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中国药理学通报 2013年第6期29卷 802-808页

作者：王睿朱玮玮林熙孙燕暨南大学医学院药理学系　　广东广州　　（510632）中山大学中山医学院药理学教研室　　广东广州　　（510080）

目的从蝰蛇（缅甸亚种）毒分离纯化一种促凝-纤溶双相活性组分FⅥbb，并研究其理化性质和生物活性。方法应用CM-SephadexC-50阳离子交换层析SephadexG-150（超细）凝胶过滤层析ChelatingSepharoseFastFlow金属离子螯合亲和层析分离纯化... 详细信息

目的从蝰蛇（缅甸亚种）毒分离纯化一种促凝-纤溶双相活性组分FⅥbb，并研究其理化性质和生物活性。方法应用CM-SephadexC-50阳离子交换层析SephadexG-150（超细）凝胶过滤层析ChelatingSepharoseFastFlow金属离子螯合亲和层析分离纯化蛇毒，反相HPLC检测组分FVIbb纯度，采用MALDI质谱测定法测定分子量，以发色底物法、纤维平板法和SDS-PAGE测定FⅥbb的酶学特征和生物活性。结果从蝰蛇（缅甸亚种）毒分离得到的促凝-纤溶双相活性组分FⅥbb为单体蛋白，相对分子质量为59138，最适温度为40℃，最适pH为10．0，为金属蛋白酶。结论应用CM-SephadexC-50阳离子交换层析和ChelatingSepha-roseFastFlow金属离子螯合亲和层析等方法可以从蝰蛇（缅甸亚种）毒纯化出促凝一纤溶双相活性组分FⅥbb，具有促凝一纤溶双相活性。

关键词：蝰蛇 FⅥbb促凝活性纤溶活性金属蛋白酶蛋白分离

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猴骨髓间充质干细胞体外诱导分化为脂肪细胞的实验探讨

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临床与实验病理学杂志 2013年第6期29卷 658-661页

作者：刘晓刚邓宇斌赵晓娟蔡辉王丽宁张新鹏北京市垂杨柳医院病理科北京100022 中山大学医学院病理学与病理生理学教研室广州510080 北京航天总医院眼科北京100076

目的体外定向诱导猴骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenhymal stem cells,BMSCs)分化为脂肪细胞。方法抽取2～3岁龄雄性恒河猴髂骨骨髓,应用密度梯度离心法提取单核细胞层进行贴壁培养,获取原代(P0)猴BMSCs后进行传代培养,并进行多向... 详细信息

目的体外定向诱导猴骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenhymal stem cells,BMSCs)分化为脂肪细胞。方法抽取2～3岁龄雄性恒河猴髂骨骨髓,应用密度梯度离心法提取单核细胞层进行贴壁培养,获取原代(P0)猴BMSCs后进行传代培养,并进行多向分化能力鉴定。分别取第3代(P3)、第5代(P5)、第8代(P8)猴BMSCs,实验组加入脂肪细胞诱导分化培养液,对照组加入常规培养液。倒置相差显微镜下观察细胞形态变化,诱导3周后行油红O染色,计算脂肪细胞分化率,并比较不同代次之间脂肪细胞分化率之间的差异。结果实验抽取的猴骨髓单核细胞具有成脂及成骨分化能力,从而表明其为多能性干细胞。成脂诱导分化培养后第5天,实验组即可观察到少数细胞胞质内出现脂滴,随后胞质内脂滴数量、大小及含脂滴细胞数量逐渐增加,约3周时达到高峰,随后诱导细胞迅速出现死亡;油红O染色示脂滴呈橙红色;脂肪细胞分化率:P3(48.3±10.0)%,P5(58.7±5.3)%,P8(68.1±5.5)%,差异有统计学意义(P<0.05)。对照组未见脂滴形成,油红O染色呈阴性。结论脂肪细胞诱导分化培养液可以在体外将猴BMSCs定向诱导分化为脂肪细胞,脂肪细胞分化率随着传代次数增加而增加。

关键词：骨髓间充质干细胞诱导分化脂肪细胞猴

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虎杖苷对严重烫伤大鼠心肌细胞钙信号调控的作用

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心脏杂志 2013年第6期25卷 639-643页

作者：邓建新蓝莉芹张翠翠丁文文薛翔刘文娟南方医科大学病理生理学教研室广东省医学休克微循环重点实验室广东广州510515 深圳大学医学院病理生理学教研室广东深圳518060

目的:观察虎杖苷(polydatin,PD)对烫伤大鼠心功能损害的钙信号调控,并探讨其对烫伤大鼠心肌细胞保护作用的机制。方法:28只成年SD大鼠随机分为4组,即假手术组、烫伤组、PD组及烫伤+PD组,每组7只大鼠(n=7)。各实验组使用Power lab系统进... 详细信息

目的:观察虎杖苷(polydatin,PD)对烫伤大鼠心功能损害的钙信号调控,并探讨其对烫伤大鼠心肌细胞保护作用的机制。方法:28只成年SD大鼠随机分为4组,即假手术组、烫伤组、PD组及烫伤+PD组,每组7只大鼠(n=7)。各实验组使用Power lab系统进行实时心功能监测。手术后5 min通过静脉给予PD(10 mg/kg),12 h后分离心室肌细胞,通过激光共聚焦显微镜观测PD对烫伤大鼠心室肌细胞钙火花发放频率、钙库水平、钙瞬变的作用。结果:与烫伤组比较,烫伤+PD组大鼠左室收缩压、左心室内压力上升的最大速率(±dP/dt max)均显著增加、钙瞬变和心肌收缩力明显增强、使烫伤引起的钙库容量下降基本恢复到正常水平,烫伤引起的高频钙火花发放显著抑制(均P<0.01),钙火花时程的增加也明显抑制(P<0.05)。结论:PD可以显著抑制烫伤引起的心肌细胞肌浆网钙漏流,恢复肌浆网钙库容量水平,增强收缩期钙瞬变和心肌收缩力,从而改善烫伤引起的心功能障碍。

关键词：虎杖苷烫伤心肌细胞钙信号大鼠

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胶质瘤细胞维甲酸代谢调控机制及其对细胞增殖的影响

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中国病理生理杂志 2012年第1期28卷 59-64页

作者：张继君谢思明林琛莅翁泽平杜展王超钟雪云暨南大学医学院病理生理学教研室广东广州510632

目的:探讨胶质瘤细胞中的维甲酸合成调控机制,以及维甲酸对人脑胶质瘤细胞SWO-Z2的增殖抑制作用及可能的机制。方法:运用小分子RNA干扰Krüppel样转录因子9(KLF9);Real-time PCR和Westernblotting检测KLF9基因RNAi沉默效率。KLF9基... 详细信息

目的:探讨胶质瘤细胞中的维甲酸合成调控机制,以及维甲酸对人脑胶质瘤细胞SWO-Z2的增殖抑制作用及可能的机制。方法:运用小分子RNA干扰Krüppel样转录因子9(KLF9);Real-time PCR和Westernblotting检测KLF9基因RNAi沉默效率。KLF9基因干扰后,运用Western blotting检测醛脱氢酶1家族成员A1(AL-DH1A1)蛋白表达的变化。应用CCK-8法从3种类型维甲酸药物(13-顺维甲酸、9-顺维甲酸和全反式维甲酸分别简称13-cis RA、9-cis RA和ATRA)中筛选出对SWO-Z2细胞活性抑制作用最强的药物。Western blotting检测不同浓度ATRA作用SWO-Z2细胞后增殖相关蛋白cyclin D1、Bcl-2、cleaved PARP以及胶质瘤分化标记物GFAP的表达情况。Real-time PCR检测SWO-Z2细胞的维甲酸受体表达情况。结果:小分子RNA干扰KLF9基因后,成功下调KLF9表达,引起ALDH1A1 mRNA和蛋白表达都下降。3种类型维甲酸中ATRA对SWO-Z2细胞的增殖活性抑制作用最强。ATRA作用SWO-Z2细胞72 h后cleaved PARP蛋白激活,cyclin D1和Bcl-2表达水平下降,而GFAP表达没有改变。SWO-Z2细胞维甲酸受体(RARs)表达降低。结论:KLF9作为ALDH1A1基因的上游调控基因,通过正调控ALDH1A1基因的表达促进胶质瘤细胞中的维甲酸合成;ATRA处理SWO-Z2细胞后未能促进胶质瘤分化而是明显抑制肿瘤细胞增殖能力,可能是由于胶质瘤细胞内缺乏维甲酸受体所致。

关键词： Krüpple样转录因子9 全反式维甲酸受体,维甲酸醛脱氢酶1家族成员A1 细胞分化

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利福平对LPS刺激BV2小胶质细胞炎症因子释放的影响

利福平对LPS刺激BV2小胶质细胞炎症因子释放的影响

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2013第二届中国老年医学和老年健康产业大会

作者：毕伟朱丽红井秀娜梁嫣然曾志芬陶恩祥中山大学孙逸仙纪念医院老年医学中心老年神经科暨南大学医学院病理生理学教研室暨南大学附属第一医院神经内科中山大学孙逸仙纪念医院老年医学中心老年神经科

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D-半乳糖亚急性衰老大鼠模型的建立及评价

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中国老年学杂志 2012年第4期32卷 742-745页

作者：张常娥魏伟刘英华谢静广州医学院病理生理学教研室广东广州510182 广州医学院药理学教研室暨南大学医学院病理生理学教研室华中科技大学同济医学院附属协和医院耳鼻喉科

目的建立D-半乳糖致大鼠亚急性衰老模型,对该模型进行探讨和评价。方法健康青年SD大鼠共60只,雌雄各半。分别分为2组,半乳糖组大鼠皮下每天注射半乳糖400 mg/kg,对照组每天注射等量生理盐水;老年鼠20只,雌雄各半,不做处理。实验开始后,... 详细信息

目的建立D-半乳糖致大鼠亚急性衰老模型,对该模型进行探讨和评价。方法健康青年SD大鼠共60只,雌雄各半。分别分为2组,半乳糖组大鼠皮下每天注射半乳糖400 mg/kg,对照组每天注射等量生理盐水;老年鼠20只,雌雄各半,不做处理。实验开始后,每周记录体重变化情况,第7周末测试大鼠空间学习能力,第8周末测试大鼠空间记忆能力,计算大鼠胸腺、脾脏、睾丸和卵巢的脏器系数,测定血清超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量。结果半乳糖注射4 w后,雄性大鼠的体重比对照组显著性降低(P<0.05),注射6 w后,体重差异非常显著性降低(P<0.01);半乳糖组雌雄大鼠的空间学习能力和记忆能力较对照组显著性降低(P<0.05),听力阈值显著增加(P<0.05),胸腺指数非常显著性降低(P<0.01),雄性大鼠睾丸系数显著性降低(P<0.05),血清SOD活性显著性降低(P<0.05),MDA含量显著性增高(P<0.05);其余实验结果组间比较差异没有显著性(P>0.05)。结论 D-半乳糖皮下注射8 w可以复制出与24月龄老年大鼠自然衰老程度相似的亚急性衰老模型,雄性大鼠优于雌性大鼠。

关键词： D-半乳糖亚急性衰老模型大鼠

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疏肝健脾方对NASH大鼠肝组织IKKβmRNA和蛋白表达的影响

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中国病理生理杂志 2012年第8期28卷 1448-1454页

作者：魏波杨钦河王文晶胡巢凤方梅霞刑会杰张玉佩程少冰王彦平冯高飞何秀敏徐拥建闫海震黄进暨南大学医学院中医系暨南大学医学院病理生理学教研室国家中医药管理局病理生理三级实验室暨南大学医学院实验动物管理中心广东广州510632

目的:探讨疏肝健脾方对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠肝组织核因子κB(NF-κB)抑制蛋白激酶β(IKKβ)mRNA和蛋白表达的影响。方法:采用高脂饲料喂养建立NASH大鼠实验模型,在施以造模因素的同时各药物干预组大鼠分别灌服疏肝方(柴胡疏肝... 详细信息

目的:探讨疏肝健脾方对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠肝组织核因子κB(NF-κB)抑制蛋白激酶β(IKKβ)mRNA和蛋白表达的影响。方法:采用高脂饲料喂养建立NASH大鼠实验模型,在施以造模因素的同时各药物干预组大鼠分别灌服疏肝方(柴胡疏肝散)、健脾方(参苓白术散)和综合方(柴胡疏肝散和参苓白术散的合方)的高、低剂量进行干预,16周后各组大鼠腹主动脉采血,全自动生化分析仪检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及肝组织TC、TG的含量;ELISA检测血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)及白细胞介素1(IL-1)的水平;HE染色观察肝组织病理变化;实时荧光定量RT-PCR检测肝组织IKKβmRNA的表达水平;Western blotting检测肝组织IKKβ蛋白磷酸化水平的变化。结果:肝组织病理染色提示大鼠NASH造模成功,与正常组比较,模型组大鼠血清TC、LDL-C、肝组织TC、TG及炎症细胞因子TNF-α、IL-1、IL-6水平均显著升高(P<0.01,P<0.05),肝组织IKKβmRNA及其磷酸化蛋白的表达水平均明显升高(P<0.01)。与模型组相比,肝组织TC、TG含量及血清TNF-α的含量以综合方高、低剂量组、健脾方高剂量组及疏肝方高剂量组下降显著(P<0.01,P<0.05);IL-1和IL-6含量均以综合方高剂量组降低显著(P<0.05),IKKβmRNA的表达水平以综合方高组及健脾方高组下调明显(P<0.05),磷酸化IKKβ蛋白的表达水平以健脾方高剂量组及综合方高、低剂量组下降最为显著(P<0.01,P<0.05)。结论:血清炎症细胞因子TNF-α、IL-1和IL-6水平的显著升高、肝组织IKKβmRNA及其磷酸化蛋白的高表达可能参与NASH的发病。降低相关炎症细胞因子的含量、抑制IKKβmRNA及蛋白磷酸化可能是疏肝健脾方抗NASH的重要机制之一。

关键词：非酒精性脂肪性肝炎疏肝健脾方 IκB激酶大鼠

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丹参酮联合克拉霉素治疗鼻咽癌放疗后鼻-鼻窦及咽部损伤

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南方医科大学学报 2012年第8期32卷 1168-1170,1178页

作者：李辉王华东马玉坤赵建夫暨南大学第一附属医院耳鼻咽喉科广东广州510630 暨南大学医学院病理生理学教研室广东广州510630 暨南大学第一附属医院肿瘤科广东广州510630

目的观察丹参酮与克拉霉素联合用药对鼻咽癌放疗后鼻-鼻窦及咽部损伤的治疗效果,以探索鼻咽癌放疗后鼻-鼻窦及咽部损伤的最佳治疗方案。方法将255例中放疗后出现鼻-鼻窦及咽部损伤的鼻咽癌患者,按发生时间顺序随机分为克拉霉素组(A组)... 详细信息

目的观察丹参酮与克拉霉素联合用药对鼻咽癌放疗后鼻-鼻窦及咽部损伤的治疗效果,以探索鼻咽癌放疗后鼻-鼻窦及咽部损伤的最佳治疗方案。方法将255例中放疗后出现鼻-鼻窦及咽部损伤的鼻咽癌患者,按发生时间顺序随机分为克拉霉素组(A组)丹参酮组(B组)以及克拉霉素+丹参酮联合用药组(C组),观察各组的治疗预后情况。结果 A、B、C 3组均有治疗效果,与治疗前比较差异具有统计学意义(P<0.05);A组与B组之间疗效差异不明显(P>0.05);而C组的疗效明显好于A组和B组(P<0.05)。结论多元化治疗是鼻咽癌放疗后鼻窦及咽部损伤治疗的趋势,克拉霉素+丹参酮联合用药是治疗鼻咽癌放疗后鼻窦及咽部损伤非常有效的手段和方法。

关键词：鼻咽癌放射损伤丹参酮克拉霉素

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眼皮肤白化病近亲婚配一家系的MATP基因致病性新突变

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中华医学杂志 2012年第4期92卷 254-258页

作者：徐蓓逢婷张丽芸蒋玮莹李洪义郑辉中山大学中山医学院医学遗传学研究室广州510080 暨南大学医学院生理学系

目的对1例近亲婚配所致的眼皮肤白化病（OCA）患者相关基因进行研究,确定致病基因并阐明突变类型.方法应用聚合酶链反应、DNA序列测定、基于PCR的染色体步移技术（PCR-Walking）、横跨越断裂点的单管多重PCR（Gap-PCR）和生物信息学... 详细信息

目的对1例近亲婚配所致的眼皮肤白化病（OCA）患者相关基因进行研究,确定致病基因并阐明突变类型.方法应用聚合酶链反应、DNA序列测定、基于PCR的染色体步移技术（PCR-Walking）、横跨越断裂点的单管多重PCR（Gap-PCR）和生物信息学分析方法,对患者家系进行突变筛查和新突变鉴定.结果患者膜相关转运蛋白（MATP）基因存在包含整个外显子3在内的6365 bp大片段缺失,缺失范围为c.562-1118（±2）_c.885＋ 4923（±2）.该突变为OCA4型致病性突变,患者基因型为该缺失突变纯合子.结论首次发现并确定了一种OCA4型大片段缺失突变.

关键词：白化病,眼皮肤突变 MATP基因

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iNOS-GC-cGMP信号活化参与了内毒素血症大鼠血管低反应性的发生机制

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中国病理生理杂志 2012年第6期28卷 1076-1081页

作者：王海华闵志雪戚仁斌张根葆包鹏举胡钱国孙瑶皖南医学院生理教研室安徽芜湖241002 皖南医学院蛇毒研究所安徽芜湖241002 暨南大学医学院病理生理教研室广东广州510632

目的:探讨诱导型一氧化氮合酶(iNOS)-鸟苷酸环化酶(GC)-环磷酸鸟苷(cGMP)信号活化在内毒素血症大鼠血管低反应中的作用。方法:采用腹腔注射脂多糖(LPS)诱导大鼠内毒素血症模型,24只SD大鼠随机分为假手术组(sham组)、内毒素血症组(LPS组... 详细信息

目的:探讨诱导型一氧化氮合酶(iNOS)-鸟苷酸环化酶(GC)-环磷酸鸟苷(cGMP)信号活化在内毒素血症大鼠血管低反应中的作用。方法:采用腹腔注射脂多糖(LPS)诱导大鼠内毒素血症模型,24只SD大鼠随机分为假手术组(sham组)、内毒素血症组(LPS组)、内毒素血症+多黏菌素B组(LPS+PMX-B组)和多黏菌素B组(PMX-B组)。颈总动脉插管记录大鼠平均动脉血压(MABP);检测各组大鼠血清中NO、iNOS和TNF-α的水平;用离体血管灌流方法,生物信号处理系统测定大鼠胸主动脉环的张力。结果:与sham组相比,LPS组大鼠MABP显著降低(P<0.01),LPS+PMX-B组大鼠明显高于LPS组(P<0.05),而PMX-B组与sham组比无统计学意义(P>0.05);生化检测发现LPS组大鼠血浆中NO、iNOS以及TNF-α水平显著高于sham组和LPS+PMX-B组(P<0.01)。同sham组相比,LPS组大鼠离体胸主动脉环对去氧肾上腺素(Phe)刺激的收缩反应及其对乙酰胆碱(ACh)的舒张反应均明显低下(P<0.01);与LPS组相比,LPS+PMX-B组的反应明显改善(P<0.01);氨基胍(AMG)预处理后,同sham组和PMX-B组相比,LPS组与LPS+PMX-B大鼠离体胸主动脉环对Phe(10-7～10-5mol.L-1)诱导下的各组血管环的收缩反应明显改善(P<0.05或P<0.01);亚甲蓝(MB)预处理后,同sham组和PMX-B组相比,LPS组与LPS+PMX-B组大鼠离体胸主动脉环对Phe(10-7～10-5mol.L-1)诱导下的各组血管环的收缩反应均得到改善(P<0.05或P<0.01);PMX-B组与sham组比差异无统计学意义(P>0.05)。结论:iNOS-GC-cGMP信号活化参与了内毒素血症大鼠血管低反应性;多黏菌素B改善内毒素血症大鼠血管低反应性,可能与中和内毒素、减少炎症因子释放、抑制iNOS-GC-cGMP信号活化有关。

关键词：内毒素血症脂多糖类胸主动脉一氧化氮合酶多黏菌素B

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