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2013年（第三届）中国药物毒理学年会暨药物非临床安全性评价研究论坛

作者：杨威广州医药研究总院药物非临床评价研究中心国家广州新药安全评价研究重点实验室

我国目前鼓励儿科药物研发,但目前国内还没有统一的儿科药物安全性评价技术指导原则(主要还是参照FDA的儿科药物评价技术指导原则),系统的儿科药物安全性评价技术体系还缺乏,笔者根据团队从事儿科医生、药物安全性评价研究、幼龄动物安... 详细信息

我国目前鼓励儿科药物研发,但目前国内还没有统一的儿科药物安全性评价技术指导原则(主要还是参照FDA的儿科药物评价技术指导原则),系统的儿科药物安全性评价技术体系还缺乏,笔者根据团队从事儿科医生、药物安全性评价研究、幼龄动物安全性评价研究经验以及大鼠、犬、猴发繁育的研究经验,对儿科药物安全性评价思路进行如下探讨。第一,正确树立儿科药物临床前安全性评价的理念。研究人员要认识到儿童是一个不断发育生长,并在不同阶段具有不同特点的完整个体,绝不能简单的考虑为成人的缩影,因此,评价儿科药物安全性,重点在于评价药物对儿童发育指标的影响,其次是对儿童不同发育阶段的血液、生化、免疫系统、组织器官等的影响。所以在进行儿科药物临床前安全性评价研究设计时,首先要充分了解所选择实验动物的生长发育特点的背景数据、生理变化的阶段节点,结合药物情况以一些重要节点作为不同发育阶段的观察终点,进行相应阶段系统的安全性评价,根据药物对不同发育阶段的影响和相关发育阶段观察终点的毒性反应进行纵横分析,合理评价和推测药物对儿童的安全性影响。第二,儿科药物临床前安全性评价动物模型的选择,简单讲就是幼龄动物的选择。大鼠从出生到成年仅仅需要约100 d,考察药物对整个儿童发育阶段的影响选择大鼠进行临床前评价即节省经费,实验时间短、又能达到考查对大鼠整个幼龄阶段影响目的。由于大鼠的生理发育与变化阶段太快,很难评估和推测药物对某一特定阶段儿童的影响,如果要评价药物对某一特定年龄阶段的儿童的影响,选择大鼠将会由于给药次数太少达不到评价效果,如果选择幼龄犬、幼龄猴进行特定年龄阶段的儿科药物安全性评价,将更有利于达到评价效果。儿童在不同的发育阶段对药物的敏感性不同(也跟药物的具体特点有关),因此对特定年龄阶段的儿科药物进行特定阶段的安全性评价非常重要,对于慢性疾病药物或者用药时间超过2周的儿科药物,建议选者特定阶段发育时间长的动物,以使药物获得充分的暴露时间,根据这一特点,对于慢性疾病药物或者用药时间超过2周的某一特定阶段的儿科药物(特别是学龄前儿科药物),可能幼龄猴才是适宜的评价动物。另外,不同年龄阶段的儿童对药物的代谢情况可能会产生差异,因此,建议儿科药物的安全性评价最好伴随毒代动力学研究,以获得更多评价药物的依据。第三,儿科药物评价动物种类的选择。为了更好的评价儿科药物,建议选择幼龄大鼠或犬进行整个发育阶段的安全性评价,评价药物对整个发育阶段的影响以及对动物成年后的影响,利于系统评估药物对儿童群体的影响;同时选择幼龄犬或幼龄猴对重点特定儿童用药阶段的临床前安全性进行评价研究,评价药物的儿童用药阶段的影响。对于整个儿童阶段都适用的儿科新药或用药周期大于4周或反复使用的儿科新药,则建议选择幼龄犬或幼龄猴进行进行整个发育阶段的安全性评价,以使每个发育阶段获得充分的暴露时间,获得更多的安全性评价信息。总之,儿科药物的临床前安全性评价思维模式、方法与成人药物的安全性评价模式有很大的差异,儿科药物临床前安全性评价技术体系研究是一项系统工程,要从实验动物生长发育、生理发育、行为学发育、器官组织发育等发育特点综合考虑,需要了解儿科用药的知识,掌握实验动物繁育的知识、发育特点的知识、药物安全性评价的知识等才有可能做好儿科药物临床前安全性评价研究工作。

关键词：儿科药物安全评价

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注射用hUCMSCs对食蟹猴静脉给药急性毒性试验

注射用hUCMSCs对食蟹猴静脉给药急性毒性试验

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2013年（第三届）中国药物毒理学年会暨药物非临床安全性评价研究论坛

作者：黄远铿黄宁周泉张红杨威广州医药研究总院药物非临床评价研究中心国家广州新药安全评价研究重点实验室

目的注射用hUCMSCs属于细胞类生物制品,本研究旨在观察单次静脉给予注射用hUCMSCs后,对食蟹猴可能产生的急性毒性反应及其严重程度,并对注射用hUCMSCsP2和P4代的受试物进行比较,为其他安全性评价实验和临床用药提供基础数据。方法本试... 详细信息

目的注射用hUCMSCs属于细胞类生物制品,本研究旨在观察单次静脉给予注射用hUCMSCs后,对食蟹猴可能产生的急性毒性反应及其严重程度,并对注射用hUCMSCsP2和P4代的受试物进行比较,为其他安全性评价实验和临床用药提供基础数据。方法本试验选用检疫合格并经过适应性饲养的食蟹猴,按体重和性别均衡随机分为3组,分别为溶媒对照组（A组）、P2给药组（B组）和P4给药组（C组）,A组2只动物,B、C组均为4只动物,雌雄各半。溶媒对照组给予专用细胞保存液,P2给药组和P4给药组分别以1 * 10～8个/***剂量（按等效体表面积折算法折算约相当于成人临床拟用量5×10～7个/人的50倍）给予P2,P4代注射用hUCMSCs,按给药顺序对动物进行静脉滴注给药。试验期间,观察动物外观体征、行为活动、腺体分泌、呼吸、排泄物性状、饮食情况、中毒反应和死亡情况并按要求进行下述指标监测:体重、心电监测、血液学和凝血功能、血液生化学、尿常规、眼科检查、病理学检查。结果（1）一般状态观察结果表明:P2给药组发现有4/4例动物在给药部位和/或采血部位出现紫色斑块,P4给药组发现有3/4例动物在给药部位和/或采血部位出现紫色斑块,后逐渐变小变淡,在给药第6天或第7天恢复;结合血液学结果发现,P2,P4给药组动物在给药后给药后2 h、第2天出现血小板数（PLT）、血小板压积（PCT%）、纤维蛋白原（Fbg）下降,凝血酶原时间（PT）、部分凝血激酶时间（APTT）、凝血酶时间（TT）延长的现象,因此推断为P2、P4给药组动物凝血功能受到一过性抑制,血液从给药部位以及采血部分血管穿刺口漏出,使得皮下产生紫色血斑。除发现上述现象外,未见动物死亡,未见其它异常反应。（2）体重结果表明:专用细胞保存液、P2、P4代注射用hUCMSCs单次给药对食蟹猴体重未见明显影响。（3）食蟹猴肛温结果表明:专用细胞保存液、P2、P4代注射用hUCMSCs单次给药对食蟹猴肛温未见明显影响。（4）血液学及凝血功能指标结果表明:专用细胞保存液、P2、P4代注射用hUCMSCs对食蟹猴单次给药可起受试动物白细胞数（WBC）、中性粒细胞数（NEUT）、中性粒细胞比率（NEUT%）一过性升高,白细胞升高主要由中性粒细胞数升高引起,由于溶媒对照组也具有上述变化,不排除与给药过程或溶媒相关。P2,P4代注射用hUCMSCs对食蟹猴单次给药可起受试动物血小板数（PLT）、血小板压积（PCT%）、纤维蛋白原（Fbg）一过性下降,凝血酶原时间（PT）、部分凝血激酶时间（APTT）、凝血酶时间（TT）一过性延长,即对受试动物凝血功能产生一过性抑制作用,而在一般状态观察结果中,P2,P4给药组分别有4/4,3/4例动物于给药后第2天开始观察到给药部位、采血部位有皮下出血产生的紫斑,推断为给药后动物凝血功能受到抑制,血液从给药部位以及采血部分血管穿刺口漏出,使得皮下产生血斑。专用细胞保存液、P2、P4代注射用hUCMSCs对食蟹猴单次给药可引起受试动物红细胞数（RBC）、血红蛋白量（HGB）、红细胞压积（HCT%）均比给药前轻微下降,且在长期毒性试验研究中也发现有RBC、H4GB和HCT降低的类似现象,由于溶媒对照组也具有上述变化,不排除与给药过程或溶媒相关,建议对具体产生原因作进一步研究探索。（5）血液生化学结果表明:专用细胞保存液、P2、P4代注射用hUCMSCs对食蟹猴单次给药可引起受试动物天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、肌酸磷酸激酶（CK）、钠（Na）、氯（Cl）指标一过性升高,血清磷（P）一过性降低;其中钠（Na）、氯（Cl）指标一过性升高可能与专用细胞保存液的成分相关,其它指标一过性升高或减低的产生原因不明,建议作进一步探索。P2,P4代注射用hUCMSCs对食蟹猴单次给药可起受试动物乳酸脱氢酶（LDH）、总胆红素（TBIL）指标一过性升高,升高原因不明,其中在长期毒性试验研究中也发现给药组有总胆红素（TBIL）升高的现象,产生原因不明,建议作进一步研究探索。（6）心电图检查结果表明:专用细胞保存液、P2、P4代注射用hUCMSCs单次给药对食蟹猴心电图检查指标未见明显影响。（7）尿常规结果表明:专用细胞保存液、P2、P4代注射用hUCMSCs单次给药对食蟹猴尿常规指标未见明显影响。（8）眼科检查结果表明:专用细胞保存液、P2、P4代注射用hUCMSCs单次给药对食蟹猴眼科检查指标未见明显影响。（9）病理学（系统解剖）检查结果表明:专用细胞保存液、P2、P4代注射用hUCMSCs单次对食蟹猴进行给药,于给药第15天进行系统解剖,系统解剖观察各组织脏器未见出现具有毒理学意义改变。结论 P2,P4代注射用hUCMSCs对食蟹猴单次给药对动物一般状态观察、血液学及凝血功能指标、生化学产生的影

关键词： hUCMSC 食蟹猴急性毒性

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门冬胰岛素30注射液安全性药理伴随毒代动力学

门冬胰岛素30注射液安全性药理伴随毒代动力学

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2013年（第三届）中国药物毒理学年会暨药物非临床安全性评价研究论坛

作者：肖百全杨威黄远铿郭琳郭健敏汪玉芳广州医药研究总院药物非临床评价研究中心国家广州新药安全评价研究重点实验室

目的本研究旨在建立门冬胰岛素30注射液的安全性药理研究思路和方法,为胰岛素类药物的安全性药理评价方案的设计提供参考。方法①小鼠降糖实验,小鼠剂量设定为2.5,5和10 U·kg,按等效体表面积法折算（下同）,相当于中型糖尿病人每... 详细信息

目的本研究旨在建立门冬胰岛素30注射液的安全性药理研究思路和方法,为胰岛素类药物的安全性药理评价方案的设计提供参考。方法①小鼠降糖实验,小鼠剂量设定为2.5,5和10 U·kg,按等效体表面积法折算（下同）,相当于中型糖尿病人每日推荐胰岛素用量（35 U/人,下同）的0.5,1和2倍;同类上市对照药（诺和锐,下同）剂量设定为5和10U·kg,相当于成人日用量的1和2倍;皮下注射给药,测定各试验组小鼠给药后15 min,30 min,1 h,1.5 h,2 h,4 h,6h,12 h的血糖变化情况;②麻醉Beagle犬伴随毒代动力学实验,Beagle犬剂量设定为0.5m 1.0和2.0 U·kg,相当于临床成人拟用量的0.5,1和2倍,诺和锐剂量设定为1.0 U·kg,相当于成人日用量的1倍,选择给药后0.5,1,2,3,4,5和6 h为观察时间点,同时每个观察点采集犬血清备用,动态观察血糖、胰岛素含量（ELISA法）、血压、呼吸和心电等指标的变化;③小鼠自发活动实验,小鼠剂量设定为2.5,5和10 U·kg,诺和锐剂量设定为5和10 U·kg,观察给药后0.5,1,2,4和6 h小鼠的自发活动情况。④机体协调实验,小鼠剂量设定为2.5,5和10 U·kg,诺和锐剂量设定为5和10 U·kg,观察给药后0.5,1,2,4和6 h小鼠的机体协调情况。⑤催眠实验,小鼠剂量设定为2.5,5和10 U·kg,诺和锐剂量设定为5和10 U·kg,观察给药后1和4 h小鼠与戊巴比妥钠协同催眠的情况。结果①门冬胰岛素30注射液各剂量单次给药均能显著降低小鼠血糖,降糖起效时间为给药后15 min,4 h后血糖基本恢复正常,血糖值最低点出现在给药后1 h,血糖变化情况存在明显的时效关系和量效关系。②门冬胰岛素30注射液各剂量组和诺和锐组均能明显降低麻醉Beagle犬的血糖,具有明显的量效、时效关系,各观察时间点犬血清胰岛素变化情况与犬血糖变化情况相吻合,结合血糖和胰岛素含量的变化情况综合分析认为对Beagle犬血压、心电和呼吸均未见具有毒理学意义的改变。③门冬胰岛素30注射液高、中剂量组和诺和锐高剂量组给药后1h具有降低小鼠的自主活动次数的作用,对其他时间点的小鼠活动次数未见明显影响。④门冬胰岛素30注射液和诺和锐各剂量组对小鼠机体协调能力均未见明显影响。⑤门冬胰岛素30注射液高、中剂量组和诺和锐高剂量组给药后1h均能显著增加小鼠的睡眠动物数,但给药后4 h对小鼠的睡眠情况未见明显影响。结论本研究结果提示,胰岛素类药物在进行安全性药理研究时若缺乏药效学和药代动力学资料时,应先通过正常动物的降糖实验以确定安全性药理实验给药的剂量和给药后观察频率的设置,同时在麻醉犬实验中应伴随血清胰岛素含量的检测（或单独做单次给药药动学研究）,这样更有利于排除胰岛素降糖作用所导致的反应而发现药物存在的非药效作用引起的不良反应,利于从有效性、安全性、药动学特点控制仿制胰岛素的质量和一致性。

关键词：门冬胰岛素30注射液毒代毒力学

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新型止血材料纤维蛋白贴安全性药理研究

新型止血材料纤维蛋白贴安全性药理研究

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2013年（第三届）中国药物毒理学年会暨药物非临床安全性评价研究论坛

作者：肖百全黄远铿欧慧瑜韩重杨威广州医药研究总院药物非临床评价研究中心国家广州新药安全评价研究重点实验室

目的研究新型止血材料纤维蛋白贴的安全性药理,为新药研发提供依据。方法通过小鼠腹腔植入给药的方式自发活动实验、协调力实验和戊巴比妥钠催眠实验来考察纤维蛋白贴对中枢神经系统的影响;通过麻醉Bealge犬肝脏贴敷给药实验考察纤维蛋... 详细信息

目的研究新型止血材料纤维蛋白贴的安全性药理,为新药研发提供依据。方法通过小鼠腹腔植入给药的方式自发活动实验、协调力实验和戊巴比妥钠催眠实验来考察纤维蛋白贴对中枢神经系统的影响;通过麻醉Bealge犬肝脏贴敷给药实验考察纤维蛋白贴对呼吸系统和心血管系统的影向;通过正常大鼠和肝部份切除大鼠分别考察纤维蛋白贴对泌尿系统和凝血功能的影响。结果纤维蛋白贴剂量为1/10贴每只小鼠时对小鼠自主活动次数、机体协调能力、戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠时间均未见明显影响;在4贴每犬时对麻醉Beagle犬呼吸及心血管系统无毒理学意义的改变;在1/2贴每只大鼠剂量下,对大鼠凝血功能和泌尿系统亦无毒理学意义的改变。结论在本研究条件下,纤维蛋白贴对中枢神经系统、呼吸系统、心血管系统、泌尿系统和凝血功能均未见明显影响,安全性较好,推测其具有良好的市场应用前景。

关键词：新型止血材料纤维蛋白贴安全性

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太白贝母祛痰实验研究

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中国民族民间医药 2010年第15期19卷 82-83页

作者：梁惠婵肖百全连雪科黄远铿雷夏凌杨威广州医药工业研究院药物非临床评价研究中心国家广州新药安全评价研究重点实验室广东广州510240

目的:研究太白贝母的祛痰作用,并与暗紫贝母和梭砂贝母进行比较。方法:采用小鼠气管苯酚红排泌法考察太白贝母、暗紫贝母和梭砂贝母的祛痰作用。结果:太白贝母、暗紫贝母和梭砂贝母均能显著促进小鼠气管酚红的排泌量。太白贝母与梭砂贝... 详细信息

目的:研究太白贝母的祛痰作用,并与暗紫贝母和梭砂贝母进行比较。方法:采用小鼠气管苯酚红排泌法考察太白贝母、暗紫贝母和梭砂贝母的祛痰作用。结果:太白贝母、暗紫贝母和梭砂贝母均能显著促进小鼠气管酚红的排泌量。太白贝母与梭砂贝母促进小鼠气管酚红排泌的作用相近,但均比暗紫贝母弱。结论:太白贝母、暗紫贝母和梭砂贝母均具有良好的祛痰作用,暗紫贝母的祛痰作用最强,太白贝母与梭砂贝母祛痰作用相近,是一种值得开发利用的川贝母。

关键词：太白贝母暗紫贝母梭砂贝母酚红祛痰

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消渴丸对GK大鼠并发糖尿病心肌病的防治作用及机理研究

消渴丸对GK大鼠并发糖尿病心肌病的防治作用及机理研究

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中华中医药学会第十次中药实验药理学术会议

作者：杨威郭健敏肖百全郭秋平汪玉芳广州医药研究总院药物非临床评价研究中心国家广州新药安全评价研究重点实验室广东广州510240

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鼻腔雾化吸入CMB对大鼠鼻刺激性

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中国药理学与毒理学杂志 2013年第3期 510-510页

作者：欧慧瑜孙昊张红冯美君梁惠婵杨威广州医药研究总院药物非临床评价研究中心国家广州新药安全评价研究重点实验室

目的观察SD大鼠鼻腔接触CMB后是否产生刺激性反应,为临床用药提供依据。方法选用检疫合格且鼻腔外观无异常的大鼠40只,将动物随机均衡分成两组,即阴性对照组和受试物组,20只/组,雌雄各半。对两组动物进行超声雾化喷雾给药,给药浓度为原... 详细信息

目的观察SD大鼠鼻腔接触CMB后是否产生刺激性反应,为临床用药提供依据。方法选用检疫合格且鼻腔外观无异常的大鼠40只,将动物随机均衡分成两组,即阴性对照组和受试物组,20只/组,雌雄各半。对两组动物进行超声雾化喷雾给药,给药浓度为原液(10 g.L-1),给药体积约为4 ml,阴性对照组的各例动物给予等体积的0.9%氯化钠注射液作对照。使用超声雾化器,将大鼠固定在保定器中,将喷雾管正对大鼠鼻部,使大鼠能充分吸入。每只动物的雾化时间均为20min,1周3次,共给药4周。每次给药前及给药后30 min、末次给药后24,48,72 h和14 d观察动物口、鼻部内外的可视范围内有无红肿、流血、溃疡等现象,尤其应注意鼻部黏膜的变化情况局部反应,并按"局部黏膜刺激反应分级标准"以计分方式表示,包括水肿、充血程度及范围等,同时观察给药后30 min动物的全身状况(如呼吸、循环、中枢神经系统)及局部刺激症状(如哮喘、咳嗽、呕吐、窒息等症状)。分批将动物剖杀。称量肺重量并计算脏体系数,然后摘取动物鼻部、咽喉部、气管、支气管及肺部进行固定,并观察有无充血、水肿、溃疡等现象后,进行组织病理学检查。结果试验期间每组各例动物外观特征、行为活动、呼吸及粪便性状等均未见明显异常。受试物组和阴性对照组的各例动物在每次给药前及给药后30 min、末次给药后24,48,72 h和14 d的各个观察时间点,口、鼻部外的可视范围内均未见红肿、流血、分泌物、溃疡等现象,且各例动物鼻部黏膜的可视范围内亦未见明显异常,评分均为0分。每次给药后即刻观察的30 min内,两组各例动物全身状况(包括呼吸、循环、中枢神经系统)及局部刺激症状(包括哮喘、咳嗽、呕吐、窒息等症状),均未见明显异常变化。末次给药后24 h,14 d,肉眼观察各组动物的鼻部、咽喉部、气管、支气管及肺部均未见明显异常变化,两组间肺脏重量也未见明显差别。组织病理学结果表明阴性对照组和CMB组动物鼻甲部上皮细胞排列紧密有序,形态规则,结构正常,纤毛清晰可见,粘膜下未见血管扩张及炎症反应,周围骨组织、软骨组织结构未见改变;鼻前庭黏膜上皮细胞排列紧密,结构完整,黏膜下未见血管扩张及炎细胞浸润等变化;咽喉部黏膜上皮结构完整,周围软骨、肌层未见异常变化;气管黏膜层的假复层纤毛柱状上皮细胞排列紧密有序,黏膜下未见血管扩张及炎细胞浸润,软骨及周围结缔组织未见异常变化;肺内各级支气管结构正常,肺泡腔无扩张或缩小及未见炎细胞,间质血管未见扩张或狭窄,亦未见炎细胞浸润。结论在本研究条件下,CMB经雾化吸入给药不引起SD大鼠呼吸道刺激性病理变化。

关键词： CMB 刺激性

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使用XT-2000iV分析仪检测大鼠及狗的骨髓成分

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中国药理学与毒理学杂志 2013年第3期 520-520页

作者：张红黄远铿张俊兵郭秋平肖百全杨威广州医药研究总院药物非临床评价研究中心国家广州新药安全评价研究重点实验室

目的为提高工作效率,使骨髓细胞分类计数标准化,同时起到节约人力物力的作用,在原本以骨髓涂片,姬姆萨染色后镜下检查,分辨细胞形态、计算数量的旧方法基础上,结合XT-2000iV血液分析仪的检测原理,设计骨髓细胞分类计数的新方法。方法分... 详细信息

目的为提高工作效率,使骨髓细胞分类计数标准化,同时起到节约人力物力的作用,在原本以骨髓涂片,姬姆萨染色后镜下检查,分辨细胞形态、计算数量的旧方法基础上,结合XT-2000iV血液分析仪的检测原理,设计骨髓细胞分类计数的新方法。方法分别制备SD大鼠和Beagle犬。使用XT-2000iV血液分析仪的手动分析功能,对骨髓中有核细胞进行分类。结果 55例SD大鼠和12例Beagle犬骨髓涂片和骨髓细胞悬液的XT-2000iV血液分析仪检测及手动设置标准的分析数据显示,大鼠和狗的骨髓成分检测中由于淋巴细胞和单核细胞难以分离,区分的细胞为中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞,网织红细胞、成熟红细胞以及淋巴细胞和单核细胞的合总。而涂片的部分则用姬姆萨染色后,在光镜下分辨有无核细胞,计数并计算两者比例。结论制备骨髓细胞悬液用XT-2000iV血液分析仪检测骨髓细胞成分和分类计数的方法比人工骨髓涂片后光镜下检查骨髓细胞更具科学性和标准化,能实现定量定标,方便批量操作,大大提高实验效率,在节约人力、财力、物力和时间方面也做出较大贡献。

关键词：骨髓成分分析

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环保型透明剂在GLP条件下病理制片中的应用

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中国药理学与毒理学杂志 2013年第3期 519-519页

作者：张红广州医药研究总院药物非临床评价研究中心国家广州新药安全评价研究重点实验室

石蜡制片是病理学基础研究和疾病诊断中常用的技术,也是国内外药物非临床安全性评价(GLP)实验室病理学研究的主要技术手段,病理的制片水平直接影响到病理诊断的全面性和准确性。在石蜡制片过程中,透明剂在组织处理过程中及切片制备过程... 详细信息

石蜡制片是病理学基础研究和疾病诊断中常用的技术,也是国内外药物非临床安全性评价(GLP)实验室病理学研究的主要技术手段,病理的制片水平直接影响到病理诊断的全面性和准确性。在石蜡制片过程中,透明剂在组织处理过程中及切片制备过程中均起到关键性作用,包括组织脱水后浸蜡前组织的透明、切片染色前切片的脱蜡以及染色后封片前切片的透明等。环保型透明剂,又名Van-Clear,国外及国内近年来均已有生产,不含二甲苯、丙酮等挥发性有毒物质,为无色无味有机溶剂,可替代二甲苯用于全自动脱水机、染色机、封片机,组织的脱蜡、透明及封片。环保型透明剂优点:①环保型透明成分中不含二甲苯、丙酮等有毒有害物质,使用过程中对实验人员的伤害较二甲苯明显减小。②透明剂性质温和,在透明过程中超出一定时间对组织的损伤程度较低。能够避免如二甲苯透明过程中透明时间偏长容易造成组织变脆,从而影响切片的弊端,也同时避免组织过度收缩变形,影响病理诊断。③透明组织染色效果好,切片透明后组织容易着色,细胞浆和细胞核染色鲜艳,色饱和度满意,对比清晰。同时也不影响组织的特殊染色,如:PAS和massion三色等,也未见对免疫组化染色有明显影响。④对仪器不具腐蚀性,不易燃易爆,其沸点为180℃,自燃点为420℃,可安全使用。环保型透明剂缺点:①透明时间较二甲苯透明时间长,几乎为二甲苯透明时间的2倍以上。室温18～25℃下,透明剂脱水中透明需分三步,时间分别为2 h,1 h和1 h;切片脱蜡分三步,时间分别为30 min,5 min和5 min;封片前切片透明也分三步,时间分别为5 min,5 min和5 min。每步骤中,时间可稍稍延长,但时间太短或低于3 min可能会对效果产生影响。②透明时间长短受季节影响,夏季室温高,相对透明时间缩短,而冬季室温低,则透明时间需相对延长。室温在15℃以下,呈出现在规定透明时间内透明不彻底现象,建议切片脱蜡时间延长至1 h以上甚至2 h。而脱水过程中影响不大,因为脱水机运行过程中,机器有一定加热作用,且脱水机采用循环进水方式,试剂分子活跃性更强。③试剂消耗大,相对二甲苯成本稍偏高。实验中需根据样品量的多少,不定时更换透明剂,以保证实验效果。总体来看,运用环保型透明剂的优势还是大于其缺点,可代替二甲苯在病理切片制备过程中的运用,不影响切片的制备质量,但在GLP条件下,更应注意中间环节的把握以及不同外界环境影响下的质量控制。

关键词：环保型透明剂 GLP 病理制片

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雷公藤提取物对雄性大鼠生殖系统毒性

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中国药理学与毒理学杂志 2013年第3期 585-585页

作者：雷夏凌黄远铿郭秋平张红李海华杨威广州医药研究总院药物非临床评价研究中心国家广州新药安全评价研究重点实验室

目的考察雷公藤提取物对SD大鼠的生殖系统毒性反应,并探讨雷公藤的生殖系统毒性和可能的机制。方法选用雄性SD大鼠,按体重随机分为4组:即阴性对照组、雷公藤18,7.2和1.8 g·kg-1,分别在给药30 d,60 d及停药30 d观察药物对动物的生... 详细信息

目的考察雷公藤提取物对SD大鼠的生殖系统毒性反应,并探讨雷公藤的生殖系统毒性和可能的机制。方法选用雄性SD大鼠,按体重随机分为4组:即阴性对照组、雷公藤18,7.2和1.8 g·kg-1,分别在给药30 d,60 d及停药30 d观察药物对动物的生殖系统毒性反应。给药期间观察对雌性大鼠动情周期变化。在设定的观察时间点,每组雌雄动物各用酶联免疫吸附法,测定雄性大鼠促性腺激素释放激素(GnRH)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、睾酮(T)的含量以及雌性大鼠促性腺激素释放激素(GnRH)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、雌二醇(E2)、孕酮(P)的含量;同时取雄性动物睾丸、附睾和雌性动物卵巢、子宫等脏器称重,计算脏器指数,随后再将雄性动物一侧附睾尾进行涂片,计算未成熟精子率和精子畸形率,然后将以上脏器以及各动物的下丘脑、垂体用10%中性福尔马林固定,进行HE染色,光镜下观察组织病理学变化。结果①脏器指数与阴性对照组比较,雌性大鼠卵巢及子宫的脏器指数未见明显改变,雄性大鼠的睾丸和附睾的脏脑系数在给药30 d,60 d及停药30 d均明显减小(P<0.05)。②动情周期与阴性对照组比较,雌性大鼠雷公藤高剂量组发情期明显延长(P<0.05)。③附睾尾精子:与阴性对照组比较,雄性大鼠附睾尾未成熟精子率在给药60 d及停药30 d均明显升高(P<0.05)。附睾尾精子畸形率在个观察时间点均明显升高(P<0.05)。④病理组织学观察在各观察时间点均发现雄性动物睾丸曲精细管生精细胞数量减少甚至消失,壁层变薄,官腔变小,形态不规则,睾丸体积明显缩小,呈萎缩性变化;附睾管腔明显缩小,管腔空虚。雌性动物在卵巢闭锁卵泡的数量增多,子宫内膜上皮细胞增生,向管腔内伸出较多突起,子宫内膜纤维组织增生,形成较多的皱褶。雌雄性动物的下丘脑及垂体组织结构并未见异常变化。结果显示雷公藤对生殖器官的损伤具有一定的时间-剂量关系,且为不可逆性变化。⑤性激素水平与阴性对照组比较,雷公藤低、中、高剂量组雄性大鼠血清T含量显著降低(P<0.05)。雷公藤中剂量组的血清FSH含量和雷公藤低、中、高剂量组的血清LH含量均明显下降(P<0.05)。雷公藤低、中、高剂量组雌性大鼠血清FSH,LH,E2和P含量均显著下降(P<0.05)。结论雷公藤对SD大鼠有明显的生殖毒性反应,雄性动物的毒性反应主要表现为附睾尾内未成熟精子率及畸形精子率升高,睾丸和附睾的脏脑系数减小及发生明显病理学变化,其毒性机制可能与降低FSH,LH和T的分泌有关。雌性动物的毒性反应主要表现为动情周期紊乱,卵巢和子宫发生明显的病理变化,其毒性机制可能与降低FSH,LH,E2和P的分泌有关。

关键词：雷公藤提取物生殖毒性

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