检索结果-内蒙古大学图书馆

中华劳动卫生职业病杂志 2011年第10期29卷 740-745页

作者：翁泽平钟雪云张继君刘薇薇陈娟刘移民余卫唐丽娟陈嘉榆方茅张程叶更新陈玲珍广州暨南大学医学院病理学教研室 510632广州广州市第十二人民医院广州510632

目的比较骨髓间充质样干细胞（BM＋MSCs）与pcDNA3．1肝细胞生长因子（HGF）转染的BM—MSCs对SiO，所致大鼠肺泡炎和早期肺纤维化的影响并探讨其机制。方法收集培养雄性Wistar幼鼠的原代BM-MSCs，并进行4，6-联脒-2-苯基吲哚（DAPI）标... 详细信息

目的比较骨髓间充质样干细胞（BM＋MSCs）与pcDNA3．1肝细胞生长因子（HGF）转染的BM—MSCs对SiO，所致大鼠肺泡炎和早期肺纤维化的影响并探讨其机制。方法收集培养雄性Wistar幼鼠的原代BM-MSCs，并进行4，6-联脒-2-苯基吲哚（DAPI）标记。将50只雄性Wistar大鼠气管滴注40mg／mlSiO2，混悬液1ml造模后，随机分为模型组、BM—MSCs组和pcDNA3．1-HGF＋BM—MSCs组。造模次日，模型组（10只）：尾静脉注入PBS1ml；BM—MSCs组（20只）：尾静脉注入10^6／mlBM-MSCs1ml；pcD-NA3．1-HGF＋BM-MSCs组（20只）：尾静脉注入10^6个／mlpcDNA3．1-HGF转染的BM-MSCslm1。14和28d后，分别处死大鼠，取肺组织冰冻切片，荧光显微镜下检测体内DAPI标记细胞；HE和Masson染色观察肺炮炎和纤维化情况；免疫印迹（Westernblot）法测各组大鼠肺组织的I-IGF表达量；ELISA法检测肺组织中肿瘤坏死因子（TNF）．or．的含量，样本碱水解法检测肺组织中羟脯氨酸（HYP）的含量。结果14、28d时，pcDNA3．1-HGF＋BM-MSCs组肺组织肺泡炎评分（14d：1．16±0.3，28d：0.8＋0．20）均低于同时期BM-SCs组（14d：1．68＋0．17，28d：1．58±031）和模型组（14d：2．36＋_0．17，28d：2．80_＋0．14），BM—MSCs组肺泡炎评分均低于同时期模型组，差异均有统计学意义（P〈0．05）。14、28d时pcDNA3．1-HGF＋BM～MSCs组肺纤维化评分（14d：0．10＋_0．11，28d：1．16＋_0．13）均明显低于同时期BM—MSCs（14d：0．54＋0．15，28d：1．36±0．13）和模型组（14d：0．64＋0．09，28d：1．84＋0．17），差异均有统计学意义（P〈O．05）。14、28d时pcDNA3．1一HGF＋BM—MSCs组肺组织匀浆中TNF—d含量[14d：（280．48＋23．11）pg／mg，28d：（249．78_＋22．33）pg／mg]均明显低于BM—MSCs组[14d：（342．58_＋35．34）pg／mg，28d：（319．5l±17．84）pg／mg]~模型组『14d：（442．29±36．76）pg／mg，28d：（348．53＋_33．95）pghngl，BM—MSCs组肺组织匀浆中TNF—d含量低于模型组，差异均有统计学意义（P〈O．05）。14、28d时peDNA3．1-HGF＋BM—MSCs组肺组织匀浆中HYP表达量f14d：（O．46＋0．04）~g／mg，28d：（0．65_＋0．05）Ixg／mg】均明显低于同时期BM—MSCs组[14d：（0．63＋0．04）~g／mg，28d：（1．04_＋0．07）jxg／mg】和模型组【14d：（0．72_＋0．06）}xg／mg，28d：（1．39＋0．06）jxg／mgl，差异均有统计学意义（P〈0．05）；28d时，BM—MSCs组肺组织匀浆中HYP表达量低于模型组，差异有统计学意义（P〈O．05）。结论应用pcDNA3．1-HGF转染后的BM—MSCs比单独应用BM—MSCs能更有效地对抗SiO：诱导的大鼠肺泡炎和早期肺纤维化，作用机制可能与其减轻肺组织的炎症有关。

关键词：肝细胞生长因子髓样组细胞肺纤维化羟脯氨酸

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石英尘和博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化模型的比较研究

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中华劳动卫生职业病杂志 2011年第7期29卷 496-501页

作者：刘薇薇陈娟刘移民李素梅余卫陈嘉榆张程唐丽娟林琛莅钟雪云广州市第十二人民医院 510632 暨南大学医学院病理学教研室

目的比较石英尘和博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化模型中的肺泡炎和早期纤维化改变,并对其机制进行探讨.方法将大鼠随机分为SiO2组（14只,气管内注入40mg/ml SiO2混悬液1 ml）、BLM组（14只,气管内注入5 mg/kg BLM A5）和对照组（14只,气... 详细信息

目的比较石英尘和博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化模型中的肺泡炎和早期纤维化改变,并对其机制进行探讨.方法将大鼠随机分为SiO2组（14只,气管内注入40mg/ml SiO2混悬液1 ml）、BLM组（14只,气管内注入5 mg/kg BLM A5）和对照组（14只,气管内注入1 ml无菌生理盐水）.在造模后7、14 d每组各处死7只动物,取肺组织病理切片行HE染色,对肺泡炎进行计分,行饱和苦味酸天狼猩红染色,采用图像分析系统测得各组胶原面积后,进行定量分析,免疫组织化学技术检测肺组织中CD68和TNF-α蛋白表达情况,采用图像分析计算累积吸光度值,进行半定量分析.结果（1）HE染色光学显微镜下可见,BLM组7d时肺泡炎（肺泡炎评分2.814±0.832）最明显,偏振光下显示BLM组14d时肺纤维化[胶原面积（1284.57±554.72）μm2）]最严重,均明显高于对照组和同期SiO2组,差异有统计学意义（P＜0,05）.（2）免疫组化结果显示,BLM组7 d时TNF-α表达最高（17.100±1.831）,明显高于对照组（0.420±0.020）、SiO2组7 d（7.909±1.275）及BLM组14d（13.506±1.454）,差异均有统计学意义（P＜0.05）;在SiO2组14 d时TNF-α表达为22.778±2.512,明显高于BLM组（14 d）、对照组及SiO2组（7 d）,差异有统计学意义（P＜0.05）.14 d时,SiO2组CD68表达明显高于对照组、BLM组（14 d）及SiO2组（7d）,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 BLM诱导的大鼠肺损伤模型的早期肺泡炎重于SiO2诱导的大鼠肺损伤模型,纤维化进程早于SiO2诱导的大鼠肺损伤模型,TNF-α在两种模型的病程中均起着重要的作用,而巨噬细胞更为持续地参与了SiO2诱导的肺纤维化.

关键词：石英肺纤维化模型,动物

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小鼠子宫内膜干细胞的存在及其分布规律

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广东医学 2011年第8期32卷 973-975页

作者：耿江涛卢晓晔覃莉暨南大学医学院组织胚胎学教研室广州510632

目的通过标记滞留细胞技术检测昆明小鼠子宫内膜干细胞的存在及其分布规律。方法取出生3 d雌性乳鼠皮下注射BrdU50μg/g体重,连续3 d。分别在注射后第1、2、3、4、6和8周取子宫。采用免疫组化SP法检测子宫内膜BrdU的表达情况,并在高倍... 详细信息

目的通过标记滞留细胞技术检测昆明小鼠子宫内膜干细胞的存在及其分布规律。方法取出生3 d雌性乳鼠皮下注射BrdU50μg/g体重,连续3 d。分别在注射后第1、2、3、4、6和8周取子宫。采用免疫组化SP法检测子宫内膜BrdU的表达情况,并在高倍镜下计算阳性细胞百分率。结果 BrdU阳性细胞在第1周时在内膜上皮及基质部均广泛表达,但阳性细胞的数量随时间逐渐下降,至第8周时则主要位于基质部血管周围以及基质与肌层交界处。结论小鼠子宫内膜基质中存在成体干细胞。

关键词：子宫内膜标记滞留细胞 BrdU 干细胞免疫组化

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去卵巢骨质疏松模型大鼠骨组织CGRP及其1型受体的表达

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中国病理生理杂志 2011年第5期27卷 976-979页

作者：吕辰鹏杨丽孙影方霁奉水旺粱恒李淑琴张荣华暨南大学药学院中药学教研室广东广州510632 暨南大学医学院中医系广东广州510632

目的:观察去卵巢骨质疏松(OP)模型大鼠骨组织降钙素基因相关肽(CGRP)及其1型受体(CGRPR1)的表达。方法:将30只3月龄Sprague-Daw ley(SD)雌性大鼠随机分成假手术组(15只)和模型组(15只)。采用双侧卵巢切除术复制OP大鼠模型。去卵巢12周后... 详细信息

目的:观察去卵巢骨质疏松(OP)模型大鼠骨组织降钙素基因相关肽(CGRP)及其1型受体(CGRPR1)的表达。方法:将30只3月龄Sprague-Daw ley(SD)雌性大鼠随机分成假手术组(15只)和模型组(15只)。采用双侧卵巢切除术复制OP大鼠模型。去卵巢12周后,应用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)观察各组大鼠股骨CGRP和CGRPR1 mRNA的表达;应用免疫组织化学技术观察各组大鼠股骨远端干骺端CGRP和CGRPR1蛋白的表达。结果:模型组大鼠股骨CGRP和CGRPR1 mRNA的表达较假手术组显著降低(P<0.01);模型组大鼠股骨远端干骺端CGRP和CGRPR1蛋白的表达较假手术组显著降低(P<0.01)。结论:骨组织CGRP及CGRPR1表达的减少可能是OP形成的机制之一。

关键词：降钙素基因相关肽骨质疏松卵巢切除术

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骨碎补总黄酮对去卵巢骨质疏松模型大鼠血清中瘦素、白细胞介素6、前列腺素E_2及骨组织中β_2-肾上腺素受体的影响

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中国病理生理杂志 2011年第4期27卷 755-758页

作者：孙影杨丽吕辰鹏方霁左娜沈家珍张荣华暨南大学药学院中药学教研室广东广州510632 暨南大学医学院中医系广东广州510632

目的:观察骨碎补总黄酮对去卵巢骨质疏松(OP)模型大鼠血清中瘦素(LEP)、白细胞介素6(IL-6)、前列腺素E_2(PGE_2)及骨组织中β_2-肾上腺素受体(ADRB2)的影响。方法:采用双侧卵巢切除法复制OP大鼠模型;造模12周后以双能X线法检测骨矿物质... 详细信息

目的:观察骨碎补总黄酮对去卵巢骨质疏松(OP)模型大鼠血清中瘦素(LEP)、白细胞介素6(IL-6)、前列腺素E_2(PGE_2)及骨组织中β_2-肾上腺素受体(ADRB2)的影响。方法:采用双侧卵巢切除法复制OP大鼠模型;造模12周后以双能X线法检测骨矿物质密度(BMD),确定OP模型是否复制成功;用药12周后应用酶联免疫法检测血清中LEP、IL-6和PGE_2的浓度,免疫组化法检测大鼠骨组织中ADRB2的表达。结果:造模12周后,模型组与假手术组相比,多个部位BMD显著下降(P<0.01),提示OP模型复制成功。用药12周后模型组LEP、IL-6和PGE_2较假手术组均有显著增高(P<0.05);骨碎补总黄酮组LEP和IL-6较模型组有明显降低(P<0.01),PGE_2无显著差异(P>0.05);模型组ADRB2表达与假手术组和给药组间比较有显著差异(P<0.05),假手术组和给药组间比较无显著差异(P>0.05)。结论:去卵巢OP大鼠血清LEP、IL-6、PGE_2和骨组织ADRB2表达升高;而骨碎补总黄酮能降低去卵巢OP大鼠血清中LEP、IL-6水平和骨组织ADRB2表达,抑制骨吸收,这可能是骨碎补总黄酮防治OP的作用机制之一。

关键词：骨碎补总黄酮瘦素白细胞介素6 前列腺素E2 受体,肾上腺素能,β2 骨质疏松

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稳定表达HLA-A＊1101蛋白的K562细胞株的建立

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中国实验血液学杂志 2011年第5期19卷 1112-1116页

作者：査显丰周羽竝杨力建陈少华李萡闫小娟李扬秋暨南大学医学院血液病研究所广东广州510632 暨南大学医学院生化教研室广东广州510632 暨南大学医学院再生医学教育部重点实验室广东广州510632

本研究目的是建立稳定表达HLA-A*1101分子的K562细胞株,为研究慢性髓系白血病(CML)HLA-I限制性抗原特异T细胞的细胞毒作用提供靶细胞。利用RT-PCR从CML患者外周血单个细胞中扩增HLA-A*1101基因全长序列;利用重组PCR将2A肽连接子(D-V-E-X... 详细信息

本研究目的是建立稳定表达HLA-A*1101分子的K562细胞株,为研究慢性髓系白血病(CML)HLA-I限制性抗原特异T细胞的细胞毒作用提供靶细胞。利用RT-PCR从CML患者外周血单个细胞中扩增HLA-A*1101基因全长序列;利用重组PCR将2A肽连接子(D-V-E-X-N-P-G-P)基因连接到HLA-A*1101的3'端,并将其定向克隆入带有增强型绿色荧光蛋白基因的真核表达载体pEGFP-N3,构成HLA-A*1101-T2A-EGFP转录盒的重组表达载体;利用电穿孔技术将pEGFP-N3或重组质粒转染入K562细胞,利用荧光显微镜监测绿色荧光蛋白的表达,通过G418筛选出有效转染pEGFP-N3或HLA-A*1101-T2A-EGFP载体的K 562细胞株;利用RT-PCR和流式细胞术检测HLA-A*1101基因和蛋白的表达情况。结果表明,成功构建了以2A肽基因为连接子的HLA-A*1101-T2A-EGFP真核表达载体;重组质粒转染的K562细胞经G418筛选2个月后,获得2株表达绿色荧光蛋白的K562稳定细胞株HLA-A*1101+K562和pEGFP-N3+K562。RT-PCR检测证明,HLA-A*1101+K562细胞表达HLA-A*1101基因,而pEGFP-N3+K562细胞则不表达HLA-A*1101;流式细胞术分析显示,HLA-A*1101和GFP蛋白双阳性HLA-A*1101+K562细胞占88.5%,明显高于pEGFP-N3+K562细胞(0.698%)。结论:建立了一个简单有效地筛选HLA-A*1101+K562细胞株的方法,并成功地建立了膜稳定表达HLA-A*1101蛋白的K562细胞株,为进一步研究CML的特异性细胞免疫提供工具细胞。

关键词：慢性髓系白血病 K562细胞 HLA-A＊1101 基因克隆基因转导

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pIRES2-EGFP-BCL11B真核表达载体体外表达的动态分析

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中国病理生理杂志 2011年第5期27卷 944-950页

作者：陈思黄欣杨力建陈少华郑海涛沈琦李萡李扬秋暨南大学医学院血液病研究所深圳大学医学院免疫学教研室广东深圳518060 教育部再生医学重点实验室广东广州510632

目的:研究真核表达载体pIRES2-EGFP-BCL11B(B细胞白血病/淋巴瘤11B基因)在K293(人胚肾细胞株)和Raji(人Burkitt淋巴瘤细胞株)细胞中的表达情况。方法:分别利用脂质体和核转染技术将真核表达载体pIRES2-EGFP-BCL11B(pBCL11B)转染至K293和... 详细信息

目的:研究真核表达载体pIRES2-EGFP-BCL11B(B细胞白血病/淋巴瘤11B基因)在K293(人胚肾细胞株)和Raji(人Burkitt淋巴瘤细胞株)细胞中的表达情况。方法:分别利用脂质体和核转染技术将真核表达载体pIRES2-EGFP-BCL11B(pBCL11B)转染至K293和Raji细胞中,并设立空质粒组(pI2)和空转染组(MOCK)作为对照。通过荧光显微镜和流式细胞仪检测转染后48 h各组EGFP的表达,确定转染效率。通过荧光实时定量PCR(Taqman)技术检测转染后24 h各组BCL11B mRNA的表达情况,通过Western blotting技术检测转染后48 h各组BCL11B蛋白的表达情况。高分辨率活细胞成像系统动态观察转染后36-72 h重组质粒在Raji细胞增殖过程中的表达。结果:K293细胞pBCL11B、pI2和MOCK组的转染效率分别为(71.23±4.62)%、(70.45±3.58)%和(0.30±0.10)%,而Raji细胞各组的转染效率分别为(23.12±5.94)%、(22.48±6.25)%和(0.30±0.10)%。实时定量PCR和Western blotting结果显示转染后pBCL11B组在mRNA和蛋白水平均能检测到BCL11B基因的有效表达,BCL11B的表达量均明显高于pI2组和MOCK组(P<0.05)。活细胞追踪显示转染后36-72 h重组质粒在细胞中可稳定表达且转染后的细胞可以正常分裂增殖。结论:系统分析了真核表达载体pIRES2-EGFP-BCL11B转染至K293和Raji细胞的表达变化特点,转染后可以检测到该基因的有效上调,研究结果为下一步转染正常人T细胞奠定了基础。

关键词：基因,BCL11B 真核表达载体 K293细胞 Raji细胞

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超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A对活化T细胞端粒长度影响及其相关机制研究

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实用医学杂志 2011年第22期27卷 4015-4017页

作者：秦雅楠王冠明张鹏林晨高永鹏田红霞李扬秋暨南大学医学院微生物学与免疫学教研室广州市510632 暨南大学医学院血液病研究所广州市510632

目的:研究超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)对T细胞端粒长度的作用及机制。方法:SEA、K562细胞、SEA联合K562细胞以及抗CD3单克隆抗体分别刺激脐带血单核细胞,SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测端粒、hTERT及IL-7R表达。结果:SEA组、K562细... 详细信息

目的:研究超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)对T细胞端粒长度的作用及机制。方法:SEA、K562细胞、SEA联合K562细胞以及抗CD3单克隆抗体分别刺激脐带血单核细胞,SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测端粒、hTERT及IL-7R表达。结果:SEA组、K562细胞组、SEA联合K562细胞组及抗CD3单抗组活化T细胞的端粒相对长度比值为1.63±0.08、1.06±0.06、3.24±0.61、1.37±0.07;hTERT的表达差异倍数为1.88±0.07、1.95±0.05、3.93±0.23、1.30±0.06;IL-7R表达差异倍数为6.61±0.52、12.81±0.34、17.42±0.50、4.87±0.66;SEA联合K562细胞组均明显高于其他3组(P<0.01),SEA组对端粒长度影响大于单纯K562细胞组。结论:超抗原SEA可以直接刺激T细胞的端粒酶活性及上调表达IL-7R,联合特异性抗原K562细胞株诱导T细胞活化上调效果更明显。

关键词：白血病髓系慢性 BCR-ABLB阳性肠毒素类端粒长度 IL-7R hTERT

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口腔扁平苔藓局部浸润淋巴细胞颗粒酶B和穿孔素蛋白表达与上皮细胞凋亡的关系

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第三军医大学学报 2011年第18期33卷 1943-1946页

作者：雷蕾詹丽华谭为霞周序珑暨南大学医学院口腔系广州510632 暨南大学第一附属医院口腔内科广州510632 深圳市瑞尔齿科门诊部广东深圳518008 暨南大学医学院病理学教研室广州510632

目的检测口腔扁平苔藓(oral lichen planus,OLP)上皮细胞凋亡状况,观察颗粒酶B、穿孔素在OLP固有层浸润淋巴细胞中的蛋白表达,探讨细胞毒作用对OLP上皮细胞凋亡的影响。方法采用原位缺口末端DNA标记技术,定位检测OLP上皮细胞凋亡情况;... 详细信息

目的检测口腔扁平苔藓(oral lichen planus,OLP)上皮细胞凋亡状况,观察颗粒酶B、穿孔素在OLP固有层浸润淋巴细胞中的蛋白表达,探讨细胞毒作用对OLP上皮细胞凋亡的影响。方法采用原位缺口末端DNA标记技术,定位检测OLP上皮细胞凋亡情况;分别使用免疫组化法检测颗粒酶B和穿孔素在组织总淋巴细胞以及CD8+细胞中的表达,以健康口腔黏膜组织(NOM)作对照。结果与NOM相比,OLP上皮细胞凋亡显著增加(P=0.037);OLP淋巴细胞中颗粒酶B、穿孔素表达明显增强(P值分别为0.016和0.012),其部分阳性细胞接近上皮基底层。OLP中CD8+/颗粒酶B+细胞双阳性表达和CD8+/穿孔素+细胞双阳性表达较NOM明显升高(P值分别为0.043和0.032)。OLP上皮细胞凋亡与淋巴细胞颗粒酶B和穿孔素表达成正相关(r=0.56,P=0.038;r=0.42,P=0.041)。结论 OLP浸润淋巴细胞包括CD8+T细胞中颗粒酶B、穿孔素表达增强,提示OLP淋巴细胞可能以颗粒酶B、穿孔素作为细胞毒介质攻击口腔上皮细胞引起其凋亡。

关键词：口腔扁平苔藓 T淋巴细胞颗粒酶B 穿孔素细胞凋亡

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人羊膜上皮细胞的体外培养及标记

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广东医学 2011年第5期32卷 555-558页

作者：阮余霞周清陈剑王彦平杨筱曦李红唐光霞吴静暨南大学附属第一医院眼科广州510630 暨南大学医学院病理生理学教研室广州510632 暨南大学附属第一医院病理科广州510630 暨南大学医学院眼科研究室广州510632

目的改良人羊膜上皮细胞的培养方法,检测生长特性,观察荧光染料4,-6-联脒-2-苯基吲哚(DAPI)标记人羊膜上皮细胞(HAECs)的效率。方法取足月剖宫产术后羊膜经胶原酶和胰蛋白酶消化获得上皮细胞。MTT法绘制细胞生长曲线、流式细胞仪检测细... 详细信息

目的改良人羊膜上皮细胞的培养方法,检测生长特性,观察荧光染料4,-6-联脒-2-苯基吲哚(DAPI)标记人羊膜上皮细胞(HAECs)的效率。方法取足月剖宫产术后羊膜经胶原酶和胰蛋白酶消化获得上皮细胞。MTT法绘制细胞生长曲线、流式细胞仪检测细胞的生长周期,免疫组化对细胞角蛋白进行鉴定。并用DAPI标记,测1、2周荧光阳性率。结果培养的HAECs多角形,生长分为缓滞期、对数增长期和平台期,近80%处于细胞周期的静止期G0。细胞角蛋白keratin阳性表达。DAPI标记1周标记率为100%;2周细胞形态好,标记率不变,荧光强度减弱。结论该实验方法成功培养人羊膜上皮细胞。DAPI短期标记效果理想。

关键词：人羊膜上皮细胞 4,6-联脒-2-苯基吲哚细胞培养

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