检索结果-内蒙古大学图书馆

广东医学 2017年第2期38卷 190-193页

作者：余丽李海成黎贞燕郭卉欣王威赵梅桂孙琦黄新春林东子李国周周杰钟球陈涛周琳华南理工大学食品科学与工程学院广东广州510640 广东省结核病控制中心参比实验室广东广州510630 暨南大学医学院微生物与免疫教研室广东广州510632 佛山市第四人民医院检验科广东佛山528000 深圳市宝安区慢性病防治院结核病防治科广东深圳518101 东莞市慢性病防治院检验科广东东莞523008

目的对目前临床上用于检测结核分枝杆菌(MTB)及其耐药性的传统及分子生物学方法进行系统评价,为设计合理的诊断路径提供指导意义。方法对标准菌株(H37Rv)、敏感、单耐及耐多药MTB进行梯度浓度稀释后,作为评估的实验样本,从检测结果的准... 详细信息

目的对目前临床上用于检测结核分枝杆菌(MTB)及其耐药性的传统及分子生物学方法进行系统评价,为设计合理的诊断路径提供指导意义。方法对标准菌株(H37Rv)、敏感、单耐及耐多药MTB进行梯度浓度稀释后,作为评估的实验样本,从检测结果的准确性、检测周期、最低检出限方面对不同方法进行评价。结果MTB检测方面,XpertMTB/RIF检测MTB的检出下限(3×10~2cfu)与培养法相当,比基因芯片和GenoType~ MTBDRplus的检出下限低;耐药性检测方面,在MTB含量不足(≤3×10~2cfu)的情况下XpertMTB/RIF对利福平(RFP)的检测存在假阳性结果,GenoType~ MTBDRplus检测3×10~4cfu链霉素耐药MTB时出现RFP和异烟肼(INH)耐药的假阳性结果;检测周期方面,XpertMTB/RIF在2 h内可完成报告,基因芯片和GenoType~ MTBDRplus在当天8 h内可完成报告,培养及比例法药敏需4~8周可报告结果。结论目前不同的MTB及耐药检测方法各有优缺点,在临床应用方面应综合考虑患者的病情、经济状况等选取合理的诊断路径。

关键词：结核分枝杆菌罗氏培养法基因芯片 XpertMTB/RIF GenoType MTBDRplus

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水飞蓟宾通过上调 P15INK4B 和 P21WAF1／CIP1活化 JNK 诱导人胰腺癌细胞 G1期阻滞及细胞凋亡

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2015年第1期36卷 21-28页

作者：王莉张晓凯张鹏王娟娟吴志慧林晨蒋建伟广州市番禺区中心医院检验科广东广州511400 南阳市第一人民医院普外科河南南阳473000 暨南大学医学院生物化学教研室广东广州510632 暨南大学医学院微生物与免疫学教研室广东广州510632

目的:探讨水飞蓟宾对胰腺癌As PC-1细胞的增殖抑制作用及其作用机制.方法:MTT法和克隆形成抑制实验观察水飞蓟宾对人胰腺癌As PC-1细胞的增殖抑制作用,碘化丙锭(PI)单染色检测细胞周期改变,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋... 详细信息

目的:探讨水飞蓟宾对胰腺癌As PC-1细胞的增殖抑制作用及其作用机制.方法:MTT法和克隆形成抑制实验观察水飞蓟宾对人胰腺癌As PC-1细胞的增殖抑制作用,碘化丙锭(PI)单染色检测细胞周期改变,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡水平,Western blotting检测细胞周期及细胞凋亡相关蛋白的表达.结果:不同浓度的水飞蓟宾对胰腺癌As PC-1细胞的生长均有抑制作用,且呈剂量-效应和时间-效应关系(P<0.05),水飞蓟宾作用于As PC-1细胞48、72 h的IC50浓度分别为224.20、87.25μmol/L;克隆形成抑制实验显示,随着水飞蓟宾浓度增加,As PC-1细胞克隆形成逐渐减少.细胞周期检测结果显示,随着水飞蓟宾浓度的增加,胰腺癌As PC-1细胞出现明显G1期阻滞;水飞蓟宾处理组细胞的周期蛋白Cyclin D1、Cyclin E2、Cyclin A、Cyclin B1表达下降,细胞周期蛋白激酶CDK4、CDK6表达不变,细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制蛋白P15INK4B、P21WAF1/CIP1表达升高,与流式检测的结果相一致.不同浓度水飞蓟宾作用48 h后,出现明显的凋亡细胞群;同时发现Caspase-9、Caspase-3活化降解,Caspase3下游效应蛋白PARP出现切割条带.JNK蛋白表达增加并磷酸化活化,Bcl-2蛋白家族中抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-x L、Mcl-1表达明显降低,促凋亡蛋白Bax表达基本不变,BH3-only蛋白Bclxs、Bid、Bim表达增加.结论:水飞蓟宾明显抑制胰腺癌细胞增殖,通过诱导P15INK4B、P21WAF1/CIP1表达阻滞细胞周期在G1期,并通过诱导JNK活化激活线粒体细胞凋亡途径,进而诱导胰腺癌As PC-1细胞凋亡.

关键词：水飞蓟宾胰腺癌 AsPC -1 细胞细胞周期凋亡

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肺结核患者体内结核病相关免疫细胞因子的动态变化

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中华结核和呼吸杂志 2015年第8期38卷 584-588页

作者：余美玲郭卉欣王云霞王威黄文焰李海成周忠敬黎贞燕余丽黄新春钟广智李国周陈涛赵梅桂钟球周琳广州市黄埔区中医医院检验科 510700 广东省结核病控制中心参比实验室深圳宝市安区慢性病防治院结核病防治科佛山市第四人民医院检验科暨南大学医学院微生物与免疫教研室华南理工大学轻工食品学院东莞市慢性病防治院检验科

目的研究肺结核患者体内结核病相关细胞因子的动态变化.方法从广州市黄埔区、深圳市宝安区、佛山市及东莞市结核病防治机构选取活动性结核病患者68例,男36例,女32例,年龄19～ 50岁,平均（30 ±9）岁.肺结核患者按门诊顺序纳入,采... 详细信息

目的研究肺结核患者体内结核病相关细胞因子的动态变化.方法从广州市黄埔区、深圳市宝安区、佛山市及东莞市结核病防治机构选取活动性结核病患者68例,男36例,女32例,年龄19～ 50岁,平均（30 ±9）岁.肺结核患者按门诊顺序纳入,采用我国抗结核标准化疗方案治疗,并根据疗程结束后病情转归情况分为完成治疗组（治愈或者临床治愈）38例,男17例,女21例,平均29岁和未完成治疗组（治疗失败或需延长治疗）30例,男19例,女11例,平均32岁.采集入院时、治疗后2个月末及6个月末的外周血清,采用ELISA方法检测血清中γ-干扰素（IFN-γ）、IL-4、IL-17、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、转化生长因子-β（TGF-β）及IL-10等细胞因子的含量,采用SPSS20.0统计软件,多组间均数比较采用配对t检验分析.结果所有纳入病例的IFN-γ在入院时、2个月末及6个月末的平均含量分别为23.2、22.2和22.3 ng/L;TGF-β的含量分别为169.1、142.3和123.2 ng/L;IL-4的含量分别为65.0、28.7和31.9 ng/L,3种细胞因子水平随疗程的延长而显著降低（t=2.67,2.35及3.41,均P＜0.05）;6个月末时,完成治疗组IL-10显著升高,达12.9 ng/L,未完成治疗组显著降低（P＜0.05）;完成治疗组的IL-4水平降低（5.4 ng/L,P＜0.05）,而未完成治疗组无变化;完成治疗组Th1/Th2（IFN--γ/IL-4）入院时为0.70,2个月末为1.21,6个月末为1.34（t=6.32,6.03和5.85,均P＜0.05）,而未完成治疗组分别为0.64和0.75（t =3.7,P＜0.05）,完成治疗组2个月末和6个月末的Th1/Th2比值显著高于未完成治疗组（t=7.11,P＜0.05）.结论 IFN-γ及TGF-β等Th1型细胞因子或Th1/Th2降低可能是影响患者预后的因素之一,可能对患者的预后产生不良影响.

关键词：分枝杆菌,结核细胞因子类动态变化

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携带脑组织特异性microRNA靶序列的重组日本脑炎病毒的构建与鉴定

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解放军医学杂志 2014年第6期39卷 429-432页

作者：曹文媛叶青李晓峰王洪江朱舜亚秦鄂德江振友秦成峰暨南大学医学院微生物学与免疫学系广州510632 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的构建携带脑组织特异性miRNA靶序列的重组日本脑炎病毒株。方法利用反向遗传学技术将脑组织特异性的miR-124和miR-125靶序列引入日本脑炎病毒cDNA全长感染性克隆,将重组质粒用XhoⅠ线性化后采用SP6转录试剂盒进行体外转录,以获得的RN... 详细信息

目的构建携带脑组织特异性miRNA靶序列的重组日本脑炎病毒株。方法利用反向遗传学技术将脑组织特异性的miR-124和miR-125靶序列引入日本脑炎病毒cDNA全长感染性克隆,将重组质粒用XhoⅠ线性化后采用SP6转录试剂盒进行体外转录,以获得的RNA转染BHK-21细胞,37℃、5%CO2孵箱培养3d后取上清盲传1代观察细胞病变,并通过RT-PCR、细胞蚀斑形成实验和病毒生长曲线等方法对恢复病毒的生物学特性进行鉴定。结果成功在BHK-21细胞中拯救获得了携带miRNA靶序列的重组病毒,与野生型病毒株具有相似的蚀斑形态和生长特性。结论通过反向遗传学技术获得了携带脑组织特异性miRNA靶序列的重组日本脑炎病毒,为miRNA介导的组织特异性减毒机制研究奠定了基础。

关键词：微RNAs 脑炎病毒,日本感染性克隆疫苗

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替莫唑胺联合粉防己碱对人脑胶质瘤U87细胞的抑制作用

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中国药理学与毒理学杂志 2014年第3期28卷 367-372页

作者：张勇马继伟李海莹王绍祥闫雍容刘子豪杜彬钟雪云暨南大学医学院病理教研室广东广州510632 暨南大学广东省分子免疫与抗体工程重点实验室广东广州510632 暨南大学生物医药研究开发基地广东省生物工程药物重点实验室广东广州510632

目的探讨粉防己碱与替莫唑胺联合用药对人脑胶质瘤细胞U87细胞存活、克隆形成、迁移能力及凋亡的影响。方法采用CCK-8法检测粉防己碱8～64μmol·L^-1,或替莫唑胺50～400μmol·L^-1,或替莫唑胺＋粉防己碱3.2和6.4μmol·L... 详细信息

目的探讨粉防己碱与替莫唑胺联合用药对人脑胶质瘤细胞U87细胞存活、克隆形成、迁移能力及凋亡的影响。方法采用CCK-8法检测粉防己碱8～64μmol·L^-1,或替莫唑胺50～400μmol·L^-1,或替莫唑胺＋粉防己碱3.2和6.4μmol·L^-1作用24 h后细胞存活率。粉防己碱6.4μmol·L^-1、替莫唑胺100μmol·L^-1或替莫唑胺＋粉防己碱3.2和6.4μmol·L^-1作用24 h后,Giemsa染色检测细胞的克隆形成;Transwell小室检测细胞迁移能力;流式细胞术AnnexinⅤ/PI双染法检测细胞凋亡;Western蛋白质印迹法检测Bcl-XL、活化胱天蛋白酶3及活化聚ADP核糖聚合酶（PARP）蛋白表达。结果 CCK-8实验结果显示,单用粉防己碱和替莫唑胺均能抑制U87细胞的生长,且具有浓度依赖性（r=0.903,P〈0.05）,替莫唑胺100μmol·L^-1＋粉防己碱3.2和6.4μmol·L^-1抑制率高于两药单用,经分析两者作用为相加。替莫唑胺可抑制U87细胞的克隆形成和迁移能力,两药联用时比单用替莫唑胺抑制作用更明显（P〈0.05）;与单用替莫唑胺相比,两药联用时抗凋亡蛋白Bcl-XL明显减少,执行凋亡的活化的剪切胱天蛋白酶3蛋白及剪切PARP明显增多。结论粉防己碱联用替莫唑胺能明显抑制人脑胶质瘤U87细胞的生长、克隆形成及迁移能力,并诱导激活胱天蛋白酶3依赖的细胞凋亡。

关键词：粉防己碱替莫唑胺 U87细胞细胞凋亡

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结核抗原诱导的人外周血细胞因子调控网络在结核病诊断中的价值

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中国防痨杂志 2015年第8期37卷 827-835页

作者：陈涛陈亮李海成郭卉欣林东子王威李玉美余丽黎贞燕孙琦黄新春李国周周杰赵梅桂钟球周琳广东省结核病控制中心广州510630 深圳市宝市安区慢性病防治院结核病防治科佛山市第四人民医院检验科暨南大学医学院微生物与免疫教研室华南理工大学轻工食品学院东莞市慢性病防治院检验科

目的γ-干扰素（IFN-γ）释放试验（IGRA）是目前广泛运用的结核病筛查和诊断技术，但其无法区分活动性结核病和潜伏性结核感染（LTBI）。本研究旨在发现更加合适的血清标志物（细胞因子）可以替换IGRA，用于活动性结核病的诊断和LTBI... 详细信息

目的γ-干扰素（IFN-γ）释放试验（IGRA）是目前广泛运用的结核病筛查和诊断技术，但其无法区分活动性结核病和潜伏性结核感染（LTBI）。本研究旨在发现更加合适的血清标志物（细胞因子）可以替换IGRA，用于活动性结核病的诊断和LTBI者的筛查，以及这些细胞因子之间的相互调控网络关系。方法40份健康人（简称“健康组”）血液样本，40份确诊为活动性肺结核患者（简称“肺结核组”）的血液样本，40份LTBI者（简称“LTBI组”）的血液样本；通过结核分枝杆菌特异性抗原[早期分泌抗原靶6（ESAT6）和培养滤液蛋白10（CFP10）]进行刺激；通过人细胞因子芯片对刺激后的细胞因子表达变化进行检测；并筛选显著变化的因子，进行细胞因子调控网络构建。结果在肺结核组患者的外周血中嗜酸粒细胞趋化蛋白（CCI。）1（I-309）、趋化因子CXCLgE又称为Mig，即monokineinducedbyIFN-7（IFN-7诱导的单核因子）]、白细胞介素（IL）10、IL6、集落刺激因子（CSF）2、CSF3、IL8、IL1α、IL7、转化生长因子（TGF）-β1、CCL2、IL2、IL13、肿瘤坏死因子（TNF）α等因子在结核特异性抗原刺激后显著上调（2．06倍至3．18倍）；而在健康组和LTBI组当中却没有显著上调。在肺结核组和LTBI组患者的外周血中CCL3、IL1b、CCL8、IFN-γ、CXCL10因子在结核分枝杆菌特异性抗原刺激后明显上调（2．44倍至11．56倍）；而在健康组中这些因子没有明显的上调。趋化因子CCL4和巨噬细胞炎性蛋白（MIP）-1α因子在健康组、LTBI组和肺结核组外周血中，经过结核分枝杆菌特异性抗原刺激后，表达都明显上调。细胞因子调控网络显示，这些表达上调的因子，主要集中于IFNγ和IL1α因子调控网络中。结论CXCL10（IP10）、CCL3、CCL8和ILII？因子可能比IFNγ更适合用于结核病或LTBI者的筛查。

关键词：结核肺/诊断细胞因子类抗原细菌细菌蛋白质类生物学标记

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IFN-γ诱导THP-1源巨噬细胞活化的条件优化

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临床医学工程 2014年第7期21卷 829-831页

作者：江勇郭卉欣赖赛麟钱明李海成黎贞燕余丽江振友周琳钟球陈涛广东省结核病控制中心广东广州510630 暨南大学医学院微生物与免疫教研室广东广州510632 华南理工大学轻工与食品学院广东广州510640

目的摸索利用IFN-γ诱导THP-1源巨噬细胞活化的方法，筛选用于检测巨噬细胞活化状态的最佳细胞因子和最佳检测时间。方法PMA（佛波酯）诱导THP-1分化成为巨噬细胞，两次加入IFN-γ诱导巨噬细胞活化（两步法），ELISA法检测不同浓度和不... 详细信息

目的摸索利用IFN-γ诱导THP-1源巨噬细胞活化的方法，筛选用于检测巨噬细胞活化状态的最佳细胞因子和最佳检测时间。方法PMA（佛波酯）诱导THP-1分化成为巨噬细胞，两次加入IFN-γ诱导巨噬细胞活化（两步法），ELISA法检测不同浓度和不同刺激时间培养上清中细胞因子TNF-γ、IL-10、IL-12、IL-23的水平。结果IFN-γ诱导的巨噬细胞可大量分泌TNF-a，分泌量大于1000ng／mL，而IL-10、IL-12、IL-23分泌量少或未见明显分泌；两次IFN—y诱导巨噬细胞活化的最低浓度均为2．5ng／mL，初次最佳刺激时间为8～16h，再次最佳刺激6～18h。结论IFN—y可诱导巨噬细胞活化，两次IFN-γ刺激的效果比单次刺激效果好，TNF-γ可作为巨噬细胞活化的理想检测指标。

关键词：巨噬细胞 IFN-γ TNF—a 活化

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γ干扰素活化的THP-1源巨噬细胞杀伤荧光BCG的实验研究

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中国防痨杂志 2014年第5期36卷 362-368页

作者：赖赛麟孙毅凡陈涛杨晓周琳钟球暨南大学医学院微生物与免疫教研室广州510630 广东省结核病控制中心广东省“十二五”结核病防治转化医学重点实验室中国科学院生物物理研究所

目的研究γ干扰素（IFN-γ）活化的THPI源巨噬细胞对BCG的杀伤作用，并探讨其杀伤机制是否与自噬有关。方法Phorbol-12-myristate-13-acetate（PMA，也称佛波酯）诱导THP-1分化成巨噬细胞。牛分枝杆菌减毒株荧光BCG以感染复数MOI（multi... 详细信息

目的研究γ干扰素（IFN-γ）活化的THPI源巨噬细胞对BCG的杀伤作用，并探讨其杀伤机制是否与自噬有关。方法Phorbol-12-myristate-13-acetate（PMA，也称佛波酯）诱导THP-1分化成巨噬细胞。牛分枝杆菌减毒株荧光BCG以感染复数MOI（multiplicityofinfection，细菌数与细胞数的比例）10：1感染未活化（Control组）、IFN7活化（IFN-γ组）、Rapamycin诱导自噬（Rapa组）、3-甲基腺嘌呤（3-MA）抑制自噬（IFN-γ＋3-MA组）4组不同预处理的巨噬细胞。感染48h后，超纯水裂解细胞，收集裂解液和培养上清混合，相同比例取各组混合液10μl，连续10倍稀释3次涂7H10平板培养基，置37℃生化培养箱培养，第3至4周观察记录菌落数，计算生存率Econtrol组的菌落数为分母，其他组（包括control组）的菌落数为分子相除得到的数值为生存率]。同时在感染过程的不同时间点裂解细胞提取总蛋白，以Westernblot方法检测自噬标志蛋白LC3B的表达，监测细胞自噬水平的变化。实验结果数据以3次重复实验数据的“x±s”形式展示（Westernblot结果除外，只采用其中-个结果数据为代表）。用SPSS17．0软件进行统计分析：巨噬细胞贴壁率比较和凋亡率比较用两独立样本t检验；巨噬细胞活化后不同时间点分泌的TNF-α浓度比较和BCG感染各组巨噬细胞后的生存率比较用One-WayANOVA检验，以P〈0．05为差异有统计学意义。结果BCG感染各组巨噬细胞48h后的生存率：Control组为（100％±0％），IFN7组（45Yo±3％），Rapa组（48％±3％），IFN-γ＋3-MA组（91％±2％）。BCG生存率经One-WayANOVA检验，与Control组（未活化组）比较：IFN-γ组BCG生存率明显下降（P=0．01），细胞自噬水平明显增高；Rapa组BCG生存率明显下降（P=0．01），细胞自噬水平明显增高；IFN-γ＋3MA组BCG生存率无下降（P=0．13），细胞自噬水平无增高。结论BCG感染巨噬细胞，或者说巨噬细胞吞噬BCG，两者的相互作用微妙而复杂。巨噬细胞在IFN7活化期间遭遇BCG，可以明显杀伤BCG，杀伤机制与自噬有关。

关键词：卡介苗干扰素Ⅱ型巨噬细胞自噬细胞系肿瘤

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高通量测序筛选结核分枝杆菌耐药株差异基因

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热带医学杂志 2014年第5期14卷 547-550页

作者：李劭源张国良文玉欣毛冬婷曹开源陈心春曾谷城中山大学中山医学院微生物学教研室广东广州510080 中山大学热带病防治研究教育部重点实验室广东广州510080 广东医学院附属深圳市第三人民医院肝病研究所广东深圳518112 暨南大学第二临床医学院深圳市人民医院胸外科广东深圳518020

目的比较结核分枝杆菌中敏感株、多耐药株、广泛耐药株三者间基因表达的差异,为进一步针对耐药菌株的研究提供方向。方法从深圳市第三人民医院收集敏感株、多耐药株、广泛耐药株各1株,提取菌株RNA,然后构建cDNA文库,使用Genome Analyzer... 详细信息

目的比较结核分枝杆菌中敏感株、多耐药株、广泛耐药株三者间基因表达的差异,为进一步针对耐药菌株的研究提供方向。方法从深圳市第三人民医院收集敏感株、多耐药株、广泛耐药株各1株,提取菌株RNA,然后构建cDNA文库,使用Genome Analyzer IIx高通量测序仪进行全基因组测序,经过筛选比对后得到测序结果 ,再比较3个菌株间的基因表达差异。结果高通量测序后共得到基因3 968个。将耐药株与敏感株的基因进行比较,选取表达差异高于10倍的基因,筛选得到多耐药株差异基因16个、广泛耐药株差异基因10个。这些表达差异基因大部分与毒素-抗毒素系统、PE/PPE家族蛋白、金属转运蛋白相关。还在多耐药株中发现了一系列高表达的前噬菌体基因及噬菌体整合相关的基因。结论通过高通量测序筛选得到一系列耐药株差异表达基因,为未来对耐药菌株的研究提供依据。

关键词：结核分枝杆菌耐药株高通量测序

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20个品种桑叶不同提取部位体外抗呼吸道合胞病毒活性初探

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中药材 2013年第3期36卷 451-455页

作者：马方王辉李药兰张晓琦向阳飞廖森泰邹宇晓刘凡暨南大学中药及天然药物研究所/中药药效物质基础及创新药物研究广东省重点实验室广东广州510632 暨南大学医学院微生物与免疫学系广东广州510632 暨南大学生物医药研究开发基地广东广州510632 广东省农业科学院蚕业与农产品加工研究所广东广州510610

目的:对5个桑种中20个品种桑叶的80个提取部位进行体外抗呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytialvirus,RSV)活性的筛选。方法:采用细胞病变效应(cytopathic effect,CPE)法,观察样品对HEp-2细胞的毒性和样品抑制RSV的致病变作用。结果:20... 详细信息

目的:对5个桑种中20个品种桑叶的80个提取部位进行体外抗呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytialvirus,RSV)活性的筛选。方法:采用细胞病变效应(cytopathic effect,CPE)法,观察样品对HEp-2细胞的毒性和样品抑制RSV的致病变作用。结果:20个品种桑叶的水部位的细胞毒性均较低,而所有石油醚、乙酸乙酯和正丁醇部位样品对HEp-2细胞有不同程度的毒性;其中17个桑品种的26个提取部位具有抑制RSV Long株和/或RSV A2株的作用,其半数抑制浓度(IC50)≤20μg/mL,选择性指数(SI)≥2.5;初步的作用机制研究表明,抗青10和粤椹大10品种桑叶的正丁醇部位均在治疗给药方式下有抗RSV的活性,而直接灭活和预防给药方式下均无抗RSV活性。结论:桑叶中含有抗呼吸道合胞病毒活性成分,但不同来源桑叶因其化学物质基础有差别,其提取物表现出的抗病毒活性有一定的差异。

关键词：桑叶呼吸道合胞病毒抗病毒活性

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