检索结果-内蒙古大学图书馆

中华微生物学和免疫学杂志 2008年第10期28卷 899-903页

作者：贺芳曾耀英王通肇静娴臧宁林长乐暨南大学组织移植与免疫实验室广州510632

目的利用腺病毒系统研究HIV-1Vpr蛋白在T细胞来源的C8166细胞内的高表达以及细胞内该蛋白对T细胞毒性。方法将表达目的蛋白Vpr的重组腺病毒rAd—vpr和空白载体病毒rAd—vector分别感染对数生长期的C8166细胞，流式细胞术（FCM）检测细... 详细信息

目的利用腺病毒系统研究HIV-1Vpr蛋白在T细胞来源的C8166细胞内的高表达以及细胞内该蛋白对T细胞毒性。方法将表达目的蛋白Vpr的重组腺病毒rAd—vpr和空白载体病毒rAd—vector分别感染对数生长期的C8166细胞，流式细胞术（FCM）检测细胞周期分布、凋亡和坏死。用Hoechst—PI荧光染色观察细胞的凋亡和坏死，JC-1荧光染色测定线粒体膜电势。结果An—nexinV—PI染色及Hoechst—PI染色一致显示HIV-1Vpr能显著诱导C8166细胞凋亡和坏死；PI细胞周期结果表明HIV-1Vpr能阻滞C8166细胞于G2期；JC—1荧光染色法测定HIV-1Vpr致C8166线粒体膜电势下降。结论细胞内HIV-1Vpr介导的T细胞毒性包括线粒体功能障碍、细胞周期的G2期阻滞和细胞的死亡。

关键词：重组腺病毒 HIV-1 Vpr C8166细胞细胞死亡

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胸腺细胞和细胞器水平的线粒体膜电势研究

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分子细胞生物学报 2006年第2期39卷 132-138页

作者：王通曾耀英邢飞跃梁佩燕梁兆端贺芳暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广州510630

以地塞米松(DEX)诱导小鼠胸腺细胞凋亡；利用PI和AnneXin V/PI流式细胞术分别检测细胞晚期和早期凋亡；利用JC-1和DiOC_6(3)/PI在细胞水平检测凋亡中线粒体膜电势(△ψm)变化：抽提线粒体,利用JC-1直接染色技术检测现存线粒体△ψm情况... 详细信息

以地塞米松(DEX)诱导小鼠胸腺细胞凋亡；利用PI和AnneXin V/PI流式细胞术分别检测细胞晚期和早期凋亡；利用JC-1和DiOC_6(3)/PI在细胞水平检测凋亡中线粒体膜电势(△ψm)变化：抽提线粒体,利用JC-1直接染色技术检测现存线粒体△ψm情况。实验结果显示,DEX显著诱导胸腺细胞早期和晚期凋亡,凋亡细胞主要来自G_0/G_1期；细胞水平可见DEX介导与△ψm相关的J-aggregate和DiOC_6(3)可染性降低,同时介导线粒体数量显著降低,6h细胞膜完整性无显著变化：单纯线粒体检测结果显示,多数线粒体维持正常△ψm。提示,DEX介导胸腺细胞凋亡中线粒体数量降低,现存线粒体多保持着正常△ψm以维持凋亡过程细胞能量供给。

关键词：凋亡细胞水平线粒体膜电势单纯线粒体功能

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重组腺病毒HIV-1 vpr基因的构建和表达

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免疫学杂志 2008年第1期24卷 86-89页

作者：贺芳曾耀英王通吴晓萍季煜华林长乐暨南大学组织移植与免疫实验室广州510632

目的构建携带HIV-1 vpr基因的重组腺病毒,使CD4+T淋巴细胞C8166内源性的高表达Vpr蛋白。方法利用AdEasy-1系统,通过将含有目的基因片段的穿梭载体pAdTrack-CMV-vpr和骨架质粒pAdEasy-1在BJ5183细菌内同源重组的方法构建重组腺病毒质粒Ad... 详细信息

目的构建携带HIV-1 vpr基因的重组腺病毒,使CD4+T淋巴细胞C8166内源性的高表达Vpr蛋白。方法利用AdEasy-1系统,通过将含有目的基因片段的穿梭载体pAdTrack-CMV-vpr和骨架质粒pAdEasy-1在BJ5183细菌内同源重组的方法构建重组腺病毒质粒Ad-vpr,用脂质体法将重组质粒转染至HEK293A细胞包装,获得重组腺病毒Ad-vpr,荧光显微镜观察Ad-vpr感染C8166细胞GFP的表达,Western blotting鉴定Vpr在C8166细胞内的特异性表达,流式细胞术检测Ad-vpr感染C8166细胞的效率。结果成功构建携带HIV-1vpr基因的重组腺病毒,Western blotting结果表明重组腺病毒Ad-vpr感染的C8166细胞内源性的高表达Vpr蛋白,流式细胞术检测结果表明Ad-vpr感染C8166细胞效率高(44.07±3.62)%。结论成功构建出携带HIV-1vpr基因的重组腺病毒,使C8166细胞内源性的高表达Vpr蛋白。

关键词：重组腺病毒 HIV-1 vpr基因 C8166细胞

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细胞凋亡分子机制的研究进展

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中国科学基金 1999年第3期13卷 137-144页

作者：曾耀英暨南大学组织移植与免疫专业实验室广州510632

细胞凋亡(apoptosis),又称程序性细胞死亡(programmed cell death),是一种进化保守和遗传决定的细胞自杀,其性质为生理性。在多细胞动物,凋亡对正常机体的发育和自身稳定起着极其重要的作用。现已发现,有许多疾病的发生和发展与凋亡机... 详细信息

细胞凋亡(apoptosis),又称程序性细胞死亡(programmed cell death),是一种进化保守和遗传决定的细胞自杀,其性质为生理性。在多细胞动物,凋亡对正常机体的发育和自身稳定起着极其重要的作用。现已发现,有许多疾病的发生和发展与凋亡机制异常有关。细胞凋亡为生物医学领域中最热门的课题之一。在过去5年里对细胞凋亡的分子机制的研究取得了突破性进展。现已证明,多种基因产物参与了细胞凋亡过程,其中包括肿瘤坏死因子受体(TNFR)基因超家族的产物死亡受体(death receptors)、连接蛋白(adapters)、天门冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(caspases)和Bcl-2家族调节蛋白(Bcl-2 protein family regulators)等。目前对每组蛋白的成员的化学特性、基本功能和它们的上游和下游的相互作用分子等均有了较清楚的了解。这些结果为发展以凋亡机制相关蛋白为靶分子的治疗性细胞凋亡干预手段奠定了基础。

关键词：细胞凋亡半胱氨酸蛋白酶死亡受体家族线粒体

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三氧化二砷诱导Jurkat细胞凋亡过程中线粒体的变化

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中国病理生理杂志 2008年第8期24卷 1600-1603页

作者：贺芳曾耀英王通肇静娴暨南大学组织移植与免疫实验室广东广州510632

目的:研究三氧化二砷(As2O3)诱导Jurkat细胞凋亡过程中线粒体的变化特点。方法:以As2O3诱导Jurkat细胞凋亡为模型,利用AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞术研究细胞凋亡和坏死,DiOC6(3)/PI染色流式细胞术检测线粒体膜电势(△ψm),壬基酚丫啶... 详细信息

目的:研究三氧化二砷(As2O3)诱导Jurkat细胞凋亡过程中线粒体的变化特点。方法:以As2O3诱导Jurkat细胞凋亡为模型,利用AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞术研究细胞凋亡和坏死,DiOC6(3)/PI染色流式细胞术检测线粒体膜电势(△ψm),壬基酚丫啶橙(NAO)/PI染色流式细胞术检测线粒体质量,利用2,7-二氯二氢荧光素乙酰乙酸(DCFH-DA)染色流式细胞术检测细胞内活性氧的变化。结果:在4×10-6mol/LAs2O3诱导下,Jurkat细胞在48h凋亡比率为(18.98±1.40)%,对照组为(5.17±0.80)%,组间差异显著(P<0.01);As2O3组坏死比率为(8.56±0.70)%,对照组为(1.53±0.55)%,组间差异显著(P<0.01)。As2O3组在48h时点的线粒体膜电势低于对照组(P<0.05),线粒体膜电势下降的Jurkat细胞比率分别为(23.07±3.62)%和(6.63±1.46)%。同时Jurkat细胞As2O3组线粒体质量显著低于对照组(P<0.01),线粒体质量下降的细胞比率分别为(25.90±1.80)%和(6.37±1.04)%。As2O3组自由基产生明显高于对照组(P<0.01),DCFDA平均荧光强度分别为24.41±0.75和17.06±0.48。结论:As2O3诱导Jurkat细胞凋亡过程中,线粒体膜电势和质量均下降,细胞内氧自由基水平升高。

关键词：三氧化二砷 Jurkat细胞细胞凋亡线粒体

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雷公藤甲素对小鼠淋巴细胞体外活化的抑制作用

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中药材 2005年第6期28卷 499-502页

作者：俞瑜曾耀英刘良季煜华肇静娴暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广州510632

目的研究雷公藤甲素(TRD)对小鼠T淋巴细胞活化标志CD69、CD25及细胞因子IL2及IFNγmRNA表达的影响,为阐明其免疫抑制作用提供分子药理学依据。方法无菌分离小鼠淋巴结细胞,加入不同浓度的雷公藤甲素预先孵育1h,用多克隆刺激剂刀豆蛋白(C... 详细信息

目的研究雷公藤甲素(TRD)对小鼠T淋巴细胞活化标志CD69、CD25及细胞因子IL2及IFNγmRNA表达的影响,为阐明其免疫抑制作用提供分子药理学依据。方法无菌分离小鼠淋巴结细胞,加入不同浓度的雷公藤甲素预先孵育1h,用多克隆刺激剂刀豆蛋白(ConA)刺激T细胞活化,利用荧光标记的单克隆体双染技术,流式细胞仪检测TRD对小鼠T细胞CD69、CD25表达的影响;采用半定量RTPCR技术从mRNA水平检测TRD对细胞因子IL2、IFNγmRNA的表达的影响。结果TRD能抑制T细胞早期活化标志CD69和CD25,同时TRD也能抑制IL2及IFNγmRNA的表达。结论TRD对T细胞早期活化分子及细胞因子表达的抑制作用可能是其发挥免疫抑制作用的机制之一。

关键词：雷公藤甲素小鼠体外活化 IFN-γmRNA表达 RT-PCR技术免疫抑制作用流式细胞仪检测 CD69 IL-2 CD25 细胞因子表达活化标志 T淋巴细胞分子药理学淋巴结细胞 T细胞活化 TRD 无菌分离不同浓度刀豆蛋白单克隆体荧光标记

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脂多糖诱发的同基因妊娠BALB/c和NOD/SCID小鼠早产模型

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细胞与分子免疫学杂志 2007年第1期23卷 32-35页

作者：林羿刘兆宇狄静芳曾耀英暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632

目的:研究脂多糖(LPS)诱发同基因妊娠BALB/c小鼠和非肥胖性糖尿病/重度联合免疫缺陷(NOD/SCID)小鼠早产的机制。方法:在预先阻断或未阻断Toll样受体4(TLR4)的条件下采用LPS刺激,并比较各组BALB/c和NOD/SCID小鼠的早产率和胚胎死亡率。... 详细信息

目的:研究脂多糖(LPS)诱发同基因妊娠BALB/c小鼠和非肥胖性糖尿病/重度联合免疫缺陷(NOD/SCID)小鼠早产的机制。方法:在预先阻断或未阻断Toll样受体4(TLR4)的条件下采用LPS刺激,并比较各组BALB/c和NOD/SCID小鼠的早产率和胚胎死亡率。由于预实验显示预期的早产均发生于孕16d,因此,实验中在早产发生之前处死小鼠,收集每只孕鼠的胎盘。采用流式细胞术检测胎盘CD45+细胞表面TLR4、CD80和细胞内TNF-α的表达率。结果:采用LPS可诱发BALB/c小鼠早产,而NOD/SCID小鼠则对LPS的诱导有抵抗。经LPS刺激后,TLR4的表达在BALB/c和NOD/SCID小鼠均无显著改变,但是两组小鼠CD45+CD80+细胞的百分率均升高。相反,LPS刺激后仅BALB/c小鼠CD45+TNF-α+细胞的百分率升高,而NOD/SCID小鼠则否。通过预先阻断TLR4的表达可消除LPS对BALB/c小鼠CD80和TNF-α表达的影响,并显著降低LPS诱发的早产率。结论:虽然LPS未能改变TLR4的表达,但是二者相互作用,可激发CD45+CD80+细胞的动员,导致炎性细胞因子产生增多,并最终导致早产。BALB/c和NOD/SCID小鼠对LPS刺激的敏感性存在差异,提示NOD/SCID小鼠缺乏功能正常的T细胞和NK细胞,可能是这种小鼠对LPS诱发的早产有抵抗的原因之一。

关键词：免疫缺陷妊娠耐受早产啮齿动物模型

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地塞米松诱导小鼠胸腺细胞凋亡中线粒体质量的变化

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中国药理学通报 2006年第5期22卷 563-567页

作者：王通曾耀英邢飞跃梁佩燕暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510630

目的研究地塞米松(DEX)诱导的小鼠胸腺细胞凋亡中线粒体质量变化。方法分别设对照组(Control)和DEX组;在6 h,分别以NAO和M itotracker G reen(MG)单染流式细胞术检测线粒体质量变化,以D iOC6(3)染色流式细胞术检测线粒体膜电势变化,以An... 详细信息

目的研究地塞米松(DEX)诱导的小鼠胸腺细胞凋亡中线粒体质量变化。方法分别设对照组(Control)和DEX组;在6 h,分别以NAO和M itotracker G reen(MG)单染流式细胞术检测线粒体质量变化,以D iOC6(3)染色流式细胞术检测线粒体膜电势变化,以Annexin V-PE/MG双染流式细胞术检测细胞凋亡中线粒体质量改变特点。结果NAO染色检测结果显示终浓度1μmol.L-1DEX可以诱导小鼠胸腺细胞线粒体心磷脂含量降低,与对照组比较P<0.01;MG染色流式细胞术结果表明DEX(P<0.01)诱导了胸腺细胞线粒体质量的降低;DEX(P<0.01)诱导线粒体膜电势依赖性D iOC6(3)在胸腺细胞中可染性下降;Annexin V-PE/MG双染流式细胞术显示,凋亡细胞中存在一定比例的低线粒体质量细胞,DEX组该群细胞多于对照组(P<0.01)。结论DEX诱导小鼠胸腺细胞凋亡中线粒体质量降低;线粒体质量评价在细胞凋亡相关药理学研究领域有应用前景。

关键词：胸腺细胞凋亡线粒体质量 NAO Mitotracker Green

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紫杉醇对小鼠T细胞CD69、CD25表达及增殖作用的流式细胞术分析

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中国药理学通报 2005年第6期21卷 705-707页

作者：彭桉平曾耀英俞瑜肇静娴狄静芳暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632

目的研究紫杉醇对多克隆刺激剂作用下小鼠T细胞CD69、CD25表达及增殖的影响,并探讨其机制。方法利用荧光标记的单克隆抗体染色结合流式细胞术,检测多克隆刺激剂佛波醇酯(PDB)或刀豆蛋白(ConA)刺激下小鼠T细胞表达活化抗原CD69、CD25的... 详细信息

目的研究紫杉醇对多克隆刺激剂作用下小鼠T细胞CD69、CD25表达及增殖的影响,并探讨其机制。方法利用荧光标记的单克隆抗体染色结合流式细胞术,检测多克隆刺激剂佛波醇酯(PDB)或刀豆蛋白(ConA)刺激下小鼠T细胞表达活化抗原CD69、CD25的百分率;以羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(CFDASE)标记技术结合流式细胞术分析PDB+Ion(Ionomycin)或ConA刺激下T细胞增殖指数。结果PTX无论对ConA或PDB刺激组T细胞CD69表达均无抑制作用(P>0.05),而对T细胞CD25表达有明显抑制作用(P<0.05),且呈剂量依赖关系;PTX无论对ConA或PDB+Ion刺激组T细胞增殖均有抑制作用(P<0.05),且呈剂量依赖关系。但在ConA及PDB+Ion刺激初立即或是24h后加入不同浓度的PTX,PTX抑制T细胞增殖作用无差异(P>0.05)。结论PTX可明显抑制多克隆刺激剂诱导的T细胞中后期活化及增殖,其作用机制可能与早期活化相关蛋白PTK及PKCθ无关,而与PKCθ下游活化信号相关。

关键词：紫杉醇 T淋巴细胞 CD69 CD25 增殖流式细胞术

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NO介导的小鼠胸腺细胞中线粒体的变化在细胞凋亡过程中的作用

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细胞与分子免疫学杂志 2006年第3期22卷 302-305页

作者：王通曾耀英邢飞跃贺芳王炯坤暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510630

目的：研究一氧化氮（NO）介导的胸腺细胞凋亡中线粒体膜电位（△ψm）和心磷脂（CL）含量变化的特点.方法：以S-亚硝基-N-乙酰青霉胺（SNAP）作为NO的供体诱导胸腺细胞凋亡,以地塞米松（DEX）作为阳性对照药物;设空白对照组、SNAP组和... 详细信息

目的：研究一氧化氮（NO）介导的胸腺细胞凋亡中线粒体膜电位（△ψm）和心磷脂（CL）含量变化的特点.方法：以S-亚硝基-N-乙酰青霉胺（SNAP）作为NO的供体诱导胸腺细胞凋亡,以地塞米松（DEX）作为阳性对照药物;设空白对照组、SNAP组和DEX组3个实验组;经膜联蛋白Ⅴ（annexinⅤ mAb）和碘化丙啶（PI）染色后,用流式细胞术（FCM）检测细胞磷脂酰丝氨酸（PS）外翻;用3,3＇-二已基噁羰花青碘化物[DiOC6（3）]和PE-anti-annexin Ⅴ mAb检测凋亡中△ψm变化;用壬基吖啶橙（NAO）和PE-anti-annexin Ⅴ mAb检测凋亡中线粒体CL变化.结果：SNAP作用后6 h,胸腺细胞出现典型的细胞凋亡特征,多数annexin Ⅴ阳性的细胞出现皱缩.DEX组△ψm降低且未凋亡的细胞比例显著高于空白对照组（P＜0.01）;而SNAP组该群细胞所占比例与空白对照组比较,差异无统计学意义（P＞0.05）.各组中约40%～50%的DiOC6（3）阴性细胞同正常细胞的大小.SNAP组CL含量降低的凋亡细胞所占比例显著高于对照组（P＜0.01）,未见CL含量降低且未凋亡的细胞群.空白对照组和SNAP组中分别有（48.32±3.96）%、（43.64±4.90）%的细胞CL含量降低但大小同正常细胞.结论：NO介导的小鼠胸腺细胞的凋亡过程,依次为磷脂酰丝氨酸外翻、线粒体去极化、CL氧化及细胞皱缩.同DEX模型组相比较,NO介导的小鼠胸腺细胞线粒体的变化为凋亡过程中较晚期的变化.

关键词：一氧化氮 S-亚硝基-N-乙酰青霉胺线粒体凋亡

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