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现代免疫学 2008年第6期28卷 457-464页

作者：王慧琪李萃林羿王文静曾山暨南大学组织移植与免疫研究中心广州510632 中南大学湘雅医院卫生部肿瘤蛋白质组学重点实验室长沙410008

调节性T细胞和调节性NK细胞都可能在维持妊娠方面发挥关键作用。研究显示,同种异基因妊娠非肥胖型糖尿病(NOD)小鼠胚胎丢失率显著增高,而注射抗唾液酸神经节苷脂清除其残存的NK细胞,可使胚胎丢失率进一步增高。相反,过继性输注来源于正... 详细信息

调节性T细胞和调节性NK细胞都可能在维持妊娠方面发挥关键作用。研究显示,同种异基因妊娠非肥胖型糖尿病(NOD)小鼠胚胎丢失率显著增高,而注射抗唾液酸神经节苷脂清除其残存的NK细胞,可使胚胎丢失率进一步增高。相反,过继性输注来源于正常小鼠的CD49b+CD25+NK细胞可显著降低胚胎丢失率。检测了CXCL12的特异性受体CXCR4在NK细胞表面的表达模式,并采用体外和体内迁移实验研究了NK细胞的迁移规律。由于以往研究证实小鼠胎盘滋养层细胞表达CXCL12,研究结果提示:孕期动员子宫外表达CXCR4的CD49b+CD25+NK细胞向妊娠子宫内迁移,可能对于调节母胎免疫耐受具有重要意义。

关键词：动物模型细胞迁移免疫调节妊娠耐受

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大豆异黄酮Genistein对T细胞体外活化CD69表达的影响

大豆异黄酮Genistein对T细胞体外活化CD69表达的影响

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第二届全国中医药免疫学术研讨会

作者：肇静娴曾洁铭曾耀英暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室(广州)

本文研究大豆异黄酮对T细胞活化的影响,探讨大豆异黄酮对PTK的抑制效应能否发展成一种免疫调节药物从而对机体进行免疫干预.

关键词：大豆异黄酮 T细胞活化 CD69表达免疫干预

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通痹灵对小鼠活化T细胞CD69表达的影响——血清免疫药理评价

通痹灵对小鼠活化T细胞CD69表达的影响——血清免疫药理评价

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第二届全国中医药免疫学术研讨会

作者：全世明曾耀英暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室(广州)

本文通过药物及其含药血清对有效分裂原——刀豆蛋白A或佛波醇酯刺激下的T淋巴细胞CD69表达的影响,研究复方制剂通痹灵对体外活化T淋巴细胞的影响,并揭示其免疫调节机理.

关键词： T细胞活化 CD69表达血清免疫药理通痹灵制剂

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bFGF特异性结合噬菌体的活性研究

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中国生物工程杂志 2009年第1期29卷 23-26页

作者：颜秋霞吴晓萍黄慧贤聂昌君聂燕芳柯实肖健李校堃温州医学院药学院/浙江省生物技术制药工程重点实验室温州325035 暨南大学医药生物技术研究开发中心广州510632 暨南大学组织移植与免疫实验中心广州510632

研究从噬菌体随机7肽库中筛选的bFGF特异性结合噬菌体的活性。采用ELISA检测3轮淘选后得到的阳性噬菌体克隆对bFGF的结合曲线。通过竞争抑制实验,分析bFGF结合噬菌体与bFGF的竞争结合活性。采用MTT法检测bFGF结合噬菌体对由bFGF诱导的Ba... 详细信息

研究从噬菌体随机7肽库中筛选的bFGF特异性结合噬菌体的活性。采用ELISA检测3轮淘选后得到的阳性噬菌体克隆对bFGF的结合曲线。通过竞争抑制实验,分析bFGF结合噬菌体与bFGF的竞争结合活性。采用MTT法检测bFGF结合噬菌体对由bFGF诱导的Balb/c3T3细胞增殖的影响。从噬菌体肽库中淘选获得的阳性噬菌体克隆能够特异地与bFGF结合,并呈剂量依赖性,其与固相bFGF的结合能被游离的bFGF竞争抑制,并可抑制由bFGF诱导的Balb/c3T3细胞增殖。bFGF特异性噬菌体可拮抗bFGF的活性,为开发针对bFGF的抗肿瘤短肽类新药提供基础。

关键词：噬菌体展示肽库碱性成纤维细胞生长因子 bFGF结合噬菌体

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T细胞行为研究方法学与免疫干预药物筛选

T细胞行为研究方法学与免疫干预药物筛选

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第二届全国中医药免疫学术研讨会

作者：曾耀英暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室(广州)

T细胞行为包括抗原识别、活化、增殖、克隆扩增、分化、效应者作用、凋亡和免疫记忆,本文通过T细胞行为研究,探索中药的干预效应和中药的免疫药物筛选.

关键词：中医免疫学 T细胞识别免疫干预药物筛选中药干预效应

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IL-6诱导血管内皮细胞纤溶相关蛋白的表达

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第二军医大学学报 2005年第7期26卷 783-787页

作者：唐小龙江振友曾耀英林羿王华东蔡淑玉暨南大学组织移植与免疫学教育部重点实验室广州510632 暨南大学医学院微生物学与免疫学教研室广州510632 暨南大学医学院病理生理学教研室安徽理工大学医学院淮南232001

目的:观察IL-6对脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)表达组织纤溶酶原激活物(tPA)和纤溶酶原激活物抑制物1(PAI-1)的影响.方法:用生长良好的第2、3代HUVECs细胞进行实验,用CCK-8测定IL-6(0.125、0.25、0.5、1.2 ng/ml)作用前后细胞活性;用发色... 详细信息

目的:观察IL-6对脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)表达组织纤溶酶原激活物(tPA)和纤溶酶原激活物抑制物1(PAI-1)的影响.方法:用生长良好的第2、3代HUVECs细胞进行实验,用CCK-8测定IL-6(0.125、0.25、0.5、1.2 ng/ml)作用前后细胞活性;用发色底物法测定0.5 ng/ml IL-6组和对照组(不加IL-6)培养上清液中tPA、PAI-1活性;进一步用RT-PCR检测细胞内tPA和PAI-1 mRNA水平.结果:与对照组相比, IL-6(≤0.5 ng/ml)对细胞增殖活性的影响无差异性.0.5 ng/ml IL-6组tPA活性在12～72 h显著升高(P<0.05),且显著上调tPA mRNA,12 h达到峰值,以后渐降,48 h mRNA达正常水平.而IL-6组PAI-1活性与PAI-1 mRNA表达与对照组无差异性.结论: IL-6可活化内皮细胞,显著上调HUVECs的tPA mRNA的转录和tPA分泌,诱发纤溶系统活化,而对PAI-1 mRNA或PAI-1活性无影响.IL-6的这种效应在炎症反应的病理生理过程中可能发挥重要作用.

关键词：组织纤溶酶原激活物纤溶酶原激活物抑制物1 白细胞介素6 人脐静脉血管内皮细胞

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晚孕期胎盘因子对小鼠淋巴细胞增殖的影响

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现代免疫学 2007年第2期27卷 125-128页

作者：李莉平林羿康佳丽夏薇王自能广州市第一人民医院妇产科广州510180 暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室暨南大学第一临床医学院妇产科教研室广州510632

通过晚孕期胎盘因子(PF)对小鼠淋巴细胞体外增殖的作用,探讨PF对正常机体免疫系统和免疫功能的效应。分离小鼠淋巴细胞,用ConA刺激其增殖,并分别与晚孕期不同浓度的PF作用,于48 h和72 h用活体染料羧基荧光素乙酰乙琥珀酰亚胺酯(CFSE)标... 详细信息

通过晚孕期胎盘因子(PF)对小鼠淋巴细胞体外增殖的作用,探讨PF对正常机体免疫系统和免疫功能的效应。分离小鼠淋巴细胞,用ConA刺激其增殖,并分别与晚孕期不同浓度的PF作用,于48 h和72 h用活体染料羧基荧光素乙酰乙琥珀酰亚胺酯(CFSE)标记,流式细胞术检测增殖。于48 h碘化丙啶染色,流式细胞术检测细胞周期分布。结果显示,晚孕期PF在48 h和72 h时间点均能显著促进ConA诱导的小鼠淋巴细胞增殖反应,且效应与剂量呈正相关。晚孕期各浓度PF组G0期所占比率均显著低于对照组,且浓度越大,比率越低,组间两两比较有统计学意义。各浓度PF组S期所占比率均显著高于对照组,各浓度PF组G2/M期所占比率均显著高于对照组,25%PF组G2/M期所占比率均显著高于5%PF组和15%PF组。晚孕期PF通过促进小鼠淋巴细胞由G1期向S和G2/M期而促进ConA刺激小鼠淋巴细胞的增殖反应,提示PF具有免疫调节的功能,可以提高机体的免疫功能。

关键词：胎盘因子人免疫缺陷病毒 CFSE 淋巴细胞增殖细胞周期分布

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可溶性EGF受体胞外域在HeLa细胞中的表达及鉴定

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2006年第2期27卷 189-193页

作者：徐丽慧洪岸何贤辉暨南大学生命科学技术学院生物工程研究所组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632

目的:在哺乳动物细胞中表达可溶性人表皮生长因子受体(sEGFR)并进行鉴定。方法:以带信号肽的sEGFR的真核表达载体pEGFR s或pEGFP-N1空载体转染HeLa细胞,利用流式细胞仪和激光共聚焦显微镜分析外源基因的表达水平,并以免疫印迹法分析培... 详细信息

目的:在哺乳动物细胞中表达可溶性人表皮生长因子受体(sEGFR)并进行鉴定。方法:以带信号肽的sEGFR的真核表达载体pEGFR s或pEGFP-N1空载体转染HeLa细胞,利用流式细胞仪和激光共聚焦显微镜分析外源基因的表达水平,并以免疫印迹法分析培养上清中的sEG-FR。结果:转染pEGFP-N1的HeLa细胞,48 h后EGFP的表达百分率可达83%,而转染pEGFR s载体的HeLa细胞EGFP阳性率为4.8%,表明由于插入的sEGFR基因包含终止密码而抑制了EG-FP的表达;共聚焦显微镜观察也得到一致的结果。进一步以抗EGFR结构域L2的抗血清进行免疫印迹分析证明,转染pEGFR s的HeLa细胞培养上清液中表达sEGFR,存在相对分子质量为83 000和80 000两种产物。结论:转染表达载体的HeLa细胞分泌表达sEGFR。

关键词：表皮生长因子受体可溶性EGFR HeLa细胞

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增强型绿色荧光蛋白在人软骨细胞中的表达及修复重建人软骨示踪方法的研究

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中国临床康复 2004年第20期8卷 3981-3983页

作者：江逊曾耀英何贤辉徐丽慧狄静芳冯铮肇静娴史剑波暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东省广州市510632 中山大学附属第一医院耳鼻喉科广东省广州市510080

目的:检测增强型绿色荧光蛋白(enhancedgreenfluorescenceprotein,EGFP)基因在原代培养的人鼻中隔软骨细胞的转染效率及瞬时表达,建立原代培养的人鼻中隔软骨细胞的示踪方法,为用组织工程法修复重建人软骨寻求示踪方法提供依据。方法:... 详细信息

目的:检测增强型绿色荧光蛋白(enhancedgreenfluorescenceprotein,EGFP)基因在原代培养的人鼻中隔软骨细胞的转染效率及瞬时表达,建立原代培养的人鼻中隔软骨细胞的示踪方法,为用组织工程法修复重建人软骨寻求示踪方法提供依据。方法:在大肠杆菌中扩增pEGFP-N1质粒,通过Amaxa细胞核转染仪将pEGFP-N1质粒转入原代培养的人鼻中隔软骨细胞,应用荧光显微镜和激光共聚焦显微镜观察其转染过程及瞬时表达情况,流式细胞仪检测其转染效率。结果:增强型绿色荧光蛋白在基因转染24h后得到了明显表达,48h后流式细胞仪检测其转化率为35.37%,且未影响软骨细胞的贴壁过程。结论:经pEGFP-N1质粒转染的原代培养的人软骨细胞仍能在体外存活,pEGFP-N1是转染原代培养的人软骨细胞较为理想的瞬时表达载体,也是组织工程化软骨形成过程的良好示踪剂。

关键词：生物医学工程软骨细胞荧光抗体技术基因表达转染

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联合应用活体染料CFDA-SE和SNARF-1检测混合淋巴细胞反应

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细胞与分子免疫学杂志 2006年第3期22卷 382-384,387页

作者：肇静娴曾耀英刘毅何贤辉暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510630 中国医学科学院中国协和医科大学皮肤病研究所江苏南京210042

目的建立一种能够对单向混合淋巴细胞反应中应答细胞的应答强度进行更全面评价的增殖检测方法。方法BALB/cJ小鼠淋巴结细胞经CFDA-SE标记后作为应答细胞,BALB/cJ或C57BL/6小鼠脾细胞经丝裂霉素C处理后再用SNARF-1标记,作为刺激细胞,进... 详细信息

目的建立一种能够对单向混合淋巴细胞反应中应答细胞的应答强度进行更全面评价的增殖检测方法。方法BALB/cJ小鼠淋巴结细胞经CFDA-SE标记后作为应答细胞,BALB/cJ或C57BL/6小鼠脾细胞经丝裂霉素C处理后再用SNARF-1标记,作为刺激细胞,进行混合培养。混合培养96h后收获细胞,用流式细胞术进行检测,分析SNARF-1-CFSE+应答细胞的增殖情况,并用ModFitTM软件拟和以获得更多增殖相关指数。结果随着应答细胞分裂代数的增加,CFSE荧光强度逐渐减弱直至与刺激细胞无法分开,通过划除SNARF-1阳性细胞以确定应答细胞,解决了这一问题。应用ModFitTM软件,获得应答细胞的前体频率和增殖指数等多项重要的增殖相关指标。结论联合应用CFSE和SNARF-1染色,结合流式细胞术,可作为评价混合淋巴细胞反应中应答细胞的应答强度的有力工具。

关键词： CFDA-SE SNARF-1 混合淋巴细胞反应增殖

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