检索结果-内蒙古大学图书馆

动物医学进展 2013年第12期34卷 1-5页

作者：罗思思谢芝勋刘加波陈敏玫杨进业邓显文谢志勤庞耀珊谢丽基范晴广西壮族自治区兽医研究所广西畜禽疫苗新技术重点实验室广西南宁530001 广西壮族自治区疾病控制中心广西南宁530028

根据H7N9亚型禽流感病毒(AIV)HA基因和NA基因的保守序列,分别设计特异性引物和不同荧光基团标记的TaqMan探针。通过优化反应条件,建立了H7N9亚型AIV的双重实时荧光定量RTPCR检测方法。结果显示,该法检测H7N9亚型AIV的下限为102copies/... 详细信息

根据H7N9亚型禽流感病毒(AIV)HA基因和NA基因的保守序列,分别设计特异性引物和不同荧光基团标记的TaqMan探针。通过优化反应条件,建立了H7N9亚型AIV的双重实时荧光定量RTPCR检测方法。结果显示,该法检测H7N9亚型AIV的下限为102copies/μL,批内重复和批间重复变异系数均小于3%。本研究建立的H7N9亚型AIV双重实时荧光定量RT-PCR方法,具有快速、特异和敏感的优点,可为H7N9亚型AIV的有效防控提供技术支撑。

关键词：禽流感病毒 H7N9 实时荧光定量RT-PCR

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黄藤素研究进展

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中国畜牧兽医 2014年第5期41卷 267-271页

作者：赵武陆荣宝刘伟银慧慧覃振华孙建华广西壮族自治区兽医研究所广西畜禽疫苗新技术重点实验室广西南宁530001 广西壮族自治区动物卫生监督所广西南宁530001

黄藤素是中国自行研制的纯天然植物药,主要用于治疗妇科炎症、外科感染、菌痢、肠炎、呼吸道及泌尿道感染、眼结膜炎等。作者就近年来黄藤素的提取及人工合成研究、检测方法、药理作用进行综述,以期为黄藤素作为新兽药的开发利用提供参考。

关键词：黄藤素巴马汀研究进展

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H5N1亚型AIVHA抗原表位的高效表达及其抗原活性分析

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基因组学与应用生物学 2012年第2期31卷 109-116页

作者：庞耀珊谢芝勋谢丽基邓显文谢志勤刘加波谢体三广西壮族自治区兽医研究所广西畜禽疫苗新技术重点实验室南宁530001 南宁市蓝光生物技术有限公司南宁530007

血凝素(hemagglutinin,HA)蛋白是禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)的一个重要表面抗原性蛋白,在疾病诊断和防治上有重要意义。本研究为了探讨一种更为简便有效的HA重组蛋白表达途径,利用生物信息学软件,对H5N1亚型AIVHA基因编码... 详细信息

血凝素(hemagglutinin,HA)蛋白是禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)的一个重要表面抗原性蛋白,在疾病诊断和防治上有重要意义。本研究为了探讨一种更为简便有效的HA重组蛋白表达途径,利用生物信息学软件,对H5N1亚型AIVHA基因编码的氨基酸序列进行分析,在分析其在大肠杆菌中的密码子偏好性、稀有密码子分布情况及有关蛋白的抗原性等重要特性后,构建了HA抗原表位重组表达质粒pET-32a(+)-HA。经测试,该重组质粒在1mmol/LIPTG诱导剂作用下诱导过夜,能在大肠杆菌Rosetta-gami B(DE3)中高效表达,并得到48.1kD大小的目的重组表达蛋白。重组蛋白用6×His-tagged protein纯化试剂盒纯化后,与福氏佐剂等量混合制备成抗原,以200μg/鸡的剂量皮下注射2月龄SPF鸡3次,采血分离血清。Western-Blot试验结果表明,该重组表达蛋白能分别与所制备的高免鸡血清及H5N1亚型AIV阳性血清发生特异性反应,在硝酸纤维素膜上出现特异性杂交带。说明本试验研究的HA抗原重组表达蛋白具有良好的免疫原性和反应原性,保留了HA蛋白的抗原活性,提示该重组蛋白在H5亚型AIV的防治技术研究中具有重要的实际应用价值。

关键词：禽流感病毒(AIV) H5N1亚型抗原表位表达

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黄藤素对铜绿假单胞菌QS毒力因子的影响

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黑龙江畜牧兽医 2017年第1期 215-217页

作者：孟菲刘伟韦晓洁银慧慧赵武覃振华姜源明孙建华广西壮族自治区兽医研究所/广西畜禽疫苗新技术重点实验室南宁530001 广西大学动物科学技术学院南宁530004

为了研究黄藤素对铜绿假单胞菌群体感应系统中毒力因子表达的影响,试验使用亚抑菌浓度的黄藤素(6.25×10^(-2)g/m L、3.13×10^(-2)g/m L)作用于铜绿假单胞菌,并测定亚抑菌浓度的黄藤素对铜绿假单胞菌生长曲线、外毒素A、绿脓... 详细信息

为了研究黄藤素对铜绿假单胞菌群体感应系统中毒力因子表达的影响,试验使用亚抑菌浓度的黄藤素(6.25×10^(-2)g/m L、3.13×10^(-2)g/m L)作用于铜绿假单胞菌,并测定亚抑菌浓度的黄藤素对铜绿假单胞菌生长曲线、外毒素A、绿脓菌素、弹性蛋白酶、蛋白水解酶的影响。结果表明:在亚抑菌浓度条件下,黄藤素对铜绿假单胞菌的生长均无明显影响,但能明显下调铜绿假单胞菌群体感应系统中外毒素A、绿脓菌素、弹性蛋白酶、蛋白水解酶的表达。说明黄藤素能够通过影响铜绿假单胞菌群体感应系统中毒力因子的表达来影响铜绿假单胞菌生物膜的形成,发挥抗病抑菌的作用。

关键词：黄藤素铜绿假单胞菌外毒素A 绿脓菌素弹性蛋白酶蛋白水解酶

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缓释定向释放型IgY微胶囊的制备及其效果评价

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中国生物制品学杂志 2016年第2期29卷 181-187页

作者：陈凤莲刘文娟谢江张健黄红梅凌丹吴健敏广西壮族自治区兽医研究所广西畜禽疫苗新技术重点实验室广西南宁530001 武鸣县动物疫病预防控制中心广西武鸣530109

目的制备缓释定向释放型IgY微胶囊,并评价其效果。方法采用喷雾干燥法,以明胶、海藻酸钠为微胶囊壁材,制备抗仔猪病原性腹泻IgY微胶囊。以IgY的活性、包封率、体外释放性能及稳定性为评价指标,通过单因素分析和L_9（3_4）正交试验,分别... 详细信息

目的制备缓释定向释放型IgY微胶囊,并评价其效果。方法采用喷雾干燥法,以明胶、海藻酸钠为微胶囊壁材,制备抗仔猪病原性腹泻IgY微胶囊。以IgY的活性、包封率、体外释放性能及稳定性为评价指标,通过单因素分析和L_9（3_4）正交试验,分别从成囊材料的配比对微胶囊性能的影响、制备微胶囊成囊乳化液的稳定性影响因素以及喷雾干燥条件3方面对IgY微胶囊制备条件进行优化,并评价微胶囊的IgY活性、包封率、在人工胃液（simulated gastric fluid,SGF）和人工肠液（simulated intestinal fluid,SIF）中的缓释效果及稳定性。结果筛选出的制备微胶囊的最佳工艺条件为：明胶浓度4%、海藻酸钠浓度0.75%,按IgY与明胶-海藻酸钠质量比为3∶4加入IgY,乳化后按进风温度170℃,进料速度10 ml/min,干燥时间10 s,出口温度70℃进行喷雾干燥。在此工艺条件下制备的IgY微胶囊包封率为77.4%,活性保持在85%以上;在SGF中2 h释放率为8.6%,在SIF中4 h释放率为81.2%;90℃加热30 s仍可保持50%以上的活性,常温（25~30℃）放置10个月活性仍保持在90%以上,4℃保存10个月活性仅下降5%。结论本工艺制备的明胶-海藻酸钠IgY微胶囊具有生物活性高,稳定性强的特点,且对特异性IgY具有缓释和靶向作用。

关键词：免疫球蛋白Y 微胶囊缓释制剂制备工艺效果评价

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鸡白细胞介素1β、白细胞介素18、肿瘤坏死因子α基因荧光定量PCR检测方法的建立

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中国畜牧兽医 2013年第9期40卷 90-95页

作者：张昆丽谢芝勋滕丽琼刘加波谢丽基庞耀珊范晴邓显文罗思思谢志勤广西大学动物科学技术学院广西南宁530004 广西壮族自治区兽医研究所广西畜禽疫苗新技术重点实验室广西南宁530001

本研究根据GenBank上公布的鸡白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素18(IL-18)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)基因序列,在保守区域各设计合成1对特异性引物,以鸡胚成纤维细胞的cDNA为模板构建重组阳性质粒。采用梯... 详细信息

本研究根据GenBank上公布的鸡白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素18(IL-18)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)基因序列,在保守区域各设计合成1对特异性引物,以鸡胚成纤维细胞的cDNA为模板构建重组阳性质粒。采用梯度稀释重组标准品质粒DNA,构建SYBR GreenⅠ染料法荧光定量PCR标准曲线。结果显示,各基因的熔解曲线均呈单一熔解峰,IL-1β、IL-18、TNF-α和GAPDH的扩增效率分别是101.2%、95.6%、100.1%和98.2%,相关系数分别为0.9996、0.9998、0.9957和0.9989。敏感性试验结果表明,该检测方法在35个Ct值内可检测到100个模板拷贝数;重复性试验结果表明,组内变异系数均小于1.4%。本研究建立的实时荧光定量PCR检测方法可用于鸡IL-1β、IL-18和TNF-αmRNA的检测,为导致免疫抑制性疾病病毒感染宿主细胞后细胞因子表达的定量分析奠定基础。

关键词：鸡白细胞介素1β 白细胞介素18 肿瘤坏死因子α 实时荧光定量PCR

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禽流感病毒 H9和 N2基因双重 RT-PCR 方法的建立

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动物医学进展 2015年第1期 11-14页

作者：徐倩谢芝勋谢丽基邓显文谢志勤罗思思黄莉黄娇玲曾婷婷广西大学动物科技学院广西南宁530001 广西壮族自治区兽医研究所广西畜禽疫苗新技术重点实验室广西南宁530001

为建立简便快速检测H9及N2亚型禽流感病毒（AIV ）的方法，根据AIV H9和N2基因序列，分别设计了2对针对H9亚型AIV的HA基因和N2亚型AIV的NA基因的引物，建立了 H9亚型和N2亚型AIV双重RT‐PCR检测方法。对H9N2亚型AIV的RNA模板进行RT‐PC... 详细信息

为建立简便快速检测H9及N2亚型禽流感病毒（AIV ）的方法，根据AIV H9和N2基因序列，分别设计了2对针对H9亚型AIV的HA基因和N2亚型AIV的NA基因的引物，建立了 H9亚型和N2亚型AIV双重RT‐PCR检测方法。对H9N2亚型AIV的RNA模板进行RT‐PCR扩增，可得到545 bp H9基因条带和341 bp N2基因的特异性条带；对非H9亚型的N2亚型AIV进行扩增，则仅出现1个特异性扩增条带，即341 bp N2基因条带；对非H9或N2亚型AIV和其他禽呼吸道病原体进行PCR扩增，结果均为阴性；结果表明该双重RT‐PCR最低能检出100 fg H9N2亚型AIV的cDNA模板。

关键词：禽流感病毒 H9亚型 N2亚型双重逆转录聚合酶链式反应

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鸭副黏病毒和鸭圆环病毒二重荧光定量PCR检测方法的建立

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中国畜牧兽医 2013年第4期40卷 26-31页

作者：许宗丽谢芝勋谢丽基刘加波谢志勤庞耀珊邓显文范晴广西大学动物科学技术学院广西南宁530004 广西壮族自治区兽医研究所广西畜禽疫苗新技术重点实验室广西南宁530001

根据鸭副黏病毒(DPMV)和鸭圆环病毒(DuCV)保守基因序列,设计了2对针对鸭副黏病毒和鸭圆环病毒的特异性引物和2条不同荧光基团标记的TaqMan探针,建立了鸭副黏病毒和鸭圆环病毒的二重荧光定量PCR检测方法。该方法敏感性好,对鸭副黏病毒和... 详细信息

根据鸭副黏病毒(DPMV)和鸭圆环病毒(DuCV)保守基因序列,设计了2对针对鸭副黏病毒和鸭圆环病毒的特异性引物和2条不同荧光基团标记的TaqMan探针,建立了鸭副黏病毒和鸭圆环病毒的二重荧光定量PCR检测方法。该方法敏感性好,对鸭副黏病毒和鸭圆环病毒的检测敏感性分别达到160和140个拷贝数;该方法特异性强,对鸭肝炎病毒、番鸭细小病毒、鸭瘟病毒和H9型禽流感病毒等病原体的检测全为阴性;应用该方法对118份临床病料进行检测,结果检出鸭副黏病毒和鸭圆环病毒阳性感染率分别为0.85%和8.47%,无混合感染。本试验建立的二重荧光定量PCR具有快速、特异、敏感和重复性好等优点,适用于鸭副黏病毒和鸭圆环病毒的快速诊断和监测。

关键词：鸭副黏病毒鸭圆环病毒二重荧光定量PCR

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禽流感病毒H9和N2亚型双重RT-PCR检测方法的建立

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动物医学进展 2015年第1期36卷 11-15页

为建立简便快速检测H9及N2亚型禽流感病毒(AIV)的方法,根据AIV H9亚型和N2亚型基因序列,分别设计了2对针对H9亚型AIV的HA基因和N2亚型AIV的NA基因的引物,建立了H9亚型和N2亚型AIV双重RT-PCR检测方法。对H9N2亚型AIV的RNA模板进行RT-PCR... 详细信息

为建立简便快速检测H9及N2亚型禽流感病毒(AIV)的方法,根据AIV H9亚型和N2亚型基因序列,分别设计了2对针对H9亚型AIV的HA基因和N2亚型AIV的NA基因的引物,建立了H9亚型和N2亚型AIV双重RT-PCR检测方法。对H9N2亚型AIV的RNA模板进行RT-PCR扩增,可得到545bp H9基因特异性条带和341bp N2基因的特异性条带;对非H9亚型的N2亚型AIV进行扩增,则仅出现1个特异性扩增条带,即341bp N2基因条带;对非H9或N2亚型AIV和其他禽呼吸道病原体进行PCR扩增,结果均为阴性。结果表明该双重RT-PCR最低能检出100fg H9N2亚型AIV的cDNA模板。

关键词：禽流感病毒 H9亚型 N2亚型双重逆转录-聚合酶链反应

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禽流感病毒H9N2亚型三重PCR检测方法的建立

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中国畜牧兽医 2014年第11期41卷 58-62页

作者：徐倩谢芝勋谢丽基罗思思黄莉黄娇玲曾婷婷谢志勤邓显文广西大学动物科技学院广西南宁530004 广西壮族自治区兽医研究所广西畜禽疫苗新技术重点实验室广西南宁530001

为建立简便快速检测禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)并同时区分出H9、N2亚型的方法,本试验根据基因库中H9亚型AIV的HA基因、N2亚型AIV的NA基因及AIV的M基因序列,分别设计了3对针对这3种基因保守序列的引物,建立了AIV H9N2亚型的... 详细信息

为建立简便快速检测禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)并同时区分出H9、N2亚型的方法,本试验根据基因库中H9亚型AIV的HA基因、N2亚型AIV的NA基因及AIV的M基因序列,分别设计了3对针对这3种基因保守序列的引物,建立了AIV H9N2亚型的三重PCR检测方法。应用该方法对H9N2亚型AIV模板进行PCR扩增,可得到3条与试验设计相符的目的条带,分别为313bp(HA基因)、451bp(NA基因)和667bp(M基因);对非H9亚型的N2亚型AIV模板进行扩增,出现2条特异性扩增条带,即451bp(NA基因)和667bp(M基因);对非H9、N2亚型AIV模板进行扩增则只出现一条目的条带,即667bp(M基因);对其他禽呼吸道病原体进行PCR扩增,结果均为阴性。敏感性试验结果显示此三重PCR方法最低检出限为10-2 ng/μL。应用所建立的三重PCR方法对120份临床病料进行检测的结果与病毒分离鉴定结果一致。各项试验结果均表明,该方法对于禽流感病毒尤其是H9、N2亚型禽流感病毒的检测具有快捷、特异、灵敏的特点。

关键词：禽流感病毒 H9亚型 N2亚型 M基因三重PCR

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