检索结果-内蒙古大学图书馆

病毒学报 2013年第3期29卷 250-257页

作者：罗思思谢芝勋谢丽基庞耀珊范晴邓显文刘加波谢志勤广西壮族自治区兽医研究所广西畜禽疫苗新技术重点实验室南宁530001

为了建立一种能够同时鉴别H5、H7、H9亚型禽流感、新城疫、传染性支气管炎和传染性喉气管炎6种鸡病毒性呼吸道传染病病原体的GeXP检测方法,本研究根据这些病原体各自的基因保守序列,设计合成了7对特异性引物,优化反应条件,用单一病毒、... 详细信息

为了建立一种能够同时鉴别H5、H7、H9亚型禽流感、新城疫、传染性支气管炎和传染性喉气管炎6种鸡病毒性呼吸道传染病病原体的GeXP检测方法,本研究根据这些病原体各自的基因保守序列,设计合成了7对特异性引物,优化反应条件,用单一病毒、混合病毒样品来验证所建立的GeXP方法的特异性和准确性,以不同拷贝数的克隆质粒来检测GeXP方法的灵敏度。检测34份临床阳性样品,进一步验证该法的可靠性。结果显示,在7对引物同时存在的GeXP反应体系中,可特异性地扩增出相关6种病毒目的片段,并可在102拷贝/μL水平同时特异地检测出鸡6种病毒性呼吸道传染病,GeXP方法检测34份临床阳性样品结果与病毒分离一致。本研究建立的GeXP方法不仅可高通量检测6种病原体,而且具有特异性强和灵敏度高的特点,适用于临床样品混合感染的快速鉴别诊断,对这6种发病特征及临床症状相似的鸡病毒性呼吸道病的有效防控有很高的实际应用价值。

关键词： GeXP检测鸡呼吸道病多重PCR

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鸡滑液支原体LAMP快速可视化检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2014年第1期36卷 46-49页

作者：邓显文谢芝勋谢志勤刘加波庞耀珊谢丽基范晴罗思思广西兽医研究所广西畜禽疫苗新技术重点实验室广西南宁530001 广西兽医研究所广西畜禽疫苗新技术重点实验室广西南宁530001

为建立能够快速检测鸡滑液支原体(MS)的检测方法,本研究根据GenBank中MS热休克ATP依赖蛋白酶基因的保守序列,设计了一套特异性环介导等温扩增(LAMP)引物,建立了MS的LAMP可视化检测方法。该方法的敏感性可达102拷贝DNA,高于常规PCR方法 1... 详细信息

为建立能够快速检测鸡滑液支原体(MS)的检测方法,本研究根据GenBank中MS热休克ATP依赖蛋白酶基因的保守序列,设计了一套特异性环介导等温扩增(LAMP)引物,建立了MS的LAMP可视化检测方法。该方法的敏感性可达102拷贝DNA,高于常规PCR方法 10倍;全部反应可以在1 h内完成;可以通过肉眼观察钙黄绿素颜色变化直接判定结果;对其它常见病原体的检测结果均为阴性。结果表明建立的LAMP方法简便、快速、灵敏、特异,可以用于MS感染的快速检测。

关键词：鸡滑液支原体 LAMP 检测

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广西畜禽大肠杆菌O157∶H7流行病学调查

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中国人兽共患病学报 2011年第12期27卷 1151-1155页

作者：李军禤雄标谢宇舟谢永平彭昊陈泽祥胡帅马春霞杨威许力干潘艳广西兽医研究所广西畜禽疫苗新技术重点实验室南宁530001

目的为了掌握广西畜禽大肠杆菌O157∶H7的流行病学情况。方法应用细菌分离、生化特性鉴定、血清凝集反应和PCR鉴定等方法在2007-2010年广西200多个畜禽养殖场进行畜禽大肠杆菌O157∶H7的流行病学调查。对采集的2 915份样本进行了大肠杆... 详细信息

目的为了掌握广西畜禽大肠杆菌O157∶H7的流行病学情况。方法应用细菌分离、生化特性鉴定、血清凝集反应和PCR鉴定等方法在2007-2010年广西200多个畜禽养殖场进行畜禽大肠杆菌O157∶H7的流行病学调查。对采集的2 915份样本进行了大肠杆菌O157∶H7的分离鉴定、致病性试验、药物敏感试验以及毒力基因检测。有5份样本经细菌培养特性、生化特性、血清凝集反应和PCR鉴定为大肠杆菌O157∶H7,样本细菌分离率为0.17%。小白鼠致病性试验显示分离菌株的毒力各有差别,对小白鼠的致死率在33.4%～100%之间。药敏结果表明分离菌株对阿莫西林、氨苄西林、多粘菌素B、罗红霉素、利福平和林可霉素不敏感。毒力基因的检测结果表明,5株分离菌株携带的毒力基因略有差异,并与其致病性强弱有一定的相关性。结论大肠杆菌O157∶H7主要在猪群传播,具有一定的毒力,对常用抗生素耐药。

关键词：大肠杆菌O157∶H7 流行病学抗生素耐药

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鸡毒支原体强弱毒株LAMP可视化鉴别检测方法的建立

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中国兽医科学 2012年第9期42卷 943-948页

作者：罗思思谢芝勋邓显文谢志勤庞耀珊谢丽基刘加波范晴彭宜广西兽医研究所广西畜禽疫苗新技术重点实验室广西南宁530001

为建立一种能鉴别鸡毒支原体强弱毒株的快速检测方法,根据GenBank中鸡毒支原体S6株的16SrRNA基因序列和F弱毒疫苗株假定的α磷酸海藻糖酶基因序列,设计2套环介导等温扩增引物,建立了鸡毒支原体强弱毒株的环介导等温扩增可视化鉴别检测... 详细信息

为建立一种能鉴别鸡毒支原体强弱毒株的快速检测方法,根据GenBank中鸡毒支原体S6株的16SrRNA基因序列和F弱毒疫苗株假定的α磷酸海藻糖酶基因序列,设计2套环介导等温扩增引物,建立了鸡毒支原体强弱毒株的环介导等温扩增可视化鉴别检测方法。该方法的敏感性可达10fg,是常规PCR方法的100倍,对其他鸡常见病原体的检测结果均为阴性。全部反应只需一个可控温的水浴锅在1h内即可完成,通过肉眼观察颜色直接判定结果。本研究建立的环介导等温扩增方法简便、快速、灵敏、特异,是一种适于基层工作站的鸡毒支原体强、弱毒株鉴别检测方法。

关键词：鸡毒支原体环介导等温扩增鉴别可视化

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九种鸡呼吸道病病原体GeXP检测方法的建立

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中国兽医科学 2013年第10期43卷 1040-1046页

作者：罗思思谢芝勋刘加波庞耀珊邓显文谢志勤谢丽基范晴广西兽医研究所广西畜禽疫苗新技术重点实验室广西南宁530001

本研究旨在建立一种能同时检测(H5、H7、H9)亚型禽流感病毒、传染性支气管炎病毒、新城疫病毒、传染性喉气管炎病毒、鸡毒支原体、滑液囊支原体和副鸡嗜血杆菌共9种鸡呼吸道传染病病原体的GeXP高通量检测方法。根据GenBank中这9种病原... 详细信息

本研究旨在建立一种能同时检测(H5、H7、H9)亚型禽流感病毒、传染性支气管炎病毒、新城疫病毒、传染性喉气管炎病毒、鸡毒支原体、滑液囊支原体和副鸡嗜血杆菌共9种鸡呼吸道传染病病原体的GeXP高通量检测方法。根据GenBank中这9种病原体的基因保守序列,设计了10对特异性引物。用所建立的GeXP多重PCR方法对单一、混合病原体进行检测,验证多重反应体系的特异性和准确性,以含靶基因的质粒来检测多重反应体系的灵敏度,并对38份阳性样品进行检测。该法能特异性检出9种鸡呼吸道病病原体,并可在1×102 copies/μL水平同时特异地检测出9种病原体,38份阳性样品的检测结果与实际相符。本研究建立的同时鉴别9种鸡呼吸道病原体的GeXP检测方法具有高通量、特异性强、灵敏度高的特点,为同时鉴别这9种临床症状相似的疾病提供了新型检测方法。

关键词：鸡呼吸道病 GeXP 多重PCR 毛细管电泳

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应用实时荧光定量RT-PCR检测猪HEV ORF2基因3个连续片段的真核表达水平

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中国兽医学报 2014年第11期34卷 1709-1715页

作者：苏乾莲李斌赵武秦毅斌梁家幸卢冰霞何颖段群棚卢敬专蒋冬福周英宁梁保忠广西兽医研究所广西畜禽疫苗新技术重点实验室广西南宁530001

将构建的猪戊型肝炎病毒广西株3个连续ORF2基因片段重组真核表达质粒pEASY-LB1、pEASY-LB2、pEASY-LB3转染人肾上皮细胞系293T,应用实时荧光定量RT-PCR检测目的基因LB1、LB2、LB3。经ABI7500系统建立的标准曲线相关系数(R2)范围为0.994 ... 详细信息

将构建的猪戊型肝炎病毒广西株3个连续ORF2基因片段重组真核表达质粒pEASY-LB1、pEASY-LB2、pEASY-LB3转染人肾上皮细胞系293T,应用实时荧光定量RT-PCR检测目的基因LB1、LB2、LB3。经ABI7500系统建立的标准曲线相关系数(R2)范围为0.994 209~0.999 130,斜率范围-3.469 403^-3.579 107,扩增效率范围为90.28%~94.19%。经对转染细胞、空白对照细胞的目的基因、内参基因的扩增曲线和融解曲线分析,表明该实时荧光定量PCR扩增体系的特异性良好,通过2-ΔΔCt相对定量法计算,可得出转染细胞293T-a、293T-b、293Tc目的基因LB1、LB2、LB3的基因表达量分别为6 226 830.88±826 430.14、9 449 238.68±926 057.13、35 177 915.63±3 949 173.42。本实验室建立的3个重组真核表达质粒在293T细胞中的转染成功为深入研究猪戊型肝炎基因工程疫苗奠定了基础。

关键词：猪戊型肝炎真核表达质粒转染实时荧光定量PCR

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鸡毒支原体强弱毒株荧光定量PCR鉴别检测方法的建立

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中国兽医学报 2013年第8期33卷 1206-1211页

作者：罗思思谢芝勋邓显文谢丽基谢志勤庞耀珊刘加波范晴广西兽医研究所广西畜禽疫苗新技术重点实验室广西南宁530001

为建立一种能鉴别鸡毒支原体(MG)强、弱毒株的快速检测方法,本研究根据GenBank中MG强毒株和弱毒株的基因组序列,选取特异性保守区序列设计了2对引物和2条探针,分别用于强弱毒株和弱毒株的检测,优化反应条件,建立了能区分MG强、弱毒株的... 详细信息

为建立一种能鉴别鸡毒支原体(MG)强、弱毒株的快速检测方法,本研究根据GenBank中MG强毒株和弱毒株的基因组序列,选取特异性保守区序列设计了2对引物和2条探针,分别用于强弱毒株和弱毒株的检测,优化反应条件,建立了能区分MG强、弱毒株的荧光定量PCR检测方法。该法特异性强,对鸡常见呼吸道病原体的反应均为阴性;灵敏度高,可检测到100拷贝/μL的模板;稳定性好,批内和批间试验Ct值的变异系数小。本研究建立的MG强、弱毒鉴别检测方法简便、快捷,为该病的防控与净化提供新方法、新思路。

关键词：鸡毒支原体强弱毒株荧光定量PCR

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Ⅰ群禽腺病毒抗体间接hexon-ELISA检测方法的建立

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中国兽医科学 2012年第7期42卷 701-707页

作者：罗思思谢芝勋刘加波庞耀珊邓显文谢志勤谢丽基范晴彭宜广西兽医研究所广西畜禽疫苗新技术重点实验室广西南宁530001

为建立一种检测Ⅰ群禽腺病毒(FAVⅠ)抗体的间接ELISA方法,以FAVⅠhexon重组蛋白作为包被抗原,优化反应条件,建立了FAVⅠ抗体间接hexon-ELISA检测方法。抗原最佳包被浓度为10.0μg/mL,最适包被条件为37℃2h加4℃过夜;最佳封闭液为50g/L... 详细信息

为建立一种检测Ⅰ群禽腺病毒(FAVⅠ)抗体的间接ELISA方法,以FAVⅠhexon重组蛋白作为包被抗原,优化反应条件,建立了FAVⅠ抗体间接hexon-ELISA检测方法。抗原最佳包被浓度为10.0μg/mL,最适包被条件为37℃2h加4℃过夜;最佳封闭液为50g/L脱脂乳;血清最佳稀释度为1∶100,最佳作用时间为75min;酶标二抗最佳工作浓度为1∶2 000,最佳作用时间为45min;hexon-ELISA阴性、阳性临界值为0.379。用建立的hexon-ELISA方法检测100份鸡血清样品,阳性率为45%。结果表明,建立的hexon-ELISA方法简便、快捷,可大批量检测,具有良好的特异性、敏感性和重复性,适用于FAVⅠ的诊断、抗体水平监测及流行病学调查。

关键词： Ⅰ群禽腺病毒六邻体酶联免疫吸附试验

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蝙蝠甲型流感病毒H17N10新亚型的研究进展

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病毒学报 2015年第1期31卷 80-84页

作者：谭伟谢芝勋广西壮族自治区兽医研究所、广西畜禽疫苗新技术重点实验室南宁530001

2012年研究人员在蝙蝠中发现了甲型流感病毒H17N10新亚型。蛋白序列及结构分析显示,HA17蛋白及NA10蛋白与已知的甲型流感病毒的血凝素和神经氨酸酶不同,它们不能与唾液酸结合,表明H17N10亚型病毒的HA17蛋白及NA10蛋白可能具有新功能。... 详细信息

2012年研究人员在蝙蝠中发现了甲型流感病毒H17N10新亚型。蛋白序列及结构分析显示,HA17蛋白及NA10蛋白与已知的甲型流感病毒的血凝素和神经氨酸酶不同,它们不能与唾液酸结合,表明H17N10亚型病毒的HA17蛋白及NA10蛋白可能具有新功能。本文将扼要介绍有关蝙蝠甲型流感病毒H17N10亚型的研究进展。

关键词：蝙蝠甲型流感病毒 H17N10亚型唾液酸 RNA聚合酶

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甲型流感病毒PA蛋白新成员的研究进展

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病毒学报 2014年第6期30卷 689-693页

作者：谭伟谢芝勋广西壮族自治区兽医研究所广西畜禽疫苗新技术重点实验室南宁530001

流感严重地威胁着人们的生活和健康,研究流感病毒的蛋白组成将有助于流感病毒疫苗及检测试剂等的研发。流感病毒含有结构和非结构蛋白。最初人们认为甲型流感病毒的8个基因节段只能编码8个病毒蛋白,以后发现M基因和NS基因可以分别编码M... 详细信息

流感严重地威胁着人们的生活和健康,研究流感病毒的蛋白组成将有助于流感病毒疫苗及检测试剂等的研发。流感病毒含有结构和非结构蛋白。最初人们认为甲型流感病毒的8个基因节段只能编码8个病毒蛋白,以后发现M基因和NS基因可以分别编码M2离子通道蛋白和非结构蛋白NS2。自2012年以来人们从甲型流感病毒中鉴定出了数种新的病毒蛋白,本文将主要介绍于2012年和2013年分别发现的甲型流感病毒PA蛋白新成员PA-X、PA-N155和PA-N182。

关键词：甲型流感病毒酸性聚合酶 PA-X 核糖体开放阅读框架移动

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