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骨髓间充质干细胞在CD4^+CD25^+调节性T细胞减轻大鼠移植物抗宿主反应中的作用

中国实验血液学杂志 2006年第6期14卷 1210-1214页

作者：田莹邓宇斌黄奕俊那晓东李艳叶美红中山大学医学院病理生理学教研室广州510080 中山大学医学院药理学教研室广州510080

本研究探讨间充质干细胞(MSC)对GVHD的作用及其机制。建立大鼠同种异体骨髓移植模型,同时输入供者的T淋巴细胞诱导出移植物抗宿主反应,联合或不联合移植供体来源的MSC,观察受鼠的GVHD的发生情况;利用双荧光标记抗体标记受鼠脾脏和胸腺... 详细信息

本研究探讨间充质干细胞(MSC)对GVHD的作用及其机制。建立大鼠同种异体骨髓移植模型,同时输入供者的T淋巴细胞诱导出移植物抗宿主反应,联合或不联合移植供体来源的MSC,观察受鼠的GVHD的发生情况;利用双荧光标记抗体标记受鼠脾脏和胸腺单个淋巴细胞,通过流式细胞术分析CD4+CD25+调节性T细胞亚群比例的变化,分析MSC的作用机制。结果显示实验组的GVHD的发生程度减轻,存活率提高,而CD4/CD8比值在GVHD组出现不同程度的减少,CD4+CD25+调节性T细胞在实验组中的脾淋巴细胞和胸腺淋巴细胞的比例分别为31.55±7.58%、93.20±2.69%,在GVHD组中的比例分别为20.90±1.90%、57.17±6.79%,实验组中CD4+CD25+调节性T细胞比例比GVHD组中增多,具有显著性差异。结论MSC能有效抑制HSC移植后致死性GVHD的发生,提高生存率,同时MSC可能通过作用于体内调节性T淋巴细胞而间接发挥了抑制GVHD的作用。

关键词：骨髓间充质干细胞造血干细胞移植同种异体造血干细胞移植移植物抗宿主病 CD4^+CD25^+调节性 T细胞

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NF-κB结合位点在NOD2基因调控中的作用

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中华微生物学和免疫学杂志 2008年第7期28卷 606-609页

作者：孙丽萍胡巢凤张吉凯暨南大学医学院病理生理学教研室、发热研究室广州510632 广东省疾病预防控制中心免疫规划所

目的探讨NF-κB结合位点在NOD2基因调控中的作用。方法以人基因组DNA为模板，PCR扩增含有NF-κB结合位点的人NOD2基因启动子序列，以切除启动子的pEGFP-N3作为框架结构，将这段序列进行酶切并定向克隆人表达载体pEGFP-N3中，构建含有NF-... 详细信息

目的探讨NF-κB结合位点在NOD2基因调控中的作用。方法以人基因组DNA为模板，PCR扩增含有NF-κB结合位点的人NOD2基因启动子序列，以切除启动子的pEGFP-N3作为框架结构，将这段序列进行酶切并定向克隆人表达载体pEGFP-N3中，构建含有NF-κB结合位点的人NOD2基因启动子驱动的绿色荧光蛋白（GFP）载体，将构建的重组质粒经脂质体LipofectAMINE^TM 2000介导瞬时转染HeLa细胞，在倒置荧光显微镜下观察其能否在NOD2基因启动子的调控下表达报告基因GFP。用突变试剂盒将重组质粒pEGFP-N3-NOD2wt中的NF-κB结合位点缺失突变，将构建的突变重组质粒mpEGFP-N3-NOD2瞬时转染HeLa细胞，观察绿色荧光蛋白的表达情况。结果pEGFP-N3-NOD2wt和mpEGFP-N3-NOD2经酶切鉴定和序列测定证实重组质粒构建成功，并且NF-κB结合位点突变成功。细胞转染结果表明，构建的重组质粒pEGFP-N3-NOD2wt转染HeLa细胞，在倒置荧光显微镜下能看到绿色荧光，而突变质粒mpEGFP-N3-NOD2荧光强度明显减弱，与未转染质粒相近。结论成功构建了含有NF-κB结合位点的人NOD2基因启动子的重组质粒和含有NF-κB结合位点缺失突变的重组质粒；NF-κB结合位点突变重组质粒在HeLa细胞中绿色荧光表达明显减弱，说明NF-κB结合位点在NOD2基因调控中发挥了正调节作用；为进一步研究NOD2基因表达及调控机制奠定了良好的基础。

关键词： NOD2启动区 NF-κB结合位点基因调控缺失突变

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叶酸和维生素B_(12)减轻高同型半胱氨酸血症诱导的老年大鼠阿尔茨海默样病变

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中国病理生理杂志 2012年第8期28卷 1436-1440页

作者：魏伟陆大祥戚仁斌王达安暨南大学医学院病理生理教研室国家中医药管理局病理生理学三级科研实验室广东广州510632

目的:探讨慢性高同型半胱氨酸血症对老年大鼠脑内tau蛋白结构和功能的影响以及其可能机制。方法:选取18月龄健康大鼠,尾静脉注射同型半胱氨酸(Hcy)生理盐水溶液(1.6 ***-1·d-1)制造高同型半胱氨酸血症模型组,在给予Hcy的同时通过... 详细信息

目的:探讨慢性高同型半胱氨酸血症对老年大鼠脑内tau蛋白结构和功能的影响以及其可能机制。方法:选取18月龄健康大鼠,尾静脉注射同型半胱氨酸(Hcy)生理盐水溶液(1.6 ***-1·d-1)制造高同型半胱氨酸血症模型组,在给予Hcy的同时通过饮用水给予叶酸(4 mg·kg-1·d-1)和维生素B12(Vit B12,***-1·d-1)作为治疗组,单纯注射生理盐水作为对照组,持续28周,Bielschowsky银染观察磷酸化tau蛋白的分布和聚集;Western blotting检测磷酸化tau蛋白、糖原合酶激酶3β(GSK-3β)和蛋白磷酸酶2A(PP2A)的表达。结果:(1)血浆中Hcy水平增高导致神经原纤维样缠结;给予叶酸和Vit B12能够有效减轻缠结;(2)血浆高Hcy水平诱导老年大鼠脑内tau蛋白在Ser199/202和Ser396位点磷酸化水平升高;(3)血浆高Hcy水平激活GSK-3β同时抑制PP2A的活性。补充叶酸和Vit B12有效地缓解了这些激酶和酯酶的活性改变,并下调了tau蛋白Ser199/202和Ser396位点的磷酸化水平。结论:补充叶酸和Vit B12能够有效改善高同型半胱氨酸血症所诱导的tau蛋白阿尔茨海默样病理改变,其机制可能与其抑制GSK-3β活性和激活PP2A有关。

关键词：老年大鼠 Tau蛋白叶酸维生素B12 阿尔茨海默病

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NALP3富含亮氨酸重复序列结构域识别人细胞周期蛋白H和禽冠状病毒蛋白

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中国病理生理杂志 2013年第1期29卷 121-127页

作者：颜亮罗滔蔡军伟毕志斐胡巢凤暨南大学医学院病理生理学教研室国家中医药管理局病理生理学实验室广东广州510632 南方医科大学病理生理学教研室广东广州510515 山西医科大学人体解剖学教研室山西太原030001

目的:寻找与NALP3富含亮氨酸重复序列(leucine-rich repeat,LRR)结构域相互作用的蛋白质分子。方法:克隆NALP3富含亮氨酸重复序列(NALP3-LRR)结构域的DNA序列并经测序检验。应用酵母双杂交技术,构建以NALP3-LRR结构域为诱饵基因的酵母... 详细信息

目的:寻找与NALP3富含亮氨酸重复序列(leucine-rich repeat,LRR)结构域相互作用的蛋白质分子。方法:克隆NALP3富含亮氨酸重复序列(NALP3-LRR)结构域的DNA序列并经测序检验。应用酵母双杂交技术,构建以NALP3-LRR结构域为诱饵基因的酵母双杂交载体,对人胚肺cDNA文库进行杂交筛选,经酵母回交实验验证蛋白质在酵母细胞内的相互作用并对阳性克隆的DNA进行序列测定和生物信息学分析。将筛选到的阳性克隆进一步用免疫共沉淀实验验证NALP3-LRR结构域与阳性蛋白之间相互作用的可靠性。结果:成功克隆NALP3-LRR结构域的DNA序列并经测序检验正确。用酵母双杂交技术对人胚肺cDNA文库进行酵母杂交筛选共获得4个阳性克隆。免疫共沉淀实验证实能与NALP3-LRR结构域发生相互作用的阳性蛋白是人细胞周期蛋白H和禽传染性支气管炎病毒株Cal99的ORF1a。结论:NALP3的富含亮氨酸重复序列结构域能与人细胞周期蛋白H和禽冠状病毒蛋白发生相互作用。

关键词： NALP3蛋白富含亮氨酸重复序列人细胞周期蛋白H 禽传染性支气管炎病毒酵母双杂交系统

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谷氨酰胺对内毒素损伤的心肌的保护作用研究

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中国病理生理杂志 2003年第6期19卷 765-768页

作者：戚仁斌陆大祥王华东王海华胡巢凤屈洋杨会杰王彦平付咏梅李楚杰暨南大学医学院病理生理学教研室广东广州510632 皖南医学院心血管功能研究所安徽芜湖241001

目的 :研究谷氨酰胺对内毒素损伤的心肌的保护作用研究。方法 :取健康体重 (2 5 0± 30 )gSD雄性大鼠 2 2只随机分成 3组 ,正常对照组 (n =7) ,内毒素组 (n =7) ,谷氨酰胺 +内毒素组 (n =8) ,在Langendorff装置上用Krebs-Henseleit(... 详细信息

目的 :研究谷氨酰胺对内毒素损伤的心肌的保护作用研究。方法 :取健康体重 (2 5 0± 30 )gSD雄性大鼠 2 2只随机分成 3组 ,正常对照组 (n =7) ,内毒素组 (n =7) ,谷氨酰胺 +内毒素组 (n =8) ,在Langendorff装置上用Krebs-Henseleit(KH)液对大鼠离体心脏行主动脉逆灌。连续记录心肌细胞单相动作电位 (MAP)、心肌收缩张力曲线 ,在相应的时点分别测定冠脉流出液中的超氧化物歧化酶 (SOD)活性和丙二醛 (MDA)含量。结果 :谷氨酰胺组对内毒素损伤引起的心肌细胞单相动作电位幅度减小及D2 0 延长、心肌张力降低、心率变慢等变化有明显的改善作用 ,同时可以明显逆转内毒素诱导的心肌SOD活性降低和MDA含量升高。结论 :谷氨酰胺对内毒素损伤的心肌有明显的保护作用 ,有机会成为一个有效防治内毒素性心肌损伤的药物。

关键词：谷氨酰胺内毒素类心肌

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丝瓜络对小鼠心肌缺血性损伤的预防效应

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中国病理生理杂志 2006年第1期22卷 68-71页

作者：关颖李菁朱伟杰孙玲付咏梅暨南大学医学院病理生理学教研室广东广州510632 暨南大学生殖免疫研究中心广东广州510632 南方医院生殖中心广东广州510515

目的:探讨中药丝瓜络(RLF)对小鼠心肌缺血性损伤的防治作用。方法:预先给予昆明小鼠166.7,333.3,666.7g/L的丝瓜络煎剂0.01mL/g灌胃,每日2次,1周后腹腔注射垂体后叶素30U/kg诱发急性心肌缺血,观察心电图变化,检测血清乳酸脱氢酶(LDH)、... 详细信息

目的:探讨中药丝瓜络(RLF)对小鼠心肌缺血性损伤的防治作用。方法:预先给予昆明小鼠166.7,333.3,666.7g/L的丝瓜络煎剂0.01mL/g灌胃,每日2次,1周后腹腔注射垂体后叶素30U/kg诱发急性心肌缺血,观察心电图变化,检测血清乳酸脱氢酶(LDH)、心肌组织中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性的改变。结果:各种剂量RLF均能降低垂体后叶素所引起的小鼠心电图中T波增高幅度及抑制心率减慢;并显著降低心肌缺血后造成的血清LDH以及心肌组织内MDA含量的增高,增加心肌组织中SOD活性。结论:RLF对急性缺血心肌有明显的保护作用,其作用机制可能与抑制心肌脂质过氧化,增强其抗氧化能力有关。

关键词：心肌缺血丝瓜络抗氧化剂小鼠预防效应

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不同消化分离方法分离人羊膜间充质干细胞效果比较

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中国病理生理杂志 2010年第5期26卷 1033-1037页

作者：肖盼陈剑王彦平吴静郭娴吟杨筱曦刘小勇暨南大学附属第一医院眼科广东广州510632 暨南大学医学院病理生理学系广东广州510632 暨南大学医学院眼科研究室广东广州510632

目的:比较不同消化分离方法提取人羊膜间充质干细胞(HAMSCs)的分离效果,以供选择一种更有效的分离方法。方法:将新鲜羊膜组织分成4片6cm×6cm大小的组织块,采用4种不同方法进行消化分离:第1组:先刮除+胶原酶Ⅱ组;第2组:先刮除+胶原... 详细信息

目的:比较不同消化分离方法提取人羊膜间充质干细胞(HAMSCs)的分离效果,以供选择一种更有效的分离方法。方法:将新鲜羊膜组织分成4片6cm×6cm大小的组织块,采用4种不同方法进行消化分离:第1组:先刮除+胶原酶Ⅱ组;第2组:先刮除+胶原酶Ⅳ组;第3组:先剪碎+胶原酶Ⅱ组;第4组:先剪碎+胶原酶Ⅳ组。对这4组原代培养HAMSCs进行存活数、形态学观察比较,第3代HAMSCs抗原检测及成脂成骨诱导分化实验。结果:第1组和第2组的HAMSCs存活数高于第3组和第4组(P<0.05)。第1组和第2组的HAMSCs成份较第3组和第4组纯净,后2组夹杂着一些团状的人羊膜上皮细胞(HAECs)。抗原结果显示CD29、CD44、CD73、CD90、CD105表达阳性,CD31、CD34、CD45、HLA-DR表达阴性,Vimentin、SSEA-3、SSEA-4、OCT-4、telom-erase结果阳性。成脂成骨诱导分化实验成功。结论:通过先将人羊膜用胰蛋白酶+EDTA消化液消化后,再将HAECs刮除干净,然后剪碎再用胶原酶消化的改进方法对HAMSCs保护较好,较易提取,获取细胞量和纯度均较传统方法高。胶原酶Ⅱ和胶原酶Ⅳ2种消化酶对HAMSCs的提取影响不大。

关键词：羊膜间充质干细胞细胞分离

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P53结合位点对人NOD8基因的调控

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中国病理生理杂志 2011年第12期27卷 2362-2367页

作者：曾琪张芸田莉唐清亮胡巢凤柏志全暨南大学医学院病理生理学系国家中医药管理局重点实验室广东广州510632 暨南大学医学院生理学系广东广州510632

目的:探讨P53结合位点在NOD8基因调控中的作用。方法:利用生物信息学方法,我们发现人与黑猩猩的NOD8基因核心启动子区域相似位置含有P53结合位点;以人基因组DNA为模板,PCR扩增含有人NOD8基因序列,构建含有/缺失人P53结合位点的NOD8基因... 详细信息

目的:探讨P53结合位点在NOD8基因调控中的作用。方法:利用生物信息学方法,我们发现人与黑猩猩的NOD8基因核心启动子区域相似位置含有P53结合位点;以人基因组DNA为模板,PCR扩增含有人NOD8基因序列,构建含有/缺失人P53结合位点的NOD8基因启动子驱动的、表达绿色荧光蛋白-NOD8融合蛋白的质粒pNOD8(760 bp)-EGFP-NOD8和mpNOD8(750 bp)-EGFP-NOD8;将构建的重组质粒经阳离子聚合物JetPeiTM介导瞬时转染HEK293细胞中,并加入不同浓度的P53抑制剂pifithrin alpha(PFT-α)处理HEK293细胞,用RT-PCR和Westren blotting方法检测NOD8 mRNA和蛋白的表达;此外,用pNOD8(760 bp)-EGFP质粒转染HEK293细胞,利用染色质免疫共沉淀法(ChIP)观察P53是否与NOD8启动子结合。结果:经酶切鉴定和序列测定证实重组质粒构建成功。ChIP实验证实P53能与NOD8启动子结合。pNOD8(760 bp)-EGFP-NOD8转染组中NOD8 mRNA的表达显著高于pEGFP-C2转染组(P<0.05),并且NOD8 mRNA在缺失人P53结合位点的mpNOD8(750 bp)-EGFP-NOD8转染组中的表达明显降低(P<0.01);同时发现加入PFT-α的pNOD8(760bp)-EGFP-NOD8转染组NOD8 mRNA的表达显著下降,并呈剂量依赖关系,其中90μmol/L PFT-α对NOD8mRNA表达的抑制作用最为显著(P<0.01)。与mRNA检测结果一致的是pNOD8(760 bp)-EGFP-NOD8转染组NOD8蛋白的表达量显著高于对照组pEGFP-C2;而mpNOD8(750 bp)-EGFP-NOD8转染组NOD8蛋白的表达量明显低于pNOD8(760 bp)-EGFP-NOD8转染组和加入PFT-α的pNOD8(760 bp)-EGFP-NOD8转染组(P<0.01)。结论:P53结合位点在NOD8基因调控中起着重要的作用,并且P53结合位点与NOD8基因之间可能存在正反馈调节。

关键词：启动子基因,NOD8 P53结合位点核苷酸结合寡聚结构域样受体

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LPS促进HUVECs表达纤溶酶原激活物抑制物1

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中国病理生理杂志 2006年第4期22卷 687-691页

作者：唐小龙江振友王华东蔡淑玉暨南大学医学院微生物学与免疫学教研室广东广州510632 暨南大学医学院病理生理学教研室广东广州510632 安徽理工大学医学院安徽淮南232001

目的:观察LPS对脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)表达组织纤溶酶原激活物(tPA)和纤溶酶原激活物抑制物1(PAI-1)的影响。方法:用生长良好的第2、3代HUVECs进行试验。用cell counting kit-8(CCK-8)测定LPS刺激后细胞活性变化;发色底物法测定LP... 详细信息

目的:观察LPS对脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)表达组织纤溶酶原激活物(tPA)和纤溶酶原激活物抑制物1(PAI-1)的影响。方法:用生长良好的第2、3代HUVECs进行试验。用cell counting kit-8(CCK-8)测定LPS刺激后细胞活性变化;发色底物法测定LPS组和对照组培养液中tPA,PAI-1活性;RT-PCR检测细胞内tPA和PAI-1mRNA水平。结果:与对照组相比,LPS(10mg/L)对细胞活性没有明显差异。LPS诱导PAI-1活性在24-72h显著升高(P<0·05),且显著上调PAI-1mRNA,24h达到峰值,以后渐降,72h达到正常水平。而LPS组与对照组tPA活性与tPA mRNA无明显差异(P>0·05)。结论:LPS(10mg/L)可显著上调PAI-1mRNA转录和分泌而不影响tPAmRNA,结果提示LPS可活化内皮细胞,诱发PAI-1mRNA表达和蛋白分泌而抑制纤溶系统,这有利于微血栓的形成、血栓稳定,血液凝固和DIC发生。

关键词：脂多糖类组织型纤溶酶原激活物脐静脉血管内皮细胞

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N-乙酰半胱氨酸对肺心病患者血浆血管性血友病因子、丙二醛含量和超氧化物岐化酶活性的影响

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临床荟萃 2008年第7期23卷 490-491页

作者：林洪刘晓妍王达安程少冰暨南大学附属第一医院内科广东广州510632 暨南大学医学院病理生理学教研室广东广州510632 暨南大学医学院中医系广东广州510632

肺血管内皮细胞损伤及继而引起的血管活性因子失衡是慢性阻塞性肺病(COPD)造成肺动脉高压、并最终发展为肺心病的重要发病环节。既往研究表明,过氧化损伤可能是肺心病患者肺血管内皮细胞受损的重要因素之一,而N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcy... 详细信息

肺血管内皮细胞损伤及继而引起的血管活性因子失衡是慢性阻塞性肺病(COPD)造成肺动脉高压、并最终发展为肺心病的重要发病环节。既往研究表明,过氧化损伤可能是肺心病患者肺血管内皮细胞受损的重要因素之一,而N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)是目前广泛用于治疗COPD、肺心病强有力的抗氧化剂。本研究拟通过观察慢性肺心病急性发作期患者使用NAC治疗前后血管内皮细胞损伤的分子标记物——[第一段]

关键词：肺心病乙酰半胱氨酸丙二醛

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