对小鼠受精卵发育的影响。方法:把p110αshRNA表达质粒显微注射到受精卵中。确定能干扰p110α表达的shRNA的最适浓度。通过检测RNA干扰后的p110... 详细信息

目的:利用特异性小发夹RNA(shRNA)表达质粒,研究IA型磷脂酰肌醇3-激酶(PI3Ks)催化亚基p110α对小鼠受精卵发育的影响。方法:把p110αshRNA表达质粒显微注射到受精卵中。确定能干扰p110α表达的shRNA的最适浓度。通过检测RNA干扰后的p110αmRNA水平和蛋白表达情况,证明干扰是否成功。在确定成功干扰p110α后,观察受精卵的形态变化、分裂率以及对MPF活性的影响。结果:p110α表达受到干扰后,MPF的活性明显降低,受精卵第一次有丝分裂受到干扰,卵裂率明显降低。结论:p110α可能通过影响MPF的活性,调控小鼠受精卵的早期发育,为进一步探讨PI3K信号转导通路在小鼠胚胎中的作用奠定了基础。

关键词： p110α shRNA MPF 小鼠受精卵

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