检索结果-内蒙古大学图书馆

华北农学报 2010年第2期25卷 1-4页

作者：李君武刘艳黄清华叶秋萍暨南大学医学院微生物与免疫教研室广东广州510632

构建包含结核杆菌Ag85B基因的植物表达载体,并转化农杆菌LBA4404。以pcDNA3-Ag85B为模板,通过常规PCR克隆出Ag85B基因,定向克隆至含有玉米特异性启动子globulin-1的pCR2.1载体上,然后将globulin-1-Ag85B的融合片段酶切下来,并连接到经... 详细信息

构建包含结核杆菌Ag85B基因的植物表达载体,并转化农杆菌LBA4404。以pcDNA3-Ag85B为模板,通过常规PCR克隆出Ag85B基因,定向克隆至含有玉米特异性启动子globulin-1的pCR2.1载体上,然后将globulin-1-Ag85B的融合片段酶切下来,并连接到经过加工修饰的含有抗除草剂基因bar的双元表达载体pCAMBIA1300上,将重组质粒转化至农杆菌LBA4404中。重组质粒双酶切可见0.8bp和10kb的两条特异性条带,与预期大小相一致。重组质粒测序表明克隆的Ag85B基因序列与Genbank上相一致,酶切从农杆菌中所抽提的质粒,片段大小与预期相一致。成功构建与转化了携带结核Ag85B基因的植物双元表达载体,为利用植物反应器生产口服结核疫苗奠定基础。

关键词：结核分枝杆菌 Ag85B基因 globulin-1

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人外周血单个核细胞与脐带间充质干细胞共培养的AFM研究

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中国生物工程杂志 2010年第8期30卷 6-12页

作者：龚超群蔡继业郜世隽王秋兰金花暨南大学生命科学技术学院化学系广州510632 暨南大学医学院微生物学免疫学教研室广州510632

采用原子力显微镜与倒置显微镜在细胞层次上观察了人外周单个核细胞(PBMCs)与同种异源脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)共培养的过程,并在单细胞水平上分析了共培养前后人外周单个核细胞的形貌和生物物理性质。结果发现:共培养后贴壁人外周... 详细信息

采用原子力显微镜与倒置显微镜在细胞层次上观察了人外周单个核细胞(PBMCs)与同种异源脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)共培养的过程,并在单细胞水平上分析了共培养前后人外周单个核细胞的形貌和生物物理性质。结果发现:共培养后贴壁人外周单个核细胞的形态发生了很大的改变,并且表面分布着大小不一的颗粒状聚合物。利用AFM高空间分辨的力位移曲线测量系统,发现共培养72h后培养上清中人外周单个核细胞、贴壁的人外周单个核细胞的粘滞力分别是单纯培养72h的人外周单个核细胞的2倍、5倍,而细胞的硬度分别是单纯培养人外周单个核细胞的1.5倍、2倍。CCK-8检测提示,共培养过程中,干细胞的生长与外周血单个核细胞的生长出现了竞争作用。通过AFM探测人外周单个核细胞与脐带间充质干细胞共培养的可视化数据,有助于更好地了解间充质干细胞与外周血单个核细胞的相互作用。

关键词：脐带间充质干细胞外周血单个核细胞原子力显微镜倒置荧光显微镜

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SEA联合K562细胞体外诱导正常人脐带血单核细胞TCRζ链表达的作用

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2010年第2期31卷 154-157页

作者：高永鹏林晨田红霞高珂郜世隽江振友陈少华沈琦李扬秋暨南大学医学院微生物学与免疫学教研室广东广州510632 暨南大学医学院血液病研究所广东广州510632

目的:研究金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)对K562细胞体外诱导脐血T细胞活化TCRζ链基因表达情况。方法:常规分离4例脐带血单核细胞,分别与抗CD3单克隆抗体、单纯K562细胞、SEA以及SEA联合K562细胞共培养,诱导T细胞活化增殖,并设空白对照组... 详细信息

目的:研究金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)对K562细胞体外诱导脐血T细胞活化TCRζ链基因表达情况。方法:常规分离4例脐带血单核细胞,分别与抗CD3单克隆抗体、单纯K562细胞、SEA以及SEA联合K562细胞共培养,诱导T细胞活化增殖,并设空白对照组。刺激培养48 h后收集各组细胞提取mRNA并合成cD-NA,采用SYBR GreenⅠ荧光定量PCR和相对定量检测TCRζ链在不同组别T淋巴细胞中的表达情况,以β2微球蛋白基因(β2M)作为内参,根据相对定量公式:2-ΔΔCt计算TCRζ链表达差异倍数。结果:抗CD3单抗组、K562细胞组、SEA组、SEA联合K562细胞组诱导培养T细胞中TCRζ链表达差异倍数分别是(4.52±0.96)、(1.65±0.26)、(1.43±0.44)、(3.41±0.30),表明各组均有活化T细胞的作用,但各组TCRζ链表达水平有差异,其中SEA联合k562细胞组的T细胞ζ链基因表达均明显高于单纯k562组及单纯SEA组(P<0.01)。结论:超抗原SEA有助于增强K562细胞体外诱导T细胞活化作用。

关键词：金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA) 脐带血 T细胞受体ζ链实时定量PCR BCR-ABL融合蛋白慢性粒细胞白血病

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植物血凝素与金色葡萄球菌肠毒素刺激人外周血单个核细胞的比较研究

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分析测试学报 2010年第5期29卷 442-448页

作者：龚超群郜世隽蔡继业黄飞程暨南大学生命科学技术学院化学系广东广州510632 暨南大学医学院微生物学免疫学教研室广东广州510632

比较了植物血凝素(PHA)与金色葡萄球菌肠毒素(SEA)对外周血单个核细胞(PBMCs)的刺激效果。取健康人外周静脉血,分离得到PBMCs,分别加入PHA及SEA进行刺激并孵育12 h,利用原子力显微镜和倒置荧光显微镜观察细胞形态变化,利用量子点联合共... 详细信息

比较了植物血凝素(PHA)与金色葡萄球菌肠毒素(SEA)对外周血单个核细胞(PBMCs)的刺激效果。取健康人外周静脉血,分离得到PBMCs,分别加入PHA及SEA进行刺激并孵育12 h,利用原子力显微镜和倒置荧光显微镜观察细胞形态变化,利用量子点联合共聚焦显微镜观察活化后细胞膜表面CD3、CD69的分布情况,利用流式细胞术检测淋巴细胞活化早期细胞分化抗原CD69分子表达的变化情况。结果显示,丝裂原PHA刺激的淋巴细胞大多成群聚集,而超抗原SEA刺激的淋巴细胞大多呈分散状,且二者形态有明显差异;两组活化后淋巴细胞的体积均大于静息组,且活化过程中发生极化作用,迁移淋巴细胞,形成膜突起;丝裂原和超抗原刺激淋巴细胞12 h后,使淋巴细胞表达CD69抗原分子,但在量表达上存在差异性(PHA:39.5%±8.7%;SEA:8.3%±1.8%),抗原分子CD3和CD69在膜表面呈不均匀分布,且SEA活化后的T淋巴细胞表面受体CD3和CD69分子在空间上形成了微结构域;外周单个核细胞中其它非T细胞在丝裂原或者超抗原的刺激下也能表达活化抗原分子CD69。

关键词：植物血凝素金色葡萄球菌肠毒素外周血单个核细胞激光共聚焦显微镜原子力显微镜流式细胞分析仪量子点

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特异性抗髓性白血病多肽疫苗的研制和应用

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癌症进展 2010年第3期8卷 251-254页

作者：高永鹏田红霞林晨暨南大学医学院微生物与免疫教研室广州510632

化疗和造血干细胞移植是治疗白血病的主要方法，但是由于受供者来源和年龄的限制，化疗后微小残留病灶的存在使白血病容易复发。对白血病化疗缓解后给予疫苗治疗是消除残留病灶的理想方法。白血病相关抗原（LAAs）是目前研究最多的免疫... 详细信息

化疗和造血干细胞移植是治疗白血病的主要方法，但是由于受供者来源和年龄的限制，化疗后微小残留病灶的存在使白血病容易复发。对白血病化疗缓解后给予疫苗治疗是消除残留病灶的理想方法。白血病相关抗原（LAAs）是目前研究最多的免疫治疗的靶抗原，对于髓性白血病，大多数LAAs既是白血病细胞过度表达的自身抗原，也是染色体易位的融合蛋白。由于许多LAAs不是膜蛋白，不能作为抗体治疗的对象。

关键词：多肽疫苗白血病免疫治疗

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NGN3与PAX4双基因表达腺病毒载体的构建与表达

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2010年第4期31卷 346-351页

作者：唐小龙江振友庞雪云蓝锴欧财文广东省中医院检验科广东广州510120 暨南大学医学院微生物学与免疫学教研室广东广州510632

目的:运用pADxsi系统构建带人NGN3与PAX4双基因表达腺病毒载体。方法:采用基因克隆技术,将目的基因NGN3从pEGFP-N1-NGN3质粒上切下连到pShuttle-GFP-CMV上,替换GFP,得到pShuttle-CMV-NGN3;再将PAX4从pEGFP-N1-PAX4质粒上切下连到系统pShuttle-CMV-NGN3上,得到pShuttle-CMV-NGN3/CMV-PAX4穿梭质粒;最后将CMV-NGN3/CMV-PAX4从pShuttle-CMV-NGN3/CMV-PAX4转移到ADxsi骨架载体上,得到pADxsi-CMV-NGN3/CMV-PAX4病毒质粒,然后在293细胞中进行包装与扩增活性病毒,并进行病毒滴度测定。体外感染人脐带间充质干细胞。逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)与免疫印迹(Western blotting)检测目的基因在细胞内的表达情况,免疫细胞化学与间接荧光法检测目的分子在细胞内的定位。结果:酶切鉴定和PCR证明重组人NGN3与PAX4双基因表达腺病毒载体构建正确;RT-PCR与Western blotting结果显示目的基因在细胞持续稳定表达;间接荧光与免疫化学表明重组腺病毒可高效感染人脐带间充质干细胞,且目的基因特异性地定位于细胞核内。结论:应用重组技术成功构建人NGN3与PAX4双基因表达腺病毒载体,且在间充质干细胞内持续而稳定表达。

关键词：腺病毒神经元素3(NGN3) 成对盒基因4(PAX4) 间充质干细胞(MCS)

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虫媒黄病毒亚基因组RNA

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生命的化学 2010年第2期30卷 227-230页

作者：岳磊刘然江振友秦成峰军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 暨南大学医学院微生物与免疫学教研室广州510632

黄病毒是一大科人类致病性的单股正链RNA病毒。黄病毒包括登革病毒、西尼罗脑炎病毒及日本脑炎病毒等成员,主要径通过节肢动物的叮咬进行传播,即为虫媒黄病毒。研究发现,在虫媒黄病毒复制过程中,除病毒基因组正链RNA、互补的负链RNA及... 详细信息

黄病毒是一大科人类致病性的单股正链RNA病毒。黄病毒包括登革病毒、西尼罗脑炎病毒及日本脑炎病毒等成员,主要径通过节肢动物的叮咬进行传播,即为虫媒黄病毒。研究发现,在虫媒黄病毒复制过程中,除病毒基因组正链RNA、互补的负链RNA及两者的杂合RNA分子外,在病毒感染细胞后还能产生一种病毒亚基因组RNA(subgenomic RNA,sgRNA)。近年对这种sgRNA展开了比较多的研究,结果表明,其产生机制与已知的其他病毒sgRNA产生机制并不相同。该sgRNA的产生与虫媒黄病毒基因组3’非编码区所形成的保守二级结构有关,同时宿主核酸酶对其的不完全降解亦有重要作用。虫媒黄病毒基因组3’非编码区中带有多个与病毒复制相关的RNA元件,而sgRNA的发现有助于全面地认识病毒RNA与宿主RNA代谢途径间的相互作用,为最终阐明病毒的致病机制奠定基础。

关键词：虫媒黄病毒非编码区亚基因组RNA

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姜黄素对IL-6损伤的大鼠海马神经元的功能性保护作用及机制

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2010年第4期31卷 352-356页

作者：谢赛董军余启贵黄涛付咏梅暨南大学医学院病理生理学教研室广东广州510632 美国印第安纳大学医学院微生物和免疫学系美国印第安纳州46202

目的:探讨姜黄素对IL-6损伤的大鼠海马神经元的功能性保护作用及其机制。方法:应用离体脑片记录技术,记录大鼠海马CA1区的兴奋性突触后电位(EPSP),给予Schaffer侧支高频电刺激(HFS)诱发长时程增强(LTP),观察不同药物处理组EPSP起始斜率... 详细信息

目的:探讨姜黄素对IL-6损伤的大鼠海马神经元的功能性保护作用及其机制。方法:应用离体脑片记录技术,记录大鼠海马CA1区的兴奋性突触后电位(EPSP),给予Schaffer侧支高频电刺激(HFS)诱发长时程增强(LTP),观察不同药物处理组EPSP起始斜率的变化情况。结果:与对照组相比,IL-6和N-甲基D-天冬氨酸(NM-DA)对大鼠海马脑片的LTP产生明显的抑制作用(P<0.05);而姜黄素可部分拮抗IL-6和NMDA对海马脑片LTP的抑制作用,与模型组相比差异有统计学意义(P<0.05);IL-6、姜黄素和NMDA对大鼠海马神经元的基础突触传递无影响。结论:姜黄素对海马神经元具有功能性保护作用,其机制可能是作用于神经元细胞膜上的NMDA受体,拮抗IL-6引起神经元功能异常。

关键词： HIV-1相关痴呆(HAD) 姜黄素白介素6(IL-6) 长时程增强(LTP) N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)

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臭灵丹中HTMF诱导Hep-2细胞凋亡

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2010年第4期31卷 369-373页

作者：曹长姝沈伟哉李药兰王辉暨南大学医学院解剖学教研室广东广州510632 暨南大学药学院中药及天然产物研究所广东广州510632 暨南大学中药药效物质基础及创新药物研究广东省重点实验室广东广州510632 暨南大学医学院微生物学及免疫学教研室广东广州510632

目的:探讨中药臭灵丹中3,5-二羟基-6,7,3′,4′-四甲氧基黄酮(HTMF)诱导人喉癌Hep-2细胞凋亡的机制。方法:倒置显微镜观察细胞形态变化,Hoechst 33258染色,观察对Hep-2细胞的致凋亡能力;流式细胞仪检测HTMF对Hep-2细胞的凋亡率和线粒体... 详细信息

目的:探讨中药臭灵丹中3,5-二羟基-6,7,3′,4′-四甲氧基黄酮(HTMF)诱导人喉癌Hep-2细胞凋亡的机制。方法:倒置显微镜观察细胞形态变化,Hoechst 33258染色,观察对Hep-2细胞的致凋亡能力;流式细胞仪检测HTMF对Hep-2细胞的凋亡率和线粒体跨膜电位(Δφm)的改变;Western blotting法检测凋亡蛋白caspase-3和caspase-9的变化。结果:倒置显微镜下Hep-2细胞随HTMF浓度加大而变小变圆,细胞存活数随浓度增加而减少。Hoechst 33258染色后高浓度组Hep-2细胞核固缩并出现呈致密浓染蓝白色颗粒状荧光的凋亡小体。流式结果显示HTMF对Hep-2细胞有促凋亡作用并呈明显的量效关系,线粒体跨膜电位(Δφm)随HTMF浓度的增加而下降。Western blotting结果显示HTMF可诱导Hep-2细胞中caspase-3和caspase-9蛋白活化,并呈浓度依赖性关系。结论:HTMF可通过线粒体途径诱导人喉癌Hep-2细胞凋亡。

关键词：细胞凋亡半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9 3,5-二羟基-6,7,3′,4′-四甲氧基黄酮(HTMF)

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臭灵丹中黄酮类化合物对人喉癌细胞Hep-2凋亡的影响及机制

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中国病理生理杂志 2010年第7期26卷 1362-1365页

作者：曹长姝沈伟哉李药兰王辉暨南大学医学院解剖学系广东广州510632 暨南大学药学院中药及天然产物研究所广东广州510632 暨南大学中药药效物质基础及创新药物研究广东省重点实验室广东广州510632 暨南大学医学院微生物及免疫学系广东广州510632

目的:探讨中药臭灵丹中黄酮类化合物诱导人喉癌细胞Hep-2凋亡的机制。方法:MTT法检测分离自臭灵丹的黄酮类化合物3,5-二羟基-6,7,3',4'-四甲氧基黄酮(HTMF)对2种正常细胞的毒性和对3种肿瘤细胞株的增殖抑制作用;采用流式细胞仪... 详细信息

目的:探讨中药臭灵丹中黄酮类化合物诱导人喉癌细胞Hep-2凋亡的机制。方法:MTT法检测分离自臭灵丹的黄酮类化合物3,5-二羟基-6,7,3',4'-四甲氧基黄酮(HTMF)对2种正常细胞的毒性和对3种肿瘤细胞株的增殖抑制作用;采用流式细胞仪检测化合物对Hep-2细胞凋亡率的影响;Western blotting法检测凋亡蛋白caspase-3和caspase-9的变化。结果:HTMF显著抑制Hep-2细胞的增殖并呈浓度、时间双重依赖性关系,但对正常细胞Vero和EVC304的毒性较小,对A549和HepG2细胞抑制作用小。流式细胞仪检测结果显示HTMF对Hep-2细胞有促凋亡作用并呈明显的量效、时效关系。Western blotting结果显示HTMF可诱导Hep-2细胞中caspase-3和caspase-9蛋白的活化,并呈时间依赖性关系。结论:HTMF对人喉癌细胞Hep-2的生长有显著的抑制作用,其机制可能通过激活caspase-9进而活化caspase-3诱导Hep-2细胞凋亡。

关键词：黄酮类化合物 Hep-2细胞细胞凋亡半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9

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