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中国抗生素杂志 2011年第3期36卷 223-227页

作者：余广超徐霖袁广卿张甜陈康蒋岗姜余琴许沙沙常彦敏曹开源暨南大学附属第一医院临床检验中心广州510630 中山大学临床检验标准化研究中心广州510080 中山大学中山医学院微生物学教研室广州510080 广东省重大传染病预防和控制技术研究中心广州510080

目的了解金属β-内酰胺酶在广州地区铜绿假单胞菌中的流行状况及其流行亚型,完善广州地区金属β-内酰胺酶的分子流行病学资料。方法采用双纸片协同法和双纸片增效法对164株亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌筛选金属β-内酰胺酶表型阳性的菌株... 详细信息

目的了解金属β-内酰胺酶在广州地区铜绿假单胞菌中的流行状况及其流行亚型,完善广州地区金属β-内酰胺酶的分子流行病学资料。方法采用双纸片协同法和双纸片增效法对164株亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌筛选金属β-内酰胺酶表型阳性的菌株,采用PCR检测5类金属β-内酰胺酶的编码基因(IMP家族、VIM家族、GIM-1、SPM-1和SIM-1),利用生物信息学的方法对检测到的金属β-内酰胺酶亚型进行比对分析并制作分子进化树。结果 164株亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌中筛选出22株金属β-内酰胺酶表型阳性的菌株,IMP阳性15株(9.1%),其中11株为IMP-9亚型,另外4株携带一个新的亚型,命名为IMP-25,VIM阳性5株(3.0%),均为VIM-2亚型,未检测到GIM-1、SPM-1和SIM-1型金属β-内酰胺酶。结论广州地区铜绿假单胞菌产金属β-内酰胺酶的基因型已经出现多型化的特征,同时存在IMP型和VIM型金属β-内酰胺酶的流行,本次研究发现了一个新的金属β-内酰胺酶亚型(IMP-25),为IMP家族金属β-内酰胺酶的多样性及其分子流行病学资料提供了新的信息。

关键词：铜绿假单胞菌金属β-内酰胺酶耐药基因

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心理应激对大鼠实验性牙周炎及牙周组织中低氧诱导因子1α表达的影响

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中国病理生理杂志 2011年第2期27卷 315-319页

作者：张增方吕芳丽陈莹杨晓燕黄绮凌李东健黄世光暨南大学医学院口腔医学系广东广州510632 中山大学中山医学院寄生虫学教研室中山大学热带病防治研究教育部重点实验室广东广州510080 广州市妇女儿童医疗中心口腔科广东广州510120 广州市荔湾区口腔医院广东广州510170

目的:探讨心理应激对牙周炎及其氧代谢的影响。方法:建立大鼠实验性牙周炎模型并予以应激刺激,SPF级4周龄雄性Wistar大鼠48只,随机分为4组:(1)正常对照组;(2)实验性牙周炎组:用浸有牙周致病菌的丝线结扎左侧上颌第二磨牙牙颈部复制牙周... 详细信息

目的:探讨心理应激对牙周炎及其氧代谢的影响。方法:建立大鼠实验性牙周炎模型并予以应激刺激,SPF级4周龄雄性Wistar大鼠48只,随机分为4组:(1)正常对照组;(2)实验性牙周炎组:用浸有牙周致病菌的丝线结扎左侧上颌第二磨牙牙颈部复制牙周炎模型;(3)单纯应激组:牙周不作特殊处理,给予应激刺激;(4)牙周炎+应激组:按上法复制牙周炎模型,并予以应激刺激。各组动物分别于实验后第1、4、6、8周末分批处死,各时点每组处死的动物数为3只。大鼠处死前测量牙周附着丧失,制作牙体牙周联合切片观察牙周的组织学改变;采用免疫组化法检测各实验组大鼠牙周组织低氧诱导因子1α(HIF-1α)的表达水平,通过计算HIF-1α平均阳性细胞率来评估组织的缺氧程度。结果:(1)与正常对照组比较,单纯应激组牙周附着丧失程度在各时点均无显著差异(P>0.05);(2)牙周炎+应激组牙周附着丧失程度在4、6和8周时明显高于牙周炎组(P<0.01);(3)与正常对照组比较,单纯应激组HIF-1α平均阳性细胞率在各时点均无显著差异(P>0.05);(4)牙周炎+应激组HIF-1α平均阳性细胞率在4、6和8周时显著高于牙周炎组(P<0.01)。结论:应激刺激可能通过降低牙周组织氧代谢水平加重大鼠牙周炎症程度。

关键词：牙周炎动物模型心理应激低氧诱导因子1α

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黄芩甙对小鼠牙周炎白细胞介素6、白细胞介素4影响的实验研究

黄芩甙对小鼠牙周炎白细胞介素6、白细胞介素4影响的实验研究

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广东省口腔医学会第三次会员代表大会暨第十次学术会议

作者：饶利佳卢嘉健吕芳丽李东建黄世光 510632广州暨南大学医学院口腔医学系中山大学医学院寄生虫教研室广州市荔湾区口腔医院

目的：观察黄芩甙对小鼠实验性牙周炎血清白细胞介素6 (interleukin-6,IL-6)、IL-4的影响,探讨黄芩甙对牙周炎的免疫调节作用机制.方法：建立小鼠实验性牙周炎模型,并予以黄芩水提取物灌胃治疗.实验采用SPF级12周龄雄性KM小鼠27只,随机... 详细信息

目的：观察黄芩甙对小鼠实验性牙周炎血清白细胞介素6 (interleukin-6,IL-6)、IL-4的影响,探讨黄芩甙对牙周炎的免疫调节作用机制.方法：建立小鼠实验性牙周炎模型,并予以黄芩水提取物灌胃治疗.实验采用SPF级12周龄雄性KM小鼠27只,随机分为3组：正常对照组;实验性牙周炎组：参照Kimura等的方法,复制小鼠实验性牙周炎模型;黄芩甙治疗组：复制小鼠实验性牙周炎模型,并于建模后5周开始用黄芩水提取物灌胃.各组小鼠分别在建模后第4、6、8周分批处死,各时点每组处死动物数为3只.制作牙体牙周组织联合切片,观察牙周的组织学改变;采用ELISA法检测实验性牙周炎小鼠外周血IL6、IL-4的水平.结果：实验性牙周炎组牙周组织表现为中等程度的炎症破坏,而黄芩甙治疗组牙周组织炎症程度较牙周炎组明显减轻,修复反应明显;牙周炎组血清IL-6水平显著高于正常对照组和黄芩甙治疗组(P＜0.01);黄芩甙治疗组血清IL-6的含量在6和8周时显著低于牙周炎组(P＜0.01);牙周炎组血清IL-4水平显著低于正常对照组和黄芩甙治疗组(P＜0.01),而黄芩甙治疗组血清IL-4的含量在6和8周时显著高于牙周炎组(P＜0.01).结论：牙周炎的发病过程与Th1/Th2细胞因子的失调密切相关,表现为IL6升高,IL-4的含量降低;黄芩甙通过降低牙周炎IL-6的含量,增加IL-4的分泌量,纠正牙周炎Th1/Th2细胞因子的失调状况,对小鼠实验性牙周炎有明显的治疗效果.

关键词：牙周炎白细胞介素动物模型黄芩甙

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靶向抑制miRNA-21提高白血病K562细胞对阿糖胞苷的敏感性

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生命科学研究 2011年第4期15卷 317-322页

作者：朱雪姣李育敏谷景义郭敏费嘉暨南大学医学院生物化学与分子生物学教研室中国广东广州510632 广西壮族自治区民族医院中国广西南宁530001 暨南大学医学院血液病研究所中国广东广州510632

为研究以miRNA-21为靶标的反义核酸(AMO-miR-21)提高白血病K562细胞对阿糖胞苷(Ara-C)的敏感性及可能的作用机制,在LipofectamineTM2000介导下,将化学合成的AMO-miR-21转染K562细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测单独使用AMO-miR-21、Ara-C以及两者联合使用对细胞增殖抑制作用,并计算抑制率和IC50;流式细胞仪检测细胞凋亡;实时定量PCR(Real-time PCR)检测miRNA-21及其候选靶基因Pdcd4 mRNA的表达水平;免疫印迹(Western blot)检测Pdcd4蛋白的表达水平.结果显示Ara-C与AMO-miR-21联合使用后,IC50从1.95μmol/L降低到0.84μmol/L,敏感性提高到单用Ara-C的2.3倍.AMO-miR-21联合Ara-C组细胞凋亡明显增加(P<0.05).AMO-miR-21显著抑制K562细胞中miRNA-21的表达水平(P<0.05),同时Pdcd4的表达明显增加(P<0.05).提示AMO-miR-21可以提高K562细胞对Ara-C的敏感性,其作用机制与靶向抑制miRNA-21,进而诱导细胞凋亡有关.

关键词： miRNA-21 反义寡核苷酸阿糖胞苷 K562细胞化疗敏感性

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广州地区猴腺病毒7型血清流行病学初步调查

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分子诊断与治疗杂志 2011年第5期3卷 306-308页

作者：卢建溪梅明珠钱师宇李刚中山大学附属第三医院疫苗研究所广东广州510630 暨南大学医学院医学信息教研室广东广州510632 中山大学附属第三医院感染科广东广州510630

目的评估广州地区猴腺病毒7型(SAdV-7)先存中和抗体阳性率情况。方法首先构建以β-半乳糖苷酶(LacZ)为报告基因,结合CMV启动子的猴重组腺病毒7型载体SAdV7-CMV-LacZ。然后使用化学发光法,检测209份免疫功能正常的成人的血清样本中SAdV-... 详细信息

目的评估广州地区猴腺病毒7型(SAdV-7)先存中和抗体阳性率情况。方法首先构建以β-半乳糖苷酶(LacZ)为报告基因,结合CMV启动子的猴重组腺病毒7型载体SAdV7-CMV-LacZ。然后使用化学发光法,检测209份免疫功能正常的成人的血清样本中SAdV-7中和抗体阳性率情况。结果我们发现SAdV-7中和抗体的阳性率为27.8%(58/209)。SAdV-7中和抗体在低滴度时阳性率最高,并且随着滴度的升高,阳性血清分布率逐渐降低。在20～40岁人群中,SAdV-7中和抗体阳性率最高,在<20岁人群中未检测到SAdV-7中和抗体。结论广州地区人群中针对SAdV-7的先存中和抗体阳性率低。因此,SAdV-7在基因治疗及基因疫苗的应用上是一个具有吸引力的候选载体。

关键词：人腺病毒猴腺病毒中和抗体

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脑缺血再灌注大鼠脑SI区及视上核nNOS免疫阳性神经元的变化

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广州医学院学报 2011年第5期39卷 16-19页

作者：崔凤金沈伟哉郭国庆惠州市第三人民医院骨一科广东惠州516002 暨南大学医学院人体解剖学教研室广东广州510632

目的:观察大鼠脑缺血再灌注后大脑皮质第一躯体感觉运动区(S I区)、视上核神经元型一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,nNOS)免疫阳性神经元形态、数量变化以探讨nNOS在缺血性脑损伤中的变化规律和作用。方法:健康SD大鼠84只,体重220～... 详细信息

目的:观察大鼠脑缺血再灌注后大脑皮质第一躯体感觉运动区(S I区)、视上核神经元型一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,nNOS)免疫阳性神经元形态、数量变化以探讨nNOS在缺血性脑损伤中的变化规律和作用。方法:健康SD大鼠84只,体重220～250 g,随机分为2组:(1)脑缺血再灌注损伤模型组:用双侧颈总动脉阻塞法建立脑缺血再灌注损伤模型。(2)假手术组:只分离双侧颈总动脉而不阻断血流。分别于术后即刻、1、2、3 d、1、2、4周灌注取脑,nNOS免疫细胞化学染色,观察大脑皮质S I区、视上核内nNOS免疫阳性神经元形态及数量变化。结果:结扎双侧颈总动脉后1、2 d和2周,S I区nNOS免疫阳性神经元数量显著低于假手术组(P<0.05);结扎双侧颈总动脉后1周,视上核nNOS免疫阳性神经元数量显著低于假手术组(P<0.05)。结论:脑缺血再灌注损伤后,S I区、视上核内nNOS免疫阳性神经元数量的减少可能参与了再灌注损伤的保护机制。

关键词：脑缺血再灌注第一躯体感觉运动区视上核神经元型一氧化氮合酶

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细胞周期蛋白D1重组质粒的构建及其在鼻咽癌细胞中的表达

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南方医科大学学报 2010年第2期30卷 202-205页

作者：柏志全张海峰陈丽新朱林燕左婉红和树同王立伟暨南大学医学院生理学教研室广东广州510632 暨南大学医学院药理教研室广东广州510632

目的克隆人细胞周期蛋白D1基因,构建真核表达载体,诱导并鉴定其表达。方法利用RT-PCR法,以低分化鼻咽癌CNE-2Z细胞mRNA为模板,扩增周期蛋白D1基因,构建重组表达载体pIRES2-EGFP-D1和pEGFP-C2-D1,用脂质体LipofectamineTM 2000将重组质... 详细信息

目的克隆人细胞周期蛋白D1基因,构建真核表达载体,诱导并鉴定其表达。方法利用RT-PCR法,以低分化鼻咽癌CNE-2Z细胞mRNA为模板,扩增周期蛋白D1基因,构建重组表达载体pIRES2-EGFP-D1和pEGFP-C2-D1,用脂质体LipofectamineTM 2000将重组质粒转染到低分化鼻咽癌CNE-2Z细胞,诱导其表达,免疫荧光、Western blotting等鉴定其表达。结果电泳获得918bp预期片段,重组质粒经酶切、PCR和测序分析证实含有周期蛋白D1完整读码框,将重组质粒导入CNE-2Z细胞并成功表达,目的蛋白经免疫荧光和Western blotting鉴定具有生物学活性。结论成功克隆并构建含周期蛋白D1基因的真核表达GFP质粒,为进一步研究周期蛋白D1在鼻咽癌CNE-2Z细胞中的作用奠定基础。

关键词：细胞周期蛋白D1 绿色荧光蛋白质粒构建免疫荧光免疫印迹

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口腔扁平苔藓固有层淋巴细胞中Fas及Fas配体的表达变化

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中华口腔医学杂志 2010年第4期45卷 219-222页

作者：雷蕾谭为霞周序珑郑佩娥暨南大学医学院口腔系广州510632 暨南大学医学院病理教研室广州510632

目的检测Fas及Fas配体（Fasligand，FasL）在口腔扁平苔藓（oral lichen planus，OLP）固有层淋巴细胞中的蛋白表达，探讨Fas、FasL和活化诱导的细胞死亡（activation—induced cell death，AICD）与OLP发病的关系。方法采用脱氧核糖核... 详细信息

目的检测Fas及Fas配体（Fasligand，FasL）在口腔扁平苔藓（oral lichen planus，OLP）固有层淋巴细胞中的蛋白表达，探讨Fas、FasL和活化诱导的细胞死亡（activation—induced cell death，AICD）与OLP发病的关系。方法采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的原位缺口末端标记法检测31例OLP和10例正常口腔黏膜（normal oral mucosa，NOM）中淋巴细胞凋亡情况；分别使用免疫组化法检测组织总淋巴细胞及CD8＋、CD4＋T细胞Fas、FasL的表达。结果OLP与NOM固有层淋巴细胞凋亡率[分别为（1．9±1．8）％、（11．5±9．0）％]差异有统计学意义（P=0．013）。OLP淋巴细胞Fas、FasL表达与NOM组相比明显增强[阳性表达率分别为52％（16／31）、71％（22／31），P值分别为0．005、0．000]。OLP中CD8＋与Fas＋细胞双阳性表达率为10％，与NOM组相比无明显升高（P=0．313），而CD8＋与FasL＋细胞双阳性表达率[58％（3／31）]显著升高（P=0．002）。CD4＋与Fas＋细胞双阳性表达率为35％（11／31），较NOM组显著升高（P=0．031），其中网纹型的表达明显升高（阳性表达为8／19，P=0．019），但糜烂、萎缩型的表达无显著升高（阳性表达为3／12，P=0．097）。CD4＋与Fas L＋表达率为16％（5／31），与NOM组相比无明显增强（P=0．182）。结论OLP淋巴细胞凋亡低下；OLP中T细胞亚群Fas、FasL表达不均衡，CD8＋细胞和萎缩、糜烂型OLP中CD4＋细胞可能逃逸AICD，与炎症的持续和进展有关；网纹型OLP中部分CD4＋T细胞可能经历AICD。

关键词：扁平苔藓,口腔 Fas配体蛋白质激活诱导细胞死亡

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天麻素对乙醇诱导肝细胞株L02细胞损伤的影响

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细胞与分子免疫学杂志 2010年第3期26卷 211-213页

作者：柏志全胡巢凤孙丽萍暨南大学医学院生理学教研室广东广州510632 暨南大学医学院病理生理学教研室广东广州510632

目的:探讨天麻素对乙醇诱导肝细胞株L02损伤的影响。方法:将人肝细胞株L02培养,加入不同浓度的乙醇,采用MTT比色法确定乙醇作用的浓度。用流式细胞仪测定细胞活性氧簇(ROS)及线粒体膜电位的改变;采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)分析法检... 详细信息

目的:探讨天麻素对乙醇诱导肝细胞株L02损伤的影响。方法:将人肝细胞株L02培养,加入不同浓度的乙醇,采用MTT比色法确定乙醇作用的浓度。用流式细胞仪测定细胞活性氧簇(ROS)及线粒体膜电位的改变;采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)分析法检测细胞ATP含量。结果:乙醇(25 mL/L)作用36 h可损伤肝细胞,细胞内ROS的水平明显增加;而细胞线粒体膜电位及肝细胞中ATP的含量则显著降低(P<0.01)。天麻素具有减轻细胞损伤的作用,并可降低损伤的肝细胞内ROS的含量,增加细胞线粒体膜电位和ATP的水平。结论:天麻素可抑制乙醇诱导的肝细胞损伤及脂质过氧化反应,改善线粒体功能,增加能量合成,发挥保护肝细胞的作用。

关键词：肝细胞活性氧簇线粒体膜电位能量代谢天麻素

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携带结核杆菌Ag85B基因的植物表达载体的构建及鉴定

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华北农学报 2010年第2期25卷 1-4页

作者：李君武刘艳黄清华叶秋萍暨南大学医学院微生物与免疫教研室广东广州510632

构建包含结核杆菌Ag85B基因的植物表达载体,并转化农杆菌LBA4404。以pcDNA3-Ag85B为模板,通过常规PCR克隆出Ag85B基因,定向克隆至含有玉米特异性启动子globulin-1的pCR2.1载体上,然后将globulin-1-Ag85B的融合片段酶切下来,并连接到经... 详细信息

构建包含结核杆菌Ag85B基因的植物表达载体,并转化农杆菌LBA4404。以pcDNA3-Ag85B为模板,通过常规PCR克隆出Ag85B基因,定向克隆至含有玉米特异性启动子globulin-1的pCR2.1载体上,然后将globulin-1-Ag85B的融合片段酶切下来,并连接到经过加工修饰的含有抗除草剂基因bar的双元表达载体pCAMBIA1300上,将重组质粒转化至农杆菌LBA4404中。重组质粒双酶切可见0.8bp和10kb的两条特异性条带,与预期大小相一致。重组质粒测序表明克隆的Ag85B基因序列与Genbank上相一致,酶切从农杆菌中所抽提的质粒,片段大小与预期相一致。成功构建与转化了携带结核Ag85B基因的植物双元表达载体,为利用植物反应器生产口服结核疫苗奠定基础。

关键词：结核分枝杆菌 Ag85B基因 globulin-1

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