检索结果-内蒙古大学图书馆

现代免疫学 2008年第6期28卷 457-464页

作者：王慧琪李萃林羿王文静曾山暨南大学组织移植与免疫研究中心广州510632 中南大学湘雅医院卫生部肿瘤蛋白质组学重点实验室长沙410008

调节性T细胞和调节性NK细胞都可能在维持妊娠方面发挥关键作用。研究显示,同种异基因妊娠非肥胖型糖尿病(NOD)小鼠胚胎丢失率显著增高,而注射抗唾液酸神经节苷脂清除其残存的NK细胞,可使胚胎丢失率进一步增高。相反,过继性输注来源于正... 详细信息

调节性T细胞和调节性NK细胞都可能在维持妊娠方面发挥关键作用。研究显示,同种异基因妊娠非肥胖型糖尿病(NOD)小鼠胚胎丢失率显著增高,而注射抗唾液酸神经节苷脂清除其残存的NK细胞,可使胚胎丢失率进一步增高。相反,过继性输注来源于正常小鼠的CD49b+CD25+NK细胞可显著降低胚胎丢失率。检测了CXCL12的特异性受体CXCR4在NK细胞表面的表达模式,并采用体外和体内迁移实验研究了NK细胞的迁移规律。由于以往研究证实小鼠胎盘滋养层细胞表达CXCL12,研究结果提示:孕期动员子宫外表达CXCR4的CD49b+CD25+NK细胞向妊娠子宫内迁移,可能对于调节母胎免疫耐受具有重要意义。

关键词：动物模型细胞迁移免疫调节妊娠耐受

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骨髓白血病细胞蛋白质组双向电泳技术的建立与优化

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中国实验血液学杂志 2008年第3期16卷 497-500页

作者：肖平曾耀英聂燕芳林蔚吴晓萍暨南大学组织移植与免疫中心广东广州510632 广东省佛山市第一人民医院临床医学研究所广东佛山528000

本研究旨在建立和优化人骨髓白血病细胞蛋白质组双向电泳分析方法,以获得分辨率高、重复性好的图谱。提取骨髓中白血病细胞总蛋白质,以等电聚焦为第一向和垂直SDS-PAGE为第二向分离蛋白,显色后用PDQuest 7.4软件分析电泳图谱,比较不同... 详细信息

本研究旨在建立和优化人骨髓白血病细胞蛋白质组双向电泳分析方法,以获得分辨率高、重复性好的图谱。提取骨髓中白血病细胞总蛋白质,以等电聚焦为第一向和垂直SDS-PAGE为第二向分离蛋白,显色后用PDQuest 7.4软件分析电泳图谱,比较不同的实验条件对图谱的影响。结果显示:通过优化样品制备和电泳中的实验环节,获得了蛋白点分离清晰的图谱,平均蛋白点数为780±73,重复实验所得蛋白点匹配率为82±5%。结论:成功建立了人骨髓白血病细胞的蛋白质组双向电泳分析方法,该方法适用于后续各亚型白血病比较蛋白组学研究。

关键词：白血病双向电泳蛋白质组

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构建的Flt3L胞外域原核表达载体在大肠杆菌中的表达

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2008年第4期29卷 331-335页

作者：卢宏松徐丽慧施焕敬韩捷何贤辉暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心广东广州510632 暨南大学生命科学技术学院生物工程研究所广东广州510632

目的:构建含组氨酸标签的FMS样酪氨酸激酶3配体(Fms-like tyrosine kinase 3 ligand,Flt3L)胞外域蛋白的原核表达载体,并在大肠杆菌中进行表达。方法:依据Flt3L基因序列设计引物,以RT-PCR的方法从小鼠脾脏总RNA中克隆Flt3L基因并构建其... 详细信息

目的:构建含组氨酸标签的FMS样酪氨酸激酶3配体(Fms-like tyrosine kinase 3 ligand,Flt3L)胞外域蛋白的原核表达载体,并在大肠杆菌中进行表达。方法:依据Flt3L基因序列设计引物,以RT-PCR的方法从小鼠脾脏总RNA中克隆Flt3L基因并构建其胞外域原核表达载体,测序鉴定后在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中诱导表达,用免疫印迹鉴定。结果:克隆到Flt3L编码区全长序列,经DNA测序证明与已报道的序列相同;构建羧基端带有His6标签的Flt3L胞外域蛋白的原核表达载体,转化大肠杆菌后SDS-PAGE分析显示在BL21(ED3)中获得较高表达;免疫印迹分析表明IPTG诱导后表达的Flt3L胞外域蛋白的相对分子质量(Mr)为19 000,与理论值相符,此蛋白与抗His6标签的抗体发生特异性反应。结论:成功克隆Flt3L基因,构建其胞外域蛋白的原核表达载体,并在大肠杆菌中获得表达。

关键词： FMS样酪氨酸激酶3配体胞外域原核表达组氨酸标签

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抗人PD-1高亲和力抗血清的制备及其在PD-1免疫印迹分析中的应用

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2008年第3期29卷 315-319页

作者：施焕敬徐丽慧韩捷卢宏松何贤辉暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心广东广州510632 暨南大学生命科学技术学院生物工程研究所广东广州510632

利用纯化的可溶性人PD-1胞外域(sPD-1)蛋白为免疫原免疫小鼠,获得抗血清.免疫印迹显示该抗血清与原核表达的sPD-1有特异性反应,但与某些菌体蛋白存在交叉反应.经菌体蛋白吸附法处理后,交叉反应明显减弱.以商业化抗人PD-1抗体和小鼠sPD-... 详细信息

利用纯化的可溶性人PD-1胞外域(sPD-1)蛋白为免疫原免疫小鼠,获得抗血清.免疫印迹显示该抗血清与原核表达的sPD-1有特异性反应,但与某些菌体蛋白存在交叉反应.经菌体蛋白吸附法处理后,交叉反应明显减弱.以商业化抗人PD-1抗体和小鼠sPD-1抗血清分析经亲和层析富集的活化的Jurkat T细胞表达的PD-1,只有自制的抗血清鉴定到特异反应条带,其表观分子质量为49 ku.

关键词：程序死亡蛋白-1 Jurkat T细胞抗血清免疫印迹

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Jagged1在树突状细胞介导淋巴细胞诱导免疫耐受中的作用

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中华微生物学和免疫学杂志 2008年第2期28卷 113-113页

作者：陈玲邢飞跃狄静芳陈笛廖继东暨南大学组织移植与免疫中心广州510632 暨南大学医学院实验中心

Jagged1是哺乳动物细胞膜上Notch受体的主要配体之一，在抗原提呈细胞（APC）表面表达丰富，介导树突状细胞（DC）成熟和分化。Jagged1与其受体结合后，激活Notch信号通路，能够诱导外周成熟T淋巴细胞分化成为产生高水平IL-10的1型调节... 详细信息

Jagged1是哺乳动物细胞膜上Notch受体的主要配体之一，在抗原提呈细胞（APC）表面表达丰富，介导树突状细胞（DC）成熟和分化。Jagged1与其受体结合后，激活Notch信号通路，能够诱导外周成熟T淋巴细胞分化成为产生高水平IL-10的1型调节性T细胞（regulatory Tcell 1，Treg 1）或产生高水平TGF-β的TH3细胞，在诱导免疫耐受中发挥着重要作用。

关键词：细胞诱导免疫耐受树突状细胞介导 Jagged1 淋巴细胞分化抗原提呈细胞调节性T细胞受体结合

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流式细胞术微球阵列法检测急性白血病血清IL-6、IL-10和TNF水平

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2008年第4期29卷 375-377页

作者：肖平曾耀英林蔚暨南大学组织移植与免疫实验中心广东广州510632 广东省佛山市第一人民医院临床医学研究所广东佛山528000

目的:探讨流式细胞术微球阵列法(CBA)在细胞因子检测中的应用及血清肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素10(IL-10)在不同亚型急性白血病(AL)中的表达水平。方法:采用BD CBA F lex Set IL-6、IL-10、TNF试剂盒和流式细胞... 详细信息

目的:探讨流式细胞术微球阵列法(CBA)在细胞因子检测中的应用及血清肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素10(IL-10)在不同亚型急性白血病(AL)中的表达水平。方法:采用BD CBA F lex Set IL-6、IL-10、TNF试剂盒和流式细胞术检测29例急性白血病患者和20例正常人血清样本中3种细胞因子水平。结果:AL患者IL-6、IL-10和TNF水平显著高于正常对照组,急性淋巴细胞白血病(ALL)的IL-10和TNF水平较急性非淋巴细胞白血病(ANLL)有显著性提高(P<0.05)。在ANLL亚型中,M1型IL-6水平最高。结论:CBA法能快速、准确地定量检测细胞因子;AL血清中IL-6、IL-10和TNF水平升高,可能与疾病的发生发展存在相关性。

关键词：流式细胞术微球阵列法急性白血病细胞因子

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早、中、晚孕期胎盘因子体外抗HIV-1的研究

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现代生物医学进展 2008年第6期8卷 1001-1004页

作者：李莉平康佳丽夏薇曾耀英广州市第一人民医院妇产科广东广州510180 暨南大学组织移植与免疫中心广东广州510632

目的:探讨早、中、晚孕期胎盘因子(PF)体外抗人免疫缺陷病毒-1(HIV-1)的作用及其在HIV-1垂直传播中可能的作用。方法:采用荧光染料Calcien-AM标记的H9/HIV-1ⅢB分别与早、中、晚孕期不同稀释浓度的PF作用后,与MT2细胞混合培养,荧光显微... 详细信息

目的:探讨早、中、晚孕期胎盘因子(PF)体外抗人免疫缺陷病毒-1(HIV-1)的作用及其在HIV-1垂直传播中可能的作用。方法:采用荧光染料Calcien-AM标记的H9/HIV-1ⅢB分别与早、中、晚孕期不同稀释浓度的PF作用后,与MT2细胞混合培养,荧光显微镜下观察合胞体的形成;用游离的HIV-1ⅢB感染MT2细胞,并分别与早、中、晚孕期不同稀释浓度的PF作用后,用MTT法检测HIV-1感染细胞的存活率,用HIV-1 p24抗原试剂盒检测细胞培养上清中p24抗原含量的变化。结果:各孕期PF并不能抑制MT2和H9/HIV-1ⅢB细胞的融合,但可以增加HIV-1感染细胞的存活率及减少HIV-1 p24抗原的表达,且效应以早孕期PF最大,中孕期PF其次,晚孕期PF最小,并与剂量呈正相关。结论:PF在体外具有抗HIV-1的作用,并呈现孕期和剂量相关性,可能在阻断HIV-1垂直传播中具有一定作用。

关键词：胎盘因子 HIV-1 垂直传播 Calcien—AM

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H-2D^b四聚体的制备及其在检测LCMV特异性CD8^＋T细胞中的应用

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生物工程学报 2008年第2期24卷 278-284页

作者：刘毅徐丽慧曾学思孙建方何贤辉中国医学科学院中国协和医科大学皮肤病研究所南京210042 暨南大学生命科学技术学院生物工程研究所广州510632 暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心广州510632

MHC四聚体技术是研究抗原特异性淋巴细胞应答的关键技术之一。为研究H-2D^b基因型(如C57BL/6)小鼠的特异性CD8^+T细胞免疫应答,需要建立H-2D^b四聚体制备技术平台。首先以RT-PCR方法克隆H-2D^b重链基因的cDNA,进而构建H-2D^b胞外域与生... 详细信息

MHC四聚体技术是研究抗原特异性淋巴细胞应答的关键技术之一。为研究H-2D^b基因型(如C57BL/6)小鼠的特异性CD8^+T细胞免疫应答,需要建立H-2D^b四聚体制备技术平台。首先以RT-PCR方法克隆H-2D^b重链基因的cDNA,进而构建H-2D^b胞外域与生物素化酶BirA底物肽(BSP)融合蛋白的表达载体,并在大肠杆菌中获得表达。在LCMV GP_(33-41)抗原肽(KAVYNFATC,KAV)和人β_2-微球蛋白存在时,通过稀释法复性获得H-2D^b/KAV单体。该单体经生物素化并纯化后与PE-链亲和素按4:1的比例混合,即形成四聚体。通过流式细胞术检测经KAV肽免疫的C57BL/6小鼠体内的LCMV特异性CD8^+T细胞的频率.结果表明在外周血、引流淋巴结和脾脏中均可检测到一定频率的LCMV特异性CD8^+T细胞,其中以对外周血标本染色的效果最佳。成功建立了小鼠H-2D^b四聚体制备技术平台,为监测及分析基于H-2D^b基因型小鼠的实验性免疫治疗创造了条件。

关键词： H-2D^b MHC四聚体淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒原核表达

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皮肤角朊细胞与表皮干细胞双向电泳图谱的建立及差异分析

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中华生物医学工程杂志 2008年第5期14卷 332-335页

作者：李孝建李延仓曾耀英沈雁杨小红暨南大学第四附属医院广州市红十字会医院烧伤科广州510220 暨南大学生命科学院组织移植与免疫中心

目的建立皮肤角朊细胞与表皮干细胞的双向电泳图谱，并分析二者表达蛋白质的差异，为进一步研究体外调控表皮干细胞的增殖、分化提供线索。方法酶消化法获取单个表皮细胞悬液。Ⅳ型胶原快速贴壁法分选表皮干细胞。利用双向电泳技术（2-D... 详细信息

目的建立皮肤角朊细胞与表皮干细胞的双向电泳图谱，并分析二者表达蛋白质的差异，为进一步研究体外调控表皮干细胞的增殖、分化提供线索。方法酶消化法获取单个表皮细胞悬液。Ⅳ型胶原快速贴壁法分选表皮干细胞。利用双向电泳技术（2-DE）建立两种细胞的蛋白质表达图谱，并用hnagemaster 2D elite5．0软件分析两种细胞的差异表达蛋白点。结果两种细胞的2-DE蛋白表达谱具有良好的重复性和可比性。皮肤角朊细胞与表皮干细胞的电泳图谱平均蛋白质点数分别为（982±18）个和（930±15）个，匹配点数为（850±13）个和（798±11）个，匹配率是86．56％和85．81％；两种细胞蛋白质间匹配点数是（886±8）个，匹配率是76．98％。找到差异蛋白点11个，其中只在表皮干细胞中表达或高表达的有8个；只在皮肤角朊细胞中表达或高表达的有3个。结论利用双向电泳法得到了分辨率较高且重复性好的皮肤角朊细胞与表皮干细胞蛋白质组图谱，且二者存在有一定的差异。

关键词：电泳,凝胶,双向表皮干细胞角朊细胞皮肤蛋白质组图谱

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荨麻疹患者外周血嗜碱性粒细胞表面CD63表达的研究

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实用皮肤病学杂志 2008年第2期1卷 82-83,78页

作者：李振肇静娴蔡小嫦邓列华深圳市龙岗区人民医院皮肤科深圳518116 暨南大学组织移植与免疫中心暨南大学附属第一医院皮肤科

目的观察荨麻疹患者外周血中活化的嗜碱性粒细胞表面表达CD63的数量,探讨嗜碱性粒细胞的活化程度,为临床检测提供新方法。方法用屋尘螨浸液作划破试验,筛选敏感的荨麻疹患者。用CD63-FITC等抗体标记嗜碱性粒细胞,流式细胞技术检测CD63... 详细信息

目的观察荨麻疹患者外周血中活化的嗜碱性粒细胞表面表达CD63的数量,探讨嗜碱性粒细胞的活化程度,为临床检测提供新方法。方法用屋尘螨浸液作划破试验,筛选敏感的荨麻疹患者。用CD63-FITC等抗体标记嗜碱性粒细胞,流式细胞技术检测CD63的表达情况。结果急、慢性患者活化嗜碱性粒细胞百分率分别为33.77～15.75%、11.66～5.25%,与正常人比较均有显著差异(P<0.05);经变应原刺激后,急、慢性患者活化嗜碱性粒细胞百分率分别为60.25～18.88%、22.22～7.89%,急、慢性患者活化前、活化后也均存在明显差异(P<0.05),而且急性患者活化程度更高(P<0.05)。结论通过测定嗜碱性粒细胞表达CD63可能有助于过敏的诊断。

关键词：荨麻疹嗜碱性粒细胞 CD63 流式细胞术

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