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细胞与分子免疫学杂志 2005年第6期21卷 798-800页

作者：于哲邢飞跃曾耀英暨南大学教育部组织移植与免疫重点实验室广东广州510632

Jagged1(新近被命名为CD339[1])是存在于哺乳动物细胞膜上Notch受体的主要配体之一,为单次跨膜糖蛋白,表达于骨髓、胎儿肝基质细胞和胸腺上皮细胞等多种组织,参与调控许多组织的生长发育,在维持正常造血前体细胞及其增殖过程中起着重要... 详细信息

Jagged1(新近被命名为CD339[1])是存在于哺乳动物细胞膜上Notch受体的主要配体之一,为单次跨膜糖蛋白,表达于骨髓、胎儿肝基质细胞和胸腺上皮细胞等多种组织,参与调控许多组织的生长发育,在维持正常造血前体细胞及其增殖过程中起着重要作用[2]。Jagged1在抗原提呈细胞(antigenpresenting cells,APC),如树突状细胞(dendritic cells,DC)、B细胞和巨噬细胞表面表达丰富,介导DC成熟和分化[3]。临床上发现,Jagged-Notch信号转导异常与类风湿性关节炎的产生密切相关[4]。近来发现,Jagged1与其受体结合后,激活Notch信号通路

关键词： Jagged1 调节性T细胞分化成熟

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地塞米松介导胸腺细胞凋亡过程中线粒体和细胞结构蛋白的变化

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中国病理生理杂志 2005年第7期21卷 1415-1418页

作者：王通曾耀英肇静娴林羿梁佩燕暨南大学教育部组织移植与免疫重点实验室广东广州510632

目的:研究地塞米松(DEX)介导的小鼠胸腺细胞凋亡过程中线粒体质量和结构蛋白变化特点。方法:以地塞米松(DEX)诱导小鼠胸腺细胞凋亡为模型,利用AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞术研究细胞凋亡和坏死,JC-1染色流式细胞术检测线粒体膜电势(△... 详细信息

目的:研究地塞米松(DEX)介导的小鼠胸腺细胞凋亡过程中线粒体质量和结构蛋白变化特点。方法:以地塞米松(DEX)诱导小鼠胸腺细胞凋亡为模型,利用AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞术研究细胞凋亡和坏死,JC-1染色流式细胞术检测线粒体膜电势(△Ψm)和线粒体质量,利用CFDA-SE染色流式细胞术检测细胞结构蛋白变化。结果:在1×10-6mol/LDEX诱导下,小鼠胸腺细胞在6h凋亡比率为(51.25±5.51)%,对照组为(12.03±2.00)%,差异显著(P<0.01);DEX组坏死比率为(30.25±3.67)%,对照组为(10.11±1.11)%,差异显著(P<0.01)。DEX组在6h时点的线粒体质量显著低于对照组(P<0.01),FL1平均荧光强度分别为(561.62±54.27)和(900.25±38.80)。DEX同时引起线粒体膜电势的显著下降(P<0.01),对照组FL2平均荧光强度为(267.51±26.48),DEX组为(133.17±12.29)。成熟T细胞培养48h,CFDA-SE法仅检测到亲代单一细胞峰;而在ConA刺激条件下出现3个子代峰。对照组小鼠胸腺细胞在CFDA-SE染色培养6h条件下,存在(5.25±1.15)%的低荧光强度细胞群,而在DEX刺激下,该群细胞占(47.39±9.76)%,并且在直方图结果上形成明显的细胞峰。结论:DEX诱导小鼠胸腺细胞凋亡过程中,线粒体质量和细胞结构蛋白均有所下降;CFDA-SE染色流式细胞术可以作为基于细胞结构蛋白变化的凋亡定量检测方法。

关键词：地塞米松胸腺细胞细胞结构蛋白细胞凋亡线粒体

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寡肽VLPALPQ对小鼠妊娠耐受的免疫调节作用

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中华微生物学和免疫学杂志 2007年第10期27卷 878-882页

作者：林羿仲艳敏 Nisar Khan 刘兆宇狄静芳曾山 Robbert Benner 暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广州510632 荷兰鹿特丹Erasmus医学中心

目的观察hCG来源的寡肽缬-亮-脯-丙-亮-脯-谷胺(Val-Leu-Pro-Ala-Leu-Pro-Gln,VL- PALPQ)对双链RNA(dsRNA)诱导建立的小鼠流产模型妊娠结局的影响,并通过对淋巴细胞亚群及细胞内IL-12水平的分析研究其免疫调节机制。方法在BALB/c×c... 详细信息

目的观察hCG来源的寡肽缬-亮-脯-丙-亮-脯-谷胺(Val-Leu-Pro-Ala-Leu-Pro-Gln,VL- PALPQ)对双链RNA(dsRNA)诱导建立的小鼠流产模型妊娠结局的影响,并通过对淋巴细胞亚群及细胞内IL-12水平的分析研究其免疫调节机制。方法在BALB/c×c57BL/6小鼠孕7.5 d注射dsRNA以建立诱发性流产模型,孕期多次腹腔注射VLPALPQ进行干预,对照组以PBS代替。分别计算孕9 d和13 d胚胎吸收率,并用4色流式细胞术分析外周血和胎盘中多种淋巴细胞亚群及CD45+细胞内IL-12的变化。结果VLPALPQ处理组孕9 d时胚胎吸收率较诱发性流产组有明显下降(P<0.05),孕13 d时下降更为显著(P<0.01)。与此相应,外周血和胎盘中CD45+细胞内IL-12的表达均显著下降(P< 0.01),胎盘中活化型淋巴细胞比率也显著下降。另外,孕13 d时共刺激因子CD86的表达也明显减少。结论VLPALPQ可通过抑制免疫细胞的活性,减弱IL-12的表达,阻断dsRNA所引起的TH1型免疫反应的增强,从而降低小鼠的流产率。

关键词：动物模型免疫耐受免疫调节诱发性流产妊娠

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雌二醇、孕酮对小鼠同种异基因移植物的影响

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免疫学杂志 2006年第2期22卷 129-131页

作者：肇静娴曾耀英王青王通倪兴华狄静芳暨南大学组织移植与免疫教研室教育部重点实验室广州510630

目的通过研究雌二醇(E2)、孕酮(P4)对小鼠同种异基因移植物存活时间的影响,探讨妊娠期间母体外周血中雌、孕激素水平对母体免疫应答能力以及对母胎免疫耐受的影响。方法雌性受体小鼠通过切除双侧卵巢去势,胃饲E2或P4,使外周血E2或P4浓... 详细信息

目的通过研究雌二醇(E2)、孕酮(P4)对小鼠同种异基因移植物存活时间的影响,探讨妊娠期间母体外周血中雌、孕激素水平对母体免疫应答能力以及对母胎免疫耐受的影响。方法雌性受体小鼠通过切除双侧卵巢去势,胃饲E2或P4,使外周血E2或P4浓度达到相当于小鼠妊娠中期水平。以腹腔注射CsA的小鼠作为对照,进行耳后同种异基因半心移植,观察各组移植物存活时间,并取移植部位组织进行石蜡切片HE染色。结果同基因移植组心肌长期存活(>300 d),异基因移植对照组心肌平均存活时间为(12.8±0.8)d。与异基因移植对照组比较,CsA组心肌存活时间显著延长(>20 d),P<0.01;E2组移植心肌存活时间显著缩短(9.7±0.5)d,P<0.01;P4组心肌存活时间与对照组比较无显著差异,平均(12±0.6)d,P>0.05。结论妊娠期母体外周血中E2和P4水平对母体的系统性免疫应答无明显抑制作用,不是维持非胎盘部位母胎免疫耐受的主导性因素。

关键词：雌二醇孕酮同种异基因移植母胎耐受

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紫外线对角质细胞线粒体功能及凋亡的影响研究

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中国病理生理杂志 2006年第5期22卷 1020-1023页

作者：王会营曾耀英王通邢飞跃肇静娴季煜华暨南大学教育部组织移植与免疫重点实验室广东广州510632

目的:分析紫外线(UV)照射对HaCaT角质细胞系线粒体功能及凋亡的影响。方法:以紫外线低剂量(UVA2J/cm2,UVB10mJ/cm2)和高剂量(UVA6J/cm2,UVB30mJ/cm2)照射HaCaT细胞,继续培养15 h,用流式细胞仪检测线粒体膜电位(△ψm)、线粒体质量(mitoc... 详细信息

目的:分析紫外线(UV)照射对HaCaT角质细胞系线粒体功能及凋亡的影响。方法:以紫外线低剂量(UVA2J/cm2,UVB10mJ/cm2)和高剂量(UVA6J/cm2,UVB30mJ/cm2)照射HaCaT细胞,继续培养15 h,用流式细胞仪检测线粒体膜电位(△ψm)、线粒体质量(mitochondrial mass);使用碘化丙啶(PI)进行DNA染色并用流式细胞仪检测亚二倍体分析凋亡,以及进行Annexin V-FITC与PI共染色,用激光共聚焦显微镜观察细胞凋亡情况。结果:HaCaT细胞经紫外线照射后,△ψm下降的细胞比例随着照射剂量的增加而增加,对照组、低剂量组及高剂量组分别为7.94%±1.02%、25.87%±4.55%、39.27%±5.32%;线粒体质量降低的细胞比例同样随着照射剂量的增加而增加,对照组、低剂量组以及高剂量组分别为15.19%±1.58%、40.36%±4.41%、68.79%±5.46%。用PI检测DNA含量所产生的亚二倍体峰观测凋亡率,对照组、低剂量组以及高剂量组凋亡率分别为1.82%±0.51%、30.16%±5.47%、58.49%±5.98%。用Annexin V-FITC/PI染色分析细胞凋亡程度,其结果与PI-DNA染色所得结果一致,对照组仅有少量细胞死亡,低剂量组凋亡细胞较对照组为多(Annexin V-FITC单阳性细胞),高剂量组以坏死细胞为多(Annexin V-FITC/PI双阳性)。结论:HaCaT细胞经紫外照射后,线粒体去极化作用增强,同时线粒体质量降低,这些变化与细胞凋亡相关。

关键词： HaCaT细胞紫外线线粒体细胞凋亡

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喜树碱诱导Jurkat细胞线粒体膜电势和线粒体质量变化的研究

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中国病理生理杂志 2006年第5期22卷 846-850页

作者：江颖娟曾耀英王通肇静娴刑飞跃王希朝梁佩燕暨南大学教育部组织移植与免疫重点实验室广东广州510632

目的:研究喜树碱(camptothecin,CPT)诱导Jurkat细胞凋亡过程中线粒体膜电势和线粒体质量的变化。方法:用喜树碱处理Jurkat细胞,利用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术研究细胞早期凋亡,PI染色流式细胞术测细胞周期,Annexin V-PE/DiOC6(3... 详细信息

目的:研究喜树碱(camptothecin,CPT)诱导Jurkat细胞凋亡过程中线粒体膜电势和线粒体质量的变化。方法:用喜树碱处理Jurkat细胞,利用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术研究细胞早期凋亡,PI染色流式细胞术测细胞周期,Annexin V-PE/DiOC6(3)双染流式细胞术检测线粒体膜电势(△ψm),NAO染色流式细胞术检测线粒体质量。结果:在10μmol.L-1CPT诱导下,6 h时Jurkat细胞早期凋亡的细胞比率(22.59±1.04)%显著高于对照组(3.93±0.73)%(P<0.01)。CPT组坏死比率(2.48±0.53)%与对照组(2.78±0.63)%无显著差异(P>0.05);并可使细胞出现明显的凋亡峰。晚期凋亡的细胞比率为(13.58±0.97)%显著高于对照组(3.18±0.51)%(P<0.01),CPT组G0/G1期细胞比率(48.14±0.96)%,明显高于对照组(44.09±0.43)%(P<0.01)。CPT组线粒体发生明显去极化现象,AnnexinV+DiOC6(3)-的细胞比率为(19.47±0.69)%,而对照组比率为(4.21±0.40)%,差异显著(P<0.01)。同时,CPT组线粒体质量显著低于对照组:CPT组NAO+细胞比率为(74.77±1.66)%,对照组为(92.24±1.41)%(P<0.01)。结论:CPT诱导Jurkat细胞凋亡过程中线粒体去极化作用增强并且线粒体质量下降,表明该凋亡过程与线粒体途径密切相关。

关键词：喜树碱 Jurkat细胞线粒体膜电位细胞凋亡

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ERK信号途径对EGF诱导的HaCaT细胞增殖具有双向调节作用

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基础医学与临床 2006年第5期26卷 471-475页

作者：王会营曾耀英季煜华邢飞跃暨南大学组织移植与免疫中心教育部重点实验室广东广州510632

目的利用带有ERK-2基因的腺病毒载体感染成角质细胞系HaCaT,探讨ERK信号途径在EGF对HaCaT细胞增殖影响中的作用。方法用3H-TdR掺入法检测HaCaT细胞增殖及PD98059对EGF促HaCaT细胞增殖的影响。腺病毒载体转染HaCaT细胞,流式细胞仪检测转... 详细信息

目的利用带有ERK-2基因的腺病毒载体感染成角质细胞系HaCaT,探讨ERK信号途径在EGF对HaCaT细胞增殖影响中的作用。方法用3H-TdR掺入法检测HaCaT细胞增殖及PD98059对EGF促HaCaT细胞增殖的影响。腺病毒载体转染HaCaT细胞,流式细胞仪检测转染率,W estern b lot检测ERK-2蛋白的表达。结果1μg/L和10μg/L EGF可促进HaCaT细胞增殖,而100μg/L EGF促增殖作用反下降。PD98059抑制EGF引起的HaCaT细胞增殖,且具有浓度依赖性。腺病毒载体具有高转染率,感染Ad-ERK2的HaCaT细胞高表达ERK-2。EGF抑制转染的HaCaT细胞增殖。结论ERK信号途径在EGF促HaCaT细胞增殖中具有双向调节作用。

关键词： ERK EGF 腺病毒载体 HaCaT 增殖

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地塞米松影响小鼠胸腺细胞线粒体膜电势变化研究

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中国病理生理杂志 2005年第5期21卷 962-965页

作者：梁佩燕曾耀英王通肇静娴邢飞跃江逊暨南大学教育部组织移植与免疫重点实验室广东广州510632

目的研究地塞米松刺激小鼠胸腺细胞过程中线粒体膜电势(△Ψm)的变化。方法以终浓度1×10-6mol/L地塞米松(DEX)刺激小鼠胸腺细胞,通过JC-1染色流式细胞术,在0、1、3、5、7、9、11、24和27h时点分别检测小鼠胸腺细胞平均J-aggregate(... 详细信息

目的研究地塞米松刺激小鼠胸腺细胞过程中线粒体膜电势(△Ψm)的变化。方法以终浓度1×10-6mol/L地塞米松(DEX)刺激小鼠胸腺细胞,通过JC-1染色流式细胞术,在0、1、3、5、7、9、11、24和27h时点分别检测小鼠胸腺细胞平均J-aggregate(FL2)和平均J-monomer(FL1)含量,并计算线粒体膜电势(FL2/FL1)。结果本研究中,小鼠胸腺细胞离体后FL1所反映的线粒体质量迅速下降,至5h对照组达到平台期(913.38±70.11),然后缓慢下降到27h的(622.80±22.81)。DEX组FL1在1h和3h与对照组没有显著差异(P>0.05),而从5h(660.91±72.95)开始显著低于对照组(P<0.01),并且随培养时间延长呈下降趋势,至27h的(309.70±53.35)。对照组和DEX组FL2随培养时间延长而降低。1-9h,对照组和DEX的△Ψm没有显著差异(P>0.05)。而在11、24和27h,对照组△Ψm分别为(256.41±21.59)、(214.14±23.21)和(146.14±17.97),而DEX组△Ψm显著低于对照组(P<0.01),分别为(138.28±20.59)、(111.61±29.67)和(72.92±17.86)。结论DEX诱导小鼠胸腺细胞凋亡过程中,线粒体质量降低和△Ψm下降是早期事件,而细胞内现存线粒体△Ψm下降则是较晚期的事件。在本研究中,线粒体质量下降与现存线粒体膜电势的变化之间关系不紧密。

关键词： JC-1染色流式细胞术线粒体膜电位地塞米松小鼠胸腺细胞细胞凋亡

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孕酮对人树突状细胞成熟和免疫功能的影响

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中国病理生理杂志 2008年第6期24卷 1143-1147页

作者：沈媛曾耀英肇静娴暨南大学附属第一医院妇产科广东广州510632 暨南大学组织移植与免疫实验室广东广州510632

目的:研究孕酮(P4)对人外周血来源树突状细胞(DCs)成熟和免疫学功能的影响。方法:在人外周血来源DCs体外培养时加入两种浓度的P4(10-7mol/L和10-6mol/L)处理,光镜和电镜下观察DCs的生成情况及形态变化,以流式细胞仪分析各组细胞的免疫表... 详细信息

目的:研究孕酮(P4)对人外周血来源树突状细胞(DCs)成熟和免疫学功能的影响。方法:在人外周血来源DCs体外培养时加入两种浓度的P4(10-7mol/L和10-6mol/L)处理,光镜和电镜下观察DCs的生成情况及形态变化,以流式细胞仪分析各组细胞的免疫表型,用ELISA方法测定其分泌的IL-10和IL-12水平,[3H]-TdR掺入法检测体外混合淋巴细胞反应中DCs刺激同种反应性T细胞的增殖能力。结果:加入P4培养后,DCs树突状和膜面状伪足减少,表达低水平MHC-II分子和共刺激分子CD40、CD80和CD86,其分泌的IL-10水平升高,IL-12水平明显下降,DCs刺激同种反应性T细胞的功能显著下降。结论:P4抑制人外周血来源DCs的成熟,对其免疫学功能具有负性调节作用。

关键词：树突细胞孕酮免疫功能

来源：评论

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体外快速筛选抗HIV药物的一种新方法

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2006年第2期27卷 233-238页

作者：曾祥凤曾耀英李海仙暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632

目的:介绍一种体外快速筛选抗H IV药物的新方法。方法:采用荧光染料钙荧光素(Cal-ce in-AM)标记H IV感染的慢性H9细胞(H9/H IV-1ⅢB)与不同稀释浓度的药物作用后,与靶细胞MT-2细胞混合培养,2 h后用荧光显微镜观察MT-2和H9/H IV-1ⅢB融... 详细信息

目的:介绍一种体外快速筛选抗H IV药物的新方法。方法:采用荧光染料钙荧光素(Cal-ce in-AM)标记H IV感染的慢性H9细胞(H9/H IV-1ⅢB)与不同稀释浓度的药物作用后,与靶细胞MT-2细胞混合培养,2 h后用荧光显微镜观察MT-2和H9/H IV-1ⅢB融合细胞的变化;孵育3 d后用MTT法检测药物对H IV感染细胞的保护作用和H IV-1p24抗原试剂盒检测药物作用后的细胞培养上清p24抗原含量的变化。结果:药物(双黄连粉针剂)能够抑制MT-2和H9/H IV-1ⅢB细胞融合(双黄连粉针剂抑制融合的EC50为3.18 mg/L,选择指数SI大于314.5);能够保护H IV感染细胞的死亡(EC50为10.59 mg/L,SI大于94.43)和减少H IV-1p24抗原的表达(EC50为23.29 mg/L,SI大于42.9)。结论:运用此方法4~6 h即可初步判断药物是否具有抗H IV的作用,此方法可简便直观,敏感快速进行抗H IV药物的筛选。

关键词：药物筛选模型艾滋病人免疫缺陷病毒

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