检索结果-内蒙古大学图书馆

中国生物工程杂志 2010年第4期30卷 39-43页

作者：欧阳东云徐丽慧高琦郭贺陈清何贤辉暨南大学组织移植与免疫实验中心广州510632 暨南大学再生医学教育部重点实验室广州510632 暨南大学生物工程研究所广州510632

中性氨基酸转运蛋白(ASCT2)是人类内源性病毒的包膜蛋白合胞素在细胞膜上的主要受体,其最大的胞外结构域存在于C-末端的105个氨基酸(以下简称TAIL)。通过RT-PCR方法从人乳腺癌MCF-7细胞中克隆ASCT2基因编码区全长序列,再从中扩增ASCT2的... 详细信息

中性氨基酸转运蛋白(ASCT2)是人类内源性病毒的包膜蛋白合胞素在细胞膜上的主要受体,其最大的胞外结构域存在于C-末端的105个氨基酸(以下简称TAIL)。通过RT-PCR方法从人乳腺癌MCF-7细胞中克隆ASCT2基因编码区全长序列,再从中扩增ASCT2的TAIL序列,与pET-41b(克隆位点的N-和C-端分别有谷胱甘肽转移酶和His6标签序列)连接构建原核表达载体,重组质粒在大肠杆菌中获得表达,免疫印迹显示重组蛋白TAIL在细菌裂解液上清和沉淀(包涵体)中均有表达,可溶性部分经亲和层析纯化获得高纯度的TAIL蛋白,该蛋白可结合在表达合胞素的MCF-7细胞表面,提示其可能具有结合合胞素的活性。

关键词：合胞素中性氨基酸转运蛋白胞外结构域原核表达

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CD95-CD95L信号介导的细胞凋亡和抗凋亡

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中国病理生理杂志 2000年第3期16卷 276-278页

作者：王曦曾耀英王子栋暨南大学组织移植与免疫学实验中心广东广州510632 暨南大学医学院生理学教研室广东广州510632

This article briefly reviewed CD95-CD95L system-induced apoptosis, and also induced resistance to apoptosis, and immune privilege.

关键词： CD95-CD95L 信号介导细胞凋亡细胞存活

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nmhaFGF对大鼠缺血再灌注损伤心肌的保护作用

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中国药科大学学报 2009年第2期40卷 161-165页

作者：许华李校堃黄亚东郑青苏志坚吴晓萍赵专友暨南大学药学院广州510632 暨南大学医药生物技术研究开发中心广州510632 暨南大学组织移植与免疫实验中心广州510632 天津药物研究院药理室天津300193

目的:研究非促分裂型酸性成纤维细胞生长因子(nmhaFGF)对缺血再灌注损伤心肌的保护作用。方法:大鼠冠脉左前降支闭塞30min后再灌注3h,再灌注前10min尾静脉注射不同剂量nmhaFGF。测定各组大鼠室性心动过速(VT)和心室颤动(VF)的潜伏期、... 详细信息

目的:研究非促分裂型酸性成纤维细胞生长因子(nmhaFGF)对缺血再灌注损伤心肌的保护作用。方法:大鼠冠脉左前降支闭塞30min后再灌注3h,再灌注前10min尾静脉注射不同剂量nmhaFGF。测定各组大鼠室性心动过速(VT)和心室颤动(VF)的潜伏期、持续时间和发生率,评定心律失常分数;再灌注24h后,测定血清AST、LDH、CK-MB含量,并计算大鼠心肌梗死面积。结果:静脉注射nmhaFGF(20,40,80μg/kg)能明显抑制缺血再灌注引起的心肌损伤。和模型组相比,nmhaFGF各组大鼠的VT和VF发生率减少,出现心律失常的潜伏期延迟,持续时间缩短;另外心肌梗死区占左室面积的百分比及梗死区占危险区百分比均有所降低;此外,血清心肌酶含量AST、LDH、CK-MB显著降低;以80μg/kgnmhaFGF作用较明显,其作用强度与8mg/kg普萘洛尔相当。结论:nmhaFGF对大鼠缺血再灌损伤心肌具有保护作用。

关键词： nmhaFGF 缺血再灌注心肌损伤

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通痹灵对多克隆刺激剂作用下小鼠T细胞CD69表达影响的血清免疫药理评价

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中国免疫学杂志 2002年第5期18卷 330-333页

作者：全世明曾耀英陈纪藩胡英杰暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广州510632 广州中医药大学第一附属医院广州510405

目的：应用血清免疫药理方法探讨通痹灵对T细胞体外活化的影响，以进一步揭示通痹灵的免疫调节分子机理，为临床用药提供理论依据。方法：分离小鼠淋巴结细胞，分别与CHX、5％CHX血清、CsA、5％CsA血清、5％通痹灵血清预孵后加入多克隆... 详细信息

目的：应用血清免疫药理方法探讨通痹灵对T细胞体外活化的影响，以进一步揭示通痹灵的免疫调节分子机理，为临床用药提供理论依据。方法：分离小鼠淋巴结细胞，分别与CHX、5％CHX血清、CsA、5％CsA血清、5％通痹灵血清预孵后加入多克隆刺激剂继续培养，总计培养24h后收获细胞，进行双色免疫荧光标记，以流式细胞术对T细胞的CD69分子表达情况进行分析。结果：5％通痹灵作用下ConA活化的T细胞CD69表达百分率为（54．67±6．69）％，与相应对照［（64．35 ±10．13）%］比较有显著差异（P<0．05）；药物作用下PDB活化的T细胞CD69表达的百分率为（80．99±6．18）%，与相应对照［（79．68±4．17）％］比较无显著差异（P>0．05）。结论：通痹灵含药血清选择性地抑制ConA刺激的T细胞活化，而对PDB刺激的T细胞活化无影响；推测抑制类风湿关节炎疾病启动与发展中异常的T细胞活化，是通痹灵治疗类风湿关节炎重要机制之一；。

关键词：中药复方 CD69 T淋巴细胞血清免疫药理学类风湿关节炎通痹灵动物实验

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TNFα和IL-10在巨细胞病毒感染人胚肺成纤维细胞中的作用

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中国病理生理杂志 2002年第3期18卷 265-268页

作者：江振友曹艳英林晨暨南大学医学院微生物学与免疫学教研室广东广州510632 暨南大学组织移植与免疫实验中心广东广州510632

目的 :研究TNFα和IL - 1 0对人巨细胞病毒 (HCMV)感染人胚肺成纤维细胞 (HEL)的影响 ,以及感染细胞产生TNFα的变化 ,探讨有关细胞因子在HCMV感染免疫中的作用。方法 :用不同浓度的TNFα和IL - 1 0作用于HEL ,2 4h后感染病毒 ,研究TNF... 详细信息

目的 :研究TNFα和IL - 1 0对人巨细胞病毒 (HCMV)感染人胚肺成纤维细胞 (HEL)的影响 ,以及感染细胞产生TNFα的变化 ,探讨有关细胞因子在HCMV感染免疫中的作用。方法 :用不同浓度的TNFα和IL - 1 0作用于HEL ,2 4h后感染病毒 ,研究TNFα和IL - 1 0对HCMV感染HEL的影响。用HCMV感染HEL ,感染后 (4、2 4、48、72、96h)分别收集培养上清液 ,用ELISA法检测TNFα含量。结果 :在病毒感染前 ,中、高浓度TNFα或低、中浓度IL - 1 0可抑制HCMV在HEL内的增殖。HCMV感染HEL后 ,细胞产生TNFα的量无明显改变。结论 :TNFα和IL - 1 0在HCMV感染免疫过程中起作用。

关键词：巨细胞病毒细胞活素类肺成纤维细胞 TNFα IL-10

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PKCθ-EGFP融合蛋白在HeLa细胞中的表达及其对细胞形态的影响

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2005年第4期26卷 470-474页

作者：杜丽蕊徐丽慧何贤辉暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室暨南大学生物工程研究所广东广州510632

目的:分析增强型绿色荧光蛋白(EGFP)与蛋白激酶C-θ(PKCθ)的融合蛋白(PKCθ-EGFP)在HeLa细胞中的表达、亚细胞定位及其对细胞形态的影响。方法:用脂质转染胺(Lipofec-tAMINE 2000)为载体分别以pPKCθ-EGFP和pEGFP-N1转染HeLa细胞,流式... 详细信息

目的:分析增强型绿色荧光蛋白(EGFP)与蛋白激酶C-θ(PKCθ)的融合蛋白(PKCθ-EGFP)在HeLa细胞中的表达、亚细胞定位及其对细胞形态的影响。方法:用脂质转染胺(Lipofec-tAMINE 2000)为载体分别以pPKCθ-EGFP和pEGFP-N1转染HeLa细胞,流式细胞仪分析其表达率,激光共聚焦显微镜分析其亚细胞定位,同时分析二丁酸佛波醇酯(PDB)和小檗碱对其亚细胞定位和细胞形态的影响。结果:转染pEGFP-N1或pPKCθ-EGFP的HeLa细胞48 h后,表达绿色荧光的细胞百分率分别为(70.9±4.4)%和(45.8±2.3)%(P<0.05)。表达的PKCθ-EGFP融合蛋白均匀分布于细胞内,与EGFP蛋白在细胞内的分布相似。PDB刺激30 min后,表达PKCθ-EGFP的HeLa细胞的形态发生显著变化,即由原来的梭形变成圆形,荧光强度增强。但表达EGFP的HeLa细胞的形态及荧光分布均不受影响。小檗碱对PDB诱导的HeLa细胞的形态和EGFP-PKCθ融合蛋白的分布无明显影响。结论:表达PKCθ-EGFP融合蛋白的HeLa细胞在PDB作用下细胞形态发生显著变化。

关键词：蛋白激酶Cθ 绿色荧光蛋白融合蛋白小檗碱细胞转染

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地塞米松诱导小鼠胸腺细胞凋亡和ERK1/2 MAPK及钙离子浓度关系的研究

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中国药科大学学报 2004年第1期35卷 77-81页

作者：王通曾耀英李校堃何贤辉肇静娴吴晓萍付小兵暨南大学教育部组织移植与免疫重点实验室暨南大学医药生物技术研究开发中心广州510632 解放军304医院全军创伤修复重点实验室北京100000

目的 :研究胸腺细胞凋亡和ERK1/ 2途径及钙离子内流之间关系 ,以进一步探讨细胞凋亡可能的信号通路机制。方法 :以地塞米松 (DEX)诱导小鼠胸腺细胞凋亡为模型 ,通过流式细胞术和电镜测定模型的稳定性 ,利用激光扫描共聚焦分析测定细胞内... 详细信息

目的 :研究胸腺细胞凋亡和ERK1/ 2途径及钙离子内流之间关系 ,以进一步探讨细胞凋亡可能的信号通路机制。方法 :以地塞米松 (DEX)诱导小鼠胸腺细胞凋亡为模型 ,通过流式细胞术和电镜测定模型的稳定性 ,利用激光扫描共聚焦分析测定细胞内 [Ca2 + ] i、SDS PAGE及Westernblot检测细胞内总量和磷酸化ERK1/ 2MAPK。结果 :仅在完全RMPI 1640培养基培养条件下 ,小鼠胸腺细胞自发凋亡百分率为 (2 90±0 62 ) % ,而在 2 5× 10 -6mol/LDEX诱导下 ,3h培养组 (12 70± 2 44) %、6h培养组 (53 55± 4 59) %发生了细胞凋亡 ,细胞内Fluo 3绿色荧光明显增强 ;正常细胞ERK1/ 2总量随时间变化不明显 ,而DEX刺激下 ,ERK1/ 2总量随时间呈递减趋势。结论 :DEX诱导小鼠胸腺细胞凋亡过程中 ,磷酸化ERK1/ 2信号被迅速抑制 ,细胞内 [Ca2 + ] i迅速上升 ,推论磷酸化ERK1/ 2信号阻断与 [Ca2 + ]

关键词：地塞米松钙离子 ERK 线粒体膜电势

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加载HCMV抗原肽的HLA-A*0201单体及其四聚体制备和鉴定

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生物工程学报 2004年第3期20卷 382-388页

作者：何贤辉徐丽慧刘毅蔡小嫦曾耀英组织移植与免疫教育部重点实验室暨南大学广州510632 暨南大学生物工程研究所广州510632 暨南大学第一附属医院皮肤科广州510632 郑州大学第一附属医院皮肤科郑州450052

细胞毒T淋巴细胞 (CTL)在控制病原体感染以及抗肿瘤过程中发挥重要作用 ,因而特异性CTL的检测相当重要 ;而过去检测CTL的方法都是间接的 ,最近发展起来的四聚体技术则是直接检测抗原特异性CTL的有效而特异的方法 ,成为目前研究T细胞免... 详细信息

细胞毒T淋巴细胞 (CTL)在控制病原体感染以及抗肿瘤过程中发挥重要作用 ,因而特异性CTL的检测相当重要 ;而过去检测CTL的方法都是间接的 ,最近发展起来的四聚体技术则是直接检测抗原特异性CTL的有效而特异的方法 ,成为目前研究T细胞免疫应答的关键技术。报道一种简化的四聚体制备程序 ,利用该程序成功制备加载人巨细胞病毒 (HCMV)抗原肽的HLA_A2四聚体 ,具有特异性结合CTL活性。HLA_A 0 2 0 1重链基因是通过RT_PCR方法从HLA_A2 + 供者白细胞中克隆 ,进而以PCR方法构建在羧基端融合生物素化酶BirA底物肽 (BSP)的HLA_A 0 2 0 1(A2 )重链胞外区原核表达载体 ,A2重组蛋白在大肠杆菌中得到高表达 ,主要以包涵体形式存在。加载抗原肽的可溶性A2单体是A2胞外区在轻链 β2 微球蛋白和HLA_A2限制性HCMVpp6 5 495_50 3抗原肽 (NLVPMVATV ,NLV)存在时通过稀释法复性获得 ,以BirA对其进行生物素化 ,然后以阴离子交换树脂纯化 ,得到的纯化A2_NLV单体与Streptavidin_PE按 4 :0 8比例混合形成四聚体 ,结合程度在 85 %以上 ,流式细胞仪分析显示该四聚体具有与HLA_A2 + 供者的特异性CTL结合活性。总之 ,这种简化的四聚体制备程序 ,不仅有利于该技术的推广 ,为特异性T细胞免疫研究建立必要的技术平台。

关键词：人类白细胞抗原四聚体细胞毒T淋巴细胞包涵体人巨细胞病毒

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SARS-CoV Sars7a和EGFP融合蛋白真核表达载体构建及其表达

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中国病毒学 2004年第3期19卷 209-213,i001页

作者：何贤辉徐丽慧刘毅蔡小嫦曾耀英暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632 暨南大学第一附属医院皮肤科广东广州510632

根据SARS-CoVsars7a基因设计并化学合成部分重叠引物,经二轮PCR获得sars7a基因片段,以此片段为模板并利用一对带有Kozak序列及删除终止密码的引物进行PCR,获得产物与pEGFP-N1载体连接,使sars7a基因位于EGFP的基因上游,得到含编码Sars7a-... 详细信息

根据SARS-CoVsars7a基因设计并化学合成部分重叠引物,经二轮PCR获得sars7a基因片段,以此片段为模板并利用一对带有Kozak序列及删除终止密码的引物进行PCR,获得产物与pEGFP-N1载体连接,使sars7a基因位于EGFP的基因上游,得到含编码Sars7a-EGFP融合蛋白基因的哺乳动物细胞表达载体。采用细胞核转染技术将重组表达载体转染K562细胞,以流式细胞仪和共聚焦显微镜分析,可检测到EGFP的绿色荧光,表明Sars7a-EGFP得到表达,该蛋白分布于整个细胞,提示Sars7a并非膜蛋白,更可能是胞浆蛋白。此外,该蛋白的表达对K562细胞凋亡无明显影响。

关键词：严重急性呼吸综合征冠状病毒 Sars7a 绿色荧光蛋白融合蛋白表达

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氧化苦参碱对刀豆蛋白A刺激的小鼠淋巴细胞增殖影响的研究

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中国现代医学杂志 2005年第7期15卷 1005-1008页

作者：伍斌蔡小嫦曾耀英王通王希朝曾翔凤暨南大学附属第一医院皮肤科广东广州510632 暨南大学组织移植与免疫中心教育部重点实验室广东广州510632

目的应用荧光染料C FD A-SE(C arboxyfluorescein diacetate,succinim idyl ester)染色检测氧化苦参碱(O xym atrine,O M T)对刀豆蛋白A(C on A)刺激的小鼠淋巴细胞增殖的影响。方法利用C FD A-SE染色,流式细胞术检测小鼠T淋巴细胞在多... 详细信息

目的应用荧光染料C FD A-SE(C arboxyfluorescein diacetate,succinim idyl ester)染色检测氧化苦参碱(O xym atrine,O M T)对刀豆蛋白A(C on A)刺激的小鼠淋巴细胞增殖的影响。方法利用C FD A-SE染色,流式细胞术检测小鼠T淋巴细胞在多克隆刺激剂C on A和O M T的共同作同下荧光强度的变化,并应用相关软件分析O M T对小鼠淋巴细胞增殖的影响程度。结果培养48h,流式细胞仪检测的淋巴细胞C FSE荧光强度,对照组未出现子代峰,即淋巴细胞没有增殖。C on A组明显的出现3个峰,说明C on A刺激后48h细胞出现了明显的细胞增殖,与对照组相比荧光强度减半明显。在C on A+O M T各剂量组中,高剂量组即O M T500μg/m L组,原代峰显著高于C on A组,各子代峰显著低于C on A组,但与对照组比较差异无显著性,说明O M T明显抑制了淋巴细胞的增殖,中剂量组即O M T125μg/m L组和高剂量组结果一致,说明这一剂量的O M T仍然明显抑制小鼠淋巴细胞的增值,O M T低剂量组即O M T31μg/m L组和C on A组比较差异没有显著性,和对照组比较,各代细胞荧光强度差异有显著性,即这一剂量的O M T对淋巴细胞增殖抑制作用不明显。培养72h后,各组之间荧光强度变化情况与48h的情况基本一致。经C ELLQ uest软件拟合后得到各项增殖指标显示,O M T在500?

关键词： CFDA—SE OMT 淋巴细胞增殖

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