检索结果-内蒙古大学图书馆

广东医学 2005年第7期26卷 1006-1007页

作者：王志鹏暨南大学医学院微生物与免疫学教研室广州510632

丙型肝炎病毒(hepatitis C virus，HCV)是一种严重威胁人类生命健康的微生物，持续感染可导致慢性丙型肝炎，并可发展为肝硬化和肝细胞癌。HCV非结构蛋白NS3在HCV复制和宿主细胞负面调控中发挥重要作用。因其具有的生物学功能，已成为HC... 详细信息

丙型肝炎病毒(hepatitis C virus，HCV)是一种严重威胁人类生命健康的微生物，持续感染可导致慢性丙型肝炎，并可发展为肝硬化和肝细胞癌。HCV非结构蛋白NS3在HCV复制和宿主细胞负面调控中发挥重要作用。因其具有的生物学功能，已成为HCV研究热点。本文就。NS3主要生物学功能研究进展综述如下。

关键词：丙型肝炎病毒功能研究进展 NS3蛋白非结构蛋白NS3 慢性丙型肝炎 HCV复制生物学功能生命健康持续感染肝细胞癌宿主细胞研究热点进展综述微生物肝硬化

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结核分枝杆菌融合基因Hsp65-Esat6荧光表达载体的构建及表达(英文)

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中国组织工程研究与临床康复 2007年第29期11卷 5836-5839页

作者：李君武黄泽棋姚翠婵周曙光李晓栋宋东黄清华暨南大学医学院微生物免疫学教研室广东省广州市510632

背景:Hsp65和Esat6之间的Linker编码一段疏水性多肽,其具有良好的柔顺性和折叠性,有利于翻译成融合蛋白时融合蛋白之间的空间折叠,使融合蛋白保持与两个天然蛋白空间构象的一致性,从而形成正确的构型而提高它们的免疫原性。目的:从结核... 详细信息

背景:Hsp65和Esat6之间的Linker编码一段疏水性多肽,其具有良好的柔顺性和折叠性,有利于翻译成融合蛋白时融合蛋白之间的空间折叠,使融合蛋白保持与两个天然蛋白空间构象的一致性,从而形成正确的构型而提高它们的免疫原性。目的:从结核分枝杆菌(MTB)H37Rv株中克隆目的融合基因Hsp65-Esat6,与报告基因EGFP一起构建真核表达载体pEGHsp65-Esat6,通过免疫组织化学法分别检测细胞中Hsp65蛋白和ESAT-6蛋白的表达。设计:单一样本实验。单位:暨南大学医学院微生物免疫学教研室。材料:质粒pVAE由华南理工大学曹以诚教授惠赠,MTBH37Rv株、大肠杆菌DH5α、表达质粒pEGFP-C1为本实验室保存,Hela细胞由本教研室胡萍博士惠赠。方法:实验于2005-09/2006-06在暨南大学医学院微生物与免疫教研室和中心实验室完成。以MTB全基因组为模板经聚合酶链反应(PCR)扩增出Hsp65基因(不含终止子),与pEGFP-C1载体进行重组,构建pEGHsp65(不含终止子)重组质粒。再以pVAE质粒为模板,经PCR扩增出Linker-Esat6基因,与pEGHsp65质粒(不含终止子)进行重组,构建真核表达载体pEGHsp65-Esat6。通过限制性内切酶图谱测定pEGHsp65-Esat6融合质粒大小;对质粒pEGFP-C1的多克隆位点内的DNA序列进行序列分析鉴定;将质粒转染Hela细胞,观察荧光的表达情况及转染效率,通过免疫组织化学法分别检测细胞中Hsp65蛋白和ESAT-6蛋白的表达。主要观察指标:①pEGHsp65-Esat6融合质粒大小。②pEGFP-C1DNA序列分析。③转染后Hela细胞的荧光表达情况。④细胞中Hsp65蛋白和ESAT-6蛋白的免疫组织化学结果。结果:①质粒pEGFP-C1的大小约为4.7kb,而pEGHsp65为6.4kb,融合质粒pEGHsp65-Esat6约为6.7kb,在琼脂糖凝胶电泳图上可以分辨出泳动速度的差异。②结果与结核分支杆菌H37Rv株的Hsp65和Esat6的基因序列完全相同。③转染融合质粒24h后,使用共聚焦显微镜可观察到有部分细胞表达荧光蛋白,说明融合质粒转染成功,转染率约为30%。未转染的Hela细胞则无荧光表达。④通过免疫组织化学法证实融合质粒在Hela细胞内能正确表达出具有生物学活性的Hsp65与ESAT-6蛋白。结论:采用Hsp65和Esat6搭配作为免疫原,成功克隆并构建了结核分枝杆菌融合基因Hsp65-Esat6荧光真核表达质粒。

关键词：结核分枝杆菌 Hsp65 Esat6 融合基因 DNA疫苗

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携带乙肝大包膜蛋白L基因与结核Esat6融合基因植物表达载体的构建及鉴定

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华北农学报 2011年第2期26卷 1-6页

作者：李君武宫君原刘鑫叶秋萍黄清华暨南大学医学院微生物与免疫教研室广东广州510632

构建包含编码结核杆菌Esat6基因和乙肝病毒大包膜蛋白(L蛋白)基因的植物双元表达载体,并转化根癌农杆菌LBA4404。分别以质粒pPIC9K-L和结核杆菌基因组为模板进行PCR扩增,获得L和Esat6基因,然后运用部分重叠聚合酶链式反应扩增出L-Esat6... 详细信息

构建包含编码结核杆菌Esat6基因和乙肝病毒大包膜蛋白(L蛋白)基因的植物双元表达载体,并转化根癌农杆菌LBA4404。分别以质粒pPIC9K-L和结核杆菌基因组为模板进行PCR扩增,获得L和Esat6基因,然后运用部分重叠聚合酶链式反应扩增出L-Esat6融合基因片段,连接到有玉米特异性启动子globulin-1的pEGG载体上,将G-L-Esat6融合基因片段酶切下,连接到含有抗除草剂基因bar的双元表达载体pCAMBIA1300上,电击法将重组质粒转化到农杆菌LBA4404中。构建了真核表达重组质粒pCAMG-L-Esat6,测序分析表明,克隆的L和Esat6序列与NCB I上公布序列一致。成功构建与转化了包含编码乙肝病毒大包膜蛋白L基因和结核杆菌Esat6基因的植物表达载体,并将其转化入根癌农杆菌LBA4404中,为成功研制利用转基因植物生产抗乙肝和结核联合口服疫苗奠定了基础。

关键词：结核分枝杆菌乙肝病毒大包膜蛋白L基因 Esat6基因 globulin-l

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影响裸鼠实验性矽结节形成过程的免疫因素分析

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中国病理生理杂志 1997年第6期13卷 610-610,664页

作者：林晨司徒锐王惠华廖剑辉暨南大学医学院微生物学与免疫学教研室广州510632 暨南大学医学院病理学教研室广州510632

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丙型肝炎病毒核心蛋白在QSG7701细胞中的表达和鉴定

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中国免疫学杂志 2005年第8期21卷 579-582,585页

作者：李君武许小亮江静王志鹏林绍强黄泽棋韦静李小兰暨南大学医学院微生物免疫教研室广州510632

目的:进行丙型病毒肝炎核心蛋白真核表达载体的构建,并在人源肝细胞QSG7701中进行表达与鉴定。方法:从含有丙肝病毒全长基因的重组质粒pBRTM/HCV1-3011质粒中扩增出HCV核心(core)基因片段,构建pcDNA3.1(-)/core重组真核表达质粒。然后... 详细信息

目的:进行丙型病毒肝炎核心蛋白真核表达载体的构建,并在人源肝细胞QSG7701中进行表达与鉴定。方法:从含有丙肝病毒全长基因的重组质粒pBRTM/HCV1-3011质粒中扩增出HCV核心(core)基因片段,构建pcDNA3.1(-)/core重组真核表达质粒。然后采用阳离子多聚体将其转染人肝细胞QSG7701,用免疫组织化学SP法检测丙型肝炎病毒核心蛋白的表达,再通过Westernblot印迹法进行鉴定。结果:所克隆的core片段大小正确,序列正确;成功的构建了pcDNA3.1(-)/core重组表达质粒,瞬时转染QSG7701细胞,用SP免疫组化检测到了核心蛋白的表达,Westernblot印迹法显示其分子量约为21000。结论:丙型病毒肝炎核心蛋白的真核表达载体pcDNA3.1(-)/core在人肝细胞中能有效表达HCV核心蛋白,从而为进一步研究和解析核心蛋白在肝细胞癌变机制中的所起的作用提供了良好的核心蛋白表达系统,同时也为开发丙型肝炎DNA疫苗提供了前期条件。

关键词：丙型肝炎病毒核心蛋白真核表达

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人类恶性畸胎瘤PA-1细胞的p53基因结构、功能状态及其意义

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中国免疫学杂志 2002年第8期18卷 546-549页

作者：李君武高崇暨南大学医学院微生物免疫教研室广州510632

目的:探讨人类恶性畸胎瘤PA-1细胞株p53基因的结构、功能状态及其意义。方法:采用DNA碱基序列分析、FASAY（酵母细胞中单个等位基因的功能分析）及Western blot（蛋白印迹分析）等方法对经20余年407-445继代培养的PA-1细胞株p53的基因... 详细信息

目的:探讨人类恶性畸胎瘤PA-1细胞株p53基因的结构、功能状态及其意义。方法:采用DNA碱基序列分析、FASAY（酵母细胞中单个等位基因的功能分析）及Western blot（蛋白印迹分析）等方法对经20余年407-445继代培养的PA-1细胞株p53的基因结构、功能状态进行了研究。结果:RT-PCR产物DNA定向序列分析显示具有野生及突变2个带（p53密码子239突变）,FASAY结果也显示p53一个等位基因是有活性的（野生的）,而另一个是非活性的（突变的）。Western blot未检测出突变的p53基因蛋白,而p21蛋白的表达水平比正常成纤维细胞低。结论:人卵巢恶性畸胎瘤PA-1细胞株经20年的继代培养后,一个p53等位基因发生错义突变,另一个仍然是野生型的。仅一个p53等位基因发生突变,不足以引起细胞的染色体不稳定性。因此,研究PA-1细胞稳定核型的维持结构,在确定有关染色体的稳定性与不稳定性的基因的方面是非常重要的。

关键词：人类恶性畸胎瘤 PA-1细胞 p53基因结构功能临床意义

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登革病毒对人树突状细胞感染性的研究

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微生物学报 2005年第4期45卷 598-600,i003页

作者：江振友史毓杰孙晗笑暨南大学医学院微生物学与免疫学教研室广州510632 暨南大学基因组药物研究所广州510632

探讨登革病毒对人树突状细胞(DC)的感染性。人外周新鲜血常规分离单核细胞,经细胞因子GMCSF、IL4诱导培养成DC,通过形态学特征、细胞表型和淋巴细胞刺激能力鉴定。用登革病毒2型(DV2)感染DC,于作用后6h、24h、48h、72h、96h分别收集上... 详细信息

探讨登革病毒对人树突状细胞(DC)的感染性。人外周新鲜血常规分离单核细胞,经细胞因子GMCSF、IL4诱导培养成DC,通过形态学特征、细胞表型和淋巴细胞刺激能力鉴定。用登革病毒2型(DV2)感染DC,于作用后6h、24h、48h、72h、96h分别收集上清液和细胞,甲基纤维素微量空斑试验测定病毒滴度,间接免疫荧光法检测细胞上病毒抗原表达,透射电镜观察病毒在细胞内的定位。病毒感染后6h即可在培养上清中测出病毒,病毒滴度在48h达到高峰,以后逐渐下降。间接免疫荧光法证明感染的DC胞浆及胞膜上携带病毒抗原。透射电镜下在病毒感染48h后DC胞浆内可见大量病毒颗粒。树突状细胞是登革病毒感染的靶细胞,病毒可感染DC并产生大量病毒颗粒,可能在其发病机制中起重要作用。

关键词：登革病毒,人树突状细胞,感染

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丙型肝炎病毒非结构蛋白5A与干扰素的应答耐受

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新医学 2006年第1期37卷 64-67页

作者：王志鹏暨南大学医学院微生物与免疫学教研室 510632

丙型肝炎病毒是丙型病毒性肝炎的病原体,目前缺乏有效的疫苗。干扰素是其主要治疗药物,但普遍存在耐受。丙型肝炎病毒非结构蛋白5A在丙型肝炎病毒的干扰素耐受中发挥重要作用。涉及的可能机制包括非结构蛋白5A干扰素敏感决定区变异、抑... 详细信息

丙型肝炎病毒是丙型病毒性肝炎的病原体,目前缺乏有效的疫苗。干扰素是其主要治疗药物,但普遍存在耐受。丙型肝炎病毒非结构蛋白5A在丙型肝炎病毒的干扰素耐受中发挥重要作用。涉及的可能机制包括非结构蛋白5A干扰素敏感决定区变异、抑制双链核糖核酸依赖性蛋白激酶、抑制2',5'-寡腺苷酸合成酶、诱生白介素-8和作用于干扰素的蛋白酪氨酸激酶和转录激动子信号途径。

关键词：丙型肝炎病毒非结构蛋白5A 干扰素应答耐受

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1型糖尿病与基因治疗

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广东医学 2006年第7期27卷 1102-1103页

作者：胡萍林绍强暨南大学医学院微生物和免疫学教研室广州510632

1 型糖尿病（type 1 diabetes，T1D）是由于自身免疫机制引起胰岛β细胞破坏，胰岛素分泌缺乏。胰岛移植治疗糖尿病是研究的热点之一，但供体来源不足和免疫排斥仍是亟待解决的问题。随着基因重组及转基因技术的不断发展，再造分泌胰岛... 详细信息

1 型糖尿病（type 1 diabetes，T1D）是由于自身免疫机制引起胰岛β细胞破坏，胰岛素分泌缺乏。胰岛移植治疗糖尿病是研究的热点之一，但供体来源不足和免疫排斥仍是亟待解决的问题。随着基因重组及转基因技术的不断发展，再造分泌胰岛素的克隆细胞，或特异性阻断针对胰岛自身免疫过程治疗T1D，为T1D治疗提供新的研究方向。

关键词： 1型糖尿病基因治疗胰岛素分泌自身免疫机制转基因技术分泌胰岛素细胞破坏移植治疗免疫排斥供体来源

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中药臭灵丹中3,5-二羟基-6,7,3′,4′-四甲氧基黄酮对人鼻咽癌CNE细胞凋亡的影响及机制

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生物化学与生物物理进展 2011年第3期38卷 254-261页

作者：曹长姝沈伟哉李药兰王辉高明雅暨南大学医学院解剖学教研室广州510632 暨南大学药学院中药及天然产物研究所广州510632 暨南大学中药药效物质基础及创新药物研究所广东省重点实验室广州510632 暨南大学医学院微生物及免疫学教研室广州510632

中药臭灵丹中黄酮类化合物3,5-二羟基-6,7,3′,4′-四甲氧基黄酮(3,5-hydroxy-6,7,3′,4′-tetramethoxyflavone,HTMF)体外对多种肿瘤细胞有抑增殖作用,但机制尚未完全清楚.为探讨HTMF对人鼻咽癌CNE细胞凋亡的影响,用MTT法检测HTMF对CN... 详细信息

中药臭灵丹中黄酮类化合物3,5-二羟基-6,7,3′,4′-四甲氧基黄酮(3,5-hydroxy-6,7,3′,4′-tetramethoxyflavone,HTMF)体外对多种肿瘤细胞有抑增殖作用,但机制尚未完全清楚.为探讨HTMF对人鼻咽癌CNE细胞凋亡的影响,用MTT法检测HTMF对CNE细胞株的增殖抑制率,倒置显微镜观察HTMF作用于CNE细胞后细胞形态变化,Hoechst 33258荧光染色观察细胞核形态的变化,流式细胞仪检测细胞的凋亡率,Western blot法检测凋亡蛋白Caspase3和Caspase9的变化,流式细胞仪检测线粒体跨膜电位(△准m)值的改变,并用JC-1荧光染料染色,激光共聚焦显微镜观察线粒体膜电位变化.结果显示,分离自臭灵丹的HTMF呈浓度、时间双重依赖性显著抑制CNE细胞的增殖,诱导细胞凋亡,引起线粒体膜电位下降及凋亡蛋白Caspase3和Caspase9的活化.提示:3,5-二羟基-6,7,3′,4′-四甲氧基黄酮对人鼻咽癌CNE细胞的生长有显著的抑制作用,并可通过降低线粒体膜电位激活Caspase9,进而活化Caspase3诱导CNE细胞凋亡.

关键词： 3,5-二羟基-6 7 3’ 4’-四甲氧基黄酮(HTMT) CNE细胞细胞凋亡线粒体

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