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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2005年第6期26卷 734-739,745页

作者：季煜华曾耀英俞瑜暨南大学组织移植与免疫研究中心教育部重点实验室广东广州510632

目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)用于无血清培养扩增软骨细胞的可行性及最适质量浓度.方法:分离、培养大鼠肋生长板软骨细胞(rat costochondral growth plate chondrocyte,RGC).细胞化学和免疫细胞化学染色的方法检测第1代RGC中... 详细信息

目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)用于无血清培养扩增软骨细胞的可行性及最适质量浓度.方法:分离、培养大鼠肋生长板软骨细胞(rat costochondral growth plate chondrocyte,RGC).细胞化学和免疫细胞化学染色的方法检测第1代RGC中蛋白多糖和Ⅱ型胶原的表达.观察0.1、1.0、10.0和100.0μg/L bFGF对无血清培养RGC形态的影响,并分别用3H-TdR和3H-Proline掺入法检测上述质量浓度bFGF对无血清培养RGC增殖和胶原合成的影响.结果:第1代RGC表达蛋白多糖和Ⅱ型胶原,保持了软骨细胞的分化表型.随着bFGF质量浓度的增加RGC的形态由多角形变为梭形和圆形.与无血清对照组相比,上述4个质量浓度的bFGF均显著促进RGC的增殖和胶原合成(P＜0.05),其中1.0和10.0μg/L bFGF促RGC增殖的作用与10%胎牛血清(FBS)对照组差异无显著性意义(P＞0.05),但促胶原合成作用较弱,相当于10%FBS对照组的60%左右(P＜0.05).结论:bFGF可用于无血清扩增软骨细胞,1.0～10.0 μg/L是适宜的质量浓度范围,但其促胶原合成作用较弱,还需添加其他因子以弥补促胶原合成作用的不足.

关键词：肋生长板软骨细胞碱性成纤维细胞生长因子无血清培养

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免疫突触形成过程中T细胞受体的重定向运动:涡旋驱动模型

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中国免疫学杂志 2005年第11期21卷 818-821,825页

作者：刘顺会韩博平曾耀英何贤辉广东药学院广州510224 暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广州510623

目的:建立T细胞受体(TCR)在免疫突触形成过程中作重定向(reorientation)运动的机制模型.方法:基于经典流体力学环境中的双分子反应传能原理,提出了T细胞受体的涡旋驱动模型,利用免疫突触内耦合的受体或配体分子作为涡源驱动T细胞受体分... 详细信息

目的:建立T细胞受体(TCR)在免疫突触形成过程中作重定向(reorientation)运动的机制模型.方法:基于经典流体力学环境中的双分子反应传能原理,提出了T细胞受体的涡旋驱动模型,利用免疫突触内耦合的受体或配体分子作为涡源驱动T细胞受体分子的募集.结果:模型计算的结果表明,在强度及作用频率同时具备一定范围的涡旋连续驱动下,TCR重定向运动速度可达到实验测定的范围(0.04～0.1 μm/s).结论:本模型证明突触内受体/配体对耦合时通过将其结合自由能转化为细胞内外流体涡旋运动的机械能可能直接提供了TCR重定向运动的驱动力.

关键词：免疫突触 T细胞受体重定向运动涡旋

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靛蓝和靛玉红对小鼠T细胞活化与增殖的影响

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中国药科大学学报 2005年第5期36卷 444-447页

作者：王通曾耀英肇静娴胡英杰江逊狄静芳冯铮暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广州510630 广州中医药大学热带医学研究所广州510630

目的:研究靛蓝(IB)和靛玉红(IR)对小鼠T细胞活化和增殖的影响。方法:以刀豆蛋白A(ConA)诱导小鼠T细胞活化和增殖,利用流式细胞术检测T细胞早期活化标志CD69分子表达情况;通过2-(4-碘苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-苯二磺酸)-2H-四唑单钠... 详细信息

目的:研究靛蓝(IB)和靛玉红(IR)对小鼠T细胞活化和增殖的影响。方法:以刀豆蛋白A(ConA)诱导小鼠T细胞活化和增殖,利用流式细胞术检测T细胞早期活化标志CD69分子表达情况;通过2-(4-碘苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-苯二磺酸)-2H-四唑单钠盐(WST-1)法测定细胞增殖;通过CFDA-SE染色流式细胞术检测增殖细胞各代所占比例和增殖指数(PI)。结果:小鼠T细胞离体培养6 h后,对照组活化比率为(14.25±2.25)%,在ConA的刺激下小鼠T细胞活化显著(35.25±2.31)%(P<0.01),IB和IR分别显著降低活化,(26.88±0.99)%和(23.98±2.25)%(P<0.01)。在ConA的刺激下,小鼠T细胞WST-1吸收度(1.28±0.09)显著高于对照组(0.33±0.02)(P<0.01)。IB和IR分别显著降低了ConA引起的WST-1吸收度增加(P<0.01)。在培养48 h后,空白对照组CFDA-SE流式细胞术检测结果仅显示单一亲代峰(parent),PI为1.0。ConA刺激下小鼠T细胞明显增殖,出现子一代和子二代峰,PI为1.36。在IB或IR作用下,ConA介导的小鼠T细胞增殖明显下降,亲代峰细胞数增多,子一代和二代的细胞数降低,PI均为1.22,低于ConA组。结论:靛蓝和靛玉红均可以显著的抑制ConA介导的小鼠T细胞的活化和增殖。

关键词：靛蓝靛玉红 T淋巴细胞活化增殖流式细胞术

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喘可治注射液抑制小鼠变应性接触性皮炎的实验研究

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中国病理生理杂志 2005年第4期21卷 757-760页

作者：熊恺轩曾耀英蔡小嫦王通肇静娴易敏暨南大学附属第一医院皮肤科广东广州516032 暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州516032

目的:探讨中药喘可治注射液抑制小鼠变应性接触性皮炎(Ⅳ型变态反应)的效果。方法:将小鼠按给药不同分为喘可治注射液高、中,低剂量组,地塞米松(DEX)组,苯海拉明及生理盐水组,利用2 ,4 -二硝基氟苯诱发的小鼠左耳变应性接触性皮炎的动... 详细信息

目的:探讨中药喘可治注射液抑制小鼠变应性接触性皮炎(Ⅳ型变态反应)的效果。方法:将小鼠按给药不同分为喘可治注射液高、中,低剂量组,地塞米松(DEX)组,苯海拉明及生理盐水组,利用2 ,4 -二硝基氟苯诱发的小鼠左耳变应性接触性皮炎的动物模型,各组于第0d、1d致敏前2h ,第2d和第5d诱发前2h及诱发后6h腹腔注射给药,通过测量左耳厚度差、左耳重量差,体重差及观察左耳病理改变,比较不同剂量喘可治注射液之间以及与对照组之间的疗效。结果:喘可治注射液高、中、低剂量和DEX组小鼠左耳厚度及重量的增加,浸润的单核细胞和中性粒细胞的数量均明显低于生理盐水组(P <0 . 0 1) ;DEX组小鼠左耳红肿的程度虽稍低于喘可治组,但小鼠体重差与其它组比较均有显著差异(P <0 . 0 1) ;苯海拉明组小鼠变应性接触性皮炎的程度与生理盐水组差异无显著。结论:喘可治注射液具有明显抑制小鼠变应性接触性皮炎的作用。

关键词：超敏反应,迟发型皮炎,变应性接触性喘可治

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一种分离、培养扩增小鼠NK细胞方法的建立

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细胞与分子免疫学杂志 2005年第3期21卷 379-381,389页

作者：杨志刚曾耀英何贤辉王通江逊唐德燊暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632 广东医学院附属医院广东湛江524001

目的:建立小鼠NK细胞的分离及培养扩增的方法。方法:用两步黏附分离法和磁珠活化的细胞分选(MACS)法,从小鼠脾脏的单个核细胞(MNC)中分离NK细胞,计数所得细胞的总数,并用FITC抗小鼠CD3和PE抗小鼠NK1.1单克隆荧光抗体染色后,用流式细胞仪... 详细信息

目的:建立小鼠NK细胞的分离及培养扩增的方法。方法:用两步黏附分离法和磁珠活化的细胞分选(MACS)法,从小鼠脾脏的单个核细胞(MNC)中分离NK细胞,计数所得细胞的总数,并用FITC抗小鼠CD3和PE抗小鼠NK1.1单克隆荧光抗体染色后,用流式细胞仪(FACS)检测NK细胞的纯度。以YAC -1为靶细胞,用MTT比色法检测NK细胞的杀伤活性。结果:将两步黏附分离法分离的2×107个脾MNC培养5、10、15、20d,计数细胞的总数并检测CD3-NK1.1+细胞百分率,分别为0.5×107、1.4×107、2.6×107、3.0×107和18.36%、43.44%、55.68%、60.03%。效靶细胞25∶1时,NK细胞的杀伤率分别为54.38%、66.54%、79.38%和83.86%,明显高于脾MNC(41.93%)(P<0.01)。MACS法纯化前后细胞的总数和CD3-NK1.1+细胞的百分率,分别为1.0×108、1.5×106和2.54%、93.60%;但纯化后的细胞在体外培养20d时,只扩增到1.9×106个。结论:用两步黏附分离法分离的小鼠NK细胞,培养2～3wk可获得大量的NK细胞,纯度可达55%～60%;在效靶细胞为25∶1时,NK细胞对YAC1细胞的杀伤率约为80%。

关键词： NK细胞分离培养扩增增殖 IL-2

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白藜芦醇对小鼠T细胞活化、增殖及细胞因子分泌的影响

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细胞与分子免疫学杂志 2005年第6期21卷 697-699,703页

作者：俞瑜曾耀英季煜华肇静娴刘良暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632 香港浸会大学中医药学院

目的:研究白藜芦醇(RSV)对小鼠T淋巴细胞增殖及细胞因子分泌的影响,为阐明其免疫抑制作用提供实验依据。方法:无菌分离小鼠淋巴结细胞,加入不同浓度的RSV预先孵育1h,用多克隆刺激剂佛波醇酯和离子霉素刺激T细胞活化增殖。采用3H-TdR掺... 详细信息

目的:研究白藜芦醇(RSV)对小鼠T淋巴细胞增殖及细胞因子分泌的影响,为阐明其免疫抑制作用提供实验依据。方法:无菌分离小鼠淋巴结细胞,加入不同浓度的RSV预先孵育1h,用多克隆刺激剂佛波醇酯和离子霉素刺激T细胞活化增殖。采用3H-TdR掺入法检测RSV对T细胞增殖的影响;用RT-PCR检测IL-2及IFN-γmRNA的表达;用胞内细胞因子染色法分析IL-2和IFN-γ的分泌。结果:RSV能抑制T细胞增殖,也能在mRNA水平及蛋白水平上抑制IL-2及IFN-γ的分泌。结论:RSV对T细胞的免疫抑制作用,可能与其抑制T细胞的活化、增殖和细胞因子的分泌有关。

关键词：白藜芦醇活化增殖细胞因子

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氧化苦参碱抑制二硝基氟苯所致小鼠接触性皮炎及淋巴细胞增殖

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中国病理生理杂志 2005年第5期21卷 931-935页

作者：伍斌蔡小嫦曾耀英施军王通肇静娴黄秀艳暨南大学附属第一医院皮肤科广东广州510632 暨南大学组织移植与免疫中心教育部重点实验室广东广州510632

目的探讨氧化苦参碱(OMT)对二硝基氟苯(DNFB)所致小鼠变应性接触性皮炎(ACD)的抑制作用及小鼠淋巴细胞增殖的影响。方法①建立DNFB所致小鼠ACD模型,以不同剂量的OMT、PBS、氢化可的松(HCT)进行腹腔注射,检测小鼠耳廓肿胀度变化。②利用... 详细信息

目的探讨氧化苦参碱(OMT)对二硝基氟苯(DNFB)所致小鼠变应性接触性皮炎(ACD)的抑制作用及小鼠淋巴细胞增殖的影响。方法①建立DNFB所致小鼠ACD模型,以不同剂量的OMT、PBS、氢化可的松(HCT)进行腹腔注射,检测小鼠耳廓肿胀度变化。②利用羧基荧光素乙酰乙酸(CFDA-SE)染色,流式细胞术检测OMT对小鼠淋巴细胞增殖的影响。结果①OMT对DNFB所致小鼠ACD呈剂量依赖性抑制作用,且与同等剂量HCT作用效果相似,但副作用明显减小。②体外实验证明,在500、125和31mg/L组,OMT对小鼠淋巴细胞增殖呈剂量依赖性抑制。结论OMT对DNFB所致小鼠ACD有显著的抑制作用,而且抑制小鼠淋巴细胞增殖;OMT是一种免疫抑制剂。

关键词：二硝基氟苯皮炎,变应性接触性苦参淋巴细胞

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PKCθ-EGFP融合蛋白在HeLa细胞中的表达及其对细胞形态的影响

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2005年第4期26卷 470-474页

作者：杜丽蕊徐丽慧何贤辉暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室暨南大学生物工程研究所广东广州510632

目的:分析增强型绿色荧光蛋白(EGFP)与蛋白激酶C-θ(PKCθ)的融合蛋白(PKCθ-EGFP)在HeLa细胞中的表达、亚细胞定位及其对细胞形态的影响。方法:用脂质转染胺(Lipofec-tAMINE 2000)为载体分别以pPKCθ-EGFP和pEGFP-N1转染HeLa细胞,流式... 详细信息

目的:分析增强型绿色荧光蛋白(EGFP)与蛋白激酶C-θ(PKCθ)的融合蛋白(PKCθ-EGFP)在HeLa细胞中的表达、亚细胞定位及其对细胞形态的影响。方法:用脂质转染胺(Lipofec-tAMINE 2000)为载体分别以pPKCθ-EGFP和pEGFP-N1转染HeLa细胞,流式细胞仪分析其表达率,激光共聚焦显微镜分析其亚细胞定位,同时分析二丁酸佛波醇酯(PDB)和小檗碱对其亚细胞定位和细胞形态的影响。结果:转染pEGFP-N1或pPKCθ-EGFP的HeLa细胞48 h后,表达绿色荧光的细胞百分率分别为(70.9±4.4)%和(45.8±2.3)%(P<0.05)。表达的PKCθ-EGFP融合蛋白均匀分布于细胞内,与EGFP蛋白在细胞内的分布相似。PDB刺激30 min后,表达PKCθ-EGFP的HeLa细胞的形态发生显著变化,即由原来的梭形变成圆形,荧光强度增强。但表达EGFP的HeLa细胞的形态及荧光分布均不受影响。小檗碱对PDB诱导的HeLa细胞的形态和EGFP-PKCθ融合蛋白的分布无明显影响。结论:表达PKCθ-EGFP融合蛋白的HeLa细胞在PDB作用下细胞形态发生显著变化。

关键词：蛋白激酶Cθ 绿色荧光蛋白融合蛋白小檗碱细胞转染

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氧化苦参碱对刀豆蛋白A刺激的小鼠淋巴细胞增殖影响的研究

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中国现代医学杂志 2005年第7期15卷 1005-1008页

作者：伍斌蔡小嫦曾耀英王通王希朝曾翔凤暨南大学附属第一医院皮肤科广东广州510632 暨南大学组织移植与免疫中心教育部重点实验室广东广州510632

目的应用荧光染料C FD A-SE(C arboxyfluorescein diacetate,succinim idyl ester)染色检测氧化苦参碱(O xym atrine,O M T)对刀豆蛋白A(C on A)刺激的小鼠淋巴细胞增殖的影响。方法利用C FD A-SE染色,流式细胞术检测小鼠T淋巴细胞在多... 详细信息

目的应用荧光染料C FD A-SE(C arboxyfluorescein diacetate,succinim idyl ester)染色检测氧化苦参碱(O xym atrine,O M T)对刀豆蛋白A(C on A)刺激的小鼠淋巴细胞增殖的影响。方法利用C FD A-SE染色,流式细胞术检测小鼠T淋巴细胞在多克隆刺激剂C on A和O M T的共同作同下荧光强度的变化,并应用相关软件分析O M T对小鼠淋巴细胞增殖的影响程度。结果培养48h,流式细胞仪检测的淋巴细胞C FSE荧光强度,对照组未出现子代峰,即淋巴细胞没有增殖。C on A组明显的出现3个峰,说明C on A刺激后48h细胞出现了明显的细胞增殖,与对照组相比荧光强度减半明显。在C on A+O M T各剂量组中,高剂量组即O M T500μg/m L组,原代峰显著高于C on A组,各子代峰显著低于C on A组,但与对照组比较差异无显著性,说明O M T明显抑制了淋巴细胞的增殖,中剂量组即O M T125μg/m L组和高剂量组结果一致,说明这一剂量的O M T仍然明显抑制小鼠淋巴细胞的增值,O M T低剂量组即O M T31μg/m L组和C on A组比较差异没有显著性,和对照组比较,各代细胞荧光强度差异有显著性,即这一剂量的O M T对淋巴细胞增殖抑制作用不明显。培养72h后,各组之间荧光强度变化情况与48h的情况基本一致。经C ELLQ uest软件拟合后得到各项增殖指标显示,O M T在500?

关键词： CFDA—SE OMT 淋巴细胞增殖

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MMP-2、TIMP-2和VEGF-C在肝细胞性肝癌中的表达及其与淋巴结转移关系的研究

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中国病理生理杂志 2005年第7期21卷 1336-1339页

作者：朱彩荣曾祥凤陈亚进陈积圣中山大学附属第二医院肝胆外科广东广州510120 暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632

目的:本实验旨在探讨MMP-2、TIMP-2和VEGF-C与HCC淋巴结转移的关系,寻找诊断HCC淋巴结转移的指标,为HCC治疗方式选择提供有意义指导。方法:选取临床手术切除、病理确诊、石蜡包埋的HCC有/无淋巴结转移癌组织标本各22例,4μm厚连续切片,... 详细信息

目的:本实验旨在探讨MMP-2、TIMP-2和VEGF-C与HCC淋巴结转移的关系,寻找诊断HCC淋巴结转移的指标,为HCC治疗方式选择提供有意义指导。方法:选取临床手术切除、病理确诊、石蜡包埋的HCC有/无淋巴结转移癌组织标本各22例,4μm厚连续切片,用鼠抗人MMP-2单抗、TIMP-2单抗和兔抗人VEGF-C多抗,免疫组化SP法检测,并比较其在癌组织中的表达情况。结果:MMP-2、TIMP-2和VEGF-C在HCC有淋巴结转移组总阳性表达率分别为81.8%、13.6%和72.7%;在无淋巴结转移组则分别为54.5%、40.9%和36.4%。HCC有淋巴结转移组MMP-2和VEGF-C的阳性表达率明显高于无淋巴结转移组(P<0.05),而TIMP-2的阳性表达率则相反,低于无淋巴结转移组(P<0.05)。结论:MMP-2和VEGF-C的过量表达及TIMP-2的低表达可能与HCC发生淋巴结转移有关;VEGF-C可能是促进HCC淋巴结转移的重要因素。联合检测MMP-2、TIMP-2和VEGF-C的表达情况可能对判断淋巴结转移和临床预后有重要价值。

关键词：癌,肝细胞明胶酶A 淋巴转移内皮生长因子

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