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激光扫描共聚焦显微镜观测大黄素β-环糊精包合物在鼻咽癌细胞的跨膜转运及分布

中国激光 2014年第5期41卷 92-96页

作者：王春苗侯华新黎丹戎陈云龙莫春燕李竟莫媛媛广西医科大学药学院广西南宁530021 广西医科大学医学科学实验中心广西南宁530021

利用激光扫描共聚焦显微镜动态研究大黄素β-环糊精包合物在鼻咽癌CNE-1细胞的跨膜转运及分布。结果显示,大黄素β-环糊精包合物以颗粒的形式主要分布于胞浆中,在其浓度为5~40mg·L-1时细胞对其摄取量随浓度的增加呈非线性增加;NaN... 详细信息

利用激光扫描共聚焦显微镜动态研究大黄素β-环糊精包合物在鼻咽癌CNE-1细胞的跨膜转运及分布。结果显示,大黄素β-环糊精包合物以颗粒的形式主要分布于胞浆中,在其浓度为5~40mg·L-1时细胞对其摄取量随浓度的增加呈非线性增加;NaN3、甘露醇可抑制CNE-1细胞对大黄素β-环糊精包合物的摄入量,环孢菌素A(CsA)在药物浓度低(小于5mg·L-1)时可显著增加细胞对大黄素β-环糊精包合物的摄入量,而在药物浓度大时,反而抑制细胞的摄取量。相对大黄素而言,大黄素β-环糊精包合物在细胞内持续时间较长。大黄素β环糊精包合物在鼻咽癌CNE-1细胞的跨膜转运主要遵循能量依赖的内吞模式且受P-gp蛋白的调控,这一特性可为药物剂型研究提供参考。

关键词：医学光学药物跨膜转运大黄素β-环糊精包合物鼻咽癌CNE-1细胞激光扫描共聚焦显微镜

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利用亲和层析法检测乙酰化蛋白的研究

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中华血液学杂志 2012年第3期33卷 211-214页

作者：郑力钟艳平萧浩周怡罗蓉李洪涛李刚廖明何敏广西医科大学医学科学实验中心南宁530021

目的建立一种快速、相对定量检测乙酰化蛋白方法，并初步应用其检测药物作用后Jurkat细胞乙酰化总蛋白水平。方法用不同浓度的曲古菌素A（TSA）诱导Jurkat细胞蛋白高乙酰化后，利用抗乙酰化赖氨酸抗体亲和层析柱富集纯化乙酰化总蛋白，... 详细信息

目的建立一种快速、相对定量检测乙酰化蛋白方法，并初步应用其检测药物作用后Jurkat细胞乙酰化总蛋白水平。方法用不同浓度的曲古菌素A（TSA）诱导Jurkat细胞蛋白高乙酰化后，利用抗乙酰化赖氨酸抗体亲和层析柱富集纯化乙酰化总蛋白，经酸洗脱后固定于酶标板，ELISA法检测乙酰化蛋白相对总量，并用基质辅助激光解吸电离串联飞行时间质谱仪（MALDI—TOF／TOF）分析验证其成分；同法检测不同浓度的没食子酸、大黄素、单乙酰化大黄素A三种药物作用Jurkat细胞后乙酰化总蛋白水平的变化，筛查诱导Jurkat细胞蛋白乙酰化药物。结果1μmol／LTSA作用于4×10^5Jurkat细胞24h，乙酰化总蛋白相对水平最高。MALDI—TOF／TOF分析显示，TSA诱导Jurkat细胞产生的乙酰化蛋白共有22种，其中15种为乙酰化组蛋白。没食子酸、大黄素、单乙酰化大黄素A作用Jut-kat细胞后所导致的乙酰化程度不同，以1μmol／L浓度TSA为阳性对照组，无药物为空白对照组，35．09μmol／L和17．54μmol／L大黄素处理的Jurkat细胞乙酰化蛋白相对水平分别为4．3％和14．2％；1．47μmol／L和2．94μmol／L没食子酸处理组乙酰化蛋白相对水平分别为28．7％和11．5％；152．91μmol／L和30．58μmol／L单乙酰化大黄素组分别为22．O％和3．6％；其中1．47μmol／L没食子酸所诱导的乙酰化蛋白水平最高。结论初步建立了活细胞基础上纯化富集并检测乙酰化总蛋白水平的方法，该法可快速、简便的筛选以组蛋白去乙酰化酶为靶点的抗癌药物。

关键词：组蛋白类乙酰化作用曲古菌素A 色谱法亲和细胞系 Jurkat

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17-甲氧基-7-羟基-苯骈呋喃查耳酮对小鼠心室肌细胞膜钠电流的影响

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中国现代应用药学 2018年第8期35卷 1185-1188页

作者：李映新黄媛恒林兴黄晓亮黄仁彬广西医科大学药学院南宁530021 广西医科大学实验生理科学实验中心南宁530021 广西医科大学医学科学实验中心南宁530021

目的观察17-甲氧基-7-羟基-苯并呋喃查耳酮(YLSC)对小鼠心室肌细胞膜上钠电流的影响。方法采用Langendorff逆行主动脉灌流法急性分离昆明小鼠心室肌细胞,全细胞膜片钳技术记录心室肌细胞膜钠电流(INa)在灌流YLSC前后的变化情况。结果 Y... 详细信息

目的观察17-甲氧基-7-羟基-苯并呋喃查耳酮(YLSC)对小鼠心室肌细胞膜上钠电流的影响。方法采用Langendorff逆行主动脉灌流法急性分离昆明小鼠心室肌细胞,全细胞膜片钳技术记录心室肌细胞膜钠电流(INa)在灌流YLSC前后的变化情况。结果 YLSC灌流可使INa的电流幅值减小,I-V曲线上移,但I-V曲线形状、最大激活电位和反转电位基本不变。INa的电流密度在膜电位-40 m V达到最大峰值,给药前的峰电流密度值为(-22.31±2.20)p A/p F,400μmol·L-1 YLSC灌流给药后为(-10.64±0.97)p A/p F,与给药前比较有显著差异(n=5,P<0.05),对钠电流的抑制率为(48.9±3.6)%;400μmol·L-1 YLSC给药前后的半数激活电压分别为(-49.51±1.22)m V和(-48.13±2.34)m V,斜率因子分别为2.43±0.36和3.39±0.64,给药前后无显著差异(n=5)。YLSC使失活曲线左移,给药前后半数失活电压分别为(-73.29±1.09)m V和(-76.79±1.62)m V,斜率因子分别为-12.13±2.15和-11.45±1.91,给药前后有显著差异(n=5,P<0.05)。结论 YLSC能通过降低钠通道失活电压,促进钠通道失活而抑制钠通道电流。

关键词：玉郎伞查耳酮心肌细胞钠通道全细胞膜片钳技术

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实验生理科学综合性实验改革的实践

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实验技术与管理 2009年第11期26卷 126-127,147页

作者：黄勤莫书荣黄仁斌谢露邝晓聪梁桂宁广西医科大学基础医学院实验生理科学实验中心

从1999年开始,广西医科大学基础医学院进行了生理学、药理学和病理生理学3门课程的实验课内容综合性改革,开设出实验生理科学课程,在加强学生综合素质与创新能力培养方面取得肯定的效果。

关键词：课程综合改革实践

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17-甲氧基-7-羟基-苯并呋喃查尔酮对心肌细胞内游离钙浓度及L-型钙电流的影响

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中国实验方剂学杂志 2013年第15期19卷 213-217页

作者：李映新黄媛恒覃斐章林兴黄仁彬广西医科大学药学院南宁530021 广西医科大学实验生理科学实验中心南宁530021 广西医科大学医学科学实验中心南宁530021

目的:研究17-甲氧基-7-羟基-苯并呋喃查尔酮(YLSC)对H2O2诱导的心肌细胞内钙超载的拮抗作用及对L型钙电流(ICa-L)的影响。方法:采用SD大鼠乳鼠进行心肌细胞培养,实验分为①正常对照组;②H2O2组:上机前加入终浓度为0.3 mmol.L-1的H2O2;... 详细信息

目的:研究17-甲氧基-7-羟基-苯并呋喃查尔酮(YLSC)对H2O2诱导的心肌细胞内钙超载的拮抗作用及对L型钙电流(ICa-L)的影响。方法:采用SD大鼠乳鼠进行心肌细胞培养,实验分为①正常对照组;②H2O2组:上机前加入终浓度为0.3 mmol.L-1的H2O2;③预先给予低、中、高不同终浓度YLSC药物处理组:分别给予100,200,400μmol.L-1YLSC的无血清培养基,孵育24 h,上机前加入终浓度为0.3 mmol.L-1H2O2,以Fluo-3/AM荧光指示剂负载,应用激光共聚焦显微镜技术,分别于加入H2O2后15 min内检测细胞内[Ca2+]i的变化;分离昆明种小鼠单个心室肌细胞,全细胞膜片钳技术记录YLSC对ICa-L的影响。结果:①与正常对照组比较,H2O2诱导的模型组细胞内[Ca2+]i增加60.43%±7.75%,而高、中、低YLSC预处理组[Ca2+]i分别增加38.39%±13.87%,14.49%±2.94%,-28.1%±1.52%,与模型组比较显著降低(P<0.01)。②YLSC可使心室肌细胞ICa-L的电流-电压(I-V)关系曲线上移,能改变ICa-L的激活和失活特征,使ICa-L的激活曲线和稳态失活曲线左移。结论:YLSC对心肌细胞钙离子通道有较好的阻断作用,能显著减轻H2O2诱导的心肌细胞内[Ca2+]i超载。

关键词： 17-甲氧基-7-羟基-苯并呋喃查尔酮激光扫描共聚焦细胞内钙浓度全细胞膜片钳 L型钙电流

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乙腈、乙醇、色谱柱去除血清高丰度蛋白方法的比较

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卫生研究 2012年第6期41卷 976-980页

作者：李茵廖明何晓周怡罗蓉李洪涛王云何敏广西医科大学公共卫生学院南宁530021 广西医科大学医学科学实验中心

目的比较乙腈沉淀法、乙醇沉淀法和多重亲和去除色谱柱Human 14法去除人血清中高丰度蛋白的效果。方法应用乙腈沉淀法、乙醇沉淀法和多重亲和去除色谱柱Human 14法对血清样品进行处理,Bis-Tris Mini Gels电泳和双向凝胶电泳检测去除高... 详细信息

目的比较乙腈沉淀法、乙醇沉淀法和多重亲和去除色谱柱Human 14法去除人血清中高丰度蛋白的效果。方法应用乙腈沉淀法、乙醇沉淀法和多重亲和去除色谱柱Human 14法对血清样品进行处理,Bis-Tris Mini Gels电泳和双向凝胶电泳检测去除高丰度蛋白的效果。结果从一维胶电泳图灰度值分析,血清经过乙腈法、色谱柱法、乙醇法处理后,白蛋白条带灰度值由原血清的19分别变成157.2,40.8和8.2;从2-DE电泳图分析看出,多重亲和去除色谱柱Human 14法处理后的蛋白点数显著增多,比原血清增加了137个;乙腈法和乙醇法处理后虽然蛋白点减少了,却有低丰度蛋白质点显现出来。结论乙腈沉淀法能在去除血清中高丰度蛋白的同时收获更多的10kD以下的小分子量蛋白;乙醇沉淀法虽然能去除部分高丰度蛋白,但小分子量蛋白的收获量较少;而多重亲和去除色谱柱Human 14法不仅能有效地去除血清中高丰度蛋白的干扰,且保留了大量的小分子量蛋白。

关键词：血清高丰度蛋白

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鼻咽癌中Rad52的表达及其临床意义

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临床耳鼻咽喉头颈外科杂志 2014年第7期28卷 486-489页

作者：韦黎黎杨小丽明慧馨李萍广西医科大学第一附属医院病理科南宁530021 广西医科大学科学实验中心

目的:研究同源重组修复相关基因Rad52在鼻咽癌组织中的表达并探讨其临床意义。方法:采用免疫组织化学三步法检测38例鼻咽癌患者癌组织及其相应存在的癌旁组织的Rad52蛋白的表达,并比较其表达结果,分析癌组织中Rad52的表达与患者的临床资... 详细信息

目的:研究同源重组修复相关基因Rad52在鼻咽癌组织中的表达并探讨其临床意义。方法:采用免疫组织化学三步法检测38例鼻咽癌患者癌组织及其相应存在的癌旁组织的Rad52蛋白的表达,并比较其表达结果,分析癌组织中Rad52的表达与患者的临床资料(如性别、年龄、临床分期等)的关系。结果:鼻咽癌组织与癌旁黏膜的Rad52蛋白表达相比差异有统计学意义(P<0.05)。Spearman等级相关分析显示,癌组织中Rad52蛋白表达情况与患者的临床分期呈负相关性(P<0.05),而与患者的性别、年龄、复发率、淋巴结转移率等无显著相关性(P>0.05);生存分析显示,Rad52蛋白的高表达对患者的生存时间有显著影响(P<0.05)。结论:Rad52蛋白对鼻咽癌患者的治疗效果及预后评估有重要意义。

关键词：鼻咽肿瘤蛋白表达修复相关基因Rad52 免疫组织化学

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EGCG诱导人肝癌SMMC-7721细胞早期凋亡及基因和蛋白谱的变化研究

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中国药理学通报 2009年第11期25卷 1482-1486页

作者：李刚容敏华钟艳平丁兰芳覃健廖明萧浩何敏广西医科大学医学科学实验中心广西南宁530021

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)诱导人肝癌SMMC-7721细胞早期凋亡的变化规律,以及EGCG作用后SMMC-7721细胞基因及蛋白谱的变化。方法通过MTT法初步筛选EGCG诱导SMMC-7721细胞凋亡的作用浓度,流式细胞Annexin V-FITC/PI法检测E... 详细信息

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)诱导人肝癌SMMC-7721细胞早期凋亡的变化规律,以及EGCG作用后SMMC-7721细胞基因及蛋白谱的变化。方法通过MTT法初步筛选EGCG诱导SMMC-7721细胞凋亡的作用浓度,流式细胞Annexin V-FITC/PI法检测EGCG对SMMC-7721细胞增殖的抑制作用和早期凋亡的诱导效应;运用Af-fymetrix U133A2.0人基因组表达谱芯片检测EGCG作用后SMMC-7721细胞基因表达谱的变化,以及SELDI检测EGCG作用后SMMC-7721细胞蛋白图谱的变化,Real-time PCR验证3个表达差异显著基因。结果EGCG诱导SMMC-7721细胞早期凋亡的最佳作用剂量是218.2μmol·L-1,早期凋亡的作用呈剂量依赖性;SMMC-7721细胞经EGCG作用后,表达差异两倍以上的基因共196个,包括上调基因132个和下调基因64个;EGCG作用后表达差异两倍以上的蛋白共43个,包括23个表达上调蛋白,20个表达下调蛋白。Real-time PCR验证DIO2、Id3基因表达与芯片结果一致。结论EGCG有明显的诱导肝癌SMMC-7721细胞早期凋亡的作用,其诱导凋亡作用涉及多基因和多蛋白变化。

关键词： EGCG 细胞早期凋亡基因谱蛋白谱 Real-time PCR 肝癌

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基于^1H-NMR的当归四逆汤抗凝血作用的代谢组学研究

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中国中药杂志 2015年第20期40卷 4088-4093页

作者：郑华秦霞宋慧唐超玲阮俊翔张洪也陆世银梁永红苏志恒广西医科大学医学科学实验中心广西南宁530021 广西医科大学药学院广西南宁530021

采用1H-NMR代谢组学技术研究当归四逆汤抗凝血作用机制以及对小鼠血浆内源性代谢产物的影响。当归四逆汤灌胃给药1周后,观察当归四逆汤对小鼠凝血酶时间的影响,并采用1H-NMR技术分析小鼠血浆代谢指纹图谱,采用主成分分析(principal comp... 详细信息

采用1H-NMR代谢组学技术研究当归四逆汤抗凝血作用机制以及对小鼠血浆内源性代谢产物的影响。当归四逆汤灌胃给药1周后,观察当归四逆汤对小鼠凝血酶时间的影响,并采用1H-NMR技术分析小鼠血浆代谢指纹图谱,采用主成分分析(principal component analysis,PCA)和正交偏最小二乘法判别分析(orthogonal partial least squares-discrimination analysis,OPLS-DA),研究给药组与正常组之间的代谢物组差异,筛选与抗凝血作用相关的潜在生物标志物。连续当归四逆汤灌胃给药1周后,能显著延长小鼠凝血酶时间(P<0.05)。代谢组学结果显示空白组和复方组能明显区分,与空白组比较,复方组内源性代谢产物肉碱、苯丙氨酸和异丁酸显著上调(P<0.01),赖氨酸、组氨酸和胆固醇显著下调(P<0.05)。肉碱、苯丙氨酸、组氨酸和胆固醇为当归四逆汤抗凝过程中潜在代谢标志物,当归四逆汤可能通过调节脂质代谢、能量代谢和氨基酸代谢影响血小板聚集功能和组织因子、纤维蛋白酶的表达来发挥抗凝作用。

关键词：当归四逆汤抗凝 1H-NMR 代谢组学代谢标志物

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基于组效关系的壮药岩黄连抑制HSC-T6细胞增殖活性成分辨识研究

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中草药 2017年第7期48卷 1354-1361页

作者：陆世银郑华程邦吴方吴金霞刘旭文唐超玲梁永红张洪也阮俊翔宋慧苏志恒广西医科大学药学院广西南宁530021 广西医科大学医学科学实验中心广西南宁530021

目的建立岩黄连提取物的化学成分与其抑制大鼠肝星状细胞(HSC-T6)作用的组效关系模型,寻找与药效显著相关的活性成分。方法采用正交设计法提取得到9个岩黄连提取物,通过HPLC法对岩黄连提取物进行成分表征,以共有峰的相对峰面积来表征其... 详细信息

目的建立岩黄连提取物的化学成分与其抑制大鼠肝星状细胞(HSC-T6)作用的组效关系模型,寻找与药效显著相关的活性成分。方法采用正交设计法提取得到9个岩黄连提取物,通过HPLC法对岩黄连提取物进行成分表征,以共有峰的相对峰面积来表征其相对质量分数;MTT法测定岩黄连提取物抑制HSC-T6细胞增殖活性,以抑制率为评价指标;利用SIMCA-P11.5软件的正交投影偏最小二乘法(OPLS)分析,研究共有峰与药效的相关性,根据S-载荷图与变异权重参数(VIP)值辨识显著活性成分;通过MTT法及流式细胞仪验证所筛选成分的活性。采用细胞乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒观察所筛选成分对人正常肝细胞(HL-7702)LDH活性的影响。结果 HPLC法对9个岩黄连提取物进行表征分析结果确定了21个共有峰,其中19、18、13、20、14和16号共有峰(VIP>1)与岩黄连抑制HSC-T6细胞增殖活性显著相关,并鉴定18、19和20号共有峰代表的化合物分别为脱氢卡维丁、巴马汀和小檗碱。MTT结果显示不同质量浓度脱氢卡维丁、巴马汀及小檗碱对HSC-T6细胞增殖具有明显抑制作用;流式细胞术检测结果也与MTT结果一致,脱氢卡维丁、巴马汀及小檗碱(0.10 mg/m L)处理HSC-T6细胞后的凋亡率分别为42.12%、42.22%、36.73%,明显高于对照组的1.69%(P<0.01)。细胞毒性实验发现当脱氢卡维丁终质量浓度低于0.15 mg/m L,巴马汀与小檗碱终质量浓度低于0.10 mg/m L时,对HL-7702细胞不具有明显的细胞毒作用。结论通过组效关系研究首次发现岩黄连提取物中脱氢卡维丁、巴马汀与小檗碱在体外能显著抑制HSC-T6细胞增殖并诱导其凋亡,且在有效质量浓度下不具有明显的细胞毒作用,表明这3种化学成分极有可能是岩黄连抗肝纤维化作用的潜在活性成分且在应用中具备一定的安全性;同时也提示基于组效关系的研究思路可为天然植物药活性成分的辨识提供行之有效的方法。

关键词：岩黄连组效关系大鼠肝星状细胞(HSC-T6) 抗纤维化脱氢卡维丁巴马汀小檗碱

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