检索结果-内蒙古大学图书馆

免疫学杂志 2004年第3期20卷 172-176页

作者：何贤辉徐丽慧刘毅江逊蔡小嫦曾耀英暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632 暨南大学第一附属医院皮肤科广东广州510632

目的　克隆人吲哚胺双加氧酶 (IDO)基因并构建IDO与增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)融合蛋白哺乳动物细胞表达载体。方法　利用RT PCR方法从人白细胞克隆IDO基因并构建IDO EGFP融合蛋白表达载体。通过细胞核转染仪将表达载体转入人软骨细胞... 详细信息

目的　克隆人吲哚胺双加氧酶 (IDO)基因并构建IDO与增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)融合蛋白哺乳动物细胞表达载体。方法　利用RT PCR方法从人白细胞克隆IDO基因并构建IDO EGFP融合蛋白表达载体。通过细胞核转染仪将表达载体转入人软骨细胞进行瞬时表达 ,以共聚焦显微镜对表达的绿色荧光进行分析。结果　从活化的人白细胞中克隆到IDO基因编码区全长 ,并构建了IDO EGFP融合蛋白表达载体。以该表达载体转染原代人软骨细胞 ,表达的融合蛋白较均匀地分布于整个细胞。结论　成功构建了IDO EGFP哺乳动物细胞表达载体。

关键词：吲哚胺双加氧酶绿色荧光蛋白融合蛋白软骨细胞共聚焦显微术

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深低温处理对异种骨-髌腱-骨移植排斥反应的影响

引用

中国病理生理杂志 2009年第4期25卷 770-773页

作者：陈克家王德就蒋亚斌曾耀英暨南大学附属第一医院急诊科广东广州510630 暨南大学附属第一医院骨科广东广州510630 暨南大学组织移植与免疫实验室广东广州510630

目的:观察深低温处理对异种骨-髌腱-骨(BPB)移植排斥反应的影响。方法:采用大鼠股部肌袋模型法探讨深低温处理对异种BPB移植免疫反应的影响,通过观察外周血T细胞活化和植入物组织形态学变化情况来判定免疫反应程度。结果:新鲜未处理异种... 详细信息

目的:观察深低温处理对异种骨-髌腱-骨(BPB)移植排斥反应的影响。方法:采用大鼠股部肌袋模型法探讨深低温处理对异种BPB移植免疫反应的影响,通过观察外周血T细胞活化和植入物组织形态学变化情况来判定免疫反应程度。结果:新鲜未处理异种BPB移植后3 d CD4+/CD8+细胞CD25+表达率即显著升高,与自体移植组比较有显著差异(P<0.05),术后14 d达高峰,且维持该峰值至术后35 d仍无下降;深低温处理的异种BPB移植后CD4+/CD8+细胞CD25+的表达明显受到抑制,表达时间推迟,至术后14 d才有轻度升高,术后3 d起各时点与未处理组比较,均P<0.05。组织学检查发现,深低温处理组骨、腱组织周围见少量淋巴细胞浸润,但未侵入组织内,无组织坏死,腱束结构清楚,胶原排列规则;新鲜异种移植组可见大量斑片状淋巴细胞弥漫性浸润骨及胶原组织周围及其中,可见骨碎片,腱结构不清,胶原排列紊乱,部分切片可见较多的嗜酸性粒细胞和多核巨细胞等炎症细胞。结论:深低温处理能显著降低异种BPB免疫原性,抑制排斥反应发生。

关键词：骨-髌腱-骨异种移植排斥反应白细胞介素2 前交叉韧带

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一种分离、培养扩增小鼠NK细胞方法的建立

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细胞与分子免疫学杂志 2005年第3期21卷 379-381,389页

作者：杨志刚曾耀英何贤辉王通江逊唐德燊暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632 广东医学院附属医院广东湛江524001

目的:建立小鼠NK细胞的分离及培养扩增的方法。方法:用两步黏附分离法和磁珠活化的细胞分选(MACS)法,从小鼠脾脏的单个核细胞(MNC)中分离NK细胞,计数所得细胞的总数,并用FITC抗小鼠CD3和PE抗小鼠NK1.1单克隆荧光抗体染色后,用流式细胞仪... 详细信息

目的:建立小鼠NK细胞的分离及培养扩增的方法。方法:用两步黏附分离法和磁珠活化的细胞分选(MACS)法,从小鼠脾脏的单个核细胞(MNC)中分离NK细胞,计数所得细胞的总数,并用FITC抗小鼠CD3和PE抗小鼠NK1.1单克隆荧光抗体染色后,用流式细胞仪(FACS)检测NK细胞的纯度。以YAC -1为靶细胞,用MTT比色法检测NK细胞的杀伤活性。结果:将两步黏附分离法分离的2×107个脾MNC培养5、10、15、20d,计数细胞的总数并检测CD3-NK1.1+细胞百分率,分别为0.5×107、1.4×107、2.6×107、3.0×107和18.36%、43.44%、55.68%、60.03%。效靶细胞25∶1时,NK细胞的杀伤率分别为54.38%、66.54%、79.38%和83.86%,明显高于脾MNC(41.93%)(P<0.01)。MACS法纯化前后细胞的总数和CD3-NK1.1+细胞的百分率,分别为1.0×108、1.5×106和2.54%、93.60%;但纯化后的细胞在体外培养20d时,只扩增到1.9×106个。结论:用两步黏附分离法分离的小鼠NK细胞,培养2～3wk可获得大量的NK细胞,纯度可达55%～60%;在效靶细胞为25∶1时,NK细胞对YAC1细胞的杀伤率约为80%。

关键词： NK细胞分离培养扩增增殖 IL-2

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小鼠异基因骨髓移植急性移植物抗宿主病模型的建立

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中国病理生理杂志 2004年第10期20卷 1947-1949页

作者：杨志刚曾耀英王青王通曾蕙兰暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632 暨南大学第一附属医院血液科广东广州510632

目的 :建立稳定可靠的小鼠异基因骨髓移植急性移植物抗宿主病 (GVHD)模型 ;为异基因骨髓移植中GVHD研究提供理想的实验参照。方法 :以C5 7BL/6 (H - 2 b)小鼠为供鼠、BALB/c(H - 2 d)小鼠为受鼠 ,在移植物中混合不同比例的供鼠外周淋巴... 详细信息

目的 :建立稳定可靠的小鼠异基因骨髓移植急性移植物抗宿主病 (GVHD)模型 ;为异基因骨髓移植中GVHD研究提供理想的实验参照。方法 :以C5 7BL/6 (H - 2 b)小鼠为供鼠、BALB/c(H - 2 d)小鼠为受鼠 ,在移植物中混合不同比例的供鼠外周淋巴细胞以引起不同程度的GVHD。根据临床表现、存活期及病理检查等判断GVHD程度。结果 :单纯异基因骨髓组只有部分小鼠出现急性GVHD ,2 0 %的小鼠长期存活 (超过 12 0d) ,无急性GVHD表现 ;混合不同比例外周淋巴细胞的异基因骨髓移植小鼠出现GVHD的时间和程度均有差异 ,其中骨髓与外周淋巴细胞 1∶1混合组小鼠全部在移植后 5 - 14d出现典型的弓背体位 ,存活期 6 - 2 4d ,临床和病理均可在相对集中的时间内观察到典型的急性GVHD改变。结论 :以供鼠骨髓与外周淋巴细胞 1∶1混合进行的异基因骨髓移植 ,10 0 %引出致死性的急性GVHD。

关键词：小鼠骨髓移植移植物抗宿主病动物模型

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人PD-L2基因克隆及其在大肠杆菌中的表达

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免疫学杂志 2004年第5期20卷 346-349页

作者：何贤辉徐丽慧刘毅蔡小嫦曾耀英暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632 暨南大学第一附属医院皮肤科广东广州510632

目的　克隆人PD L2基因并构建PD L2胞外区的原核表达载体 ,在大肠杆菌中进行表达。方法　以RT PCR方法从活化的人外周血单个核细胞总RNA中克隆PD L2基因的cDNA ,构建PD L2胞外区的原核表达载体 ,在大肠杆菌BL2 1(ED3)中进行表达并鉴定... 详细信息

目的　克隆人PD L2基因并构建PD L2胞外区的原核表达载体 ,在大肠杆菌中进行表达。方法　以RT PCR方法从活化的人外周血单个核细胞总RNA中克隆PD L2基因的cDNA ,构建PD L2胞外区的原核表达载体 ,在大肠杆菌BL2 1(ED3)中进行表达并鉴定。结果　克隆到PD L2基因cDNA编码区全长序列 ,经DNA测序证明其与已报道的序列一致。进而构建了PD L2胞外区的原核表达载体 ,并在大肠杆菌表达 ,免疫印迹分析表明在IPTG诱导后表达PD L2胞外区蛋白 ,相对分子质量Mr 为 2 2 0 0 0 ,与理论值大小相符。结论　成功克隆PD L2基因 ,其胞外区蛋白在大肠杆菌中获得表达 ,为进一步研究PD L2功能提供了条件。

关键词： PD-L2 基因克隆大肠杆菌重组蛋白

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白藜芦醇对小鼠T细胞活化、增殖及细胞因子分泌的影响

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细胞与分子免疫学杂志 2005年第6期21卷 697-699,703页

作者：俞瑜曾耀英季煜华肇静娴刘良暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632 香港浸会大学中医药学院

目的:研究白藜芦醇(RSV)对小鼠T淋巴细胞增殖及细胞因子分泌的影响,为阐明其免疫抑制作用提供实验依据。方法:无菌分离小鼠淋巴结细胞,加入不同浓度的RSV预先孵育1h,用多克隆刺激剂佛波醇酯和离子霉素刺激T细胞活化增殖。采用3H-TdR掺... 详细信息

目的:研究白藜芦醇(RSV)对小鼠T淋巴细胞增殖及细胞因子分泌的影响,为阐明其免疫抑制作用提供实验依据。方法:无菌分离小鼠淋巴结细胞,加入不同浓度的RSV预先孵育1h,用多克隆刺激剂佛波醇酯和离子霉素刺激T细胞活化增殖。采用3H-TdR掺入法检测RSV对T细胞增殖的影响;用RT-PCR检测IL-2及IFN-γmRNA的表达;用胞内细胞因子染色法分析IL-2和IFN-γ的分泌。结果:RSV能抑制T细胞增殖,也能在mRNA水平及蛋白水平上抑制IL-2及IFN-γ的分泌。结论:RSV对T细胞的免疫抑制作用,可能与其抑制T细胞的活化、增殖和细胞因子的分泌有关。

关键词：白藜芦醇活化增殖细胞因子

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小鼠表皮干细胞分化潜能的体内植入研究(英文)

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中国病理生理杂志 2006年第12期22卷 2418-2423页

作者：林羿李海标黄锦桃曾山狄静芳曾耀英中山大学组织胚胎学教研室广东广州510080 暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632

目的:将小鼠表皮干细胞(epidermal stem cells,ESCs)种植到可生物降解的载体内并移植到同基因受者小鼠皮下,研究其分化潜能。方法:在体外诱导ES细胞分化为ESC,经用Hoechst 33342荧光染色后,种植到含有胶原凝胶的聚乙醇酸(polyglycolic a... 详细信息

目的:将小鼠表皮干细胞(epidermal stem cells,ESCs)种植到可生物降解的载体内并移植到同基因受者小鼠皮下,研究其分化潜能。方法:在体外诱导ES细胞分化为ESC,经用Hoechst 33342荧光染色后,种植到含有胶原凝胶的聚乙醇酸(polyglycolic acid,PGA)小网内,作为细胞载体移植到与干细胞同基因的129/J小鼠皮下。结果:荧光显微镜观察发现ESC在移植物内至少能存活3周以上,并能分化形成毛囊样和腺样结构,形成与天然真皮相似的结构。在植入后10周内未观察到明显排斥或毒性反应。结论:ESC可作为种子细胞用于制备具有形成真皮附属结构潜能的皮肤替代物的实验研究。

关键词：细胞表面标志物表皮干细胞

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氧化苦参碱抑制二硝基氟苯所致小鼠接触性皮炎及淋巴细胞增殖

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中国病理生理杂志 2005年第5期21卷 931-935页

作者：伍斌蔡小嫦曾耀英施军王通肇静娴黄秀艳暨南大学附属第一医院皮肤科广东广州510632 暨南大学组织移植与免疫中心教育部重点实验室广东广州510632

目的探讨氧化苦参碱(OMT)对二硝基氟苯(DNFB)所致小鼠变应性接触性皮炎(ACD)的抑制作用及小鼠淋巴细胞增殖的影响。方法①建立DNFB所致小鼠ACD模型,以不同剂量的OMT、PBS、氢化可的松(HCT)进行腹腔注射,检测小鼠耳廓肿胀度变化。②利用... 详细信息

目的探讨氧化苦参碱(OMT)对二硝基氟苯(DNFB)所致小鼠变应性接触性皮炎(ACD)的抑制作用及小鼠淋巴细胞增殖的影响。方法①建立DNFB所致小鼠ACD模型,以不同剂量的OMT、PBS、氢化可的松(HCT)进行腹腔注射,检测小鼠耳廓肿胀度变化。②利用羧基荧光素乙酰乙酸(CFDA-SE)染色,流式细胞术检测OMT对小鼠淋巴细胞增殖的影响。结果①OMT对DNFB所致小鼠ACD呈剂量依赖性抑制作用,且与同等剂量HCT作用效果相似,但副作用明显减小。②体外实验证明,在500、125和31mg/L组,OMT对小鼠淋巴细胞增殖呈剂量依赖性抑制。结论OMT对DNFB所致小鼠ACD有显著的抑制作用,而且抑制小鼠淋巴细胞增殖;OMT是一种免疫抑制剂。

关键词：二硝基氟苯皮炎,变应性接触性苦参淋巴细胞

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杨梅素对淋巴细胞活化及增殖的影响

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中国药理学通报 2006年第1期22卷 63-66页

作者：俞瑜曾耀英刘良季煜华邢飞跃肇静娴暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632 香港浸会大学中医药学院

目的研究杨梅素(myricetin)对小鼠T细胞活化及增殖的影响,探讨其作为免疫调节药物开发的可能性并提供相关实验依据。方法无菌分离小鼠淋巴结细胞,加入不同浓度的杨梅素预先孵育1h,用多克隆刺激剂刀豆蛋白(ConA)刺激T细胞活化,利用荧光... 详细信息

目的研究杨梅素(myricetin)对小鼠T细胞活化及增殖的影响,探讨其作为免疫调节药物开发的可能性并提供相关实验依据。方法无菌分离小鼠淋巴结细胞,加入不同浓度的杨梅素预先孵育1h,用多克隆刺激剂刀豆蛋白(ConA)刺激T细胞活化,利用荧光标记的单克隆抗体双染技术,流式细胞仪检测杨梅素对小鼠CD3+T细胞CD69表达的影响;采用3H-TdR参入法检测杨梅素对淋巴细胞增殖的影响,采用半定量RT-PCR技术从mRNA水平检测杨梅素对IL-2mRNA表达的影响。采用ELISPOT检测杨梅素对IFN-γ分泌的影响。结果杨梅素能抑制T细胞早期活化标志CD69的表达,并能抑制淋巴细胞增殖反应,同时对淋巴细胞活化后IL-2 mRNA的表达及IFN-γ的分泌也有抑制作用。结论杨梅素对淋巴细胞的活化增殖反应具有抑制作用。

关键词：杨梅素淋巴细胞活化增殖细胞因子

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中国恒河猴Mamu-B*1703/EGFP在K562和B16细胞中的表达及分布

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第三军医大学学报 2010年第9期32卷 874-878页

作者：欧阳东云徐丽慧高琦郭贺何贤辉暨南大学组织移植与免疫实验中心广州510632 暨南大学再生医学教育部重点实验室暨南大学生物工程研究所广州510632

目的分析恒河猴主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)Ⅰ类分子重链的亚细胞分布,建立适于体外研究恒河猴MHCⅠ类分子表达和抗原呈递功能的细胞系。方法将含Mamu-B*1703重链基因真核表达载体pEGFP-N1分别转染K562... 详细信息

目的分析恒河猴主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)Ⅰ类分子重链的亚细胞分布,建立适于体外研究恒河猴MHCⅠ类分子表达和抗原呈递功能的细胞系。方法将含Mamu-B*1703重链基因真核表达载体pEGFP-N1分别转染K562和B16细胞,细胞收集后以W6/32单克隆抗体或抗Mamu-B*1703抗血清及PE标记二抗染色,利用激光共聚焦显微镜和流式细胞术分析Mamu-B*1703复合体在细胞内和细胞表面的表达。结果在K562和B16细胞的细胞质内均可观察到与Mamu-B*1703重链基因融合表达的绿色荧光蛋白激发后的绿色荧光,即2种细胞均可表达外源Mamu-B*1703重链分子;但通过藻红蛋白标记的抗MHCⅠ类分子复合体抗体染色显示,Mamu-B*1703复合体仅表达于K562细胞表面,而不表达于B16细胞表面。结论Mamu-B*1703重链可与人K562细胞而不能与小鼠B16细胞内的βm轻链结合组装成复合体,表达于细胞表面,提示研究恒河猴的MHCⅠ分子表达应利用人类的细胞株。

关键词：主要组织相容性复合体Ⅰ类分子 Mamu-B＊1703 中国恒河猴转染

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