检索结果-内蒙古大学图书馆

中国人兽共患病杂志 2005年第1期21卷 22-23页

作者：龙军陈清俞守义第一军医大学珠江医院检验科广州510282 第二军医大学热卫系流行病教研室

目的　采用基因工程技术制备金黄色葡萄球菌B型肠毒素 (SEB)。方法　根据SEB已知序列 ,设计一对引物 ,用PCR方法从金黄色葡萄球菌染色体DNA上扩增出基因片段 ,克隆到原核表达质粒 pET32a上 ,转化大肠埃希菌JM10 9感受态细胞 ,经酶切和PC... 详细信息

目的　采用基因工程技术制备金黄色葡萄球菌B型肠毒素 (SEB)。方法　根据SEB已知序列 ,设计一对引物 ,用PCR方法从金黄色葡萄球菌染色体DNA上扩增出基因片段 ,克隆到原核表达质粒 pET32a上 ,转化大肠埃希菌JM10 9感受态细胞 ,经酶切和PCR鉴定 ,然后进行测序。结果　PCR扩增产物大小为 74 0bp ,重组质粒经双酶切PCR鉴定表明已正确重组 ,测序结果与已知序列基本吻合。结论　成功地克隆了金黄色葡萄球菌B型肠毒素 ,为下一步研究发病机制奠定基础。

关键词：金黄色葡萄球菌肠毒素克隆 PCR 序列分析

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金黄色葡萄球菌肠毒素单克隆抗体制备与应用

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中国公共卫生 2005年第1期21卷 25-26页

作者：龙军陈清俞守义第一军医大学珠江医院检验科广州510282 广州第一军医大学热卫系流行病教研室

目的制备抗B型金黄色葡萄球菌肠毒素单克隆抗体。方法纯化B型金黄色葡萄球菌肠毒素(SEB)免疫BALB/C小鼠的脾细胞与SO2/0骨髓瘤细胞融合,经筛选及克隆化,共获得6株能稳定分泌抗B型金黄色葡萄球菌肠毒素单克隆抗体的杂交瘤细胞株并进行了... 详细信息

目的制备抗B型金黄色葡萄球菌肠毒素单克隆抗体。方法纯化B型金黄色葡萄球菌肠毒素(SEB)免疫BALB/C小鼠的脾细胞与SO2/0骨髓瘤细胞融合,经筛选及克隆化,共获得6株能稳定分泌抗B型金黄色葡萄球菌肠毒素单克隆抗体的杂交瘤细胞株并进行了鉴定。结果6株单克隆抗体除两株属于IgG2A外,其余均属于IGG1亚类,其培养上清和腹水的滴度分别为1256～1512和112800～125600,6株单克隆抗体均不与SEA发生交叉反应,仅有2株与SEC1有弱交叉反应。WESTERNBLOT实验显示出一条特异性带,位于分子量28.5KDA处,证明了其特异性。结论成功获得抗B型金黄色葡萄球菌肠毒素单克隆抗体,为检测SEB打下了基础。

关键词：金黄葡萄球菌肠毒素单克隆抗体腹水

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耐甲氧西林金黄色葡萄球菌及肠毒素的检测

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中国公共卫生 2004年第5期20卷 519-520页

作者：龙军陈清俞守义第一军医大学热卫系流行病教研室广州510515

目的　评价乳胶结合实验检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (MRSA)的方法并检测MRSA的肠毒素。方法　收集 130株金黄色葡萄球菌临床分离株 ,通过药敏试验将其分为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌和甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌 (MSSA) ,应用乳胶结... 详细信息

目的　评价乳胶结合实验检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (MRSA)的方法并检测MRSA的肠毒素。方法　收集 130株金黄色葡萄球菌临床分离株 ,通过药敏试验将其分为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌和甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌 (MSSA) ,应用乳胶结合试验和基因扩增分别检测青霉素结合蛋白 2a(PBP2a)和MecA基因 ;用酶联免疫吸附试验 (ELISA)检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌肠毒素。结果　 6 5株MecA基因扩增阳性菌株中的 6 2株PBP2a检测阳性 ,6 3株MSSA中 ,MecA基因扩增及PBP2a检测全部为阴性。MRSA产肠毒素为 6 7株。MSSA肠毒素为 19株。结论　乳胶结合试验是一种简便、快速、准确检测MRSA的方法。

关键词：甲氧西林金黄色葡萄球菌青霉素耐药性肠毒素

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金黄色葡萄球菌肠毒素D产毒基因的序列分析

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中国公共卫生 2004年第3期20卷 274-275页

作者：龙军陈清俞守义第一军医大学热卫系流行病教研室广州510515

目的　构建金黄色葡萄球菌肠素D(SED)毒力蛋白基因重组表达质粒。方法　根据SED已知序列 ,设计合成一对引物 ,用PCR方法从金黄色葡萄球菌毒力质粒上扩增出基因片段 ,克隆到原核表达质粒PET3 2中 ,转化大肠埃希菌JM 10 9感受态细胞 ,经... 详细信息

目的　构建金黄色葡萄球菌肠素D(SED)毒力蛋白基因重组表达质粒。方法　根据SED已知序列 ,设计合成一对引物 ,用PCR方法从金黄色葡萄球菌毒力质粒上扩增出基因片段 ,克隆到原核表达质粒PET3 2中 ,转化大肠埃希菌JM 10 9感受态细胞 ,经酶切和PCR鉴定 ,然后进行测序。结果　PCR扩增产物大小为 3 17bp ;重组质粒经双酶切和PCR鉴定表明已正确重组 ;测序结果与己知序列基本吻合。结论　国内首次克隆了金黄色葡萄球菌肠毒素D产毒基因。

关键词：葡萄球菌金黄色肠毒素克隆 PCR 序列分析

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PCR-ELISA检测葡萄球菌肠毒素A

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中国公共卫生 2004年第11期20卷 1340-1341页

作者：龙军陈清俞守义第一军医大学珠江医院检验科广州510282 第一军医大学热卫系流行病教研室

葡萄球菌肠毒素(SE)是引起食物中毒和医院感染的重要病原.金葡菌肠毒素分为7个血清型.近年来,国外学者又发现了新的血清型即SEH[1]、SEG、SEI[2].近来发现[3],造成医院感染的耐青霉素金黄色葡萄球菌(MRSA),80%以上产生肠毒素,个别医院... 详细信息

葡萄球菌肠毒素(SE)是引起食物中毒和医院感染的重要病原.金葡菌肠毒素分为7个血清型.近年来,国外学者又发现了新的血清型即SEH[1]、SEG、SEI[2].近来发现[3],造成医院感染的耐青霉素金黄色葡萄球菌(MRSA),80%以上产生肠毒素,个别医院分离株几乎100%产生肠毒素.肠毒素的检测有生物学方法、免疫学方法、分子生物学方法等,近年来又发展基因探针的检测方法,由于放射性同位素标记探针的半衰期及放射污染特点,限制了该技术的推广应用,聚合酶链反应(PCR)在临床应用时,遇到了一些问题,比如灵敏度的特异性问题、污染问题,因为存在TapDNA聚合酶抑制物质而致假阳性结果[4].虽然可以通过斑点技术,Southern杂交法提高PCR的灵敏度和特异性,但是,这些方法多存在费时、繁琐、易污染等问题,不适合大量标本的检测,在参考国内外文献的基础上,本文建立了PCR-ELISA法检测金葡菌肠毒素基因的方法.结果报告如下.

关键词：葡萄球菌肠毒素A PCR-ELISA 医院感染临床应用 MRSA 金葡菌血清型推广应用生物学方法病原

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原位PCR检测霍乱弧菌ctxAB基因

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中华微生物学和免疫学杂志 2004年第9期24卷 751-754页

作者：朱利俞守义陈清蔡俊鹏第一军医大学热卫系流行病教研室广州510515 华南理工大学生物工程系

目的　为监测环境中的霍乱弧菌 ,建立原位PCR(insituPCR ,ISPCR)检测方法。方法纯培养的霍乱弧菌为实验材料 ,霍乱毒素基因 (ctxAB)为靶序列。 4 %多聚甲醛固定细胞 ,1mg/ml溶菌酶消化 2 0min ,PCR反应体系中加入 2 .5 %甘油 ,以荧光素... 详细信息

目的　为监测环境中的霍乱弧菌 ,建立原位PCR(insituPCR ,ISPCR)检测方法。方法纯培养的霍乱弧菌为实验材料 ,霍乱毒素基因 (ctxAB)为靶序列。 4 %多聚甲醛固定细胞 ,1mg/ml溶菌酶消化 2 0min ,PCR反应体系中加入 2 .5 %甘油 ,以荧光素标记的引物为标示物 ,在液相环境下 ,进行靶序列的ISPCR。结果　经蓝光激发 ,荧光显微镜下有扩增产物的细菌发出明亮的绿色荧光 ,阴性对照则无荧光。结论　由于ISPCR既能检测靶序列 ,又保护了细菌形态 ,可以在检测中省去细菌培养的过程 ,因此。

关键词：霍乱弧菌原位PCR 基因霍乱毒素细菌培养 AB 序列荧光素标记细胞扩增产物

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人杯状病毒检测方法及其进展

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国外医学（流行病学．传染病学分册） 2004年第2期31卷 104-107页

作者：刘翼聂军于德宪第一军医大学热卫系流行病教研室广州510515

人杯状病毒常常引起人群胃肠炎的爆发与散发,随着检测方法的不断改进,其危害性愈来愈受到重视。本文对人杯状病毒的常用检测方法及其研究进展进行了综述。

关键词：人杯状病毒胃肠炎酶联免疫吸附试验 RT-PCR 食品污染

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诺瓦克样病毒抗体水平及其相关因素研究

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中国公共卫生 2004年第6期20卷 685-686页

作者：戴迎春聂军张绪富李志峰刘翼俞守义 JIANG Xi 第一军医大学热卫系流行病学、中医系中西医结合基础教研室广州510515 Division of Infectious Diseases Cincinnati Children'sHospitalMedicalCenterCincinnatiOH45229-3039USA

目的　了解某军校学员诺瓦克样病毒抗体水平 ,同时调查分析与血型、入学前家庭所在地等的关系。方法　利用酶联免疫吸附试验检测血清中的诺瓦克样病毒rNV、rMX和r387特异性IgG抗体水平。结果　rNV、rMX和r387IgG抗体总检出率分别为 88 9... 详细信息

目的　了解某军校学员诺瓦克样病毒抗体水平 ,同时调查分析与血型、入学前家庭所在地等的关系。方法　利用酶联免疫吸附试验检测血清中的诺瓦克样病毒rNV、rMX和r387特异性IgG抗体水平。结果　rNV、rMX和r387IgG抗体总检出率分别为 88 9% ,5 4 1%和 90 0 %。其中rMX抗体阳性率不同血型之间存在显著性差异 (P<0 0 5 ) ,以O型抗体阳性率最高 6 2 5 % (115 / 184 ) ,B型最低 4 9 1% (16 0 / 2 16 ) ,而rNV和r387抗体阳性率未见显著性差异。不同入学前家庭所在地 3种抗体阳性率均有显著性差异 ,其中以农村籍学员抗体阳性率最高 ,城市最低。结论　该军校人群中诺瓦克样病毒感染普遍。

关键词：诺瓦克样病毒血清流行病学酶联免疫吸附试验人类环状病毒

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福氏志贺菌ipaC基因的克隆及序列分析

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中国公共卫生 2003年第3期19卷 273-274页

作者：孙素霞王红王勇俞守义第一军医大学热卫系流行病学教研室广州510515

目的　构建福氏志贺菌毒力蛋白基因 (ipaC)重组表达质粒。方法　根据ipaC已知序列 ,设计合成一对引物 ,用PCR方法从福氏志贺菌毒力质粒上扩增出ipaC基因片段 ,克隆到原核表达质粒pET3 2a中 ,转化大肠埃希菌TG1感受态细胞 ,经酶切和PCR鉴... 详细信息

目的　构建福氏志贺菌毒力蛋白基因 (ipaC)重组表达质粒。方法　根据ipaC已知序列 ,设计合成一对引物 ,用PCR方法从福氏志贺菌毒力质粒上扩增出ipaC基因片段 ,克隆到原核表达质粒pET3 2a中 ,转化大肠埃希菌TG1感受态细胞 ,经酶切和PCR鉴定 ,然后进行测序。结果　ipaC基因体外扩增产物大小约为 1112bp。重组质粒经双酶切和PCR鉴定表明为正确重组子 ,测序结果与已知序列基本吻合。结论　在国内首次克隆了福氏志贺菌ipaC基因。

关键词：福氏志贺菌毒力蛋白基因克隆 PCR 序列分析

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福氏志贺氏菌毒力基因ipaC在大肠杆菌中表达的初步研究

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中国人兽共患病杂志 2003年第6期19卷 29-31,41页

作者：孙素霞王红王勇向前吴爱军俞守义第一军医大学热卫系分子流行病学实验室广州510515

目的　构建福氏志贺氏菌毒力基因ipaC与质粒pET32a的重组质粒 ,转入大肠杆菌中表达 ,并检测表达产物的活性。方法　PCR扩增福氏志贺氏菌毒力质粒中ipaC基因 ,克隆到质粒 pET32aT7启动子下游 ,转化感受态大肠杆菌BL2 1(λDE3) ,IPTG诱导... 详细信息

目的　构建福氏志贺氏菌毒力基因ipaC与质粒pET32a的重组质粒 ,转入大肠杆菌中表达 ,并检测表达产物的活性。方法　PCR扩增福氏志贺氏菌毒力质粒中ipaC基因 ,克隆到质粒 pET32aT7启动子下游 ,转化感受态大肠杆菌BL2 1(λDE3) ,IPTG诱导表达 ,SDS -PAGE以及Western -Blot分析。结果　获得pET32a -ipaC重组表达质粒 ,SDS -PAGE以及Western -Blot显示重组质粒表达产物的分子量约为 6 3kDa,并具有一定的免疫活性。结论　福氏志贺氏菌毒力基因ipaC可在大肠杆菌中表达 ,且表达产物具有一定的免疫活性。

关键词：福氏志贺氏菌毒力基因 ipaC 大肠杆菌基因表达细菌性痢疾

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