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中华微生物学和免疫学杂志 2008年第7期28卷 606-609页

作者：孙丽萍胡巢凤张吉凯暨南大学医学院病理生理学教研室、发热研究室广州510632 广东省疾病预防控制中心免疫规划所

目的探讨NF-κB结合位点在NOD2基因调控中的作用。方法以人基因组DNA为模板，PCR扩增含有NF-κB结合位点的人NOD2基因启动子序列，以切除启动子的pEGFP-N3作为框架结构，将这段序列进行酶切并定向克隆人表达载体pEGFP-N3中，构建含有NF-... 详细信息

目的探讨NF-κB结合位点在NOD2基因调控中的作用。方法以人基因组DNA为模板，PCR扩增含有NF-κB结合位点的人NOD2基因启动子序列，以切除启动子的pEGFP-N3作为框架结构，将这段序列进行酶切并定向克隆人表达载体pEGFP-N3中，构建含有NF-κB结合位点的人NOD2基因启动子驱动的绿色荧光蛋白（GFP）载体，将构建的重组质粒经脂质体LipofectAMINE^TM 2000介导瞬时转染HeLa细胞，在倒置荧光显微镜下观察其能否在NOD2基因启动子的调控下表达报告基因GFP。用突变试剂盒将重组质粒pEGFP-N3-NOD2wt中的NF-κB结合位点缺失突变，将构建的突变重组质粒mpEGFP-N3-NOD2瞬时转染HeLa细胞，观察绿色荧光蛋白的表达情况。结果pEGFP-N3-NOD2wt和mpEGFP-N3-NOD2经酶切鉴定和序列测定证实重组质粒构建成功，并且NF-κB结合位点突变成功。细胞转染结果表明，构建的重组质粒pEGFP-N3-NOD2wt转染HeLa细胞，在倒置荧光显微镜下能看到绿色荧光，而突变质粒mpEGFP-N3-NOD2荧光强度明显减弱，与未转染质粒相近。结论成功构建了含有NF-κB结合位点的人NOD2基因启动子的重组质粒和含有NF-κB结合位点缺失突变的重组质粒；NF-κB结合位点突变重组质粒在HeLa细胞中绿色荧光表达明显减弱，说明NF-κB结合位点在NOD2基因调控中发挥了正调节作用；为进一步研究NOD2基因表达及调控机制奠定了良好的基础。

关键词： NOD2启动区 NF-κB结合位点基因调控缺失突变

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人γδ T细胞表型与功能特征的探讨

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免疫学杂志 2008年第6期24卷 609-612,617页

作者：李丽吴长有中山大学医学院免疫学教研室热带传染病教育部重点实验室广州510080

目的比较观察人外周血PBMCs和CBMCs中αβT和γδT细胞的表型与功能特征,进一步了解γδT细胞在免疫应答中的作用。方法分离正常人PBMCs及脐带血CBMCs,检测表面分子的表达。PMA+Ionomycin刺激PBMCs或CBMCs后,利用流式细胞术(FCM)检测其... 详细信息

目的比较观察人外周血PBMCs和CBMCs中αβT和γδT细胞的表型与功能特征,进一步了解γδT细胞在免疫应答中的作用。方法分离正常人PBMCs及脐带血CBMCs,检测表面分子的表达。PMA+Ionomycin刺激PBMCs或CBMCs后,利用流式细胞术(FCM)检测其细胞因子的产生以及初始/记忆细胞标记的表达。结果与αβT细胞相比,γδT细胞高表达CD45RO,低表达CD25和CCR7;与CBMCs中γδT细胞相比,PBMCs中γδT细胞表达CD45RO升高,CD45RA与CD25降低。细胞因子表达的结果表明,与αβT细胞相比,γδT细胞分泌大量IFN-γ和TNF-α,较少分泌IL-2,且IFN-γ+细胞主要为CD45RA-CD62L-CCR7-;与PBMCs中γδT细胞不同,体外刺激CBMCs中γδT细胞后,表达IFN-γ数量较低,且IFN-γ+细胞主要为CD45RA+CD62L-CCR7-/+。结论PBMCs与CBMCs中αβT和γδT细胞的表型与功能均存在差别,记忆性γδT细胞的增加可能与其活化和免疫应答的作用相关。

关键词： γδ T细胞表型细胞因子

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通过肿瘤致敏的DCs活化的CD8^+ T细胞可有效地杀死肿瘤细胞(英文)

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中国病理生理杂志 2008年第4期24卷 645-649页

作者：唐小龙江振友蔡淑玉暨南大学医学院血液病研究所广东广州510632 暨南大学医学院微生物学与免疫学教研室广东广州510632 安徽理工大学医学院生物医学工程研究所安徽淮南232001

目的:探索肿瘤裂解物负载的DCs诱导活化的初始T细胞介导细胞免疫及活化的T细胞杀死肿瘤细胞的能力。方法:应用黏附法分离外周血中的淋巴细胞和单核细胞,应用GM-CSF +IL-4刺激单核细胞并诱导为iDCs,然后进行分组,应用相应的细胞因子等刺... 详细信息

目的:探索肿瘤裂解物负载的DCs诱导活化的初始T细胞介导细胞免疫及活化的T细胞杀死肿瘤细胞的能力。方法:应用黏附法分离外周血中的淋巴细胞和单核细胞,应用GM-CSF +IL-4刺激单核细胞并诱导为iDCs,然后进行分组,应用相应的细胞因子等刺激iDCs转化为mDCs,其中肿瘤裂解物冲击DCs组:冻融抗原负载+TNF-α+IL-1β;无肿瘤裂解物冲击组: TNF-α+IL-1β。再分别用上述DCs与淋巴细胞进行混合培养以刺激混合淋巴细胞中的T细胞转化为细胞毒性T细胞,并进行分组,肿瘤裂解物冲击DCs组:肿瘤裂解物冲击DCs +IL-2 +IL-7;无肿瘤裂解物冲击DCs组:无肿瘤裂解物冲击DCs +IL-2 +IL-7;对照组: IL-2 +IL-7。结果:成功获得iDCs,并高表达CD86、CD80和HLA-DR;相对于其它组,肿瘤裂解物冲击DCs组mDCs更显著上调CD83,且更有效地刺激淋巴细胞增殖;肿瘤裂解物冲击DCs组的CTLs也高表达CD95(Fas)且TNF -α和IFN-γ的表达水平显著提高(P<0.05)。结论:肿瘤裂解物冲击DCs可有效促进T细胞活化、增殖;并显著增强相应CTLs的杀死靶细胞的能力,这为发展DCs +CTLs的免疫治疗肿瘤提供了一种新而且简便的生物治疗模式。

关键词：树突细胞抗原肿瘤疫苗免疫疗法

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STC1在胃癌组织与外周血液中表达的意义

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中国病理生理杂志 2008年第5期24卷 978-981页

作者：唐小龙江振友蔡淑玉许礼发周昕暨南大学医学院血液病研究所广东广州510632 暨南大学医学院微生物学与免疫学教研室广东广州510632 安徽理工大学医学院生物医学工程研究所安徽淮南232001

目的:研究外周血液与胃癌组织中斯钙素1(STC1)的表达情况。方法:分别在I-IV型的胃癌74例患者中,应用RT-PCR法检测外周血和肿瘤组织中STC1mRNA表达情况,应用免疫组化法检测肿瘤组织中STC1蛋白表达情况。结果:74例胃癌患者,48例外周血液中... 详细信息

目的:研究外周血液与胃癌组织中斯钙素1(STC1)的表达情况。方法:分别在I-IV型的胃癌74例患者中,应用RT-PCR法检测外周血和肿瘤组织中STC1mRNA表达情况,应用免疫组化法检测肿瘤组织中STC1蛋白表达情况。结果:74例胃癌患者,48例外周血液中STC1mRNA阳性;肿瘤组织STC1mRNA与STC1蛋白全部表达。外周血中STC1mRNA与肿瘤淋巴结转移数、肿瘤大小和病理TNM分期有(r分别为0.637、0.519、0.541,P<0.05、P<0.01、P<0.05)显著正相关。结论:STC1在胃癌的发生发展过程中具有抑制免疫系统功能等重要作用;外周血中STC1mRNA检测可试用作为肿瘤微转移的1个新指标。

关键词：斯钙素1 肿瘤转移胃肿瘤

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大鼠海马神经元neurobasal无血清的原代培养方法

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2008年第6期29卷 547-551页

作者：王圆圆张文斌龚晓兵郭国庆陈静辛莉沈伟哉原林暨南大学医学院解剖学教研室广东广州510632 暨南大学第一附属医院广东广州510630 南方医科大学解剖学教研室广东广州510515

目的：建立纯度和活力较高的无血清原代培养海马神经元的方法。方法：新生SD大鼠海马，用neurobasal培养基培养，免疫荧光鉴定神经元纯度，MTT法检测其活力。结果：神经元接种12～24h后贴壁，并长出细小突起，3d具有典型神经元形态特征... 详细信息

目的：建立纯度和活力较高的无血清原代培养海马神经元的方法。方法：新生SD大鼠海马，用neurobasal培养基培养，免疫荧光鉴定神经元纯度，MTT法检测其活力。结果：神经元接种12～24h后贴壁，并长出细小突起，3d具有典型神经元形态特征，4d突起形成稀疏的神经纤维网络，8d后神经元5～10个聚集成团，突起密集，生长稳定，12d后出现细胞碎片。Tubulin荧光染色显示清晰的神经元，突起绵长且相互交织，占细胞总数的66．7％；GFAP荧光染色的细胞数量少，突起短粗，占33．7％。培养1～5d MTT代谢率逐渐上升，6～11d处于平台期，11d后下降。结论：neurobasal无血清培养获得的神经元纯度大于60％，6～11d的细胞适于细胞学实验。

关键词：神经元原代培养 neurobasal培养基海马大鼠

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四君子汤及拆方对D-半乳糖诱导衰老小鼠学习记忆调节作用的影响

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中药材 2008年第7期31卷 1039-1041页

作者：成文利江振友王修银潘竞锵董军邝少松铙子亮中山大学附属第六医院广东广州510655 暨南大学医院微生物学与免疫学教研室广东广州510632 广州市中医院广东广州510130 暨南大学医学院病理生理学教研室广东广州510632 广东省医学实验动物中心广东广州510120

目的:观察党参、白术、茯苓和炙甘草及四君子汤对D-半乳糖(D-gal)诱导小鼠衰老模型学习记忆的调节作用。方法:用D-gal诱导衰老小鼠模型。采用Y型迷宫、氧化抗氧化指标的测定和跳台实验检测小鼠学习记忆能力。结果:与对照组比较,衰老模... 详细信息

目的:观察党参、白术、茯苓和炙甘草及四君子汤对D-半乳糖(D-gal)诱导小鼠衰老模型学习记忆的调节作用。方法:用D-gal诱导衰老小鼠模型。采用Y型迷宫、氧化抗氧化指标的测定和跳台实验检测小鼠学习记忆能力。结果:与对照组比较,衰老模型组小鼠跳台错误次数和迷宫错误次数明显增多(P<0.05,P<0.01);四君子汤能明显降低D-gal诱导衰老小鼠的跳台错误次数和迷宫测试潜伏期(P<0.05)。结论:D-gal能诱导小鼠出现学习记忆能力下降,四君子汤能改善衰老小鼠学习记忆能力。

关键词：四君子汤 D-半乳糖衰老小鼠学习记忆

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亚硝酸钠对大鼠睾丸支持细胞波形蛋白表达的影响

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中国职业医学 2008年第1期35卷 1-3,6页

作者：张晓蓉宿宝贵韩晖吴赤蓬深圳市宝安区松岗卫生监督所(预防保健所) 广东深圳518105 暨南大学医学院解剖学教研室广州510632 暨南大学医学院公共卫生学教研室广州510632

目的研究亚硝酸钠对睾丸支持细胞波形蛋白表达的影响。方法用冷胰蛋白酶消化法进行睾丸支持细胞的体外原代培养;四甲基偶氮唑盐比色法测定亚硝酸钠对支持细胞的细胞抑制率,用改进寇氏法计算半数抑制浓度(IC50);用免疫细胞化学检测亚硝... 详细信息

目的研究亚硝酸钠对睾丸支持细胞波形蛋白表达的影响。方法用冷胰蛋白酶消化法进行睾丸支持细胞的体外原代培养;四甲基偶氮唑盐比色法测定亚硝酸钠对支持细胞的细胞抑制率,用改进寇氏法计算半数抑制浓度(IC50);用免疫细胞化学检测亚硝酸钠对睾丸支持细胞中波形蛋白表达的影响。结果亚硝酸钠浓度为0.0150g/L时对睾丸支持细胞有毒性作用,随着剂量增大,毒性作用逐渐增强,细胞抑制率与亚硝酸钠剂量之间存在着明显的剂量-反应关系,IC50为1.17g/L,标准差为1.14g/L。各剂量组的平均灰度与阴性对照组比较,差异均有显著性(P<0.05),且随着染毒剂量的增加,平均灰度逐渐降低。结论一定剂量的亚硝酸钠可以抑制支持细胞波形蛋白的表达。

关键词：亚硝酸钠波形蛋白支持细胞

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超抗原及其增强疫苗免疫效应的意义

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癌症进展 2008年第4期6卷 352-356页

作者：郜世隽林晨暨南大学医学院微生物和免疫教研室广州510632

超抗原(superantigen,SAg)是一类具有多种免疫活性的特殊抗原分子,主要是一些细菌毒素和逆转录病毒基因产物。超抗原不受MHC限制,选择性地识别T细胞的抗原受体TCRVβ链,对CD4^+T细胞和CD8^+T细胞都具有强大的活化作用。超抗原概念一经提... 详细信息

超抗原(superantigen,SAg)是一类具有多种免疫活性的特殊抗原分子,主要是一些细菌毒素和逆转录病毒基因产物。超抗原不受MHC限制,选择性地识别T细胞的抗原受体TCRVβ链,对CD4^+T细胞和CD8^+T细胞都具有强大的活化作用。超抗原概念一经提出,其在治疗恶性肿瘤上的潜力便受到重视。本文综述超抗原生物学特性,与T细胞受体的关系以及超抗原在增强疫苗刺激免疫应答中所取得的进展。

关键词：超抗原疫苗 T细胞

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P16,CDK4及cyclin D1在粤东地区食管癌中的表达及意义

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广东医学 2008年第2期29卷 280-282页

作者：谢有科钟雪云陈少湖暨南大学医学院病理教研室广州510632 广东省揭阳市人民医院 515500

目的研究抑癌基因蛋白P16与细胞周期调控蛋白CDK4,cyclin D1在粤东地区食管癌高发地区患者的表达情况,寻找对临床诊治有价值的食管癌分子指标。方法利用免疫组化SP法对粤东地区10例正常食管黏膜和45例食管癌标本进行P16,CDK4及cyclin D... 详细信息

目的研究抑癌基因蛋白P16与细胞周期调控蛋白CDK4,cyclin D1在粤东地区食管癌高发地区患者的表达情况,寻找对临床诊治有价值的食管癌分子指标。方法利用免疫组化SP法对粤东地区10例正常食管黏膜和45例食管癌标本进行P16,CDK4及cyclin D1蛋白的检测。结果P16,CDK4及cyclin D1在10例食管正常黏膜中均有低水平散在表达,而在45例食管癌中,P16表达总阳性率为60.0%(27/45),CDK4表达总阳性率为64.4%(29/45),cyclin D1表达总阳性率为55.5%(25/45),P16和CDK4在中、低分化食管癌组间的表达率差异有显著性(P=0.031,P=0.030),P16和CDK4表达呈负相关(P=0.005);P16,CDK4及cyclin D1表达与肿瘤浸润范围、淋巴结转移无显著相关性。结论P16在食管癌中呈现独特性的高水平表达,P16和CDK4表达与肿瘤分化程度相关,并且提示P16和CDK4间存在负反馈调控通路。P16和CDK4可以作为粤东地区食管癌的有效分子标志物,在食管癌早期筛选和临床诊治中有重要价值。

关键词：食管肿瘤 P16 CDK4 Cyelin D1

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ADM与5Fu可抑制MDA-MB231乳癌细胞的SNCG表达

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免疫学杂志 2008年第5期24卷 534-536,540页

作者：袁光波张幸平何金花唐卫军陈睿重庆医科大学附属第一医院肿瘤科重庆400016 暨南大学医学院生化教研室广州510632

目的研究乳癌临床常用化疗药物顺铂(cisplatin or DDP),阿霉素(adriamycin,ADM),氟尿嘧啶(fluorouracil,5Fu)对MDA-MB231乳癌细胞SNCG表达的干扰效应。方法通过RT-PCR及免疫组织化学法检测上述药物处理组和阴性对照组MDA-MB231细胞的SNC... 详细信息

目的研究乳癌临床常用化疗药物顺铂(cisplatin or DDP),阿霉素(adriamycin,ADM),氟尿嘧啶(fluorouracil,5Fu)对MDA-MB231乳癌细胞SNCG表达的干扰效应。方法通过RT-PCR及免疫组织化学法检测上述药物处理组和阴性对照组MDA-MB231细胞的SNCG表达状况,用Quantity One软件及北航真彩色医学图像处理系统(CM-2000B)分别对各组SNCG mRNA和蛋白相对表达水平进行分析。结果ADM和5Fu处理组与阴性对照组比较,MDA-MB231细胞的SNCG mRNA及蛋白表达水平差异均有统计学意义(P值均小于0.05),而DDP处理组表达水平与对照组无差别。结论ADM和5Fu可抑制MDA-MB231细胞的SNCG表达。

关键词： SNCG 化疗药物 MDA—MB231乳癌细胞 RT-PCR 免疫组织化学

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