检索结果-内蒙古大学图书馆

医学研究杂志 2025年第1期54卷 79-86页

作者：曾曌月赵振凯蒋佳男李枫农蔚霞葛盈盈谢小薰张庆梅罗彬广西医科大学组织学与胚胎学教研室南宁530021 广西高校区域性疾病基础研究重点实验室南宁530021

目的探究癌-睾丸抗原顶体素结合蛋白(acrosin binding protein,ACRBP)在肝癌中的表达及其与免疫浸润的相关性。方法首先利用UALCAN(university of alabama at birmingham cancer data analysis portal,UALCAN)和HPA(human protein atlas,HPA)数据库分析肝癌和正常肝组织中ACRBP的mRNA和蛋白的表达情况。基于TCGA数据,采用TIMER(tumor immune estimation resource,TIMER)数据库、CIBERSOFT(cell-type identification by estimating relative subsets of rna transcripts,CIBERSORT)工具和TISIDB(an integrated repository portal for tumor-immune system interactions,TISIDB)数据库分析肝癌中ACRBP的表达与免疫细胞浸润及免疫调节基因的相关性。此外,还分离人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),与ACRBP表达下调的肝癌细胞共培养,通过ELISA(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测免疫分子的分泌,流式细胞术检测PBMC的凋亡情况。结果生物信息学分析显示,在肝癌组织中,ACRBP mRNA及蛋白表达均显著高于正常肝组织;ACRBP的mRNA表达与调节性T细胞(Treg细胞)浸润、免疫抑制分子和趋化因子等多种免疫调节基因呈正相关;与正常肝组织比较,ACRBP高表达的肝癌组织中浆细胞,γδT细胞,自然杀伤细胞(NK细胞)和M2型巨噬细胞浸润比例明显减少。在体外试验中,下调肝癌细胞中ACRBP的表达,发现PBMC分泌α肿瘤坏死因子、γ干扰素和白细胞介素2增加,PBMC的凋亡率有所增多。结论肝癌中ACRBP的表达与免疫细胞浸润相关,ACRBP参与免疫细胞调节而影响肿瘤微环境,为将来开发以ACRBP为靶标的免疫治疗提供了理论基础。

关键词：肝癌 ACRBP 癌睾丸抗原免疫浸润

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溶瘤新城疫病毒激活NK细胞诱导结直肠癌细胞焦亡的作用机制

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国际生物制品学杂志 2025年第2期48卷 67-74页

作者：孙桐吴醒李然梁莹樊晓晖广西医科大学基础医学院微生物学教研室南宁530021 广西高校区域性疾病基础研究重点实验室南宁530021

目的探讨溶瘤新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)激活的自然杀伤(natural killer,NK)细胞通过分泌颗粒酶A(granzyme A,GZMA)诱导结直肠癌细胞焦亡的作用机制,尤其是焦亡相关蛋白焦孔素B(gasdermin B,GSDMB)表达水平在其中的作用... 详细信息

目的探讨溶瘤新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)激活的自然杀伤(natural killer,NK)细胞通过分泌颗粒酶A(granzyme A,GZMA)诱导结直肠癌细胞焦亡的作用机制,尤其是焦亡相关蛋白焦孔素B(gasdermin B,GSDMB)表达水平在其中的作用。方法以不同浓度的NDV(NDV1、2、3:0.001、0.010、0.100血凝单位/mL)与NK细胞共培养16 h,同时设空白对照组(仅培养基)和无NDV刺激的NK细胞对照组。各组分别与GSDMB高表达的SW837和低表达的SW480结直肠癌细胞共孵育后,通过定量PCR和ELISA分别检测NK细胞中效应分子的基因表达及蛋白质分泌水平,通过细胞增殖-毒性和乳酸脱氢酶释放检测评价2种肿瘤细胞株的存活率及焦亡情况,通过细胞形态学观察和GSDMB切割的蛋白质印迹检测验证NK细胞介导的焦亡效应。结果定量qPCR和ELISA结果显示,NDV感染上调了NK细胞中GZMA、IFN-γ和穿孔素的基因表达及蛋白质分泌,NDV3刺激组的GZMA(t=6.70,P=0.003)和IFN-γ(t=13.66,P<0.001)分泌水平最高,且与无刺激对照的差异均有统计学意义。相比于与未刺激的NK细胞共孵育者,与激活的NK细胞共孵育后SW837细胞活力抑制(NDV3-NK效靶比=1、2:t=﹣10.17、﹣25.94,均P<0.001)、乳酸脱氢酶(NDV3-NK效靶比=1、2:t=13.70、9.75,均P<0.001)释放、N端GSDMB(NDV2-NK效靶比=1、2:t=6.80、3.07,均P<0.05)均增加,且差异有统计学意义。SW837细胞出现质膜气泡化及肿胀等焦亡特征,而SW480细胞虽出现活力抑制和细胞破坏,但焦亡表现不明显。结论NDV激活的NK细胞能通过分泌GZMA诱导结直肠癌细胞焦亡效应,尤其在GSDMB高表达的细胞中效果显著。

关键词：新城疫病毒焦亡结直肠肿瘤自然杀伤细胞颗粒酶A

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果糖通过促进糖酵解调控M1型巨噬细胞极化

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广西医科大学学报 2025年第2期42卷 168-173页

作者：王名鸿刘彧冰王新航李菡陈思宏张敏华彭阳陆彩玲唐深李习艺广西医科大学公共卫生学院南宁530021 广西医科大学基础医学院南宁530021 广西医科大学广西高校区域性疾病基础研究重点实验室南宁530021

目的:探讨果糖(Fru)对脂多糖(LPS)和干扰素γ(IFN-γ)诱导的M1型巨噬细胞极化过程的调控作用及可能机制。方法:实验分为M0组(THP-1细胞用100 nmol/L佛波酯刺激24 h)、M1组(M0组基础上用10 ng/mL LPS和20 ng/mL IFN-γ刺激48 h)、M1+5 mm... 详细信息

目的:探讨果糖(Fru)对脂多糖(LPS)和干扰素γ(IFN-γ)诱导的M1型巨噬细胞极化过程的调控作用及可能机制。方法:实验分为M0组(THP-1细胞用100 nmol/L佛波酯刺激24 h)、M1组(M0组基础上用10 ng/mL LPS和20 ng/mL IFN-γ刺激48 h)、M1+5 mmol/L Fru组(加入LPS和IFN-γ的同时加入5 mmol/L Fru刺激48 h)。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测M1型巨噬细胞极化标志物白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和环氧化物酶-2(COX-2)的mRNA表达;微量法酶活性试剂盒检测糖酵解限速酶己糖激酶(HK)、乳酸脱氢酶(LDH)活性;活性氧(ROS)试剂盒检测细胞内ROS水平;中性红吞噬实验检测细胞吞噬能力;刃天青法检测线粒体呼吸链代谢酶活性;三磷酸腺苷(ATP)检测试剂盒检测ATP含量。结果:与M0组比较,M1组IL-1β、IL-6、TNF-α和COX-2 mRNA表达增加,HK、LDH活性升高,线粒体呼吸链代谢酶活性和ATP含量降低,细胞内ROS生成增加,吞噬能力增强(均P<0.05)。与M1组比较,M1+5 mmol/L Fru组IL-1β、IL-6、TNF-α和COX-2 mRNA表达水平升高,HK、LDH活性增加,线粒体呼吸链代谢酶活性和ATP含量降低,细胞内ROS生成增加,吞噬能力降低(均P<0.05)。结论:Fru可能通过促进M1型巨噬细胞糖酵解,降低氧化磷酸化水平,上调M1型巨噬细胞极化相关标志物的表达,促进ROS产生,下调巨噬细胞吞噬能力,从而调控M1型巨噬细胞极化。

关键词：果糖 M1型巨噬细胞糖酵解极化吞噬能力

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基于网络药理学和细胞验证探讨美迪紫檀素通过p53依赖性周期调控通路抑制肝癌细胞增殖的作用机制

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北京中医药大学学报 2024年第12期47卷 1724-1734页

作者：黎永卓颜瑾黄春萍肖诚周静广西医科大学基础医学院生理学教研室南宁530021 中日友好医院临床医学研究所广西高校区域性疾病基础研究重点实验室(广西医科大学)

目的探讨美迪紫檀素对肝癌细胞增殖的抑制作用及其分子机制。方法采用人肝癌HepG2、HCC-M和Hep3B等细胞株,通过倒置显微镜观察50μmol/L美迪紫檀素对细胞形态的影响,采用平板克隆形成实验评估12.5、25、50μmol/L美迪紫檀素对细胞增殖... 详细信息

目的探讨美迪紫檀素对肝癌细胞增殖的抑制作用及其分子机制。方法采用人肝癌HepG2、HCC-M和Hep3B等细胞株,通过倒置显微镜观察50μmol/L美迪紫檀素对细胞形态的影响,采用平板克隆形成实验评估12.5、25、50μmol/L美迪紫檀素对细胞增殖能力的作用;利用Swiss Target Prediction数据库预测美迪紫檀素的作用靶点,应用STRING和Cytoscape工具构建蛋白质互作网络,通过基因本体(GO)功能和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析探索美迪紫檀素的潜在作用机制;利用流式细胞术检测细胞周期,蛋白质印迹法检测细胞周期相关蛋白表达水平,通过对比美迪紫檀素在p53表达不同的细胞株上的效应,验证p53在美迪紫檀素诱导肝癌细胞周期阻滞中的作用。结果不同肝癌细胞经50μmol/L美迪紫檀素处理后,均可见细胞膜完整性被破坏、细胞核皱缩、细胞间连接消失等形态学变化;与空白对照组比较,在不同浓度下(12.5、25、50μmol/L)均可见细胞数量减少,平板克隆形成实验也提示美迪紫檀素可抑制肝癌细胞的克隆形成数量(P<0.05)。蛋白质互作网络构建和功能富集分析结果,美迪紫檀素作用靶点富集于细胞周期调控信号通路;细胞周期流式结果,美迪紫檀素使HepG2细胞周期阻滞在G2/M期,并伴随着p53蛋白的积累和周期调节蛋白cdc2的下调(P<0.05);然而美迪紫檀素诱导G2/M期,细胞周期阻滞的作用可被p53抑制剂逆转,与此同时,美迪紫檀素无法在Hep3B(p53缺失型)和p53敲除的HCT116细胞中诱导细胞发生G2/M期阻滞,一致表明p53在美迪紫檀素诱导G2/M期周期阻滞的关键作用。结论美迪紫檀素可抑制肝癌细胞增殖,其抗癌效应与p53依赖性G2/M期细胞周期阻滞密切有关。

关键词：美迪紫檀素细胞周期 p53 肝癌细胞

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粪类圆线虫丝氨酸蛋白酶抑制剂1蛋白生物信息学分析及原核表达

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中国血吸虫病防治杂志 2023年第3期35卷 244-250页

作者：韩雪闭香连赵红英石云良温晴吕佳音孙嘉月傅晓茵刘登宇广西医科大学寄生虫学教研室、广西高校区域性疾病基础研究重点实验室广西南宁530021 广西壮族自治区人民医院检验科广西南宁530021

目的采用生物信息学方法预测粪类圆线虫丝氨酸蛋白酶抑制剂1(Strongyloides stercoralis serine protease in⁃hibitor 1,Ss⁃SRPN⁃1)蛋白结构和抗原表位,构建原核表达载体并进行重组蛋白表达,为阐明Ss⁃SRPN⁃1蛋白功能奠定基础。方法自NCB... 详细信息

目的采用生物信息学方法预测粪类圆线虫丝氨酸蛋白酶抑制剂1(Strongyloides stercoralis serine protease in⁃hibitor 1,Ss⁃SRPN⁃1)蛋白结构和抗原表位,构建原核表达载体并进行重组蛋白表达,为阐明Ss⁃SRPN⁃1蛋白功能奠定基础。方法自NCBI数据库中获取Ss⁃SRPN⁃1氨基酸序列,使用ExPASY、SWISS⁃MODEL和Protean等生物信息学软件对Ss⁃SRPN⁃1蛋白的理化性质、结构和抗原表位等进行预测。根据Ss⁃SRPN⁃1核苷酸序列设计引物,以粪类圆线虫感染性三期幼虫DNA为模板,对Ss⁃SRPN⁃1基因进行扩增、克隆和测序。将重组质粒pET28a(+)/Ss⁃SRPN⁃1转入大肠埃希菌BL21(DE)中诱导重组Ss⁃SRPN⁃1蛋白表达,纯化重组蛋白并进行Western blotting及质谱鉴定。结果生物信息学分析显示,Ss⁃SRPN⁃1蛋白由372个氨基酸组成,分子式为C1948H3046N488O575S16,是一种稳定的亲水性蛋白,预测其亚细胞定位在细胞外;预测该蛋白存在11个优势B细胞抗原表位、20个T细胞表位。成功扩增长度为1119 bp的Ss⁃SRPN⁃1基因,构建了重组质粒pET28a(+)/Ss⁃SRPN⁃1并转化至大肠埃希菌BL21(DE)进行表达,表达的重组Ss⁃SRPN⁃1蛋白分子量约43 kDa,鉴定结果显示该重组蛋白为Ss⁃SRPN⁃1蛋白。结论成功表达了重组Ss⁃SRPN⁃1蛋白,预测该蛋白可作为一种潜在的粪类圆线虫病疫苗候选分子。

关键词：粪类圆线虫丝氨酸蛋白酶抑制剂1 生物信息学分析重组表达

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溶瘤新城疫病毒抑制IL-6诱导的人胶质母细胞瘤U87MG细胞的迁移和侵袭

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中国肿瘤生物治疗杂志 2024年第1期31卷 27-31页

作者：陶薇伊秦莹吴醒郑婷婷樊晓晖梁莹广西医科大学基础医学院微生物学教研室广西高校区域性疾病基础研究重点实验室广西南宁530021

目的:探讨溶瘤新城疫病毒(NDV)对IL-6诱导的人胶质母细胞瘤U87MG细胞增殖、迁移和侵袭的作用及其可能的机制。方法:将U87MG细胞分为对照组、IL-6组、NDV组、NDV+IL-6组,其中IL-6组与NDV+IL-6组用75 ng/mL IL-6预处理1 h,其余组用DMEM预... 详细信息

目的:探讨溶瘤新城疫病毒(NDV)对IL-6诱导的人胶质母细胞瘤U87MG细胞增殖、迁移和侵袭的作用及其可能的机制。方法:将U87MG细胞分为对照组、IL-6组、NDV组、NDV+IL-6组,其中IL-6组与NDV+IL-6组用75 ng/mL IL-6预处理1 h,其余组用DMEM预处理1 h,后分别用DMEM、75 ng/mL IL-6、1 HU NDV、1 HU NDV+75 ng/mL IL-6处理24 h。MTT法、细胞划痕实验和Transwell侵袭实验分别检测IL-6、NDV对U87MG细胞增殖、迁移和侵袭的影响,WB法检测各组细胞JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3和MMP2蛋白的表达水平。结果:与对照组相比,IL-6组细胞迁移率显著升高(P<0.05),侵袭细胞数目显著增多(P<0.01);与IL-6组相比,NDV+IL-6组U87MG细胞增殖率显著降低(P<0.05),细胞迁移率和侵袭细胞数目均显著降低(均P<0.01)。WB实验结果显示,与对照组相比,IL-6组p-STAT3/STAT3比值显著升高(P<0.01),NDV组p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3比值显著降低(P<0.05,P<0.01),MMP-2蛋白表达量显著降低(P<0.01);与IL-6组相比,NDV+IL-6组p-STAT3/STAT3比值、MMP-2蛋白表达量均显著降低(均P<0.05)。结论:NDV能抑制IL-6对人脑胶质瘤U87MG细胞迁移和侵袭的诱导作用,其机制可能与JAK2/STAT3信号通路的参与调控有关。

关键词：新城疫病毒 IL-6 胶质母细胞瘤 U87MG细胞增殖迁移侵袭 JAK2/STAT3信号通路

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自转录活性调节区测序技术在增强子发现研究中的应用

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遗传 2024年第8期46卷 589-602页

作者：王纪龙李青战廷正广西医科大学寄生虫学教研室南宁530021 广西医科大学细胞生物学教研室南宁530021 广西高校区域性疾病基础研究重点实验室(广西医科大学) 南宁530021

自转录活性调节区测序(self-transcribing active regulatory region sequencing,STARR-seq)是一种可发现并同时验证全基因组增强子活性的高通量测序方法。其原理为:将待验证序列插入质粒载体并电转入细胞中,该序列在作为增强子提高靶... 详细信息

自转录活性调节区测序(self-transcribing active regulatory region sequencing,STARR-seq)是一种可发现并同时验证全基因组增强子活性的高通量测序方法。其原理为:将待验证序列插入质粒载体并电转入细胞中,该序列在作为增强子提高靶基因转录的同时,其本身也作为靶基因被增强转录。通过对转录组进行测序,并对比未插入片段的测序结果,可获得增强子在基因组位置及活性的信息。在传统增强子研究方法中,通过对染色质开放区域和转录活性区域进行测序以预测增强子,但只能逐一验证预测结果,无法高通量验证增强子活性。STARR-seq技术解决了上述缺陷,可在对全基因组增强子高通量挖掘的同时,对其活性进行可靠的验证。自STARR-seq技术发明以来,已被广泛运用于不同物种与细胞中的增强子发现及活性验证研究。本文对传统增强子预测方法以及STARR-seq技术的基本原理、发展历史和具体运用进行了介绍,并对其发展前景进行展望,以期为后续增强子相关领域研究人员提供参考。

关键词：自转录活性区域测序增强子转录调控单核苷酸多态性

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华支睾吸虫3个半胱氨酸蛋白酶N端短片段原核表达及其抗原性分析

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中国病原生物学杂志 2024年第3期19卷 297-301,307页

作者：韦帅李晓芹赖雅诗张立林卢婷邓佩超石云良李艳文广西医科大学基础医学院寄生虫学教研室广西南宁530021 广西高校区域性疾病基础研究重点实验室广西河池市人民医院医学检验科

目的通过克隆和表达获得华支睾吸虫3个半胱氨酸蛋白酶N端短片段重组蛋白并分析其抗原性。方法以pET-28a-CsCP1-3重组质粒为模板进行目的片段CsCP1a-3a PCR扩增,构建pET28a-CsCP1a-3a表达载体,并转化至BL21(DE3)大肠埃希菌,经异丙基-β-D... 详细信息

目的通过克隆和表达获得华支睾吸虫3个半胱氨酸蛋白酶N端短片段重组蛋白并分析其抗原性。方法以pET-28a-CsCP1-3重组质粒为模板进行目的片段CsCP1a-3a PCR扩增,构建pET28a-CsCP1a-3a表达载体,并转化至BL21(DE3)大肠埃希菌,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE分析;表达产物经变性、纯化及复性,与华支睾吸虫感染大鼠血清行Western blot分析。结果成功构建pET28a-CsCP1a-3a重组质粒;SDS-PAGE分析显示,重组蛋白CsCP1a-3a以包涵体形式表达;重组蛋白CsCP1a-3a可被华支睾吸虫感染后第4、5周大鼠血清识别。结论重组蛋白CsCP1a-3a具有较好抗原性,可作为华支睾吸虫感染诊断候选分子。

关键词：华支睾吸虫半胱氨酸蛋白酶重组蛋白抗原性

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微囊泡包裹溶瘤病毒的制备与鉴定及对Hepa 1-6细胞体外杀伤作用的探究

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微生物学通报 2024年第5期51卷 1754-1765页

作者：吴醒郑婷婷梁莹陶薇伊秦莹樊晓晖广西医科大学基础医学院微生物学教研室广西南宁530021 广西高校区域性疾病基础研究重点实验室广西南宁530021 南昌市洪都中医院检验科江西南昌330006

【背景】溶瘤病毒生物治疗是肿瘤治疗发展的新方向,其中新城疫病毒(Newcastle disease virus, NDV)因具有生物安全及靶向性强等优势备受关注。然而,中和抗体的病毒清除将削弱溶瘤病毒的持续有效发挥的作用。基于肿瘤细胞源性的微囊泡递... 详细信息

【背景】溶瘤病毒生物治疗是肿瘤治疗发展的新方向,其中新城疫病毒(Newcastle disease virus, NDV)因具有生物安全及靶向性强等优势备受关注。然而,中和抗体的病毒清除将削弱溶瘤病毒的持续有效发挥的作用。基于肿瘤细胞源性的微囊泡递送体系有望解决上述瓶颈,因此微囊泡包裹溶瘤病毒的制备具有非常重要的现实意义。【目的】探究建立基于肿瘤细胞源性的新城疫病毒微囊泡递送体系和评估其体外杀瘤效应。【方法】采用差速离心的方法,提取出微囊泡包裹的新城疫病毒(MV@NDV);粒度仪检测MV、NDV、MV@NDV的粒径大小;透射电子显微镜观察MV@NDV中MV和NDV的相对位置;免疫印迹技术(Western blotting, WB)检测MV@NDV的Integrin β-1、Gpc3和Flotillin-1蛋白表达;激光共聚焦显微镜观察MV@NDV感染Hepa1-6细胞24 h,细胞NDV-HN蛋白表达;倒置显微镜和CCK-8法分别检测感染Hepa 1-6细胞24、48、72 h的细胞形态以及活力变化;实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR, qPCR)和免疫印迹技术(WB)分别检测MV@NDV感染Hepa 1-6细胞24 h凋亡相关基因Caspase-3和Caspase-9表达以及凋亡相关蛋白Caspase-3表达。【结果】粒径和透射电子显微镜检测结果表明MV粒径范围为141-342 nm,NDV粒径范围为91-825 nm,MV@NDV粒径范围为164-712 nm。WB结果表明MV@NDV能够表达MV所表达的Integrin β-1、Gpc 3、Flotillin-1蛋白。激光共聚焦显微镜观察结果表明MV@NDV、NDV感染Hepa1-6细胞,出现红色荧光,均表达NDV-HN蛋白。CCK-8结果表明MV@NDV组与NC组相比,Hepa 1-6细胞活力下降(P<0.05)。qPCR结果表明MV@NDV与NC组相比凋亡相关基因Caspase-3和Caspase-9均上调(P<0.05)。WB结果表明MV@NDV与NC组相比凋亡相关蛋白Caspase-3上调(P<0.05)。【结论】成功构建NDV微囊泡递送体系MV@NDV,有望解决治疗型溶瘤新城疫病毒在临床转化上存在的瓶颈,为临床新城疫病毒抗肿瘤方面提供新的思路及依据。

关键词：溶瘤病毒新城疫病毒微囊泡抗肿瘤

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华支睾吸虫囊蚴脱囊的超微结构观察

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2023年第5期41卷 601-608页

作者：李晓芹赖雅诗陈豫吕嘉慧韦帅张立林何姗姗石云良李艳文广西医科大学基础医学院寄生虫学教研室南宁530021 广西高校区域性疾病基础研究重点实验室(广西医科大学) 南宁5300213 广西横州市疾病预防控制中心横州530300 广西河池市人民医院医学检验科河池547000

目的利用扫描电子显微镜和透射电子显微镜对华支睾吸虫囊蚴脱囊的超微结构进行观察和分析。方法取华支睾吸虫阳性麦穗鱼,去除头、鱼鳞和内脏,称重后绞碎,按1 g∶10 ml比例加入人工消化液(成分为0.6 g胃蛋白酶,100 ml生理盐水,1 ml浓盐... 详细信息

目的利用扫描电子显微镜和透射电子显微镜对华支睾吸虫囊蚴脱囊的超微结构进行观察和分析。方法取华支睾吸虫阳性麦穗鱼,去除头、鱼鳞和内脏,称重后绞碎,按1 g∶10 ml比例加入人工消化液(成分为0.6 g胃蛋白酶,100 ml生理盐水,1 ml浓盐酸),于37℃消化过夜后反复过滤,体视显微镜下分离成熟囊蚴。加入0.025%胰蛋白酶溶液(pH=7.4),37℃孵育约3 min,将脱囊后尾蚴、未完全脱出后尾蚴、外形较完整囊蚴及脱下空囊分开收集,使用3%戊二醛与1%四氧化锇固定制样。样品使用50%、70%、80%、90%、100%乙醇逐级浸泡脱水(每级10 min,100%乙醇脱水重复3次),100%六甲基二硅烷浸泡3次(每次10 min),干燥后镀膜喷金,使用扫描电子显微镜观察样品;按50%、70%、90%乙醇、1∶1混合液(90%乙醇∶90%丙酮)、90%、100%丙酮逐级脱水(每级10 min,100%丙酮脱水重复3次),依次于丙酮与包埋剂(环氧树脂618)1∶1、1∶3混合液与全包埋剂中浸泡后聚合处理,修块、切片、醋酸铀⁃柠檬酸铅双重染色,使用透射电子显微镜观察样品。结果扫描电镜下可见囊蚴外观出现了局部膨胀或凹陷、褶皱及塌陷、囊壁内外层分离;脱囊形成的线状裂口长、边缘平整,未能脱出的后尾蚴被软塌的囊壁包裹,其上皮棘刺穿囊壁;脱囊后尾蚴背、腹面遍布体棘,腹吸盘明显大于口吸盘,口、腹吸盘内壁结构不同;排泄囊内填满大小不一圆球形排泄颗粒。透射电镜下显示,脱囊后尾蚴体壁为合胞体结构,由外向内可见皮层外质膜下为电子致密的颗粒状基质,基质向表面形成突起,基质内含许多分泌颗粒及大小不等囊泡;皮棘根部从基质膜发出,穿过基质从皮层表面穿出;基层厚度差异较大,内含多个高电子密度分泌小体;外环肌和内纵肌发达,深入到细胞层,经胞质管运送的物质在远端形成囊泡;皮层细胞间物质发达,充满杂乱分布的管状、大小不等的囊泡结构及线粒体。结论囊蚴凭借发达的肌肉组织剧烈运动,在脱囊中起积极作用;皮棘有助于后尾蚴尽快摆脱软化囊壁的包裹;囊内后尾蚴可能借助运动触碰囊壁方式使皮层分泌物可直接作用于内壁,发挥化学性软化内壁作用来协助脱囊。

关键词：华支睾吸虫脱囊超微结构扫描电子显微镜透射电子显微镜

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