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中山大学学报（医学科学版） 2008年第2期29卷 149-153页

作者：杜瑞王辉黄雪松郭国庆沈伟哉暨南大学医学院人体解剖学教研室暨南大学理工学院食品科学与工程系广东广州510632

【目的】探讨姜酚肟对谷氨酸(glutamate,Glu)诱导PC12细胞损伤的保护作用。【方法】体外培养PC12细胞,建立谷氨酸诱导PC12细胞损伤的模型;采用MTT法检测细胞活力,流式细胞术和Hoechst33258DNA染色法检测细胞凋亡。【结果】经5mmol/L的... 详细信息

【目的】探讨姜酚肟对谷氨酸(glutamate,Glu)诱导PC12细胞损伤的保护作用。【方法】体外培养PC12细胞,建立谷氨酸诱导PC12细胞损伤的模型;采用MTT法检测细胞活力,流式细胞术和Hoechst33258DNA染色法检测细胞凋亡。【结果】经5mmol/L的谷氨酸处理24h后,PC12细胞活力比对照组降低,仅为对照组的58.3%。在一定浓度范围内,姜酚肟能保护PC12细胞免受谷氨酸(5mmol/L)的影响,但较高浓度时对细胞有一定的毒性。经不同浓度姜酚肟(3.125、6.25、12.5、25μg/mL)预处理后,细胞活力明显提高,其保护作用随浓度降低而升高,当浓度为6.25μg/mL时效果最好,使PC12细胞的存活率达到75.2%(P<0.01),浓度为3.125μg/mL时,细胞存活率降为70.2%(P<0.01)。谷氨酸(5mmol/L)能诱导PC12细胞凋亡,处理24h后细胞凋亡率为20.1%,经姜酚肟(3.125、6.25、12.5、25μg/mL)预处理后,细胞凋亡率明显降低,分别为3.5%(P<0.01),2.8%(P<0.01),9.6%(P<0.01),17.7%(P<0.05)。【结论】谷氨酸能诱导PC12细胞凋亡,较低浓度的姜酚肟能有效保护PC12细胞免受谷氨酸诱导的细胞损伤,其中6.25μg/mL的姜酚肟效果最好。

关键词：姜酚肟谷氨酸 PCI2细胞细胞凋亡

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登革病毒感染对人血管内皮细胞血管细胞黏附分子-1表达的影响

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第二军医大学学报 2008年第7期29卷 750-755页

作者：肖瑞江振友张倩广州医学院临床技能实验中心广州510182 暨南大学医学院微生物学与免疫学教研室广州510632 安徽省芜湖市疾病预防与控制中心芜湖241000

目的:研究登革病毒2型(DV2)体外感染对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)表达血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)的影响。方法:原代分离、纯化、培养人HUVEC细胞,用生长良好的2 ～3代细胞进行实验。分别用病毒感染复数(MOI)为1、2、4、8、 16的DV2病毒... 详细信息

目的:研究登革病毒2型(DV2)体外感染对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)表达血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)的影响。方法:原代分离、纯化、培养人HUVEC细胞,用生长良好的2 ～3代细胞进行实验。分别用病毒感染复数(MOI)为1、2、4、8、 16的DV2病毒液感染HUVEC,阴性对照组直接以RPMI 1640培养,应用细胞计数试剂-8(CCK-8)法测定DV2感染前和感染后 6、12、24、48、72和96 h的细胞活性。另以MOI =2的DV2病毒液感染细胞,阴性对照组直接以RPMI 1640培养,于感染后6、12、 24、48、72、96 h分别收集病毒感染的HUVEC,采用流式细胞术测定细胞表面VCAM-1表达水平;采用RT-PCR法检测细胞中 VCAM-1 mRNA转录水平。结果:当病毒MOI =2时对细胞活力的影响与对照组相比差异无统计学意义。DV2感染可以促进 HUVECs中VCAM-1 mRNA的转录,96 h内均有增加,与对照组相比有显著性差异(P<0.05)。其中,正常状态下HUVEC基本无VCAM-1 mRNA转录,感染12 h达到最高峰,12 ～48 h表达量显著高于其他时间(P<0.05)。DV2感染HUVEC后,VCAM-1蛋白表达在12 ～72 h显著升高(P<0.05),与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:DV2感染上调HUVEC 的VCAM-1 mRNA转录和蛋白表达。这可能是DV2感染诱发患者血管通透性升高和血浆渗漏的重要分子机制之一。

关键词：登革病毒人脐静脉内皮细胞血管细胞黏附分子-1

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硒化麒麟菜多糖对肝癌细胞株生长和凋亡的影响

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中山大学学报（医学科学版） 2008年第3期29卷 270-273,277页

作者：江振友刘玥唐渝岑颖洲王长军暨南大学医学院微生物学与免疫学教研室广东广州510632 暨南大学生命科学院化学系有机化学教研室广东广州510632

【目的】探讨硒化麒麟菜多糖在体外对肝癌HepG2.2.15细胞株生长和凋亡的作用及机制。【方法】处于生长期的人肝癌细胞HepG2.2.15分为3组,对照组、硒化麒麟菜多糖组和顺氨氯铂组。用MTT法检测各组肿瘤细胞增殖的情况,流式细胞仪检测细胞... 详细信息

【目的】探讨硒化麒麟菜多糖在体外对肝癌HepG2.2.15细胞株生长和凋亡的作用及机制。【方法】处于生长期的人肝癌细胞HepG2.2.15分为3组,对照组、硒化麒麟菜多糖组和顺氨氯铂组。用MTT法检测各组肿瘤细胞增殖的情况,流式细胞仪检测细胞周期、细胞调亡以及凋亡基因Fas的表达情况。【结果】硒化麒麟菜多糖在体外可抑制肿瘤细胞的增殖,最高抑制率为97.2%,并且有时间依赖性。硒化麒麟菜多糖可阻滞肝癌HepG2.2.15细胞的生长使之停留在S和G2/M期,从而抑制了肿瘤细胞的增殖,同时通过促进Fas表达14.4%±0.11%,明显高于对照组1.5%±0.01%(P<0.05),从而诱导HepG2.2.15细胞凋亡。【结论】硒化麒麟菜多糖可能是通过阻滞肿瘤细胞的生长及诱导细胞凋亡等机制,从而对肝癌细胞的增殖有一定的抑制作用。

关键词：硒化麒麟菜多糖细胞周期细胞凋亡 Fas基因

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大鼠海马神经元neurobasal无血清的原代培养方法

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2008年第6期29卷 547-551页

作者：王圆圆张文斌龚晓兵郭国庆陈静辛莉沈伟哉原林暨南大学医学院解剖学教研室广东广州510632 暨南大学第一附属医院广东广州510630 南方医科大学解剖学教研室广东广州510515

目的：建立纯度和活力较高的无血清原代培养海马神经元的方法。方法：新生SD大鼠海马，用neurobasal培养基培养，免疫荧光鉴定神经元纯度，MTT法检测其活力。结果：神经元接种12～24h后贴壁，并长出细小突起，3d具有典型神经元形态特征... 详细信息

目的：建立纯度和活力较高的无血清原代培养海马神经元的方法。方法：新生SD大鼠海马，用neurobasal培养基培养，免疫荧光鉴定神经元纯度，MTT法检测其活力。结果：神经元接种12～24h后贴壁，并长出细小突起，3d具有典型神经元形态特征，4d突起形成稀疏的神经纤维网络，8d后神经元5～10个聚集成团，突起密集，生长稳定，12d后出现细胞碎片。Tubulin荧光染色显示清晰的神经元，突起绵长且相互交织，占细胞总数的66．7％；GFAP荧光染色的细胞数量少，突起短粗，占33．7％。培养1～5d MTT代谢率逐渐上升，6～11d处于平台期，11d后下降。结论：neurobasal无血清培养获得的神经元纯度大于60％，6～11d的细胞适于细胞学实验。

关键词：神经元原代培养 neurobasal培养基海马大鼠

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广州市医护人员职业暴露现况及认知态度调查

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中国公共卫生 2008年第4期24卷 478-479页

作者：董晓梅陈雄飞彭云姚海燕黄建宇何思扬王声湧肖昕王自能暨南大学医学院流行病学教研室广州510632 广州市疾病预防控制中心传染病科暨南大学医学院艾滋病基因与疫苗研究中心暨南大学医学院妇产科学教研室

目的了解广州市医护人员职业暴露的发生情况，调查医护人员对艾滋病（AIDS）相关问题的态度及需求。方法利用自制的调查表，采用整群抽样方法对广州市14家医院658名医护人员进行问卷调查。结果最近1个月，45．1％的调查对象有被医疗锐... 详细信息

目的了解广州市医护人员职业暴露的发生情况，调查医护人员对艾滋病（AIDS）相关问题的态度及需求。方法利用自制的调查表，采用整群抽样方法对广州市14家医院658名医护人员进行问卷调查。结果最近1个月，45．1％的调查对象有被医疗锐器刺伤或损伤过；最近1周，调查对象完整皮肤、受损皮肤或粘膜接触到可疑污染体液的比例分别为40．9％，15．3％和11．1％；还有7．6％的人被污染的利器刺伤。护理人员的职业暴露风险相对较高，工龄短、自我防护意识不佳的医护人员发生职业暴露的几率增高。近70％的医护人员担忧自己因艾滋病职业暴露而发生感染，20％～30％的医护人员对人类免疫缺陷病毒感染者或艾滋病患者有抗拒态度。调查对象希望政府和单位开展艾滋病职业暴露防护培训及增加对艾滋病防治医护人员的保障与补偿。结论广州市医护人员职业暴露的发生率不容忽视，尤其是护理人员、工龄短和自我防护意识差者。相当比例的医护人员惧怕感染HIV，并持抗拒态度。需要尽快建立对艾滋病防治人员的保障制度。

关键词：医护人员职业暴露现况调查

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亚硝酸钠对大鼠睾丸支持细胞波形蛋白表达的影响

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中国职业医学 2008年第1期35卷 1-3,6页

作者：张晓蓉宿宝贵韩晖吴赤蓬深圳市宝安区松岗卫生监督所(预防保健所) 广东深圳518105 暨南大学医学院解剖学教研室广州510632 暨南大学医学院公共卫生学教研室广州510632

目的研究亚硝酸钠对睾丸支持细胞波形蛋白表达的影响。方法用冷胰蛋白酶消化法进行睾丸支持细胞的体外原代培养;四甲基偶氮唑盐比色法测定亚硝酸钠对支持细胞的细胞抑制率,用改进寇氏法计算半数抑制浓度(IC50);用免疫细胞化学检测亚硝... 详细信息

目的研究亚硝酸钠对睾丸支持细胞波形蛋白表达的影响。方法用冷胰蛋白酶消化法进行睾丸支持细胞的体外原代培养;四甲基偶氮唑盐比色法测定亚硝酸钠对支持细胞的细胞抑制率,用改进寇氏法计算半数抑制浓度(IC50);用免疫细胞化学检测亚硝酸钠对睾丸支持细胞中波形蛋白表达的影响。结果亚硝酸钠浓度为0.0150g/L时对睾丸支持细胞有毒性作用,随着剂量增大,毒性作用逐渐增强,细胞抑制率与亚硝酸钠剂量之间存在着明显的剂量-反应关系,IC50为1.17g/L,标准差为1.14g/L。各剂量组的平均灰度与阴性对照组比较,差异均有显著性(P<0.05),且随着染毒剂量的增加,平均灰度逐渐降低。结论一定剂量的亚硝酸钠可以抑制支持细胞波形蛋白的表达。

关键词：亚硝酸钠波形蛋白支持细胞

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二氢杨梅素对糖耐量异常大鼠氧化和非酶糖基化的影响

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吉林大学学报（医学版） 2008年第6期34卷 994-997页

作者：陈静郭丽娜郑成暨南大学医学院营养学教研室广东广州510632 广东省中医院营养科广东广州510120 广州大学化学化工学院广东广州510006

目的:研究二氢杨梅素对糖耐量异常大鼠氧化和非酶糖基化的影响。方法:以D-半乳糖为诱导剂,采用剂量递增全程腹腔注射法建立糖耐量异常动物模型。以二氢杨梅素为受试物,二甲双胍降糖药为阳性对照,实验8周后,测定各实验组大鼠空腹及餐后2... 详细信息

目的:研究二氢杨梅素对糖耐量异常大鼠氧化和非酶糖基化的影响。方法:以D-半乳糖为诱导剂,采用剂量递增全程腹腔注射法建立糖耐量异常动物模型。以二氢杨梅素为受试物,二甲双胍降糖药为阳性对照,实验8周后,测定各实验组大鼠空腹及餐后2h血糖、血清胰岛素水平、血清超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)含量、血清糖化血红蛋白(GHb)和晚期糖基化终末产物(AGEs)含量。结果:与模型组比较,二氢杨梅素组餐后2h血糖、血清胰岛素水平及胰岛素抵抗指数显著降低(P<0.05),血清GSH-Px活性明显增高(P<0.05),血清MDA含量及AGEs水平显著降低(P<0.05),各组大鼠血清GHb含量和SOD活性差异无显著性(P>0.05)。结论:二氢杨梅素可通过提高机体GSH-Px抗氧化酶活性及抑制非酶糖基化作用,降低机体氧化应激水平和胰岛素抗性,促进外周组织对血糖的利用,从而明显改善大鼠糖耐量异常状态。

关键词：二氢杨梅素糖耐量异常氧化作用非酶糖基化

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通过肿瘤致敏的DCs活化的CD8^+ T细胞可有效地杀死肿瘤细胞(英文)

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中国病理生理杂志 2008年第4期24卷 645-649页

作者：唐小龙江振友蔡淑玉暨南大学医学院血液病研究所广东广州510632 暨南大学医学院微生物学与免疫学教研室广东广州510632 安徽理工大学医学院生物医学工程研究所安徽淮南232001

目的:探索肿瘤裂解物负载的DCs诱导活化的初始T细胞介导细胞免疫及活化的T细胞杀死肿瘤细胞的能力。方法:应用黏附法分离外周血中的淋巴细胞和单核细胞,应用GM-CSF +IL-4刺激单核细胞并诱导为iDCs,然后进行分组,应用相应的细胞因子等刺... 详细信息

目的:探索肿瘤裂解物负载的DCs诱导活化的初始T细胞介导细胞免疫及活化的T细胞杀死肿瘤细胞的能力。方法:应用黏附法分离外周血中的淋巴细胞和单核细胞,应用GM-CSF +IL-4刺激单核细胞并诱导为iDCs,然后进行分组,应用相应的细胞因子等刺激iDCs转化为mDCs,其中肿瘤裂解物冲击DCs组:冻融抗原负载+TNF-α+IL-1β;无肿瘤裂解物冲击组: TNF-α+IL-1β。再分别用上述DCs与淋巴细胞进行混合培养以刺激混合淋巴细胞中的T细胞转化为细胞毒性T细胞,并进行分组,肿瘤裂解物冲击DCs组:肿瘤裂解物冲击DCs +IL-2 +IL-7;无肿瘤裂解物冲击DCs组:无肿瘤裂解物冲击DCs +IL-2 +IL-7;对照组: IL-2 +IL-7。结果:成功获得iDCs,并高表达CD86、CD80和HLA-DR;相对于其它组,肿瘤裂解物冲击DCs组mDCs更显著上调CD83,且更有效地刺激淋巴细胞增殖;肿瘤裂解物冲击DCs组的CTLs也高表达CD95(Fas)且TNF -α和IFN-γ的表达水平显著提高(P<0.05)。结论:肿瘤裂解物冲击DCs可有效促进T细胞活化、增殖;并显著增强相应CTLs的杀死靶细胞的能力,这为发展DCs +CTLs的免疫治疗肿瘤提供了一种新而且简便的生物治疗模式。

关键词：树突细胞抗原肿瘤疫苗免疫疗法

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STC1在胃癌组织与外周血液中表达的意义

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中国病理生理杂志 2008年第5期24卷 978-981页

作者：唐小龙江振友蔡淑玉许礼发周昕暨南大学医学院血液病研究所广东广州510632 暨南大学医学院微生物学与免疫学教研室广东广州510632 安徽理工大学医学院生物医学工程研究所安徽淮南232001

目的:研究外周血液与胃癌组织中斯钙素1(STC1)的表达情况。方法:分别在I-IV型的胃癌74例患者中,应用RT-PCR法检测外周血和肿瘤组织中STC1mRNA表达情况,应用免疫组化法检测肿瘤组织中STC1蛋白表达情况。结果:74例胃癌患者,48例外周血液中... 详细信息

目的:研究外周血液与胃癌组织中斯钙素1(STC1)的表达情况。方法:分别在I-IV型的胃癌74例患者中,应用RT-PCR法检测外周血和肿瘤组织中STC1mRNA表达情况,应用免疫组化法检测肿瘤组织中STC1蛋白表达情况。结果:74例胃癌患者,48例外周血液中STC1mRNA阳性;肿瘤组织STC1mRNA与STC1蛋白全部表达。外周血中STC1mRNA与肿瘤淋巴结转移数、肿瘤大小和病理TNM分期有(r分别为0.637、0.519、0.541,P<0.05、P<0.01、P<0.05)显著正相关。结论:STC1在胃癌的发生发展过程中具有抑制免疫系统功能等重要作用;外周血中STC1mRNA检测可试用作为肿瘤微转移的1个新指标。

关键词：斯钙素1 肿瘤转移胃肿瘤

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纳米金抑制血管内皮细胞增殖的分子机制

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中华实验外科杂志 2008年第11期25卷 1421-1423页

作者：潘运龙覃莉蔡继业孙加升邱思远暨南大学附属第一医院普外科广州510632 暨南大学医学院组织胚胎学教研室暨南大学生命科学技术学院纳米生物技术实验室

目的观察纳米金能否抑制血管内皮细胞增殖，以及作用的分子机制。方法在96孔板内，无血清培养人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）24h，分别加入预先孵育过夜的纳米金（1000nmol/L）＋血管内皮生长因子（VEGF）165（10μg/L）、VEGF165各100... 详细信息

目的观察纳米金能否抑制血管内皮细胞增殖，以及作用的分子机制。方法在96孔板内，无血清培养人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）24h，分别加入预先孵育过夜的纳米金（1000nmol/L）＋血管内皮生长因子（VEGF）165（10μg/L）、VEGF165各100μl,噻唑蓝（MTT）比色法观察纳米金对HUVEC增殖的影响。取3种浓度（250、500、1000nmol/L）纳米金各0．5m1，分别与碱性成纤维细胞生长因子（bFGF，10mg／L）0．5ml，4℃孵育24h；再加入过饱和浓度的肝素-琼脂糖凝胶，离心后用bFGF抗体检测上清液和沉淀物中bFGF含量变化。无血清培养HUVEC5孔，每孔加入VEGF165（10M／L）100μl；再加入不同浓度纳米金（125、250、500nmol/L），100μl，作用5min，用Western blot方法测定磷酸化PLC-γ1蛋白。用AFM（原子力显微镜）表征纳米金与VEGF165作用后粒径大小。结果纳米金＋VEGF165组与VEGF165组的增殖倍数分别为1．75和4．25，表明纳米金抑制HUVEC的增殖（t=14．421，P〈0．01）。纳米金能够与具有肝素结合位点的bFGF结合。VEGF165浓度不变（10μg/L），随着纳米金溶液浓度的增加，从125、250到500nmol/L，纳米金抑制PLC-γ1磷酸化越来越明显。AFM观察到纳米金与VEGF165作用后，粒径普遍大于30nm。结论纳米金与具有肝素结合位点的VEGF165结合，抑制了VEGF165的信号传导，从而抑制血管内皮细胞增殖。

关键词：血管内皮细胞增殖纳米金生长因子肝素结合位点

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