检索结果-内蒙古大学图书馆

生命科学研究 2008年第2期12卷 154-157页

作者：费嘉马文丽吴清华郑文岭南方医科大学基因工程研究所广东省生物芯片重点实验室中国广东广州510515 暨南大学医学院生物化学与分子生物学教研室中国广东广州510800 华南基因组研究中心

为研制高通量定量检测的蛋白质芯片,以人血清IgG为研究模型,选择戊二醛基修饰的玻片为载体,蛋白质样品溶解于20%甘油的PBS,由机械手将浓度为0.5g/L人IgG单克隆抗体点样在玻片上,人血清白蛋白为阴性对照,以1%的BSA为封闭液对蛋白质芯片... 详细信息

为研制高通量定量检测的蛋白质芯片,以人血清IgG为研究模型,选择戊二醛基修饰的玻片为载体,蛋白质样品溶解于20%甘油的PBS,由机械手将浓度为0.5g/L人IgG单克隆抗体点样在玻片上,人血清白蛋白为阴性对照,以1%的BSA为封闭液对蛋白质芯片进行封闭,并经相应处理,构建用于定量检测人血清IgG蛋白质芯片.先以不同浓度IgG标准品为待测样品,建立蛋白质芯片方法和ELISA方法的标准曲线,两条标准曲线的R2值分别为0.996和0.994(P<0.01).两种方法的检测人IgG结果有很好的相关性(R2=0.9937,P<0.01),其敏感性均在15.625μg/L.用两种方法分别检测10例人血清IgG,结果显示两种方法的检测的IgG浓度有很好的一致性,以玻片为载体的蛋白质芯片可用于微量生物样品的定量检测.

关键词：蛋白质芯片免疫球蛋白G 酶联免疫吸附试验醛基修饰

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PTEN在人脑胶质瘤细胞中的表达及其对细胞增殖的影响

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癌症 2007年第3期26卷 247-251页

作者：李平钟雪云秦艳芳林琛莅贾晋萍暨南大学医学院病理教研室广东广州510632

背景与目的:PTEN基因的缺失及突变与多种肿瘤有关,而脑胶质瘤是与PTEN基因变异关系最为密切的恶性肿瘤之一。本研究旨在观察PTEN基因对人脑胶质瘤细胞生物学特性的影响,为PTEN用于胶质瘤基因治疗提供科学的实验依据。方法:(1)应用RT-PC... 详细信息

背景与目的:PTEN基因的缺失及突变与多种肿瘤有关,而脑胶质瘤是与PTEN基因变异关系最为密切的恶性肿瘤之一。本研究旨在观察PTEN基因对人脑胶质瘤细胞生物学特性的影响,为PTEN用于胶质瘤基因治疗提供科学的实验依据。方法:(1)应用RT-PCR方法扩增人脑胶质瘤细胞U251、SHG-44中PTEN基因,序列测定分析。(2)采用阳离子聚合物转染试剂,将携带野生型PTEN基因的重组真核表达载体质粒转染至胶质瘤细胞,G418筛选出稳定转染的细胞并扩增培养。通过细胞形态学、细胞生长曲线观察PTEN基因表达对细胞形态和增殖的影响,应用Western blot、免疫细胞化学法检测相关蛋白的表达。结果:(1)胶质瘤细胞U251和SHG-44的PTEN mRNA分别存在着突变型、缺失型两种表达方式。(2)稳定转染的U251和SHG-44细胞株的生长曲线显示细胞增殖明显受抑制,第7天细胞计数分别为未转染对照组细胞数的39.1%、27.8%;Western blot显示稳定转染细胞株有外源性PTEN蛋白的表达;细胞免疫化学法显示胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillaryacidic protein,GFAP)表达量增加,从而表现出对细胞形态影响的差异,稳定转染的U251细胞出现向星形细胞分化的特征,SHG-44细胞形态转染前后无明显改变。结论:恢复野生型PTEN基因表达对胶质瘤细胞存在差异性的诱导分化作用。

关键词： PTEN 脑肿瘤胶质瘤诱导分化异质性

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登革病毒感染对人血管内皮细胞PGIS表达及PGI_2分泌的影响

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细胞与分子免疫学杂志 2007年第1期23卷 48-51页

作者：江振友肖瑞暨南大学医学院微生物学与免疫学教研室广东广州510632

目的:研究登革病毒感染对人血管内皮细胞分泌血管活性物质前列环素(PGI2)的影响,以了解登革出血热/登革休克综合征(DHF/DSS)的发病机制。方法:用登革病毒Ⅱ型感染人脐静脉内皮细胞(HUVEC),于感染后6、12、24、48、72、96h,分别收集病毒... 详细信息

目的:研究登革病毒感染对人血管内皮细胞分泌血管活性物质前列环素(PGI2)的影响,以了解登革出血热/登革休克综合征(DHF/DSS)的发病机制。方法:用登革病毒Ⅱ型感染人脐静脉内皮细胞(HUVEC),于感染后6、12、24、48、72、96h,分别收集病毒感染的HUVEC,用RT-PCR检测细胞内前列环素合酶(PGIS)mRNA的水平;分别收集病毒感染的上清液,用放射免疫检测法测定PGI2的含量。结果:登革病毒感染可使PGISmRNA的水平增高,导致HUVEC分泌PGI2的量明显升高。在病毒感染后48、72、96h,与对照组比较HUVEC表达PGISmRNA的水平和HUVEC分泌PGI2的量明显升高(P<0.05)。结论:DV2感染可显著上调HUVEC中PGISmRNA转录及PGI2的分泌,导致登革病毒所致血管内皮细胞的功能障碍,可能与DHF/DSS的发病机制有关。

关键词：登革病毒血管内皮细胞前列环素合酶前列环素

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瑶药黄酮化合物体外抗肿瘤活性研究

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中药材 2007年第8期30卷 980-984页

作者：王辉李药兰沈伟哉郭国庆江振友岑颖洲范兆永暨南大学医学院解剖教研室广东广州510632 暨南大学药学院中药及天然产物研究所广东广州510632 暨南大学医学院微生物及免疫教研室广东广州510632 暨南大学化学系广东广州510632

目的:研究瑶族药用植物中黄酮化合物的体外抗肿瘤活性,并初步分析它们的构效关系。方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)吸收减少实验,测定6个黄酮化合物对2种正常细胞的毒性和对7种肿瘤细胞的增殖抑制作用。结果:6种化合物中,圣草苷、柚皮苷... 详细信息

目的:研究瑶族药用植物中黄酮化合物的体外抗肿瘤活性,并初步分析它们的构效关系。方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)吸收减少实验,测定6个黄酮化合物对2种正常细胞的毒性和对7种肿瘤细胞的增殖抑制作用。结果:6种化合物中,圣草苷、柚皮苷、槲皮素和槲皮苷对2种正常细胞非洲绿猴肾细胞Vero和人黑色素细胞MC基本不显示出毒性,柚皮素对这2种细胞的毒性都较大,而圣草酚对Vero细胞毒性很小,对MC细胞的毒性非常大。柚皮素有较广谱的抗肿瘤活性,它对7个受试肿瘤细胞都显示出较强的增殖抑制,尤其对乳腺癌细胞MCF-7的半数抑制浓度达到了50μg/m l。在7种肿瘤细胞中,MCF-7和肝癌细胞HepG2对受试黄酮化合物最为敏感,两者都被圣草酚、柚皮素和槲皮素以较低浓度有效地抑制。这些化合物对肿瘤细胞的抑制作用都显示出浓度依赖性。结论:圣草酚、柚皮素和槲皮素对肿瘤细胞的生长有较好的抑制作用,而它们的葡萄糖苷的细胞毒性较小。

关键词：黄酮化合物抗肿瘤 MTT法

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PTEN基因对人脑胶质瘤细胞生长的影响

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中华肿瘤杂志 2007年第4期29卷 245-248页

作者：李平钟雪云何丽珍林琛莅暨南大学医学院病理教研室广州510632 广州市肿瘤医院

目的通过增强型绿色荧光蛋白（EGFP）与PTEN融合蛋白真核表达载体的构建和表达，观察PTEN基因对人脑胶质瘤细胞生长的影响。方法（1）以RT—PCR方法扩增人的PTEN基因，经T—A亚克隆筛选后连入真核表达载体pEGFP—N1，构建融合蛋白表... 详细信息

目的通过增强型绿色荧光蛋白（EGFP）与PTEN融合蛋白真核表达载体的构建和表达，观察PTEN基因对人脑胶质瘤细胞生长的影响。方法（1）以RT—PCR方法扩增人的PTEN基因，经T—A亚克隆筛选后连入真核表达载体pEGFP—N1，构建融合蛋白表达载体。采用阳离子聚合物转染试剂，将重组质粒DNA瞬时转染至SHG-44细胞，检测融合蛋白的表达。（2）G418筛选出稳定转染的细胞（SHG-44-Z），并扩增培养，通过细胞形态学、生长曲线观察PTEN基因对细胞形态和增殖的影响，免疫组织化学法检测对胶质纤维酸性蛋白（GFAP）表达的影响。结果（1）重组质粒阳性克隆的测序结果与GenBank报告序列一致。瞬时转染的SHG-44细胞于荧光显微镜下可见绿色荧光，流式细胞仪可检测到荧光表达量为17．8％，免疫细胞化学法检测到外源PTEN蛋白表达。证实pEGFP—PTEN融合蛋白表达载体构建成功，并在胶质瘤细胞得以正确表达。（2）转染组SHG-44-Z细胞株的生长增殖受到明显抑制，第7天细胞计数为未转染组细胞数的27．8％，且GFAP表达上调。结论携带绿色荧光蛋白的PTEN基因真核表达载体的构建，为进一步研究PTEN的作用机理及抑癌效应奠定了基础。

关键词：抑癌基因PTEN 绿色荧光蛋白基因克隆胶质瘤

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融合蛋白FADDdel-GFP对死亡受体介导的胰岛细胞凋亡的影响

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中国免疫学杂志 2007年第4期23卷 296-299,305页

作者：胡萍李君武叶嗣颖林绍强李小兰韦静暨南大学医学院微生物和免疫学教研室广州510632

目的研究融合蛋白FADDdel-GFP对死亡受体介导的细胞凋亡信号的生物学效应,以探讨通过基因修饰靶细胞对1型糖尿病的影响。方法用脂质体将融合基因pFADDdel-GFP导入胰岛细胞株NIT,通过细胞RT-PCR和荧光显微镜检测其表达,采用FACS检测抗-Fa... 详细信息

目的研究融合蛋白FADDdel-GFP对死亡受体介导的细胞凋亡信号的生物学效应,以探讨通过基因修饰靶细胞对1型糖尿病的影响。方法用脂质体将融合基因pFADDdel-GFP导入胰岛细胞株NIT,通过细胞RT-PCR和荧光显微镜检测其表达,采用FACS检测抗-Fas抗体诱导的胰岛细胞株的细胞毒效应。结果转染重组子pFADDdel-GFP的NITf-g细胞可见绿色荧光蛋白表达;NITf-g细胞对抗-Fas诱导的细胞损伤率为10.16%,细胞内的Caspase-3的活性为12.33%,均明显低于对照组(P<0.05)。结论成功建立了稳定表达FADDdel-GFP的胰岛细胞株;FADDdel-GFP可有效抑制死亡受体介导的细胞内凋亡信号传导。

关键词： FADD Caspase-3 凋亡 1型糖尿病

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大青叶对IL-1β作用下兔下丘脑EP3 mRNA表达的影响

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细胞与分子免疫学杂志 2007年第1期23卷 42-45页

作者：董军裘晟谢新华潘锐唐红梅陆大祥暨南大学医学院病理生理教研室暨南大学附属第一医院骨科广东广州510630

目的:阐明大青叶的中枢解热机制,为其临床应用提供实验依据和理论指导。方法:实验用新西兰兔复制白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)发热模型,在观察大青叶注射液(Daqingyeinjection,DQYI)解热作用的基础上,应用原位杂交技术检测静脉注... 详细信息

目的:阐明大青叶的中枢解热机制,为其临床应用提供实验依据和理论指导。方法:实验用新西兰兔复制白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)发热模型,在观察大青叶注射液(Daqingyeinjection,DQYI)解热作用的基础上,应用原位杂交技术检测静脉注射DQYI对IL-1β作用下新西兰兔视前区-下丘脑前部(preopticanteriorhypothalamus,POAH)组织中前列腺素E3受体(E-typeprostaglandinreceptor,EP3)mRNA表达的影响。结果:(1)DQYI静脉注射后对正常新西兰兔结肠温度没有明显影响,与生理盐水组相比,最大体温上升高度(△T)及1h体温反应指数(TRI1)两组间无统计学意义(P>0.05);IL-1β组在静脉注射IL-1β后,结肠温度逐渐升高,△T及TRI1与生理盐水组相比,也有统计学意义(P<0.01);而DQYI+IL-1β组结肠温度上升峰值明显低于IL-1β组,两组△T及TRI1比较,有显著性差异(P<0.05)。(2)新西兰兔下丘脑POAHEP3mRNA在生理状态下仅有少量或没有表达;IL-1β诱导发热后,EP3mRNA表达明显增强;而DQYI能减少IL-1β作用下EP3mRNA的表达(P<0.05)。结论:DQYI对IL-1β诱导的新西兰兔发热有解热作用;且其解热作用机制可能与其抑制下丘脑EP3mRNA的表达有关。

关键词：大青叶 IL-1β 解热 POAH 前列腺素E受体

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登革病毒感染对血管内皮细胞ICAM-1表达的影响

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中华微生物学和免疫学杂志 2007年第12期27卷 1112-1116页

作者：江振友柏志全肖瑞卢业成暨南大学医学院微生物学与免疫学教研室广州510632 暨南大学医学院生理学教研室广州510632 广州医学院临床技能中心广州市第八人民医院

目的探讨登革病毒2型(DV2)体外感染对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)表达细胞间黏附分子(intercellular adhesion molecule,ICAM-1)的影响。方法原代分离培养HUVEC,用生长良好的2、3代细胞进行实验。用CCK-8法测定DV2感染前后的细胞活性。流... 详细信息

目的探讨登革病毒2型(DV2)体外感染对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)表达细胞间黏附分子(intercellular adhesion molecule,ICAM-1)的影响。方法原代分离培养HUVEC,用生长良好的2、3代细胞进行实验。用CCK-8法测定DV2感染前后的细胞活性。流式细胞仪测定DV2感染组和对照组细胞在不同实验时间点细胞表面ICAM-1蛋白表达的情况。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法和图像定量分析技术分析DV2感染组和对照组在不同实验时间点HUVEC内ICAM-1 mRNA水平。结果病毒感染HUVEC对细胞活力的影响与对照组相比差异无统计学意义。DV2感染HUVEC促进ICAM-1 mRNA转录,DV2组与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。其中,正常状态下HUVEC有一定水平ICAM-1 mRNA转录,但感染后显著增加(P<0.05),24～72 h维持于高水平,与其他时间表达差异有统计学意义(P<0.05)。DV2感染HUVEC,细胞表达ICAM-1蛋白在12～72 h显著升高,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论DV2感染上调HUVEC的ICAM-1 mRNA水平和蛋白表达,从而诱发并加重血管内皮局部的损伤,破坏血管的屏障功能,促进血管渗漏的形成与发展。这可能是DV2感染诱发患者血管通透性升高和血浆渗漏的重要分子机制之一。

关键词：登革病毒人脐静脉内皮细胞细胞间黏附分子

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角膜内皮细胞高表达TGF-β_1的免疫学作用

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眼科研究 2007年第7期25卷 489-493页

作者：马慧香徐锦堂姜振友赵松滨陈建苏暨南大学医学院附属第一医院眼科暨南大学医学院眼科研究室广州510632 暨南大学医学院免疫教研室广州510632

目的探讨TGF-β1基因转染角膜内皮细胞后表达产物的免疫学活性。方法分别用RT-PCR、Western blot、免疫组织化学法检测pSecTag2-TGF-β1MP质粒转染角膜内皮细胞48h后TGF-β1基因的表达,ELISA法检测TGF-β1浓度;MTT法检测其对ConA诱导的... 详细信息

目的探讨TGF-β1基因转染角膜内皮细胞后表达产物的免疫学活性。方法分别用RT-PCR、Western blot、免疫组织化学法检测pSecTag2-TGF-β1MP质粒转染角膜内皮细胞48h后TGF-β1基因的表达,ELISA法检测TGF-β1浓度;MTT法检测其对ConA诱导的淋巴细胞转化反应的影响;用流式细胞仪法检测其对淋巴细胞凋亡以及淋巴细胞CD3+、CD4+、CD8+、CD25+、CD69+、CD71+亚群分化的影响。结果从mRNA转录和蛋白质水平均证实TGF-β1基因在角膜内皮细胞获得高效表达。瞬时转染48h角膜内皮细胞培养上清中TGF-β1的表达为(98±3)pg/ml,高于对照组。在其作用下淋巴细胞活化增生受抑制;出现明显的亚二倍体峰;CD25+、CD69+、CD71+阳性细胞比率下降。结论基因转染角膜内皮细胞高表达TGF-β1,可抑制淋巴细胞的活化增生,促使淋巴细胞凋亡。

关键词：转化生长因子-β1 基因转染淋巴细胞免疫

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人骨髓间质干细胞体外培养及诱导成骨的鉴定

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广东医学 2007年第2期28卷 199-201页

作者：张利查振刚姚平吴昊张嘉晴刘宁黄春华林宏生王国普暨南大学附属第一医院骨科广州510630 暨南大学医学院生理教研室广州510630 暨南大学医学院生化教研室广州510630

目的优化人骨髓间质干细胞(human bone marrow mesenchym alstem cells,hBMSCs)体外分离培养方法,对hBMSCs体外培养及诱导成骨能力进行鉴定。方法密度梯度离心法分离hBMSCs,流式细胞分析法(FACS)对细胞表面抗原、细胞活力、细胞周期进... 详细信息

目的优化人骨髓间质干细胞(human bone marrow mesenchym alstem cells,hBMSCs)体外分离培养方法,对hBMSCs体外培养及诱导成骨能力进行鉴定。方法密度梯度离心法分离hBMSCs,流式细胞分析法(FACS)对细胞表面抗原、细胞活力、细胞周期进行检测。以含地塞米松(1×10-7mmol/L)、β-甘油磷酸钠(10 mmol/L)、抗坏血酸(35.22 mg/L)的DMEM培养液对hBMSCs进行诱导分化,相差显微镜和透视电镜观察细胞形态,Gomori钙钴法进行碱性磷酸酶染色(ALP),免疫组化检测Ι型胶原,茜素红法进行钙结节染色。结果hBMSCs可在体外分离扩增,表达CD44、CD105和CD106,不表达CD34和CD45,细胞活力为92.3%,G0-G1细胞占94.2%。经成骨培养液诱导后细胞形态由长梭形向多边形转变,ALP染色、Ι型胶原染色及钙结节染色均为强阳性。结论hBMSCs可在体外长期、稳定培养,具有向成骨细胞分化的潜能。

关键词：骨髓间质干细胞细胞培养诱导成骨

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