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第四军医大学学报 2006年第12期27卷 1064-1067页

作者：肇静娴曾耀英江逊季煜华刘毅暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510630 中国医学科学院中国协和医科大学皮肤病研究所江苏南京210042

目的:了解胎盘绒毛对T细胞应答的抑制能力及其在妊娠周期不同阶段的变化.方法:制备孕10,20和37wk的绒毛提取物,通过检测CD69和CD25分子的表达,评价其对T细胞活化的影响,WST-1法分析其对T细胞增殖的影响,流式微球阵列(CBA)法分析其对Th1/... 详细信息

目的:了解胎盘绒毛对T细胞应答的抑制能力及其在妊娠周期不同阶段的变化.方法:制备孕10,20和37wk的绒毛提取物,通过检测CD69和CD25分子的表达,评价其对T细胞活化的影响,WST-1法分析其对T细胞增殖的影响,流式微球阵列(CBA)法分析其对Th1/Th2细胞因子谱的影响,并以Western印迹法分析提取物中吲哚胺-2,3双加氧酶(IDO)的含量.结果:孕早、中、晚期的胎盘绒毛提取物均能显著抑制植物血凝素(PHA)诱导的人T细胞活化,增殖,细胞因子分泌以及ConA诱导的小鼠T细胞活化(P<0.01).但三个时期的提取物对上述不同T细胞行为的抑制强度不同,以20wk提取物的抑制作用最强.提取物中IDO蛋白的含量20wk最高,37wk次之,10wk最低.结论:妊娠不同时期的绒毛滋养细胞均能够抑制T细胞应答,但抑制强度不一致,且对T细胞不同行为的抑制存在分离现象,提示妊娠不同时期的绒毛滋养细胞表达抑制因子的模式不同.

关键词：胎盘绒毛滋养层免疫抑制 T淋巴细胞色氨酸加氧酶

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ASCT2胞外域ECL2原核可溶性表达条件的优化及其纯化

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医学分子生物学杂志 2010年第2期7卷 126-130页

作者：陈清欧阳东云徐丽慧耿梅张延亭何贤辉暨南大学组织移植与免疫实验中心广州市510632 暨南大学再生医学教育部重点实验室广州市510632 暨南大学生物工程研究所广州市510632

目的构建重组人ASCT2胞外域ECL2融合蛋白的原核表达载体，优化其在大肠埃希菌中可溶性表达的条件，并获得纯化的ECL2蛋白。方法以PCR方法扩增编码ECL2的DNA片段，插入至pET-41b载体中，构建ECL2的原核表达载体，转化至大肠埃希菌，优化... 详细信息

目的构建重组人ASCT2胞外域ECL2融合蛋白的原核表达载体，优化其在大肠埃希菌中可溶性表达的条件，并获得纯化的ECL2蛋白。方法以PCR方法扩增编码ECL2的DNA片段，插入至pET-41b载体中，构建ECL2的原核表达载体，转化至大肠埃希菌，优化可溶性表达条件，GSH—Agarose亲和层析纯化并鉴定，与MCF-7细胞结合活性的测定。结果免疫印迹显示，ECL2融合蛋白既表达于包涵体中，也能以可溶性形式表达。随IPTG浓度的增高，可溶性表达水平提高；培养温度为28℃和33℃时可溶性产物高于37℃；而随诱导时间的延长至12h以上，可溶性表达量下降。可溶性表达优化条件为：温度33℃、IPTG浓度0．4mmol／L、诱导时间4h。经亲和层析获得高纯度ECL2蛋白并具有与MCF-7细胞结合活性。结论优化了ECL2融合蛋白的可溶性表达条件，通过亲和层析一步法可获得高纯度融合蛋白。

关键词：中性氨基酸转运蛋白2 胞外结构域可溶性表达合胞素

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重组人ASCT2胞外结构域ECL2在大肠杆菌中的表达及其鉴定

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生命科学研究 2010年第3期14卷 213-218页

作者：欧阳东云徐丽慧高琦郭贺陈清何贤辉暨南大学组织移植与免疫实验中心中国广东广州510632 暨南大学再生医学教育部重点实验室中国广东广州510632 暨南大学生物工程研究所中国广东广州510632

中性氨基酸转运蛋白(ASCT2)是人类内源性病毒的包膜蛋白合胞素在细胞膜上的主要受体,ECL2是该受体的其中一个较大的胞外结构域.通过RT-PCR方法从人乳腺癌MCF-7细胞中克隆ASCT2基因编码区全长序列,再从中扩增ASCT2的胞外区ECL2序列,与pET... 详细信息

中性氨基酸转运蛋白(ASCT2)是人类内源性病毒的包膜蛋白合胞素在细胞膜上的主要受体,ECL2是该受体的其中一个较大的胞外结构域.通过RT-PCR方法从人乳腺癌MCF-7细胞中克隆ASCT2基因编码区全长序列,再从中扩增ASCT2的胞外区ECL2序列,与pET-41b连接构建原核表达载体,重组质粒在大肠杆菌中获得高效表达,重组蛋白在N-和C-端分别融合谷胱甘肽转移酶(GST)和His6标签,融合蛋白在上清液和包涵体中均有表达,可溶性部分经亲和层析纯化获得高纯度的重组蛋白,该蛋白可结合在表达合胞素的MCF-7细胞表面,具有结合合胞素的潜在活性,这些结果为进一步研究ASCT2与合胞素的相互作用奠定了基础.

关键词：合胞素中性氨基酸转运蛋白胞外结构域原核表达

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外伤性眼内炎对眼免疫赦免状态的影响

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眼科研究 2000年第4期18卷 339-342页

作者：彭广华李志杰李辰河南医科大学博士后流动站暨南大学组织移植与免疫实验中心眼科学实验室广州510632

目的研究外伤后眼内炎症对眼免疫赦免状态的影响。方法在Ｗｉｓｔａｒ大鼠和新西兰白兔建立外伤性眼内炎模型。将牛血清白蛋白分别接种于受伤眼和正常眼玻璃体腔。接受附加佐剂的牛血清白蛋白免疫方案１周后，评价其诱导玻璃体腔相关免... 详细信息

目的研究外伤后眼内炎症对眼免疫赦免状态的影响。方法在Ｗｉｓｔａｒ大鼠和新西兰白兔建立外伤性眼内炎模型。将牛血清白蛋白分别接种于受伤眼和正常眼玻璃体腔。接受附加佐剂的牛血清白蛋白免疫方案１周后，评价其诱导玻璃体腔相关免疫偏离的能力，并观察受伤眼组织病理学改变。结果眼外伤后５～７天发生中度到重度炎症反应。常规免疫组动物均出现抗原特异性迟发型超敏反应（ＤＴＨ）阳性；单纯玻璃体腔抗原接种组动物均显示ＤＴＨ阴性；受伤眼玻璃体腔抗原接种组和受伤眼玻璃体抗原接种后对侧正常眼玻璃体抗原接种组均显示ＤＴＨ阳性。结论外伤性眼内炎导致受伤眼和正常眼免疫偏离诱导的失败。眼相关免疫偏离的消失可能参与了交感性眼炎的发病过程。

关键词：外伤性眼内炎免疫偏离免疫赦免动物模型

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CBA/N小鼠肝癌移植瘤的建立及重建SCID免疫的B淋巴细胞抗癌作用

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第四军医大学学报 2004年第11期25卷 998-1001页

作者：江逊张志培曾耀英王文亮黄立军施新猷暨南大学组织移植与免疫学教育部重点实验室广东广州510632 第四军医大学唐都医院儿科陕西西安710038 第四军医大学基础部病理学教研室陕西西安710033

目的 :研究CBA/N ,nude,SCID小鼠建立人肝癌模型和重建SCID免疫的特点 ,初步探讨B淋巴细胞及其抗体对肝癌细胞生长的排斥作用 .方法 :将体外培养的人肝癌细胞接种到B细胞缺陷的CBA/N ,T细胞缺陷的BALB/c nu ,T ,B细胞缺陷的SCID小鼠及... 详细信息

目的 :研究CBA/N ,nude,SCID小鼠建立人肝癌模型和重建SCID免疫的特点 ,初步探讨B淋巴细胞及其抗体对肝癌细胞生长的排斥作用 .方法 :将体外培养的人肝癌细胞接种到B细胞缺陷的CBA/N ,T细胞缺陷的BALB/c nu ,T ,B细胞缺陷的SCID小鼠及免疫重建的SCID小鼠中 ,观察瘤细胞生长特点 ;取实验小鼠血清 ,测定荷瘤鼠抗体Ig含量的变化 ,取小鼠血清与肝癌细胞作抗原抗体凝集试验 .结果 :CBA/N和用BALB/c小鼠外周血淋巴细胞重建的SCID(B PBL SCID)小鼠不成瘤 ,nude ,SCID和用CBA/N外周血淋巴细胞重建的SCID (C PBL SCID)小鼠 1 0 0 %成瘤 ;有B淋巴细胞的实验鼠 (包括B PBL SCID)测到的Ig达到mg/mL水平 ,血清能与肝癌产生凝集反应 .结论 :SCID小鼠是建立肿瘤模型和免疫重建及其肿瘤免疫研究的理想的实验动物 ;

关键词：肝癌细胞接种免疫缺陷小鼠 SCID免疫重建抗体

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15种中草药对小鼠吞噬细胞吞噬白假丝酵母菌的影响

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赣南医学院学报 2005年第5期25卷 577-578页

作者：马廉兰张文平刘志春谢水祥曾祥凤赣南医学院病原生物学教研室江西赣州341000 暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632

目的:探讨黄芩等中草药50%乙醇提取物对小鼠中性粒细胞吞噬白假丝酵母菌的影响。方法:采用BALB/c小鼠体内吞噬实验法,设立对照组与试验组,对比观察实验组与对照组小鼠中性粒细胞对白假丝酵母菌的吞噬百分数及吞噬指数。结果:(1)吞噬百... 详细信息

目的:探讨黄芩等中草药50%乙醇提取物对小鼠中性粒细胞吞噬白假丝酵母菌的影响。方法:采用BALB/c小鼠体内吞噬实验法,设立对照组与试验组,对比观察实验组与对照组小鼠中性粒细胞对白假丝酵母菌的吞噬百分数及吞噬指数。结果:(1)吞噬百分数均值及P值:黄芩85.1%、P<0.01,牡丹皮87.6%、P<0.01,羌活51.7%、P<0.05,大黄53.8%、P<0.05,千里光66.3%、P<0.05;(2)吞噬指数均值及P值:黄芩2.09、P<0.05,牡丹皮1.523、P<0.05;(3)知母、五蓓子、大蒜、茵陈、白花蛇舌草、黄精、补骨脂、金银花、桑枝、海金沙吞噬百分数及吞噬指数的P值均大于0.05。结论:黄芩、牡丹皮、羌活、大黄、千里光具有增强中性粒细胞对白假丝酵母菌的吞噬作用,知母、五蓓子、大蒜、茵陈、白花蛇舌草、黄精、补骨脂、金银花、、桑枝、海金沙对中性粒细胞吞噬作用无明显影响。

关键词：黄芩白假丝酵母菌吞噬百分数吞噬指数

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白假丝酵母菌不同菌株荚膜的对比性观察

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赣南医学院学报 2005年第4期25卷 429-431页

作者：马廉兰钟有添刘志春王小丽谢水祥曾祥凤李坊贞张文平江西赣南医学院病原生物学教研室江西赣州341000 暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632

目的:观察白假丝酵母菌标准菌株(CCCMC1a、ATCC 14053)与临床分离菌株(C1-1、C1-2、 C1-3 、C1-4)于不同条件下荚膜层的厚度变化.方法:(1)将实验菌种沙保氏琼脂36小时培养物用生理盐水配成约含1×109个/ml的菌悬液,家兔耳缘静脉注射... 详细信息

目的:观察白假丝酵母菌标准菌株(CCCMC1a、ATCC 14053)与临床分离菌株(C1-1、C1-2、 C1-3 、C1-4)于不同条件下荚膜层的厚度变化.方法:(1)将实验菌种沙保氏琼脂36小时培养物用生理盐水配成约含1×109个/ml的菌悬液,家兔耳缘静脉注射,1ml/只,同时用BALB/c小鼠腹腔注射,0.5ml/只;待实验动物发病后解剖动物,分别取家兔肾组织印片及小鼠腹腔液涂片进行Hiss荚膜染色镜检,用显微测微计测量荚膜层的厚度,各菌株随机计数40个酵母细胞的荚膜层的厚度值,取各菌株荚膜层厚度的均值进行比较. (2)实验菌株沙保氏液体培养物与同一菌株的抗血清作荚膜肿胀实验及血清交叉实验,Hiss荚膜染色镜检.荚膜层厚度的测量与计算方法同前.结果:(1)标准菌株与临床分离菌株在家兔及小白鼠体内均可形成荚膜,荚膜层的厚度可因不同菌种(株)和不同环境而有差异(均值在0.25～0.58μm不等;P＜0.01或＜0.05),边界明显.(2)用全菌抗血清作荚膜肿胀实验,可见菌细胞的荚膜明显加宽,且菌株之间可出现交叉阳性.结论:白假丝酵母菌的荚膜厚度可因不同菌种(株)和不同环境而有差异;荚膜肿胀实验显示各菌株除与相应抗血清作用出现荚膜肿胀实验阳性外菌株之间还可出现血清交叉阳性.

关键词：白假丝酵母菌荚膜厚度动物实验荚膜肿胀实验

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超抗原SEB或SEC对T细胞增殖和活化的影响

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实用医学杂志 2005年第15期21卷 1612-1614页

作者：李明邢飞跃李岩四川大学华西医学中心感染免疫研究室成都市610041 暨南大学教育部组织移植与免疫重点实验室广州市510632

目的:探讨超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素B(staphy lococcal enterotoxinB,SEB)和金黄色葡萄球菌肠毒素C(staphy lococcal enterotoxinC,SEC)在体外对T细胞增殖和活化的影响。方法:不同浓度SEB或SEC在体外刺激T细胞,采用MTT法检测T细胞增... 详细信息

目的:探讨超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素B(staphy lococcal enterotoxinB,SEB)和金黄色葡萄球菌肠毒素C(staphy lococcal enterotoxinC,SEC)在体外对T细胞增殖和活化的影响。方法:不同浓度SEB或SEC在体外刺激T细胞,采用MTT法检测T细胞增殖水平,在流式细胞仪(flowcytometer,FCM)上检测T细胞受不同浓度SEB或SEC刺激后不同时间其早期活化标志CD69的表达水平。结果:SEB或SEC在体外能明显激活T细胞,以浓度为100μg/L时活化T细胞的作用最强,刺激时间以4～8h为佳,而对T细胞的增殖无明显影响。SEB和SEC活化T细胞的作用强度之间无明显差异。结论:以上结果提示,SEB或SEC具有很强的刺激T细胞活化的能力,为其应用于肿瘤免疫治疗提供了一定依据。

关键词：超抗原 SEB SEC T细胞增殖金黄色葡萄球菌肠毒素类

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应激及地塞米松对小鼠胸腺细胞和脾脏细胞凋亡的作用

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2001年第3期22卷 120-121页

作者：孙荭程云华何贤辉黄柏炎徐丽慧曾耀英暨南大学组织移植与免疫实验中心广东广州510632 暨南大学医学院第一附属医院临床医学研究室广东广州510632 暨南大学生物工程学系广东广州510632

目的 :研究应激对小鼠胸腺细胞及脾脏细胞凋亡的作用机理 .方法 :以小鼠为模型 ,采用碘化丙啶染色结合流式细胞仪分析 ,研究应激 (将四肢固定用水淹至颈部 )、注射地塞米松 (dexamethasone ,DEX)或应激同时注射DEX对胸腺细胞及脾脏细胞... 详细信息

目的 :研究应激对小鼠胸腺细胞及脾脏细胞凋亡的作用机理 .方法 :以小鼠为模型 ,采用碘化丙啶染色结合流式细胞仪分析 ,研究应激 (将四肢固定用水淹至颈部 )、注射地塞米松 (dexamethasone ,DEX)或应激同时注射DEX对胸腺细胞及脾脏细胞凋亡的作用 .结果 :胸腺细胞和脾脏细胞的凋亡百分率与腹腔注射DEX的剂量呈正相关 ,其中胸腺细胞更易于凋亡 ;应激能引起胸腺细胞及脾脏细胞的凋亡 (P <0 .0 1) ;DEX能增强应激对胸腺细胞及脾脏细胞的凋亡作用 (P <0 .0 1) .结论 :应激可通过诱导免疫细胞凋亡而削弱机体的免疫力 ,引起疾病发生 ;

关键词：应激胸腺细胞脾脏细胞地塞米松细胞凋亡免疫系统协同作用

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无排卵型功血患者子宫出血机制的实验研究

无排卵型功血患者子宫出血机制的实验研究

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第七次全国妇产科病理学术会议

作者：罗璐朱凤川曾耀英马炎辉暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室福建医科大学附属第一医院妇产科

无排卵型功血是妇科常见病,其出血机制尚不清楚.经典的内分泌学说早已得到公认,子宫内膜局部微环境的变化正引起学者们进一步的关注.本研究从子宫内膜的血管内皮生长因子(VEGF)和性激素受体着手,分析其与子宫内膜血管形成的相关性,初步... 详细信息

无排卵型功血是妇科常见病,其出血机制尚不清楚.经典的内分泌学说早已得到公认,子宫内膜局部微环境的变化正引起学者们进一步的关注.本研究从子宫内膜的血管内皮生长因子(VEGF)和性激素受体着手,分析其与子宫内膜血管形成的相关性,初步探讨无排卵型功血的出血机制.

关键词：无排卵型功血子宫出血机制血管内皮生长分子性激素受体

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