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解剖学杂志 2010年第2期33卷 154-156页

作者：卢晓晔林芳芳李杨秋高岚暨南大学医学院组织学与胚胎学教研室广州510632 暨南大学医学院血液研究所广州510632 山西中医学院组织学与胚胎学教研室太原030024

目的：检测不同胎龄胎儿胸腺组织内T细胞抗原受体（TCR）的表达及发育规律.方法：18～40周胎儿胸腺组织,采用免疫组织化学SP法检测TCRαβ和TCRγδ的表达. 结果：胚胎21周,胸腺组织开始出现TCRαβ和TCRγδ阳性细胞.TCRαβ阳性细胞... 详细信息

目的：检测不同胎龄胎儿胸腺组织内T细胞抗原受体（TCR）的表达及发育规律.方法：18～40周胎儿胸腺组织,采用免疫组织化学SP法检测TCRαβ和TCRγδ的表达. 结果：胚胎21周,胸腺组织开始出现TCRαβ和TCRγδ阳性细胞.TCRαβ阳性细胞主要分布被膜下及小叶间隔中,围绕血管成群分布.TCRγδ阳性细胞的分布与TCRαβ阳性细胞相似, 但细胞数量较TCRαβ阳性细胞少.38周以后胎儿胸腺内TCR阳性细胞主要分布在皮髓质交界处,被膜下及小叶间隔中的TCR阳性细胞较早期少.结论：TCR阳性细胞在胚胎早期开始出现,其分布部位提示局部微环境有利于这些细胞的分化发育.

关键词：胎儿胸腺 T细胞抗原受体免疫细胞化学

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SEA联合K562细胞体外诱导正常人脐带血单核细胞TCRζ链表达的作用

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2010年第2期31卷 154-157页

作者：高永鹏林晨田红霞高珂郜世隽江振友陈少华沈琦李扬秋暨南大学医学院微生物学与免疫学教研室广东广州510632 暨南大学医学院血液病研究所广东广州510632

目的:研究金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)对K562细胞体外诱导脐血T细胞活化TCRζ链基因表达情况。方法:常规分离4例脐带血单核细胞,分别与抗CD3单克隆抗体、单纯K562细胞、SEA以及SEA联合K562细胞共培养,诱导T细胞活化增殖,并设空白对照组... 详细信息

目的:研究金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)对K562细胞体外诱导脐血T细胞活化TCRζ链基因表达情况。方法:常规分离4例脐带血单核细胞,分别与抗CD3单克隆抗体、单纯K562细胞、SEA以及SEA联合K562细胞共培养,诱导T细胞活化增殖,并设空白对照组。刺激培养48 h后收集各组细胞提取mRNA并合成cD-NA,采用SYBR GreenⅠ荧光定量PCR和相对定量检测TCRζ链在不同组别T淋巴细胞中的表达情况,以β2微球蛋白基因(β2M)作为内参,根据相对定量公式:2-ΔΔCt计算TCRζ链表达差异倍数。结果:抗CD3单抗组、K562细胞组、SEA组、SEA联合K562细胞组诱导培养T细胞中TCRζ链表达差异倍数分别是(4.52±0.96)、(1.65±0.26)、(1.43±0.44)、(3.41±0.30),表明各组均有活化T细胞的作用,但各组TCRζ链表达水平有差异,其中SEA联合k562细胞组的T细胞ζ链基因表达均明显高于单纯k562组及单纯SEA组(P<0.01)。结论:超抗原SEA有助于增强K562细胞体外诱导T细胞活化作用。

关键词：金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA) 脐带血 T细胞受体ζ链实时定量PCR BCR-ABL融合蛋白慢性粒细胞白血病

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人外周血单个核细胞与脐带间充质干细胞共培养的AFM研究

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中国生物工程杂志 2010年第8期30卷 6-12页

作者：龚超群蔡继业郜世隽王秋兰金花暨南大学生命科学技术学院化学系广州510632 暨南大学医学院微生物学免疫学教研室广州510632

采用原子力显微镜与倒置显微镜在细胞层次上观察了人外周单个核细胞(PBMCs)与同种异源脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)共培养的过程,并在单细胞水平上分析了共培养前后人外周单个核细胞的形貌和生物物理性质。结果发现:共培养后贴壁人外周... 详细信息

采用原子力显微镜与倒置显微镜在细胞层次上观察了人外周单个核细胞(PBMCs)与同种异源脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)共培养的过程,并在单细胞水平上分析了共培养前后人外周单个核细胞的形貌和生物物理性质。结果发现:共培养后贴壁人外周单个核细胞的形态发生了很大的改变,并且表面分布着大小不一的颗粒状聚合物。利用AFM高空间分辨的力位移曲线测量系统,发现共培养72h后培养上清中人外周单个核细胞、贴壁的人外周单个核细胞的粘滞力分别是单纯培养72h的人外周单个核细胞的2倍、5倍,而细胞的硬度分别是单纯培养人外周单个核细胞的1.5倍、2倍。CCK-8检测提示,共培养过程中,干细胞的生长与外周血单个核细胞的生长出现了竞争作用。通过AFM探测人外周单个核细胞与脐带间充质干细胞共培养的可视化数据,有助于更好地了解间充质干细胞与外周血单个核细胞的相互作用。

关键词：脐带间充质干细胞外周血单个核细胞原子力显微镜倒置荧光显微镜

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植物血凝素与金色葡萄球菌肠毒素刺激人外周血单个核细胞的比较研究

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分析测试学报 2010年第5期29卷 442-448页

作者：龚超群郜世隽蔡继业黄飞程暨南大学生命科学技术学院化学系广东广州510632 暨南大学医学院微生物学免疫学教研室广东广州510632

比较了植物血凝素(PHA)与金色葡萄球菌肠毒素(SEA)对外周血单个核细胞(PBMCs)的刺激效果。取健康人外周静脉血,分离得到PBMCs,分别加入PHA及SEA进行刺激并孵育12 h,利用原子力显微镜和倒置荧光显微镜观察细胞形态变化,利用量子点联合共... 详细信息

比较了植物血凝素(PHA)与金色葡萄球菌肠毒素(SEA)对外周血单个核细胞(PBMCs)的刺激效果。取健康人外周静脉血,分离得到PBMCs,分别加入PHA及SEA进行刺激并孵育12 h,利用原子力显微镜和倒置荧光显微镜观察细胞形态变化,利用量子点联合共聚焦显微镜观察活化后细胞膜表面CD3、CD69的分布情况,利用流式细胞术检测淋巴细胞活化早期细胞分化抗原CD69分子表达的变化情况。结果显示,丝裂原PHA刺激的淋巴细胞大多成群聚集,而超抗原SEA刺激的淋巴细胞大多呈分散状,且二者形态有明显差异;两组活化后淋巴细胞的体积均大于静息组,且活化过程中发生极化作用,迁移淋巴细胞,形成膜突起;丝裂原和超抗原刺激淋巴细胞12 h后,使淋巴细胞表达CD69抗原分子,但在量表达上存在差异性(PHA:39.5%±8.7%;SEA:8.3%±1.8%),抗原分子CD3和CD69在膜表面呈不均匀分布,且SEA活化后的T淋巴细胞表面受体CD3和CD69分子在空间上形成了微结构域;外周单个核细胞中其它非T细胞在丝裂原或者超抗原的刺激下也能表达活化抗原分子CD69。

关键词：植物血凝素金色葡萄球菌肠毒素外周血单个核细胞激光共聚焦显微镜原子力显微镜流式细胞分析仪量子点

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慢性血吸虫病并结直肠癌中hMSH2和hMLH1的表达

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实用医学杂志 2010年第6期26卷 912-914页

作者：罗惠莉卢晓晔暨南大学医学院组织胚胎学教研室广州市510632

目的:探讨hMSH2/hMLH1蛋白表达与慢性血吸虫病并结直肠癌之间的相关性及其可能的作用机制。方法:应用免疫组化SP法检测67例慢性血吸虫病并结直肠癌患者癌变组织及癌旁正常组织中hMSH2/hMLH1蛋白的表达情况。结果:慢性血吸虫病并结直肠... 详细信息

目的:探讨hMSH2/hMLH1蛋白表达与慢性血吸虫病并结直肠癌之间的相关性及其可能的作用机制。方法:应用免疫组化SP法检测67例慢性血吸虫病并结直肠癌患者癌变组织及癌旁正常组织中hMSH2/hMLH1蛋白的表达情况。结果:慢性血吸虫病并结直肠癌患者癌变组织中hMSH2/hMLH1蛋白表达丢失率为28.4%,而癌旁正常结直肠组织中表达丢失率为1.5%(P=0.000);在黏液腺癌中hMSH2/hMLH1蛋白表达明显减低(P<0.05);逐步回归法进行Logistic多因素分析结果显示组织学分型是hMSH2/hMLH1表达缺失的唯一危险因素(OR=3.333,95%CI1.096～10.141,P=0.034)。结论:hMSH2/hMLH1蛋白缺失与结直肠癌组织学分型有关;hMSH2/hMLH1蛋白缺失在慢性血吸虫病并结直肠癌中起重要作用,微卫星不稳定性可能参与了慢性血吸虫肠病发展为结直肠癌的恶性转化过程。

关键词：结直肠肿瘤 hMLH1/hMSH2 血吸虫病免疫组织化学

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NF-κB结合位点突变对人NOD2基因启动子调控的影响

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现代免疫学 2010年第1期30卷 46-50页

作者：孙丽萍胡巢凤暨南大学医学院病理生理学教研室发热研究室广州510302

探讨NF-κB结合位点突变对人NOD2基因启动子调控的影响。采用PCR技术从人基因组DNA中扩增含有NF-κB结合位点的人NOD2基因启动子序列,并定向克隆入已切除启动子的表达载体pEGFP-N3中,构建含有NF-κB结合位点的人NOD2基因启动子驱动的绿... 详细信息

探讨NF-κB结合位点突变对人NOD2基因启动子调控的影响。采用PCR技术从人基因组DNA中扩增含有NF-κB结合位点的人NOD2基因启动子序列,并定向克隆入已切除启动子的表达载体pEGFP-N3中,构建含有NF-κB结合位点的人NOD2基因启动子驱动的绿色荧光蛋白(green fluorescent proteins,GFP)载体pEGFP-N3-NOD2wt,并构建NF-κB结合位点2个碱基缺失突变的载体,将构建的重组质粒瞬时转染HEK293细胞,在倒置荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达情况。结果显示重组质粒转染HEK293细胞后,在倒置荧光显微镜下均能看到绿色荧光,其中pEGFP-N3-NOD2wt重组质粒在HEK293细胞中荧光表达较强,而突变质粒mpEGFP-N3-NOD2荧光强度明显减弱。说明NF-κB结合位点是驱动NOD2基因转录的重要元件,且在NOD2基因启动子的调控中发挥了正调节作用,为进一步研究NOD2基因表达及调控机制提供了新的思路。

关键词：人NOD2启动子 NF-κB结合位点缺失突变荧光表达

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脑缺血大鼠大脑皮质IGF-Ⅱ免疫阳性神经元的变化及复方丹参的影响

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2010年第2期31卷 145-149页

作者：郭春梅邢旭光郭国庆刘南暖沈伟哉暨南大学第一临床医学院内科学基础实验室广东广州510630 暨南大学医学院解剖学教研室广东广州510632

目的:观察脑缺血大鼠大脑皮质胰岛素样生长因子II(IGF-II)免疫阳性神经元的变化,并探讨复方丹参的抗缺血机制。方法:双侧颈总动脉结扎建立永久性脑缺血模型,复方丹参腹腔内注射后用ABC法显示IGF-II免疫阳性神经元并进行定量分析。结果:... 详细信息

目的:观察脑缺血大鼠大脑皮质胰岛素样生长因子II(IGF-II)免疫阳性神经元的变化,并探讨复方丹参的抗缺血机制。方法:双侧颈总动脉结扎建立永久性脑缺血模型,复方丹参腹腔内注射后用ABC法显示IGF-II免疫阳性神经元并进行定量分析。结果:大鼠大脑皮质II-V层有较丰富的IGF-II免疫阳性神经元分布,阳性细胞多见一个细长的突起。对照组大鼠阳性神经元分布较均匀、不密集,60、120、180 d光密度无明显变化;脑缺血组大鼠60 d时密集,较对照组增多明显,光密度增高,但120、180 d数量有所减少,光密度下降,但仍多于对照组。生理盐水处理组IGF-II免疫阳性神经元的变化与单纯缺血大鼠对应时间点相似,用丹参处理后60 d,阳性神经元的数量较缺血组和生理盐水处理组数量减少,光密度未见明显差异,120 d时数量仍然较密集,多于对照组,180 d进一步减少,接近对照组,但多突起的阳性细胞多见。结论:脑缺血性刺激可诱导大鼠大脑皮质IGF-II免疫阳性神经元增多,丹参干预后IGF-II免疫阳性神经元未见明显增多,但表达IGF-II免疫阳性神经元形态特征发生变化。

关键词：脑缺血胰岛素样生长因子丹参大脑皮质大鼠

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B细胞非霍奇金淋巴瘤患者TCR ζ基因的表达特点

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肿瘤防治研究 2010年第5期37卷 547-550页

作者：李菊香陈少华杨力建林春兰李扬秋暨南大学附属第一医院临床医学检验中心广州510632 暨南大学医学院血液病研究所暨南大学医学院生化教研室暨南大学再生医学教育部重点实验室

目的分析B细胞非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)患者外周血中T细胞信号转导分子TCRζ基因的表达特点。方法采用SYBRGreenⅠ实时定量RT-PCR和相对定量分析法检测17例B-NHL患者外周血单个核细胞(PBMCs)中TCRζ基因的表达情况,以β2微球蛋白基因(β2M... 详细信息

目的分析B细胞非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)患者外周血中T细胞信号转导分子TCRζ基因的表达特点。方法采用SYBRGreenⅠ实时定量RT-PCR和相对定量分析法检测17例B-NHL患者外周血单个核细胞(PBMCs)中TCRζ基因的表达情况,以β2微球蛋白基因(β2M)作为内参,采用相对定量公式:2-△Ct×100%,计算TCRζ基因的相对mRNA表达量,17例健康成人作为对照。结果全部B-NHL样本均全部表达TCRζ基因,但其表达水平显著低于对照组(P=0.000),健康人PBMCs的TCRζ基因mRNA的表达水平为B-NHL患者的3.26倍。B-NHL患者TCRζ基因表达水平与患者的年龄无相关性。结论 B-NHL患者中TCRζ基因的mRNA表达水平明显下调,可能是其细胞免疫功能缺陷的原因之一。

关键词： TCRζ基因非霍奇金淋巴瘤实时定量RT-PCR

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重组人改构体酸性成纤维细胞生长因子对帕金森病大鼠中脑腹侧被盖区酪氨酸羟化酶神经元的保护

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解剖学杂志 2010年第5期33卷 655-659页

作者：肖春苟沈伟哉郭国庆李校堃韶关学院医学院解剖学教研室韶关512026 暨南大学医学院解剖学教研室广州510630 温州医学院生物与天然药物研究院温州325027

目的：探讨重组人改构体酸性成纤维细胞生长因子（Mrh-aFGF）对帕金森病（PD）大鼠旋转行为和中脑腹侧被盖区酪氨酸羟化酶（TH）免疫阳性神经元的影响.方法：6-羟基多巴胺（6-OHDA）分别注入黑质和腹侧被盖区后建立PD大鼠模型,侧脑室内... 详细信息

目的：探讨重组人改构体酸性成纤维细胞生长因子（Mrh-aFGF）对帕金森病（PD）大鼠旋转行为和中脑腹侧被盖区酪氨酸羟化酶（TH）免疫阳性神经元的影响.方法：6-羟基多巴胺（6-OHDA）分别注入黑质和腹侧被盖区后建立PD大鼠模型,侧脑室内注射Mrh-aFGF,用阿扑吗啡诱导旋转行为,免疫组织化学显色观察TH免疫阳性神经元和纤维,并进行定量分析.结果：PD组术后旋转启动时间缩短,持续时间延长,速度加快;Mrh-aFGF处理组旋转行为有改善.各组大鼠组内健侧和损毁侧阳性神经元比较,对照组损毁侧无明显改变;PD组、NS处理组和Mrh-aFGF处理组损毁侧阳性神经元与健侧比较均减少.Mrh-aFGF处理组损毁侧中脑腹侧被盖区阳性神经元数量较PD组及对照组增加.结论：Mrh-aFGF能减少PD大鼠中脑腹侧被盖区TH免疫阳性神经元的丢失,并改善其旋转行为.

关键词：帕金森病重组人改构体酸性成纤维细胞生长因子酪氨酸羟化酶中脑腹侧被盖区免疫组织化学大鼠

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特异性抗髓性白血病多肽疫苗的研制和应用

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癌症进展 2010年第3期8卷 251-254页

作者：高永鹏田红霞林晨暨南大学医学院微生物与免疫教研室广州510632

化疗和造血干细胞移植是治疗白血病的主要方法，但是由于受供者来源和年龄的限制，化疗后微小残留病灶的存在使白血病容易复发。对白血病化疗缓解后给予疫苗治疗是消除残留病灶的理想方法。白血病相关抗原（LAAs）是目前研究最多的免疫... 详细信息

化疗和造血干细胞移植是治疗白血病的主要方法，但是由于受供者来源和年龄的限制，化疗后微小残留病灶的存在使白血病容易复发。对白血病化疗缓解后给予疫苗治疗是消除残留病灶的理想方法。白血病相关抗原（LAAs）是目前研究最多的免疫治疗的靶抗原，对于髓性白血病，大多数LAAs既是白血病细胞过度表达的自身抗原，也是染色体易位的融合蛋白。由于许多LAAs不是膜蛋白，不能作为抗体治疗的对象。

关键词：多肽疫苗白血病免疫治疗

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