检索结果-内蒙古大学图书馆

细胞生物学杂志 2008年第6期30卷 742-746页

作者：许文彬徐丽慧卢宏松施焕敬何贤辉暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心广州510632

研究棉酚(gossypol)对JurkatT细胞增殖和凋亡的影响及可能机制。将不同浓度的棉酚作用于JurkatT细胞,用MTS比色法检测细胞存活率;以膜联蛋白V-PE染色分析细胞凋亡;用Hoechst33342染色观察核形态;用荧光染料Mitocapture结合流式细胞术和... 详细信息

研究棉酚(gossypol)对JurkatT细胞增殖和凋亡的影响及可能机制。将不同浓度的棉酚作用于JurkatT细胞,用MTS比色法检测细胞存活率;以膜联蛋白V-PE染色分析细胞凋亡;用Hoechst33342染色观察核形态;用荧光染料Mitocapture结合流式细胞术和激光共焦显微镜检测线粒体跨膜电位变化。结果显示棉酚作用JurkatT细胞24h、48h、72h,其IC50值分别为77.2ìmol/L、57.3ìmol/L、23.3ìmol/L,对细胞的抑制作用与药物存在时间-剂量依赖关系;终浓度为8、16、32ìmol/L的棉酚处理24h后的细胞凋亡率分别为5.30%、15.20%、51.19%,对照组凋亡率为3.43%;高浓度棉酚作用后大量细胞核呈现染色质固缩、核碎裂和致密浓染等凋亡特征;随着浓度增加细胞线粒体跨膜电位明显降低。研究表明棉酚能有效抑制JurkatT细胞增殖和诱导其发生凋亡,并呈现出时间-剂量依赖关系,其诱导凋亡的作用可能依赖于线粒体途径。

关键词：棉酚 Jurkat T细胞细胞增殖凋亡流式细胞术

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基于单片机C8051F020控制的低温冷冻治疗仪

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现代电子技术 2008年第6期31卷 40-42页

作者：曾山陆尧胜林启涛代军弟张茂俊宋立国暨南大学组织移植免疫中心广东广州510632 暨南大学广东广州510632

介绍一种基于C8051F020单片机控制的低温冷冻治疗仪,重点阐述低温冷冻治疗仪的温度测量电路、报警电路、通信接口电路以及LCD与单片机的接口显示电路结构及原理。结果表明该低温冷冻治疗仪使用方便、结构简单、成本较低、可靠性高,可显... 详细信息

介绍一种基于C8051F020单片机控制的低温冷冻治疗仪,重点阐述低温冷冻治疗仪的温度测量电路、报警电路、通信接口电路以及LCD与单片机的接口显示电路结构及原理。结果表明该低温冷冻治疗仪使用方便、结构简单、成本较低、可靠性高,可显示、可报警;治疗仪性能可靠,使用方便,对研究低温冷冻治疗具有重要的临床应用价值。

关键词：低温治疗温度测量热电偶非线性

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NK细胞对异基因骨髓移植中移植排斥和造血及免疫重建的影响

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中国实验血液学杂志 2008年第3期16卷 627-632页

作者：杨志刚熊丹曾耀英梁亮李庆华吴国才广东医学院附属医院血液科广东湛江524001 暨南大学组织移植与免疫研究中心广东广州510632

本研究探讨自然杀伤(NK)细胞在小鼠异基因骨髓移植(allo-BMT)中对移植排斥、造血及免疫重建的影响。以C57BL/6(H-2b)小鼠为供鼠、BALB/c(H-2d)小鼠为受鼠,分别在致死剂量和非致死剂量(≤7.0Gy)全身照射(TBI)的预处理条件下进行allo-BMT... 详细信息

本研究探讨自然杀伤(NK)细胞在小鼠异基因骨髓移植(allo-BMT)中对移植排斥、造血及免疫重建的影响。以C57BL/6(H-2b)小鼠为供鼠、BALB/c(H-2d)小鼠为受鼠,分别在致死剂量和非致死剂量(≤7.0Gy)全身照射(TBI)的预处理条件下进行allo-BMT,移植同时输注供鼠外周T细胞和(或)NK细胞,移植后不同时间检测受鼠外周血白细胞、骨髓CD34+细胞数和外周血淋巴细胞中CD3+细胞、CD19+细胞及供鼠来源的H-2Kb+细胞表达的百分率,并对不同移植组的存活率、植入与排斥、造血及免疫重建进行比较。结果表明:在致死剂量TBI预处理的移植中,输注NK细胞与不输注NK细胞的移植组比较,存活率显著增高(60天存活率为70%vs0.0%);白细胞数、CD19+细胞表达及骨髓CD34+细胞数恢复快;H-2Kb+细胞的表达水平高[(86.68±4.45)%vs(4·68±0·32)%]。移植后28天输注NK细胞组CD3+细胞表达水平明显低于不输注NK细胞组[(33.69±3.36)%vs(50.40±5·06)%,p<0.01],移植后60天两组比较差异无显著性(p>0.05)。在非致死剂量TBI预处理的移植中,移植后30天,异基因骨髓移植组H-2Kb+细胞表达率明显下降,移植后60天已下降至移植前水平;而输注高浓度和低浓度NK细胞的两组在移植后60天仍能检测到80%以上的H-2b+细胞表达。结论:在小鼠allo-BMT中,同种异基因反应性NK细胞可以抑制移植排斥,提高造血干细胞的植入水平,促进造血及免疫重建并增加移植受鼠的生存率。

关键词：天然杀伤细胞骨髓移植同种异基因反应性造血重建

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婴儿肠道不同部位T细胞亚群及其表面分子检测--婴儿肠道HIV-感染和复制的可能性分析

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现代免疫学 2008年第6期28卷 496-501页

作者：黄秀艳曾耀英刘钧澄唐先高陈洁张志崇佘锦标王辉暨南大学组织移植与免疫中心广州510632 中山大学附属第一医院小儿外科广州510080 暨南大学附属第一医院器官移植中心广州510632 深圳市东湖医院肝病研究所深圳518020

通过对婴儿外周血(PB)、肠系膜淋巴结(MLN)和肠上皮内(IE)来源淋巴细胞的比较性研究,以分析婴儿肠道HIV-1感染容许性和HIV-1复制支持性的细胞与分子基础。分离婴儿外周血单个核细胞(PBMC),肠系膜淋巴结淋巴细胞(MLNL)和肠上皮间淋巴细胞... 详细信息

通过对婴儿外周血(PB)、肠系膜淋巴结(MLN)和肠上皮内(IE)来源淋巴细胞的比较性研究,以分析婴儿肠道HIV-1感染容许性和HIV-1复制支持性的细胞与分子基础。分离婴儿外周血单个核细胞(PBMC),肠系膜淋巴结淋巴细胞(MLNL)和肠上皮间淋巴细胞(iIEL),制备单细胞悬液,运用流式细胞术结合荧光抗体染色技术:(1)检测不同部位的CD3+T细胞中CD4+辅助性T细胞和CD8+杀伤性T细胞比例;(2)检测不同部位的CD4+T细胞CCR5和CXCR4以及CD69和HLA-DR的表达水平。结果发现:(1)iIEL中的CD4+辅助性T细胞占CD3+T细胞的比例明显低于PBMC和MLNL,而CD8+杀伤性T细胞占CD3+T细胞的比例明显高于PBMC和MLNL;(2)iIEL中CD4+T细胞CCR5和CXCR4以及CD69和HLA-DR的表达水平均明显高于PBMC和MLNL。结果表明:婴儿iIEL中CD4+T淋巴细胞与PBMC和MLNL的CD4+T淋巴细胞相比较,高表达HIV-1入胞共受体CCR5和CXCR4,提示iIEL更易被HIV-1感染;iIEL中CD4+T淋巴细胞高表达细胞活化标记分子CD69和HLA-DR,说明其更有利于HIV-1复制,这种高基础活化率可能与其不断接触小肠来源的食物和共生菌抗原有关。由此可见,婴儿肠道具有了HIV-1感染容许性和HIV-1复制支持性的细胞和分子基础,因此成了HIV-1最易感的解剖部位,这可能是围产期HIV感染的婴儿病毒载量明显高于成年人,且病情进展也比成年人快的原因。

关键词： HIV病 CD4+T细胞肠上皮间淋巴细胞免疫过度活化

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非孕与早孕妇女外周血及宫内膜和蜕膜组织自然杀伤细胞亚群的变化

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中国妇幼保健 2008年第7期23卷 967-970页

作者：侯倩曾耀英王自能江西省妇幼保健院辅助生殖中心 330006 暨南大学组织移植与免疫中心暨南大学附一院妇产科

目的:探讨非孕与早孕妇女的外周血、宫内膜和蜕膜组织之间的自然杀伤(NK)细胞亚群的差异,以及雌、孕激素对外周血、宫内膜和蜕膜组织NK细胞的影响。方法:用流式细胞仪检测非孕和早孕妇女外周血、宫内膜和蜕膜组织NK细胞表面标记CD56和C... 详细信息

目的:探讨非孕与早孕妇女的外周血、宫内膜和蜕膜组织之间的自然杀伤(NK)细胞亚群的差异,以及雌、孕激素对外周血、宫内膜和蜕膜组织NK细胞的影响。方法:用流式细胞仪检测非孕和早孕妇女外周血、宫内膜和蜕膜组织NK细胞表面标记CD56和CD16分子,以及用放射免疫沉淀法测定外周血清雌二醇(E2)和孕酮(P4)水平,并进行比较分析。结果:早孕外周血组NK细胞的CD56+CD16-、CD56+CD16+和CD56-CD16+3组亚群的百分率均明显高于非孕外周血组(分别为P≤0.013、P<0.001、P≤0.001);非孕宫内膜组的NK细胞以CD56+为主,为20.82%,且其CD56+CD16-的百分率明显高于其外周血组,而CD56-CD16+的百分率明显小于外周血组(P≤0.001),两组的CD56+CD16+的百分率无差异(P>0.05),非孕宫内膜组CD56+CD16-的百分率明显高于CD56+CD16+和CD56-CD16+(均为P<0.001),非孕外周血组的NK细胞以CD16+为主,且其CD56-CD16+的百分率明显高于CD56+CD16-和CD56+CD16+(均为P<0.001)。早孕蜕膜组的NK细胞以CD56+为优势,为62.42%。早孕蜕膜组NK细胞的CD56+CD16-、CD56+CD16+和CD56-CD16+3组亚群的百分率均明显高于非孕宫内膜组(均为P<0.001),而早孕周围血中的NK细胞以CD56+CD16+和CD16+为主,分别为9.93%和10.65%,且与CD56+CD16-比较均有显著性差异(均为P<0.001),早孕外周血组CD16+NK细胞的百分率明显高于蜕膜组(P≤0.001),且两组CD56+CD16+的百分率无差异(P>0.05)。结论:孕激素能明显促进宫内膜CD56+NK细胞的增殖和分化,雌、孕激素水平的协同升高可增加外周血和宫内膜组织的CD56+、CD56+CD16+、和CD16+NK细胞亚群的百分率;CD56+CD16+NK细胞在早孕外周血和蜕膜组织之间,以及在非孕外周血和宫内膜组织之间均可能起免疫调控作用。

关键词：宫内膜蜕膜外周血自然杀伤细胞雌激素孕酮

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人小胶质细胞的分离、纯化、特异分子表达与吞噬功能研究

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中国病理生理杂志 2008年第5期24卷 939-944页

作者：黄秀艳曾耀英张彩朱斌暨南大学组织移植与免疫研究中心广东广州510632 中山大学附属第一医院妇产科(黄埔院区) 广东广州510700 广州市番禺区何贤纪念医院产科广东广州511400

目的:探讨人小胶质细胞(microglia)分离、纯化、培养及鉴定的方法,为深入研究小胶质细胞功能建立一种简便的、稳定的细胞模型。方法:取5个月人工药物引产的胎儿脑组织,将脑组织剪碎、研磨、过滤、离心获取混合胶质细胞悬液,用DMEM/F12... 详细信息

目的:探讨人小胶质细胞(microglia)分离、纯化、培养及鉴定的方法,为深入研究小胶质细胞功能建立一种简便的、稳定的细胞模型。方法:取5个月人工药物引产的胎儿脑组织,将脑组织剪碎、研磨、过滤、离心获取混合胶质细胞悬液,用DMEM/F12完全培养基调整细胞密度为2×1010cells/L,接种于75cm2培养瓶中(记作first0d);7-10d后,进行第1次纯化。此次纯化采用轻柔摇动法将贴壁不牢的小胶质细胞和少突胶质细胞与底层的星形胶质细胞分离并转入另一培养瓶继续培养扩增(记作second0d);4-5d后,混合的小胶质细胞和少突胶质细胞汇合成片,采用胰酶-EDTA消化法结合差速贴壁法进行第2次纯化。此次纯化将消化得到的细胞悬液离心和重悬,接种于培养瓶(记作0h);2h后,小胶质细胞贴壁生长,少突胶质细胞依然漂浮在培养上清中,此时通过移走上清以去除少突胶质细胞,即得到高纯度的小胶质细胞;运用激光共聚焦显微镜技术、流式细胞术结合细胞表面或胞内免疫荧光抗体染色技术检测所分离的小胶质细胞CD45,CD11b和CD68的阳性率,以计算其纯度;通过吞噬荧光微球评价其吞噬功能;利用胞膜边缘波动(membrane ruffling)现象结合荧光标记的鬼笔环肽染色技术鉴定其活化水平。结果:我们所分离的小胶质细胞中,>98%的细胞表达CD45,CD11b和CD68,并且能够吞噬荧光微球。结论:我们成功地分离和纯化了人小胶质细胞,所得到的小胶质细胞高表达CD45,CD11b和CD68分子,并且具有很强的吞噬功能,为进一步进行其功能和蛋白质组研究奠定基础。

关键词：小神经胶质细胞 CD68 吞噬作用

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鼠表皮干细胞的稳定分选方法及其体外培养体系建立

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中国组织工程研究与临床康复 2008年第25期12卷 4851-4854页

作者：李孝建李延仓4暨南大学第四附属医院广州市红十字会医院烧伤科曾耀英沈雁杨小红谭见容暨南大学第四附属医院广州市红十字会医院烧伤科广东省广州市510220 暨南大学生命科学院组织移植与免疫中心广东省广州市510220

背景：采用多种人工合成材料构建的组织工程皮肤，存在着创面愈合后不耐受摩擦、瘢痕增生及挛缩严重、缺乏皮肤附件等不足。而表皮干细胞尽管在体内可无限增殖分化以维持皮肤更新，但在体外普通培养条件下易发生终末分化。目的：为获得... 详细信息

背景：采用多种人工合成材料构建的组织工程皮肤，存在着创面愈合后不耐受摩擦、瘢痕增生及挛缩严重、缺乏皮肤附件等不足。而表皮干细胞尽管在体内可无限增殖分化以维持皮肤更新，但在体外普通培养条件下易发生终末分化。目的：为获得稳定生长的鼠表皮干细胞，拟建立或完善能够调控其增殖分化的体外培养体系。设计、时间及地点：细胞观察，于2007—05／11在广州市创伤外科研究所完成。材料：清洁级1～3d龄Wistar大鼠20只用于制备表皮干细胞。方法：采用两步酶消化法获得单个表皮细胞悬液，Ⅳ型胶原快速贴壁法分选贴壁细胞，加入含胎牛血清、0．05mmol／LCaCl2及表皮细胞生长因子、腺苷、胰岛素、氢化可的松、霍乱毒素等复合的DMEM培养基进行培养，原代分离细胞时胎牛血清体积分数为0．2以维持细胞活性，第2次换液时改为0．1。主要观察指标：光镜下观察细胞生长情况，免疫组化法检测目的细胞角蛋白19和P63整合素的表达，流式细胞仪检测01整合素和CD71的表达，通过细胞周期及生长曲线观察其增殖能力。结果：①Ⅳ型胶原筛选的细胞在复合DMEM培养基中生长良好，细胞活性〉98％，培养6d后形成含100～200个细胞的大克隆，呈鹅卵石样铺满瓶底。②角蛋白19和P63均呈阳性表达，β1整合素表达率为98.57％，CD71表达率为9．05％。③94．99％细胞处于GdG，期，细胞呈指数增长。结论：两步酶消化＋Ⅳ型胶原快速黏附法可成功分选稳定生长的鼠表皮干细胞。含霍乱毒素、腺苷、胰岛素等因子的复合DMEM培养基可维持表皮干细胞的增殖能力，其中合适的血清浓度及Ca^2＋浓度至关重要。

关键词：表皮干细胞细胞培养鉴定

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红车轴草提取物对RAW264．7细胞株增殖与吞噬及NO分泌的抑制作用

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中华微生物学和免疫学杂志 2008年第9期28卷 817-817页

作者：杨志黄秀艳曾耀英滕菲姚满林宋兵李林暨南大学组织移植与免疫实验中心广州510632

红车轴草（Trifoliumpratense Leguminosae）为豆科多年生草本植物，又名红三叶、三叶草等。红车轴草提取物（TLE）主要成分有异黄酮及鹰嘴豆芽素等。目前已有TLE抑制小鼠淋巴细胞增殖与抗肿瘤用途的报道。本文对免疫细胞影响作了初步... 详细信息

红车轴草（Trifoliumpratense Leguminosae）为豆科多年生草本植物，又名红三叶、三叶草等。红车轴草提取物（TLE）主要成分有异黄酮及鹰嘴豆芽素等。目前已有TLE抑制小鼠淋巴细胞增殖与抗肿瘤用途的报道。本文对免疫细胞影响作了初步的研究。

关键词：红车轴草提取物 RAW264.7 细胞株增殖抑制作用多年生草本植物分泌 NO 吞噬

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分泌型Survivin真核表达载体的构建及其在HeLa细胞中的表达

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2008年第6期29卷 562-566,577页

作者：韩捷施焕敬徐丽慧卢宏松何贤辉暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心广东广州510632 暨南大学生命科学技术学院生物工程研究所广东广州510632

目的:构建含6个组氨酸标签(His6)的小鼠存活素(Survivin)融合蛋白的真核表达载体,及其在真核细胞中的表达。方法:根据小鼠Survivin序列设计引物,经过RT-PCR克隆Survivin的cDNA并进一步构建分泌型Sur-vivin的真核表达载体,经测序鉴定后... 详细信息

目的:构建含6个组氨酸标签(His6)的小鼠存活素(Survivin)融合蛋白的真核表达载体,及其在真核细胞中的表达。方法:根据小鼠Survivin序列设计引物,经过RT-PCR克隆Survivin的cDNA并进一步构建分泌型Sur-vivin的真核表达载体,经测序鉴定后在大肠杆菌中扩增在HeLa细胞中表达;以金属离子螯合层析富集,再用免疫印迹法鉴定。结果:克隆到Survivin编码区全长序列,经DNA测序后证明与已报道序列相同。构建氨基端融合小鼠IL-2信号肽,羧基端带有His6标签的Survivin融合蛋白的真核表达载体,在HeLa细胞中转染成功并且表达;细胞上清经HisTrap HP柱层析富集后,进行免疫印迹分析,表明该融合蛋白以分泌型方式在HeLa细胞中表达。结论:成功克隆Survivin的cDNA,并构建其分泌型真核表达载体。

关键词：存活素真核表达分泌型肿瘤相关抗原

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早、中、晚孕期胎盘因子体外抗HIV-1的研究

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免疫学杂志 2008年第2期24卷 230-233页

作者：李莉平林羿康佳丽夏薇王自能广州市第一人民医院妇产科广州510180 暨南大学组织移植与免疫国家重点实验室广州510632 暨南大学第一临床医学院妇产科教研室广州510632

目的探讨早、中、晚孕期胎盘因子(PF)体外抗人免疫缺陷病毒-1(HIV-1)及在HIV-1垂直传播中的作用。方法荧光染料Calcien-AM标记的H9/HIV-1ⅢB分别与早、中、晚孕期不同稀释浓度的PF作用后,与MT2细胞混合培养,荧光显微镜下观察合胞体的形... 详细信息

目的探讨早、中、晚孕期胎盘因子(PF)体外抗人免疫缺陷病毒-1(HIV-1)及在HIV-1垂直传播中的作用。方法荧光染料Calcien-AM标记的H9/HIV-1ⅢB分别与早、中、晚孕期不同稀释浓度的PF作用后,与MT2细胞混合培养,荧光显微镜下观察合胞体的形成;用HIV-1ⅢB感染MT2细胞,并分别与早、中、晚孕期不同稀释浓度的PF作用后,用MTT法检测HIV-1感染细胞的存活率,用ELISA方法检测细胞培养上清中p24抗原水平。结果各孕期PF并不能抑制MT2和H9/HIV-1ⅢB细胞的融合,但可以增加HIV-1感染细胞的存活率及减少HIV-1p24抗原的表达,且效应以早孕期PF最大,中孕期PF其次,晚孕期PF最小,并与剂量呈正相关。结论PF在体外具有抗HIV-1的作用,并呈现孕期和剂量相关性,可能在阻断HIV-1垂直传播中具有一定作用。

关键词：胎盘因子 HIV-1 垂直传播 Calcien-AM

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