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中国兽医学报 2024年第2期44卷 249-257页

作者：黄娇玲谢芝勋罗思思李孟谢丽基邓显文谢志勤曾婷婷张艳芳范晴张民秀王盛李丹韦悠李小凤广西壮族自治区兽医研究所农业农村部中国(广西)-东盟跨境动物疫病防控重点实验室/广西兽医生物技术重点实验室广西南宁530001

将多壁碳纳米管-壳聚糖-铂纳米粒子复合材料(MWCNT-Chi-PtNP)修饰金电极(GE),并吸附血清4型禽腺病毒(fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)蛋白单克隆抗体(MAb/FAdV-4),构建一种新型的电阻型电化学免疫传感器用于检测FAdV-4。对传感器的... 详细信息

将多壁碳纳米管-壳聚糖-铂纳米粒子复合材料(MWCNT-Chi-PtNP)修饰金电极(GE),并吸附血清4型禽腺病毒(fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)蛋白单克隆抗体(MAb/FAdV-4),构建一种新型的电阻型电化学免疫传感器用于检测FAdV-4。对传感器的测试底液及样品孵育时间进行优化后,在最优条件下,对所构建的传感器的敏感性、特异性和稳定性进行检测。并对36份临床样品进行检测,以验证该传感器的实用性。结果显示,所建立的FAdV-4电化学免疫传感器的测试底液最佳pH值为7.0,样品的最佳孵育时间为30 min,检测线性范围10^(1.46)~10^(4.46)EID50/mL FAdV-4,最低检出限为10^(1.89)EID50/mL FAdV-4(S/N=3);敏感性试验结果显示该免疫传感器灵敏度比常规PCR方法(10^(3.46)EID50/mL)FAdV-4高37倍,且该传感器特异性高,稳定性好;该传感器对36份临床样品进行检测,结果与PCR方法和测序结果相符。结果表明,所建立的FAdV-4电化学免疫传感器具有检测快速、特异性好和敏感性高等优点,为FAdV-4的诊断提供一种新型的快速检测技术。

关键词：多壁碳纳米管电化学免疫传感器铂纳米粒子血清4型禽腺病毒

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鹧鸪源基因Ⅻ型新城疫病毒对SPF鸡致病性的研究

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动物医学进展 2023年第11期44卷 53-58页

作者：曾婷婷谢丽基谢芝勋黄娇玲王盛邓显文谢志勤华俊广西壮族自治区兽医研究所广西兽医生物技术重点实验室农业农村部中国(广西)-东盟跨境动物疫病防控重点实验室广西南宁530001

为研究鹧鸪源基因Ⅻ型新城疫病毒(NDV)FP158对SPF鸡的致病性,测定了FP158的鸡胚平均死亡时间(MDT)和脑内接种致病指数(ICPI),将FP158感染6周龄SPF鸡后,观察其临床症状,测定喉头和泄殖腔棉拭子中病毒的鸡胚半数感染量(EID_(50));感染后第... 详细信息

为研究鹧鸪源基因Ⅻ型新城疫病毒(NDV)FP158对SPF鸡的致病性,测定了FP158的鸡胚平均死亡时间(MDT)和脑内接种致病指数(ICPI),将FP158感染6周龄SPF鸡后,观察其临床症状,测定喉头和泄殖腔棉拭子中病毒的鸡胚半数感染量(EID_(50));感染后第3天随机处死3只鸡,观察其剖检病变,并采集内脏器官制备病理切片观察病理变化。结果显示,FP158的MDT为57 h,ICPI为1.65。SPF鸡在感染后第3天开始出现精神萎靡,排黄绿色稀便,轻微的呼吸道症状和轻微的神经症状,到第9天后症状逐渐消失。感染后SPF鸡喉头和泄殖腔排毒逐渐升高,至第3天达到高峰,后逐渐降低,至第13天检测不到排毒。剖检发现盲肠扁桃体出血,其他组织器官未发现明显病变。病理切片观察发现大脑局部神经元变性,嗜酸性增强;肺脏支气管黏膜水肿,大量炎细胞浸润,部分上皮细胞脱落,管腔充满炎性渗出物;盲肠扁桃体异嗜性细胞浸润。对照组SPF鸡临床表现正常,排毒检测为阴性,无剖检病变和组织病理学变化。研究结果表明,鹧鸪源基因Ⅻ型NDV能感染SPF鸡。

关键词：基因Ⅻ型新城疫病毒人工感染排毒病理学

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H9N2亚型禽流感病毒多拷贝M2e蛋白单克隆抗体的制备

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中国家禽 2024年第11期46卷 45-51页

作者：张民秀谢芝勋李孟罗思思谢志勤谢丽基李丹阮志华广西壮族自治区兽医研究所农业农村部中国(广西)-东盟跨境动物疫病防控重点实验室广西兽医生物技术重点实验室广西南宁530001

为制备H9N2亚型禽流感病毒(AIV)多拷贝M2e蛋白单克隆抗体,试验将纯化的3M2e重组蛋白免疫BALB/c小鼠;取免疫小鼠的脾细胞与SP2/0细胞融合,采用间接ELISA筛选出分泌抗体的杂交瘤细胞株;将获得的杂交瘤细胞株腹腔注射BALB/c小鼠制备腹水;... 详细信息

为制备H9N2亚型禽流感病毒(AIV)多拷贝M2e蛋白单克隆抗体,试验将纯化的3M2e重组蛋白免疫BALB/c小鼠;取免疫小鼠的脾细胞与SP2/0细胞融合,采用间接ELISA筛选出分泌抗体的杂交瘤细胞株;将获得的杂交瘤细胞株腹腔注射BALB/c小鼠制备腹水;采用间接ELISA测定腹水效价,鼠源单克隆抗体亚类鉴定试剂盒检测单克隆抗体腹水,三株单克隆抗体重链亚型均为IgG1;Westernblot鉴定单克隆抗体的特异性;使用IFA鉴定3M2e蛋白在Sf9细胞的表达和检测H9N2亚型AIV在MDCK细胞的感染。结果显示:获得了3株分泌多拷贝M2e抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为4C7-B11、4E10-A10和5A12-B5;获得腹水的效价均为1∶1000000;三株单克隆抗体重链亚型均为IgG1;Westernblot鉴定三株单克隆抗体均能与2M2e、3M2e和4M2e原核重组蛋白及在Sf9细胞表达的3M2e发生特异性反应;IFA鉴定结果也显示三株单克隆抗体均能检测3M2e蛋白在Sf9细胞的表达,并且能检测到H9N2亚型AIV在MDCK细胞上的感染,出现特异性的绿色荧光;三株单克隆抗体重链亚型均为IgG1。研究获得了H9N2亚型AIV多拷贝M2e单克隆抗体,可用于Westernblot和IFA鉴定,为靶向M2e蛋白H9N2亚型禽流感疫苗的研究提供特异性的检测工具。

关键词：禽流感病毒 M2e蛋白蛋白表达单克隆抗体

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猫杯状病毒GX2019的分离鉴定及全基因克隆遗传进化分析

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中国兽医科学 2020年第7期50卷 880-885页

作者：王浩秦树英刘金凤白安斌覃绍敏吴健敏广西大学动物科学技术学院广西南宁530004 广西壮族自治区兽医研究所广西兽医生物技术重点实验室广西南宁530001

从南宁某宠物医院疑似感染猫杯状病毒(Feline calicivirus,FCV)猫鼻咽拭子中,利用F81细胞分离1株FCV后,RT-PCR和电镜鉴定,测定TCID50和理化性质。同时利用RT-PCR分段扩增病毒全基因序列,进行同源性及遗传进化分析。结果显示,FCV GX2019... 详细信息

从南宁某宠物医院疑似感染猫杯状病毒(Feline calicivirus,FCV)猫鼻咽拭子中,利用F81细胞分离1株FCV后,RT-PCR和电镜鉴定,测定TCID50和理化性质。同时利用RT-PCR分段扩增病毒全基因序列,进行同源性及遗传进化分析。结果显示,FCV GX2019分离株的TCID50为1×10-8.67/0.1 mL,基因组全长为7687 bp,与FCV CH-JL4(长春株)毒株核苷酸序列相似性最高,为85.3%,属于同一分支。氨基酸分析表明,与国内FCV疫苗株255、国外FCV疫苗株F9、FCV跛行综合征株2280及FCV GX01分离株氨基酸变异率分别为46.7%、26.7%、53.3%、40.0%,其中B细胞抗原识别表位中氨基酸位点发生了改变。

关键词：猫杯状病毒分离鉴定全基因克隆遗传进化分析

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血清4型禽腺病毒水平感染SPF鸡的致病性研究

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畜牧与兽医 2023年第5期55卷 56-62页

作者：韦悠邓显文谢芝勋杨冰怡阮志华黄娇玲曾婷婷谢志勤范晴张艳芳王盛广西壮族自治区兽医研究所/广西兽医生物技术重点实验室广西南宁530001 广西大学动物科学技术学院广西南宁530004

为研究血清4型禽腺病毒(FAdV-4)通过水平传播途径感染SPF鸡的致病性,将3周龄SPF鸡饲养于FAdV-4不同污染程度的隔离器中以建立自然感染动物模型,每天记录疾病过程并统计发病率和死亡率,剖检并检测器官病毒载量,检测环境和鸡躯体表面的FAd... 详细信息

为研究血清4型禽腺病毒(FAdV-4)通过水平传播途径感染SPF鸡的致病性,将3周龄SPF鸡饲养于FAdV-4不同污染程度的隔离器中以建立自然感染动物模型,每天记录疾病过程并统计发病率和死亡率,剖检并检测器官病毒载量,检测环境和鸡躯体表面的FAdV-4病毒载量。结果显示:FAdV-4水平感染SPF鸡的第1~4天无明显临床症状,第5天起饮食量下降、排黄绿色粪便,第6~9天陆续有鸡死亡,第10天后鸡群逐渐康复至与对照组相同;FAdV-4具有广泛的组织嗜性,在肝脏中含量最高;环境中FAdV-4的污染程度对鸡群的发病率和死亡率均有影响,每25 cm^(2)地网的病毒载量为1.4×10^(5)copies、侧壁为2.3×10^(3)copies、料槽为1.2×10^(4)copies时将达到环境致病阈值,此时每25 cm^(2)鸡体表病毒载量为脚底1.2×10^(5)copies、头部1.1×10^(4)copies、背部3.7×10^(3)copies。本研究加深了对FAdV-4致病性的了解,为兽医工作者和养殖业人员采取有效的预防控制措施提供了参考数据。

关键词：血清4型禽腺病毒水平传播动物模型致病阈值

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猫细小病毒广西分离株FPV-GX01全基因的克隆及遗传进化分析

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中国兽医科学 2018年第10期48卷 1250-1257页

作者：张振江唐海波刘金凤王浩秦树英何怡柳吴健敏广西大学动物科学技术学院广西南宁530004 广西壮族自治区兽医研究所广西兽医生物技术重点实验室广西南宁530001

为了解广西地区猫细小病毒（feline parvovirus,FPV）的生物学特性,阐明其基因组与遗传进化等特征。笔者采集经胶体金检测FPV阳性的粪便样品接种FK81细胞,进行病毒分离及理化特性鉴定,同时利用PCR分段扩增病毒基因组DNA,并与国内外分离... 详细信息

为了解广西地区猫细小病毒（feline parvovirus,FPV）的生物学特性,阐明其基因组与遗传进化等特征。笔者采集经胶体金检测FPV阳性的粪便样品接种FK81细胞,进行病毒分离及理化特性鉴定,同时利用PCR分段扩增病毒基因组DNA,并与国内外分离株进行同源性及遗传进化比较分析。结果显示,分离株在FK81细胞上盲传3代后出现CPE,猪红细胞血凝价达1∶1 024,第5代病毒TCID50测定为10-5.2/0.1 m L,该毒株对热、酸、氯仿及乙醚有较强的抵抗力,将分离株命名为FPV-GX01。全基因测序结果表明,分离株基因组为4 901 bp,与2007年我国猫源细小病毒株FPV-XJ1同源性高达99.0%,属同一分支。氨基酸位点分析显示,FPV-GX01株VP2蛋白功能较少发生突变,与犬细小病毒（canine parvovirus,CPV）氨基酸位点存在宿主差异;FPV-GX01 NS1蛋白序列上没有VP2蛋白稳定,第619位异亮氨酸突变成苯丙氨酸。广西地区分离的猫细小病毒也在不断发生遗传变异进化,本研究对该地区猫细小病毒的进化特征提供了一定的参考。

关键词：猫细小病毒分离鉴定全基因组生物学特性

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猫细小病毒广西株的分离鉴定及动物发病模型的建立

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中国兽医科学 2020年第1期50卷 26-33页

作者：张振江刘金凤王浩唐海波秦树英李承浩吴健敏广西大学动物科学技术学院广西南宁530004 广西壮族自治区兽医研究所广西兽医生物技术重点实验室广西南宁530001

本研究通过利用FK81细胞按常规方法对猫细小病毒进行分离鉴定。选取其中效价最高的分离株以不同剂量经口腔和鼻腔感染猫,通过测定LD50,观察临床症状、白细胞含量变化、组织病理变化等指标,构建动物发病模型。从86份疑似猫瘟粪便样品中... 详细信息

本研究通过利用FK81细胞按常规方法对猫细小病毒进行分离鉴定。选取其中效价最高的分离株以不同剂量经口腔和鼻腔感染猫,通过测定LD50,观察临床症状、白细胞含量变化、组织病理变化等指标,构建动物发病模型。从86份疑似猫瘟粪便样品中成功分离到6株猫细小病毒,其中GX01株TCID50及血凝价均高于其他5株;不同剂量GX01感染猫后均表现出高热、腹泻、呕吐和体重下降等典型临床症状;感染后第3天粪便中检测到病毒;发病后期白细胞严重减少;攻毒第14天测定LD50为1×10-2.2;解剖表现为肠臌气、部分脏器肿大有出血点;组织病理切片观察到十二指肠和肺上皮细胞出现胞浆、胞核侵染、坏死等明显的组织病变,肾出现脂肪变性。本研究成功分离6株广西地区猫细小病毒并建立发病动物模型,为猫细小病毒发病机制和治疗药物的研究奠定了基础。

关键词：猫细小病毒分离临床表征发病模型

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禽呼肠孤病毒σA蛋白单克隆抗体的制备及夹心ELISA检测方法的建立

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中国兽医学报 2024年第7期44卷 1373-1379页

作者：杨冰怡谢芝勋谢志勤任红玉韦悠谢丽基黄娇玲王盛广西大学动物科学技术学院广西南宁530004 广西壮族自治区兽医研究所广西兽医生物技术重点实验室广西南宁530001

旨在制备禽呼肠孤病毒(ARV)σA蛋白单克隆抗体及建立一种夹心ELISA方法检测ARV病原。以原核表达ARVσA蛋白作为抗原,免疫BALB/c小鼠,筛选稳定的杂交瘤细胞株制备单克隆抗体,建立基于单克隆抗体的σA-夹心ELISA检测方法,并进行敏感性、... 详细信息

旨在制备禽呼肠孤病毒(ARV)σA蛋白单克隆抗体及建立一种夹心ELISA方法检测ARV病原。以原核表达ARVσA蛋白作为抗原,免疫BALB/c小鼠,筛选稳定的杂交瘤细胞株制备单克隆抗体,建立基于单克隆抗体的σA-夹心ELISA检测方法,并进行敏感性、特异性、重复性和准确性检验。结果显示,成功构建了重组质粒pET-32a-σA,并在大肠杆菌中良好表达。通过杂交瘤细胞筛选,获得了2株能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为6B3和8E11,2株杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体均能与天然ARV反应。选择其中1株6B3分泌的单克隆抗体作为捕获抗体,ARV阳性鸡多克隆抗体作为检测抗体,通过优化反应条件,建立了检测ARV的σA-夹心ELISA方法。特异性检测显示该法只检出ARV病原,没有检出其他常见鸡病病原;敏感性试验显示其能检出7.72×10^(2)EID50/mL的ARV;重复性试验显示批内和批间试验的变异系数(Cv)均小于5.0%,重复性好。用σA-夹心ELISA方法与PCR方法同时对30份样品进行检测,两者检测结果相符。结果表明成功建立基于ARVσA蛋白单克隆抗体的夹心ELISA方法用于ARV的鉴别检测,为准确快速检测ARV提供技术手段。

关键词：禽呼肠孤病毒 σA蛋白单克隆抗体夹心ELISA

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2013~2016年中国流行性出血病病毒血清型5型的分离与遗传特征分析

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病毒学报 2020年第3期36卷 475-483页

作者：杨振兴李占鸿吴健敏王金萍肖雷寇美玲朱建波廖德芳李华春杨恒云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室昆明650224 广西壮族自治区兽医研究所广西兽医生物技术重点实验室南宁530001

流行性出血病病毒(Epizootic haemorrhagic disease virus,EHDV)是一种严重危害反刍动物的虫媒病毒,全世界已发现9种血清型EHDV,长久以来我国EHDV血清型分布、病毒活动规律和病毒遗传特征不明确,对我国的畜牧业进出口和牛羊养殖业构成... 详细信息

流行性出血病病毒(Epizootic haemorrhagic disease virus,EHDV)是一种严重危害反刍动物的虫媒病毒,全世界已发现9种血清型EHDV,长久以来我国EHDV血清型分布、病毒活动规律和病毒遗传特征不明确,对我国的畜牧业进出口和牛羊养殖业构成了潜在威胁。本文首次报道了2013~2016年在云南省与广西壮族自治区设立的哨兵动物中,9株EHDV-5型毒株的分离以及病毒基因节段2、3与6(Seg-2、Seg-3、Seg-6)的序列特征。中国分离的9株EHDV-5型毒株Seg-2,Seg-3与Seg-6及其编码蛋白之间高度保守,核酸与氨基酸序列相似度均大于99%,在系统发生树上聚为紧密的一簇,表明我国云南与广西流行的EHDV-5有着最近的共有祖先。中国与澳大利亚EHDV-5毒株不同基因节段之间也有着较高的序列相似度(>91%),表明两地流行EHDV-5型毒株有着共同的起源。中国毒株的Seg-2与Seg-6在系统发生树上虽与澳大利亚毒株(CSIRO 157)聚为一簇,但最终形成了独立的进化分支,表明中国流行的EHDV-5发生了独立的进化。本研究首先丰富了世界范围内EHDV-5型毒株资源,其次为我国开展EHDV-5病毒的更深入研究提供了宝贵材料和理论数据。

关键词：流行性出血病病毒(EHDV) 序列分析血清型地域基因型

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奶犊牛关节炎病例病原学诊断与治疗

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黑龙江畜牧兽医 2021年第22期 69-72页

作者：陶立吴翠兰李常挺庞观龙彭昊兰美益马春霞韦志锋李军广西壮族自治区兽医研究所南宁530001 广西兽医生物技术重点实验室南宁530001 广西农业职业技术学院南宁530007

广西某奶牛养殖场现有犊牛26头,7头犊牛出生3 d后出现前肢膝关节肿胀、悬蹄,发病率为26.9%。为了解奶犊牛关节炎的致病原因,试验无菌采集犊牛肿胀未破溃的关节液(病料A)和犊牛肿胀已破溃的关节液(病料B),通过病原分离纯化、生化试验、... 详细信息

广西某奶牛养殖场现有犊牛26头,7头犊牛出生3 d后出现前肢膝关节肿胀、悬蹄,发病率为26.9%。为了解奶犊牛关节炎的致病原因,试验无菌采集犊牛肿胀未破溃的关节液(病料A)和犊牛肿胀已破溃的关节液(病料B),通过病原分离纯化、生化试验、致病性试验、16S rDNA基因PCR扩增后并测序鉴定的方法确定病原种类,再根据药敏试验筛选敏感药物进行临床治疗。结果表明:从A、B两份不同的病料中均分离到1株支原体,接种7日龄鸡胚均可引起胚体不同程度出血和萎缩等,经PCR扩增后并测序鉴定为同一种产碱支原体,命名为Ma-GXLA150127GJ1。从B病料中还分离到1株可使小鼠致死的病原菌,经鉴定为黏质沙雷氏菌。该2株分离株均对链霉素高度敏感,对罗红霉素、红霉素、林可霉素等耐药。通过使用高敏药物链霉素治疗,病牛全部痊愈。说明引起本次奶犊牛关节炎的原发病原为产碱支原体,黏质沙雷氏菌是关节破溃继发感染的病原。

关键词：奶犊牛关节炎产碱支原体黏质沙雷氏菌原发感染继发感染

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