检索结果-内蒙古大学图书馆

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2006年第1期24卷 35-40页

作者：张亚晶陈晓光郑学礼王春梅南方医科大学公共卫生与热带医学学院病原生物学系广州510515

目的克隆中华按蚊防御素基因全长cDNA序列及基因组序列,并对其进行鉴定和生物信息学分析。方法根据已发表的埃及伊蚊和冈比亚按蚊等的防御素基因序列设计引物,提取中华按蚊总RNA并构建其基因组文库,分别进行多轮RT-PCR和巢式PCR扩增,将... 详细信息

目的克隆中华按蚊防御素基因全长cDNA序列及基因组序列,并对其进行鉴定和生物信息学分析。方法根据已发表的埃及伊蚊和冈比亚按蚊等的防御素基因序列设计引物,提取中华按蚊总RNA并构建其基因组文库,分别进行多轮RT-PCR和巢式PCR扩增,将所得片段进行克隆、测序,并应用相关生物信息学软件对序列进行鉴定和分析。结果从中华按蚊基因组文库中扩增出完整的防御素基因组序列(由两个外显子和一个内含子组成)以及5′端和3′端的非编码序列(UTR)片段,总长度为2256bp;从中华按蚊总RNA中扩增出大小为324bp的cDNA片段,经测序证实为中华按蚊防御素基因全长cDNA序列,其开放阅读框共编码107个氨基酸,成熟肽部分具有40个氨基酸残基。结论首次克隆出中华按蚊防御素基因全长cDNA序列及基因组序列,为进一步的功能研究奠定了基础。

关键词：中华按蚊防御素 cDNA序列基因组序列克隆

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弓形虫研究的过去、现在与未来

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2009年第5期27卷 426-431页

作者：陈晓光谭峰南方医科大学公共卫生与热带医学学院病原生物学系广州510515

弓形虫为顶复动物门寄生原虫,呈世界性广泛分布,可感染所有温血动物,并在宿主免疫功能低下或受抑制时导致严重的疾患,其极高的流行性和致病的机会性已越来越引起人们的关注。本文回顾了弓形虫研究的历史,综述了目前弓形虫研究的热点并... 详细信息

弓形虫为顶复动物门寄生原虫,呈世界性广泛分布,可感染所有温血动物,并在宿主免疫功能低下或受抑制时导致严重的疾患,其极高的流行性和致病的机会性已越来越引起人们的关注。本文回顾了弓形虫研究的历史,综述了目前弓形虫研究的热点并提出了在今后研究中需要解决的问题。

关键词：刚地弓形虫弓形虫病

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刚地弓形虫多表位抗原基因在转基因番茄中的表达研究

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2008年第6期26卷 432-437页

作者：周晓红黄小琴钟任佳朱巧珍赵莹郭瑜琪陈晓光南方医科大学公共卫生与热带医学学院病原生物学系广州510515

目的获得稳定表达弓形虫多表位抗原基因(Tg-MAG)的转基因番茄植株。方法用植物组成型启动子E35S、番茄果实特异性E82.2启动子以及E35S-E81.1复合式启动子驱动弓形虫Tg-MAG的植物表达载体pC35MG、pCE2MG与pC35E1MG,以农杆菌介导的T-DNA... 详细信息

目的获得稳定表达弓形虫多表位抗原基因(Tg-MAG)的转基因番茄植株。方法用植物组成型启动子E35S、番茄果实特异性E82.2启动子以及E35S-E81.1复合式启动子驱动弓形虫Tg-MAG的植物表达载体pC35MG、pCE2MG与pC35E1MG,以农杆菌介导的T-DNA转化法转化番茄子叶和下胚轴;经芽诱导、伸长以及生根的连续性抗性筛选和培育,获得Tg-MAG转基因番茄植株,练苗后移栽花盆中培育至开花、结果。用PCR、RT-PCR、蛋白质印迹(Western blotting)分别对Tg-MAG转基因植株进行DNA、RNA、蛋白水平的鉴定。结果获得的Tg-MAG转基因番茄植株经PCR和RT-PCR鉴定,得到预期360bp的Tg-MAG片段,经Western blotting筛选获得能正确表达预期相对分子质量(Mr)为11900的Tg-MAG重组蛋白,且8株具有免疫反应性,其中有2株于番茄果实中所表达的重组蛋白能与抗弓形虫速殖子主要表面抗原1(SAG1)单克隆抗体K7H3发生强免疫反应。结论获得Tg-MAG转基因番茄株系,在其果实中成功表达具有良好免疫反应性的Tg-MAG重组蛋白。

关键词：刚地弓形虫多表位抗原基因转基因番茄表达

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刚地弓形虫感染对宿主细胞信号转导的影响

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2011年第5期29卷 378-384页

作者：罗济璇朱国辉吴永坚彭鸿娟南方医科大学公共卫生与热带医学学院病原生物学系广州510515

刚地弓形虫在入侵和寄生于宿主细胞,引起急性与慢性感染的过程中,对宿主细胞进行精细的、整体的调控,在激发和抑制宿主免疫反应之间保持一个精细的平衡,保证弓形虫在宿主细胞内成功地生存增殖,并有机会传播给终末宿主;在此过程中宿主细... 详细信息

刚地弓形虫在入侵和寄生于宿主细胞,引起急性与慢性感染的过程中,对宿主细胞进行精细的、整体的调控,在激发和抑制宿主免疫反应之间保持一个精细的平衡,保证弓形虫在宿主细胞内成功地生存增殖,并有机会传播给终末宿主;在此过程中宿主细胞的信号转导发生广泛的应激变化,在弓形虫入侵、寄生过程中及与弓形虫-宿主相互关系中起着重要作用。本文拟从5个方面综述弓形虫感染对宿主细胞信号通路的调控作用:①弓形虫分泌蛋白调控宿主细胞信号转导,②弓形虫调节宿主天然免疫、保护性免疫相关的细胞信号通路,③弓形虫调控与抗凋亡及细胞周期相关的宿主细胞信号转导,④弓形虫调节宿主细胞钙离子信号通路,⑤弓形虫调节与细胞结构重组相关的宿主细胞信号转导。

关键词：刚地弓形虫入侵发育宿主细胞细胞信号

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登革Ⅱ型病毒前膜蛋白基因反向重复序列具有干扰病毒复制的作用

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南方医科大学学报 2013年第5期33卷 642-648页

作者：朱娉婷潘京郑学礼南方医科大学公共卫生与热带医学学院病原生物学系广东广州510515

目的构建含有登革Ⅱ型病毒(DENV-2)前膜蛋白(prM)基因反向重复序列(irRNA)的重组质粒,评价其抑制病毒复制的效果。方法 DENV-2接种乳鼠,提取总RNA,在正义和反义引物两端分别加上XhoⅠ和EcoRⅠ的识别位点,将经RT-PCR扩增的prM全长基因片... 详细信息

目的构建含有登革Ⅱ型病毒(DENV-2)前膜蛋白(prM)基因反向重复序列(irRNA)的重组质粒,评价其抑制病毒复制的效果。方法 DENV-2接种乳鼠,提取总RNA,在正义和反义引物两端分别加上XhoⅠ和EcoRⅠ的识别位点,将经RT-PCR扩增的prM全长基因片段插入pcDNA3.1(+)中,形成含有prM反向序列的重组质粒pcDNA-asprM;于另一对正义和反义引物两端引入酶切位点NheⅠ和BglⅡ,经RT-PCR扩增prM全长基因片段插入pMD18-T-vector中,形成含有正向序列的重组质粒pMD18-T-prM。限制性内切酶NheⅠ和KpnⅠ分别酶切重组质粒pMD18-T-prM和重组质粒pcDNA-asprM,得到片段prM和线性化载体pcDNA-asprM,连接构建成含有prM反向重复序列的重组质粒pcDNA-irRNA。筛选的阳性重组质粒pcDNA-irRNA用脂质体法转染至BHK-21细胞中,半定量PCR和实时荧光定量PCR分析评估该质粒抑制登革病毒复制的效果。结果成功构建具有prM反向重复序列的重组质粒pcDNA-irRNA。经转染pcDNA-irRNA的实验组与未转染质粒阳性对照组相比,半定量PCR结果显示DENV-2攻击96 h后NS3的mRNA表达水平下降28%;实时定量PCR分析显示,DENV-2攻击72 h后实验组病毒拷贝数比阳性对照组少1.44倍,攻击96 h后实验组的NS1表达量明显低于阳性对照组(P<0.05)。结论 DENV-2 prM反向重复序列具有干扰病毒复制的效果,为登革病毒基因疫苗的研究提供理论依据。

关键词：登革Ⅱ型病毒前膜蛋白反向重复序列 RNA干扰 BHK-21细胞

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白纹伊蚊嗅觉受体OR7的基因克隆、鉴定和功能分析

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南方医科大学学报 2014年第10期34卷 1420-1425页

作者：周宁王晓明邓裕华刘宏美刘通陈晓光南方医科大学公共卫生与热带医学学院病原生物学系广东广州510515

目的克隆鉴定白纹伊蚊嗅觉受体基因OR7,并对其表达谱和功能进行分析。方法提取成蚊总RNA,采用RT-PCR技术扩增白纹伊蚊嗅觉受体基因OR7的全长编码基因,并检测OR7在不同虫期和不同组织器官中的表达谱;将OR7基因克隆于真核表达载体pME18s中... 详细信息

目的克隆鉴定白纹伊蚊嗅觉受体基因OR7,并对其表达谱和功能进行分析。方法提取成蚊总RNA,采用RT-PCR技术扩增白纹伊蚊嗅觉受体基因OR7的全长编码基因,并检测OR7在不同虫期和不同组织器官中的表达谱;将OR7基因克隆于真核表达载体pME18s中,转染HEK293细胞,利用钙成像技术初步分析其对气味分子刺激的钙调功能。结果成功克隆出白纹伊蚊嗅觉受体基因OR7的全长编码基因,经测序得知其编码区序列长度为1395 bp;表达谱分析显示,其在蚊幼虫、蛹、成蚊中都有表达,且在雌蚊嗅器中表达显著。钙成像结果显示OR7对气味分子刺激后的钙离子通道有一定的调节功能。结论克隆出白纹伊蚊的嗅觉受体基因OR7,初步分析显示其在雌蚊中显著表达,并具有对气味分子的识别功能。

关键词：白纹伊蚊嗅觉受体表达谱气味功能分析

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番茄遗传转化筛选及其子代选育体系的优化研究

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南方医科大学学报 2008年第7期28卷 1117-1122页

作者：应彩云黄小琴郭瑜琪钟莉莉刘艳黎事伦顾晓敏周晓红南方医科大学公共卫生与热带医学学院病原生物学系广东广州510515

目的以弓形虫多表位抗原基因(MAG)和截短的速殖子主要表面抗原1(tSAG1)为插入子建立优化的番茄遗传转化筛选及其子代选育体系。方法从培养基激素配方、番茄外植体选择等方面进行番茄再生体系的优化。自番茄品种、外植体选材、培养温度... 详细信息

目的以弓形虫多表位抗原基因(MAG)和截短的速殖子主要表面抗原1(tSAG1)为插入子建立优化的番茄遗传转化筛选及其子代选育体系。方法从培养基激素配方、番茄外植体选择等方面进行番茄再生体系的优化。自番茄品种、外植体选材、培养温度、培养基激素配方以及在共培养时是否加入乙酰丁香酮(AS)等进行以农杆菌介导的番茄基因组稳定转化体系的优化。采用不同浓度卡那霉素抗性压力对转基因小苗进行根筛选诱导的比对。转基因番茄幼苗练苗移栽开花结果后收集种子,以无菌播种卡那霉素抗性筛选法进行番茄转基因植株子代的选育。结果子叶较下胚轴具有更强的再生能力,在优化的番茄再生培养基ZB3中,番茄子叶可达到98%(59/60)的高频再生芽萌发率。番茄的转化体系优化,培养基激素配方、培养温度是番茄转化芽诱导过程中的关键影响因素,(23±1)℃能显著提高转化芽的萌发率,AS的施加亦能显著提高番茄转化芽萌发率,Zhongshu No.5番茄子叶于ZB2培养基和(23±1)℃的条件下转化芽萌发率为35%(28/81)。80mg/L卡那霉素抗性进行HK种番茄转化小苗根的筛选诱导比较适宜,生根率为48%(31/65)。抗性苗移栽成活,正常开花结果的转化植株117株。无菌播种,卡那霉素浓度≥100mg/L时能显著抑制非转基因番茄种子的发育尤其是根的萌发与植株的伸长,根出现紫化且无侧根生长;将转基因番茄种子置于150mg/L卡那霉素抗性浓度下培养,能有效进行转基因植株后代遗传分离的选育。结论成功建立番茄高频再生体系以及优化的番茄转化、抗性筛选及其转基因植株子代的选育体系。

关键词：转基因番茄弓形虫遗传转化

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大肠杆菌ER2566表达的重组Thanatin的敏感抗菌活性

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南方医科大学学报 2010年第5期30卷 1050-1054,1058页

作者：王沛珍顾金保罗军彭鸿娟南方医科大学公共卫生与热带医学学院病原生物学系广东广州510515 南方医科大学公共卫生与热带医学学院微生物学系广东广州510515

目的原核表达抗菌肽,纯化并鉴定其抗菌活性。方法用人工合成的方法合成编码thanatin21肽的DNA序列(并使用了大肠杆菌的偏爱密码子),克隆入pTYB11质粒,转化大肠杆菌ER2566。thanatin与内含肽融合表达,内含肽是一种具有自剪切功能能够自... 详细信息

目的原核表达抗菌肽,纯化并鉴定其抗菌活性。方法用人工合成的方法合成编码thanatin21肽的DNA序列(并使用了大肠杆菌的偏爱密码子),克隆入pTYB11质粒,转化大肠杆菌ER2566。thanatin与内含肽融合表达,内含肽是一种具有自剪切功能能够自动将目标蛋白及内含肽分离的蛋白剪切元素。内含肽-thanatin以可溶性蛋白的方式表达,存在于细胞裂解液的水相中,将细胞裂解液过几丁质亲和层析柱,内含肽-thanatin能够特异地结合到几丁质柱上。在层析柱上用DTT/半胱氨酸缓冲液在4℃切割过夜,切割下来的thanatin用洗脱液洗脱。结果在最先洗脱下来的4ml洗脱液中蛋白浓度达到245μg/ml。纯化后的thanatin具有很好的抗革兰氏阴性菌以及真菌的能力,如弗氏志贺菌(Shigella flexneri)、肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)、宋内志贺菌(Shigella snnei)、大肠杆菌O157(Escherichia coli O157)、产毒大肠杆菌(toxinproducing Escherichia coli)、绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa)、白色念珠菌(Candida albicans),尤其在抗耐药菌方面表现出显著优势,如耐药肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)及产超广谱β内酰胺酶(Extended-Spectrum β-Lactamases,ESBLs)大肠杆菌。重组Thanatin对80株产ESBLs耐药大肠杆菌及30株敏感的大肠杆菌所产生的抑菌圈的大小没有显著性差异(P>0.05,t-test),具有相同的抗菌能力。结论在大肠杆菌ER2566中表达的thanatin对革兰氏阴性菌尤其是临床耐药菌有很好的抗菌活性,克服了抗生素耐药性的问题。Thanatin具有开发成抗革兰氏阴性菌药物的潜力。

关键词： Thanatin 原核表达抗菌活性

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日本血吸虫小热休克蛋白Sjp40的RNA干扰效应

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南方医科大学学报 2012年第4期32卷 456-461页

作者：陈敏芳麦荣嘉莫倩珍周晓红南方医科大学公共卫生与热带医学学院病原生物学系广东广州510515

目的研究日本血吸虫小热休克蛋白(sHSP)Sjp40基因的RNA干扰效应及其干扰后日本血吸虫HSP60、HSP70、HSP90基因在mRNA水平出现的协同效应,观察各期虫体Sjp40、SjHSP60、SjHSP70、SjHSP90基因mRNA表达水平。方法以双链RNA(dsRNA)实现RNA... 详细信息

目的研究日本血吸虫小热休克蛋白(sHSP)Sjp40基因的RNA干扰效应及其干扰后日本血吸虫HSP60、HSP70、HSP90基因在mRNA水平出现的协同效应,观察各期虫体Sjp40、SjHSP60、SjHSP70、SjHSP90基因mRNA表达水平。方法以双链RNA(dsRNA)实现RNA干扰。体外转录合成dsRNA,将Sjp40的dsRNA(dsSjp40)及阴性对照GFP的dsRNA(dsGFP)通过浸泡法转染到日本血吸虫成虫中,体外培养7 d后用TRIZOL法提取其总RNA及总蛋白,实时荧光定量PCR(qPCR)检测Sjp40基因及SjHSP60、SjHSP70、SjHSP90基因mRNA的表达,Western blot检测Sjp40蛋白表达产物。提取各期虫体总RNA,qPCR检测Sjp40、SjHSP60、SjHSP70、SjHSP90基因的mRNA表达。结果转染后Sjp40 dsRNA转染组目的基因的转录水平较阴性对照GFP dsRNA转染组下降了80%左右;蛋白质水平较空白对照及阴性对照组(dsGFP)出现明显降低,qPCR结果显示在Sjp40基因RNA干扰后SjHSP60、SjHSP70、SjHSP90基因的mRNA表达水平未发现明显变化。此四种HSPs在日本血吸虫生活史不同时期mRNA表达存在明显差异,Sjp40基因在虫卵期mRAN水平表达相对其他HSPs基因高。结论 dsSjp40 RNAi可特异性抑制Sjp40的表达,但对SjHSP60、SjHSP70、SjHSP90基因mRNA的表达没有明显的影响。

关键词：日本血吸虫小热休克蛋白 RNA干扰 dsRNA

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日本血吸虫纯净活虫卵制备方法的改进

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2008年第2期26卷 160-160,F0003页

作者：王衍海彭鸿娟顾金保南方医科大学公共卫生与热带医学学院病原生物学系广州510515

为改进日本血吸虫无菌活虫卵的制备方法,将感染血吸虫尾蚴38～45d的家兔剖杀,于无菌条件下摘取肝脏,匀浆,以360目分样筛过筛,截留成熟及未成熟虫卵,用1.2%生理盐水反复洗涤数次后收集虫卵,置0.25%胰蛋白酶消化液中消化2h,当混杂组织被... 详细信息

为改进日本血吸虫无菌活虫卵的制备方法,将感染血吸虫尾蚴38～45d的家兔剖杀,于无菌条件下摘取肝脏,匀浆,以360目分样筛过筛,截留成熟及未成熟虫卵,用1.2%生理盐水反复洗涤数次后收集虫卵,置0.25%胰蛋白酶消化液中消化2h,当混杂组织被消化成单个细胞后,再用360目分样筛过滤去除杂质细胞,用含100μl/ml氨苄青霉素与硫酸链霉素双抗的Earle’s平衡盐溶液反复洗涤数次,获得大量纯净、活性高达(95.1±6.4)%的无菌虫卵。本法收集虫卵工作效率较高。

关键词：日本血吸虫虫卵制备体外培养

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