检索结果-内蒙古大学图书馆

基因组学与应用生物学 2017年第2期36卷 550-556页

作者：王焕景赵秀玲濮黎萍张鹏飞张明广西大学动物繁殖研究所亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室南宁530004

本研究克隆了水牛BCL2-like 10(BCL2L10)基因序列,并用生物信息学技术分析了该序列的同源性、系统进化树、蛋白的理化性质以及高级结构。同时利用免疫荧光染色的方法检测了BCL2L10蛋白在水牛卵母细胞成熟前后的表达情况。结果表明,应用R... 详细信息

本研究克隆了水牛BCL2-like 10(BCL2L10)基因序列,并用生物信息学技术分析了该序列的同源性、系统进化树、蛋白的理化性质以及高级结构。同时利用免疫荧光染色的方法检测了BCL2L10蛋白在水牛卵母细胞成熟前后的表达情况。结果表明,应用RT-PCR技术克隆得到的水牛BCL2L10基因序列全长600 bp,其中编码区长度为558 bp,共编码185个氨基酸。对该序列进行对比分析发现,水牛BCL2L10基因的核苷酸序列与野牛、牛、绵羊、小鼠、大鼠、野猪的同源性分别为99%、98%、96%、84%、81%、75%。生物进化树分析显示,水牛BCL2L10基因与牦牛、野牛的亲缘关系最近。生物信息学分析得到BCL2L10蛋白的分子量为21.6 k D,理论等电点为9.54。功能结构域预测显示BCL2L10蛋白属于BCL-2家族成员,参与细胞凋亡调控过程。免疫荧光染色结果发现,BCL2L10蛋白在水牛卵母细胞成熟过程中均有表达。

关键词：水牛 BCL2L10 序列分析表达模式

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水牛睾丸曲精细管蛋白质组双向电泳方法的建立及优化

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基因组学与应用生物学 2019年第4期38卷 1474-1479页

作者：张鹏飞黄愉淋耿双双陈富美付强黄凤玲陆阳清张明广西大学动物繁殖研究所亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室南宁530004

建立并优化了沼泽型水牛睾丸曲精细管蛋白质分离的双向电泳体系,为后续水牛睾丸曲精细管蛋白质表达谱的鉴定和研究奠定基础。比较不同IPG胶条(线性与非线性)、胶条pH范围和蛋白质上样量这三个参数对双向电泳结果的影响。结果显示,采用... 详细信息

建立并优化了沼泽型水牛睾丸曲精细管蛋白质分离的双向电泳体系,为后续水牛睾丸曲精细管蛋白质表达谱的鉴定和研究奠定基础。比较不同IPG胶条(线性与非线性)、胶条pH范围和蛋白质上样量这三个参数对双向电泳结果的影响。结果显示,采用上样量350μg的曲精细管总蛋白、24 cm且pH值4～7的线性IPG胶条能够更好地分离水牛睾丸曲精细管蛋白质,获得质量较好且分辨率较高的双向电泳图谱,得到大约486个蛋白点。双向凝胶电泳技术能够对水牛睾丸曲精细管蛋白质进行有效分离,并通过对双向电泳体系的优化可获得蛋白质点清晰且分辨率更高的双向电泳图谱。

关键词：水牛睾丸曲精细管蛋白质组双向电泳

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小鼠Iqcf5基因干扰载体的构建及筛选

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基因组学与应用生物学 2016年第11期35卷 2989-2995页

作者：赵秀玲潘宏濮黎萍张鹏飞王焕景张明广西大学动物繁殖研究所亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室南宁530004

本试验旨在构建4条针对Iqcf5(IQ motif containing F5)基因的sh RNA干扰载体,并进行有效干扰靶点的筛选,为以后进一步对Iqcf5基因功能的研究奠定基础。提取成年小鼠睾丸组织的RNA,进行反转录,扩增Iqcf5基因的编码区,并将其克隆到真核表... 详细信息

本试验旨在构建4条针对Iqcf5(IQ motif containing F5)基因的sh RNA干扰载体,并进行有效干扰靶点的筛选,为以后进一步对Iqcf5基因功能的研究奠定基础。提取成年小鼠睾丸组织的RNA,进行反转录,扩增Iqcf5基因的编码区,并将其克隆到真核表达载体HP362-PBL-PBR-CAG-m Cherry-WPRE上。设计针对Iqcf5基因的sh RNA序列,应用基因重组技术插入到p GPU6/GFP/Neo载体中,将其与Iqcf5基因的真核表达载体共转染293T细胞,进行有效干扰靶点的筛选。构建了Iqcf5基因的真核表达载体和4条针对目的基因Iqcf5的sh RNA,分别是Iqcf5-107、Iqcf5-257、Iqcf5-425和Iqcf5-500和一个阴性对照质粒,经测序鉴定正确,共转染293T细胞,经过筛选Iqcf5-257和Iqcf5-500在293T细胞中对Iqcf5基因表达的干扰效果最佳。成功构建了Iqcf5基因的真核表达载体及其sh RNA干扰载体,并在工具细胞293T中进行了有效干扰靶点的筛选,这为下一步对Iqcf5基因功能的研究奠定了基础。

关键词： shRNA 钙调蛋白 RNAi Iqcf5基因

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精卵融合过程中关键蛋白的研究进展

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基因组学与应用生物学 2016年第11期35卷 3028-3033页

作者：王焕景陈富美濮黎萍赵秀玲黄愉淋张鹏飞张明广西大学亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室动物繁殖研究所南宁530004

受精作用是有性生殖过程中的终极事件,精子与卵子间的融合过程是其中最关键的步骤。单倍体的精子和卵子相互识别和融合形成一个双倍有机体。尽管其潜在的分子机制还不是很清楚,但是最近的基因敲除试验已经证实精卵融合过程中需要3个必... 详细信息

受精作用是有性生殖过程中的终极事件,精子与卵子间的融合过程是其中最关键的步骤。单倍体的精子和卵子相互识别和融合形成一个双倍有机体。尽管其潜在的分子机制还不是很清楚,但是最近的基因敲除试验已经证实精卵融合过程中需要3个必不可少的因子:位于卵母细胞上的CD9蛋白,精子上的Izumo1蛋白及其在卵母细胞上的受体蛋白Juno。缺乏其中的任何一种蛋白分子将会导致精卵融合机制紊乱。综述重点介绍了这3种精卵融合关键蛋白的最新研究进展。

关键词：精卵融合 CD9 Izumo1 Juno

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水牛胎儿成纤维细胞电转染条件的优化

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中国生物工程杂志 2013年第9期33卷 59-65页

作者：罗婵任艳萍龚云杨素芳阮秋燕管晓梅蒋建荣石德顺广西大学动物繁殖研究所亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室南宁530004

高活力的转基因细胞的制备是转基因克隆动物研究的关键环节。为了高效制备转基因细胞,外源基因转入水牛胎儿成纤维细胞的条件需要优化。采用组织块贴壁法分离获得水牛胎儿成纤维细胞,经染色体核型分析表明获得的细胞具有正常的生物学功... 详细信息

高活力的转基因细胞的制备是转基因克隆动物研究的关键环节。为了高效制备转基因细胞,外源基因转入水牛胎儿成纤维细胞的条件需要优化。采用组织块贴壁法分离获得水牛胎儿成纤维细胞,经染色体核型分析表明获得的细胞具有正常的生物学功能,可用于细胞转染。采用电穿孔法将载体EGFP-N1导入水牛胎儿成纤维细胞,分别比较不同电压(200V,250V,300V,350V)、不同电击时间(5ms,10ms,15ms)和不同细胞代数(第3代、第5代、第10代)的转染效率,并利用优化的电转染条件将乳腺特异性表达的水牛促乳素(PRL)基因导入水牛胎儿成纤维细胞,G418筛选获单克隆并进行鉴定。结果发现电压为300 V,脉冲时间为10 ms时,细胞GFP阳性率为35.5%,转染效率较高。随传代次数的增加,细胞的转染效率下降;传至第10代的细胞转染效率显著低于第3代的水牛胎儿成纤维细胞(30%VS 35.5%,P<0.05)。运用优化条件转染、筛选可获得转PRL单克隆细胞,转染效率为2.1×10-5(84/4×106)。挑取单克隆细胞扩大培养,经PCR鉴定和核型分析,证实单克隆稳定整合促乳素基因,并且核型分析正常,可作为核供体,用于生产水牛转基因克隆胚胎。为采用体细胞克隆技术生产水牛转基因胚胎奠定了基础。

关键词：水牛胎儿成纤维细胞电穿孔转染效率促乳素基因转基因细胞

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水牛卵泡液差异蛋白质双向电泳方法的建立及质谱分析

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畜牧兽医学报 2013年第8期44卷 1244-1250页

作者：黄愉淋黄德伦官俊良潘秋庄付强黄凤玲张明卢克焕广西大学动物繁殖研究所亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室南宁530004

旨在研究沼泽型水牛成熟前后卵泡内差异表达蛋白质的变化规律。采用双向凝胶电泳技术分离成熟卵泡液和未成熟卵泡液总蛋白质,建立和优化了卵泡液的双向电泳体系,并使用质谱鉴定差异表达蛋白点。结果显示,丙酮沉淀法处理得到的总蛋白质... 详细信息

旨在研究沼泽型水牛成熟前后卵泡内差异表达蛋白质的变化规律。采用双向凝胶电泳技术分离成熟卵泡液和未成熟卵泡液总蛋白质,建立和优化了卵泡液的双向电泳体系,并使用质谱鉴定差异表达蛋白点。结果显示,丙酮沉淀法处理得到的总蛋白质样品后,在24cm(pH 4～7)胶条且上样量350μg时得到分辨率较好的双向电泳图谱。软件分析得到11个差异蛋白点,以成熟卵泡液作为对照,5个蛋白点表达上调,3个蛋白点表达下调,1个蛋白点缺失,2个蛋白点在未成熟卵泡液中特异性表达。质谱成功鉴定出4个蛋白质:过氧化物酶-2、醛糖还原酶、牛纤维蛋白原的晶体结构、转甲状腺素蛋白。该研究建立了良好的卵泡液双向电泳体系,分析并鉴定一批水牛卵泡液差异蛋白质,对于研究水牛卵母细胞的发育微环境和成熟机制提供了新的研究线索。

关键词：水牛卵泡液蛋白质组双向电泳质谱鉴定

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基于LC-MS/MS策略建立水牛卵母细胞蛋白质表达谱的方法研究

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基因组学与应用生物学 2015年第5期34卷 967-971页

作者：陈富美付强黄德伦胡炜张明广西大学动物繁殖研究所亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室南宁530004

本研究采用了LC-MS/MS策略对如何建立水牛卵母细胞蛋白质表达谱进行了探讨,为后续研究不同时期的水牛卵母细胞和早期胚胎卵裂分化过程中蛋白质组变化建立研究平台。本实验收集水牛GV期和MⅡ期卵母细胞各500枚,去除透明带后将两个时期的... 详细信息

本研究采用了LC-MS/MS策略对如何建立水牛卵母细胞蛋白质表达谱进行了探讨,为后续研究不同时期的水牛卵母细胞和早期胚胎卵裂分化过程中蛋白质组变化建立研究平台。本实验收集水牛GV期和MⅡ期卵母细胞各500枚,去除透明带后将两个时期的细胞混合后提取蛋白质,蛋白质酶解后通过强阳离子交换色谱预分离多肽混合物,预分离后的馏分采用EASY-n LC结合LTQ-Orbitrap质谱鉴定蛋白质表达谱。通过SEQUEST检索,共鉴定出574种蛋白质,生物信息学分析表明,有明确分子功能相关的蛋白质有487种,与组成细胞成分相关的蛋白质有476种,与生物学进程相关的蛋白质有490种,初步建立了一套获得水牛卵母细胞蛋白质表达谱的方法。结果表明建立的LC-MS/MS策略方法适合于水牛卵母细胞蛋白质组学的研究,卵母细胞蛋白质表达谱数据为今后研究水牛不同时期的卵母细胞和早期胚胎卵裂分化过程中蛋白质组学奠定了方法与理论基础。

关键词：水牛卵母细胞蛋白质表达谱 LC-MS/MS LTQ-Orbitrap

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磷酸化蛋白质组学在哺乳动物精子研究中的应用

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基因组学与应用生物学 2017年第7期36卷 2862-2866页

作者：张鹏飞濮黎萍王焕景赵秀玲陈富美陆阳清张明广西大学动物繁殖研究所亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室南宁530004

蛋白质磷酸化是蛋白质翻译后最普遍、最重要的修饰之一,是生物体内一种普通的调节方式,参与调控细胞增殖、信号转导、新陈代谢、肿瘤发生等分子机能,并在精子信号转导和酶合成表达的过程中起重要作用。对精子磷酸化蛋白的研究有助于深... 详细信息

蛋白质磷酸化是蛋白质翻译后最普遍、最重要的修饰之一,是生物体内一种普通的调节方式,参与调控细胞增殖、信号转导、新陈代谢、肿瘤发生等分子机能,并在精子信号转导和酶合成表达的过程中起重要作用。对精子磷酸化蛋白的研究有助于深入了解精子发生、运输、获能,以及精卵识别的调控机理。因此,在磷酸化蛋白组学的层面上研究精子的各项机能可以为雄性不育更深层的研究提供一条新的道路。

关键词：哺乳动物精子磷酸化蛋白质组学

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CRISPR/Cas系统的概述及其在干扰基因表达研究中的应用及存在的问题

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基因组学与应用生物学 2016年第3期35卷 672-676页

作者：赵秀玲黄愉淋潘宏张明广西大学动物繁殖研究所亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室南宁530004

CRISPR(clustered regularly interspaced short palindromic repeats)/Cas系统是源于原核生物的一种获得性免疫防御系统,与Cas蛋白协同作用保护细菌等免受病毒或者质粒的二次感染,广泛存在于细菌和古细菌中。科学家们通过改造CRISPR/Ca... 详细信息

CRISPR(clustered regularly interspaced short palindromic repeats)/Cas系统是源于原核生物的一种获得性免疫防御系统,与Cas蛋白协同作用保护细菌等免受病毒或者质粒的二次感染,广泛存在于细菌和古细菌中。科学家们通过改造CRISPR/Cas系统,使其成为一种新型的基因编辑工具。最近,科学家们又通过突变Cas9这个核酸酶的切割活性区域,使其成仍可结合到特定的核酸序列上,但却失去核酸切割活性的d Cas9(dead Cas9)蛋白,利用这个空间位阻效应达到抑制基因表达的效果,实现基因的沉默。这就是利用CRISPR系统干扰基因表达基本原理。本文主要综述CRISPR/Cas系统的结构、种类、作用机制及其在干扰基因表达中的应用和存在的问题。

关键词： CRISPR/Cas9 干扰 dCas9 基因表达

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Lyzl1表达特性及基因敲除小鼠模型的建立

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基因组学与应用生物学 2019年第6期38卷 2450-2455页

作者：赵秀玲潘宏陈东荣张明广西大学动物繁殖研究所亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室

本试验旨在对Lyzl1在雄性小鼠的生殖系统中的表达特性进行初步研究,通过CRISPR/Cas9技术获得了Lyzl1敲除的小鼠模型,从而为进一步确定Lyzl1对雄性小鼠生殖功能的影响奠定基础。利用Real time PCR和Western blotting检测Lyzl1的表达情况... 详细信息

本试验旨在对Lyzl1在雄性小鼠的生殖系统中的表达特性进行初步研究,通过CRISPR/Cas9技术获得了Lyzl1敲除的小鼠模型,从而为进一步确定Lyzl1对雄性小鼠生殖功能的影响奠定基础。利用Real time PCR和Western blotting检测Lyzl1的表达情况。免疫组化检测Lyzl1基因在睾丸和附睾中的定位情况。免疫荧光检测Lyzl1在精子上的定位情况,为预测该基因功能奠定基础。利用CRISPR/Cas9系统,体外转录cas9和sg RNA,把cas9 mRNA和sg RNA按照一定的比例进行受精卵注射和胚胎移植,获得F0代Lyzl1突变小鼠,经过连续交配至F2代获得该基因敲除的纯合小鼠,以期进一步研究其与小鼠生殖的关系。为研究该基因功能提供依据。

关键词： CRISPR/Cas9 Lyzl1 Lyzl1敲除的小鼠模型

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