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河北医科大学学报 2003年第6期24卷 331-334,T008-T009页

作者：金国华周君琳张君岚凌亦凌河北医科大学第三医院感染科河北石家庄050051 河北医科大学第三医院手外科河北石家庄050051 河北医科大学基础医学院病理生理学教研室河北石家庄050017

目的观察肠缺血再灌注 (ischemia reperfusion ,I/R)致肺损伤时肺组织中一氧化氮 (nitricoxide ,NO)及过氧亚硝基阴离子 (peroxynitriteanion ,ONOO-)的变化及作用。方法夹闭大鼠肠系膜上动脉造成肠缺血模型 ,测定假手术组、缺血再灌注... 详细信息

目的观察肠缺血再灌注 (ischemia reperfusion ,I/R)致肺损伤时肺组织中一氧化氮 (nitricoxide ,NO)及过氧亚硝基阴离子 (peroxynitriteanion ,ONOO-)的变化及作用。方法夹闭大鼠肠系膜上动脉造成肠缺血模型 ,测定假手术组、缺血再灌注组、假手术 +氨基胍及缺血再灌注 +氨基胍组的肺组织学变化以及肺组织匀浆中超氧化物歧化酶 (superoxidedismutase,SOD)活性和丙二醛 (malondialdehyde,MDA)、NO-2 /NO-3 含量变化 ;应用免疫组化方法测定肺组织中诱导型一氧化氮合酶 (inducibleNOsynthase ,iNOS)及ONOO-体内生成标志物硝基酪氨酸(nitrotyrosine ,NT)的变化。结果肠I/R后肺组织出现水肿、出血及中性粒细胞浸润征象。与假手术组相比 ,缺血再灌注组肺组织MDA和NO-2 /NO-3 的含量显著增高 (P <0 .0 5 ) ,SOD活性则显著降低 (P <0 .0 5 ) ,且出现大量iNOS及NT阳性信号。缺血再灌注组 +AG组肺组织MDA和NO-2 /NO-3 的含量显著低于缺血再灌注组 (P <0 .0 5 ) ,SOD活性显著高于缺血再灌注组 (P <0 .0 5 ) ,NT阳性信号减弱。结论肠I/R致肺损伤时肺组织中有大量NO和ONOO-产生并参与介导了此种肺损伤的发生。

关键词：一氧化氮阴离子肺再灌注损伤

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油酸致ARDS过程中肠源性内毒素及血浆肿瘤坏死因子的动态变化

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新疆医科大学学报 2003年第3期26卷 233-235页

作者：贾存东孟广军张建龙梁莉萍新疆医科大学附属肿瘤医院内一科新疆维吾尔自治区第三建筑工程公司医院新疆医科大学基础医学院病理生理学教研室新疆乌鲁木齐830000 新疆医科大学第二附属医院病理科新疆乌鲁木齐830000

目的:探讨肠源性内毒素 (endotoxin,ET)及血浆肿瘤坏死因子 - α(TNF- α)在油酸所致急性呼吸窘迫综合征 (ARDS)过程所继发的肺外器官损害中的动态变化及其作用。方法:将 34只成年家兔随机分组 ,其中 6只作为对照组 ,另外 2 8只从耳缘... 详细信息

目的:探讨肠源性内毒素 (endotoxin,ET)及血浆肿瘤坏死因子 - α(TNF- α)在油酸所致急性呼吸窘迫综合征 (ARDS)过程所继发的肺外器官损害中的动态变化及其作用。方法:将 34只成年家兔随机分组 ,其中 6只作为对照组 ,另外 2 8只从耳缘静脉缓慢注入油酸 (OA) 0 .1mg/kg,以 30、6 0、90、12 0 m in为时限又分为 4组作为实验组 ,监测平均动脉血压 (MABP)、血气及门静脉、腔静脉血浆 ET、TNF- α的动态变化。同时对小肠组织进行光镜及电镜观察。结果 :实验组注射 OA6 0 m in后 ,门静脉血浆 ET水平显著高于对照组 (P <0 .0 1) ,而腔静脉中的ET在注射 OA90 min后显著高于对照组 (P <0 .0 5～ 0 .0 1) ,且 OA6 0 min与 OA90 min时限的门静脉血浆 ET水平与同时点的腔静脉血浆 ET水平相比差异具有统计学意义。实验组注射 OA6 0 m in后门、腔静脉血浆 TNF- α水平显著高于对照组 (P <0 .0 5～ 0 .0 1) ,门静脉血浆 TNF- α水平在注射 OA90 m in后达高峰。电镜下可见 OA6 0、90 m in组小肠微绒毛排列紊乱 ,线粒体肿胀 ,粗面内质网扩张 ,上述改变在 OA12 0 min组加重。结论 :在 OA致 ARDS过程中 ,有肠源性 ET血症的发生及 TNF- α的过量释放 ,它们可能参与 OA所致

关键词：油酸 ARDS 肠源性内毒素血浆肿瘤坏死因子动态变化

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胰岛素上调神经细胞的神经型一氧化氮合酶活性及表达

胰岛素上调神经细胞的神经型一氧化氮合酶活性及表达

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2003年全国生化与生物技术药物学术研讨会

作者：袁中瑞鲁丹丹古力努尔程晟卢景芬北京大学医学部天然药物及仿生药物国家重点实验室(北京) 山东大学基础医学院病理生理学教研室(山东济南) 北京大学医学部天然药物及仿生药物国家重点实验室(北京)

本实验以原代培养的大鼠星形胶质细胞和小脑R2神经细胞株为实验对象,应用流式细胞分析、原位杂交及电子自旋共振等技术方法研究了胰岛素分对神经型一氧化氮合酶的调节作用.

关键词：胰岛素神经细胞一氧化氮合酶活性测定调节作用病理生理学

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小鼠骨髓树突状细胞pcDNA3-hCEA转染疫苗的抗瘤作用

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中国病理生理杂志 2002年第11期18卷 1317-1323页

作者：黄幼田董子明赵明耀杨洪艳张义国郑智敏马俊芬汤黎明陈宁郑州大学基础医学院病理生理学教研室河南郑州450052

目的 :将pcDNA3 -hCEA转染小鼠骨髓树突状细胞 (DCs) ,观察其诱导BALB/c小鼠对CT2 6(hCEA+ )的抗肿瘤免疫效应。方法 :采用rmGM -CSF和rmIL - 4体外诱导培养小鼠骨髓DCs;构建真核表达质粒pcDNA3 -hCEA ;并用lipofectamine将其转染DCs,制... 详细信息

目的 :将pcDNA3 -hCEA转染小鼠骨髓树突状细胞 (DCs) ,观察其诱导BALB/c小鼠对CT2 6(hCEA+ )的抗肿瘤免疫效应。方法 :采用rmGM -CSF和rmIL - 4体外诱导培养小鼠骨髓DCs;构建真核表达质粒pcDNA3 -hCEA ;并用lipofectamine将其转染DCs,制备DCs(pCDNA3 -hCEA)疫苗 ;同时制备CT2 6(hCEA+ ) ;采用RT -PCR检测DCs(pCDNA3 -hCEA)中CEAmRNA的表达 ,采用放射免疫法检测DCs(pCDNA3 -hCEA)培养上清中CEA的含量 ;使用DCs(pCDNA3 -hCEA)疫苗体外诱导小鼠同种异体T淋巴细胞靶向性杀伤。采用DCs(pcDNA3 -hCEA)疫苗预防免疫BALB/c小鼠 ,观察其对于荷临界致瘤量CT2 6(hCEA+ )小鼠的抗肿瘤效应。结果 :经G41 8筛选 ,DCs(pCDNA3 -hCEA)有 1 4 %的获得率 ;RT -PCR检测表明DCs(pCDNA3 -hCEA)内CEAmRNA呈阳性表达 ;放射免疫法检测表明DCs(pCDNA3 -hCEA)能微量表达人CEA ;DCs(pCDNA3 -hCEA)能够有效诱导CEA靶向免疫杀伤。DCs(pcDNA3 -hCEA)疫苗延长荷CT2 6(hCEA+ )瘤小鼠生存期 1周至 4周。结论 :编码肿瘤抗原基因的真核表达质粒转染的树突状细胞。

关键词：小鼠骨髓树突状细胞 pcDNA3-hCEA 癌胚抗原肿瘤免疫效应真核表达质粒

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肺腺癌A549细胞培养上清液对人单核细胞衍生树突状细胞的影响

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郑州大学学报（医学版） 2002年第2期37卷 139-143页

作者：陈小兵赵明耀杨洪艳黄幼田郑智敏马俊芬汤黎明董子明郑州大学基础医学院病理生理学教研室

目的 :观察肺腺癌A5 4 9细胞培养上清液 (TSN)对人单核细胞衍生树突状细胞 (MoDC)的表型、增殖和抗肿瘤A5 4 9免疫应答的影响。方法 :制备人肺腺癌A5 4 9细胞的TSN、灭活TSN和冻融抗原 ;人MoDC培养按照不同培养条件组合分为 7组 ,分别... 详细信息

目的 :观察肺腺癌A5 4 9细胞培养上清液 (TSN)对人单核细胞衍生树突状细胞 (MoDC)的表型、增殖和抗肿瘤A5 4 9免疫应答的影响。方法 :制备人肺腺癌A5 4 9细胞的TSN、灭活TSN和冻融抗原 ;人MoDC培养按照不同培养条件组合分为 7组 ,分别于培养全程或晚期 (第 7d)加入TSN或第 4d加入冻融抗原冲击致敏 ,制备MoDC瘤苗 ,第 9d收获细胞。检测各组MoDC表型、MoDC凋亡率、体外混合淋巴细胞反应 (MLR)、MoDC诱导的细胞毒性T细胞 (CTL)抑瘤活性、培养上清液中IL 12含量。结果 :培养全程加TSN的MoDC ,相对特异性表型CD80、CD83和人类白细胞抗原 (HLA DR)明显下调 ,凋亡率明显升高 ,同时 ,激活T细胞增殖能力、诱导CTL抑瘤活性及分泌IL 12的量均显著低于正常培养组 ;培养晚期加TSN的MoDC及培养全程加入灭活TSN的MoDC ,均无上述影响 ;脱离TSN影响、体外正常制备的MoDC瘤苗 ,表型明显上调、各项免疫指标明显升高 ,诱导出了高效的抗A5 4 9免疫应答。结论 :TSN能干扰MoDC成熟过程 ,下调其表型表达 ,诱导其凋亡发生 ,抑制其介导的抗肿瘤免疫应答 ;而脱离TSN影响。

关键词：树突状细胞单核细胞肺腺癌A549细胞细胞凋亡白细胞介素-12 培养上清液

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小鼠腹腔巨噬细胞与树突状细胞协同抗瘤效应

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郑州大学学报（医学版） 2002年第2期37卷 136-138页

作者：赵明耀黄幼田杨洪艳郑智敏陈宁汤黎明董子明郑州大学基础医学院病理生理学教研室郑州450052

目的 :观察巨噬细胞 (Mφ)与树突状细胞 (dendriticcell,DC)对H2 2肝细胞瘤、CT2 6结肠腺癌小鼠协同抗肿瘤免疫作用。方法 :腹腔荷H2 2 (1× 10 6)昆明鼠随机均分成 :①H2 2组、②H2 2 +Mφ组、③H2 2 +DC组、④H2 2 +Mφ +DC组 ,... 详细信息

目的 :观察巨噬细胞 (Mφ)与树突状细胞 (dendriticcell,DC)对H2 2肝细胞瘤、CT2 6结肠腺癌小鼠协同抗肿瘤免疫作用。方法 :腹腔荷H2 2 (1× 10 6)昆明鼠随机均分成 :①H2 2组、②H2 2 +Mφ组、③H2 2 +DC组、④H2 2 +Mφ +DC组 ,按组别腹腔分别注入Mφ和 (或 )H2 2脉冲致敏DC ;腹腔荷CT2 6 (1× 10 4)BALB/C小鼠以双向有序二因素检测 (9格方格表 )设计 ,治疗鼠同时注射相应数量的Mφ和CT2 6脉冲致敏DC ,每鼠的Mφ和DC呈不同组合。 1周后均强化 1次 ,所注入数量同第 1次。结果 :H2 2组小鼠 38d内均死亡 ,死亡的中位时间为 2 9d ;而H2 2 +Mφ组和H2 2 +DC组均死亡 3只 ,死亡的中位时间分别为 37d ,36d ;H2 2 +Mφ +DC组在实验观察 6 0d内 ,未出现腹水 ,无一死亡 ;荷瘤一段时间后 ,前 3组小鼠静脉血粒细胞 /淋巴细胞比值进行性增大 ,免疫细胞数量减少。荷CT2 6小鼠生存时间行免疫治疗比未免疫治疗延长 ,单用DC或Mφ呈疗效剂量依赖性 ,高剂量Mφ和DC合用与DC或Mφ单用疗效差异无显著性。结论 :DC、Mφ细胞均能提高机体抗瘤能力和生存期 ,有明确的量效关系 ;DC抗原递呈功能明显大于Mφ ;DC。

关键词：树突状细胞巨噬细胞 H22肝细胞癌 CT26结肠腺癌肿瘤免疫小鼠

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小鼠内源性抗原提呈树突状细胞疫苗的抗瘤作用

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郑州大学学报（医学版） 2002年第2期37卷 133-136页

作者：黄幼田赵明耀杨洪艳郑智敏马俊芬汤黎明董子明郑州大学基础医学院病理生理学教研室郑州450052

目的 :将pcDNA3 hCEA真核表达质粒和肿瘤来源的RNA分别转染小鼠骨髓树突状细胞 (dendriticcell,DC) ,观察内源性抗原提呈DC疫苗诱导BALB/C小鼠对CT2 6 hCEA+ 的抗肿瘤免疫效应。方法 :采用细胞因子rmGM CSF和rmIL 4诱导培养法制备小鼠... 详细信息

目的 :将pcDNA3 hCEA真核表达质粒和肿瘤来源的RNA分别转染小鼠骨髓树突状细胞 (dendriticcell,DC) ,观察内源性抗原提呈DC疫苗诱导BALB/C小鼠对CT2 6 hCEA+ 的抗肿瘤免疫效应。方法 :采用细胞因子rmGM CSF和rmIL 4诱导培养法制备小鼠骨髓DC ,利用Lipofectamine将pcDNA3 hCEA和肿瘤来源的RNA分别转染DC ,制备能够内源性表达CEA的DC疫苗。使用DC疫苗预防免疫BALB/C小鼠 ,观察其对于荷CT2 6 hCEA+ 小鼠的抗肿瘤效应。结果 :内源性抗原提呈DC疫苗明显延长荷CT2 6 hCEA+ 瘤小鼠生存期 ;与其他方法制备的DC疫苗相比 ,有较强的针对性抗肿瘤免疫效应和较长的持续效应。结论 :对于免疫逃逸的肿瘤。

关键词：小鼠内源性抗原树突状细胞疫苗抗瘤作用免疫逃逸

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小鼠一体多瘤模型复制与S180脉冲致敏树突状细胞抗瘤特异性观察

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郑州大学学报（医学版） 2002年第2期37卷 147-150页

作者：赵明耀杨洪艳黄幼田郑智敏陈宁汤黎明董子明郑州大学基础医学院病理生理学教研室郑州450052

目的 :复制一种新的荷瘤动物模型 ,同一小鼠皮下 ,不同部位荷 3种不同类型肿瘤 (S180、H2 2、EAC瘤株 ) ,继之以一种肿瘤抗原 (冻融S180细胞 )脉冲刺激的树突状细胞 (DC)免疫治疗 ,观察其效应。方法 :昆明小鼠随机分为 5组 ,6只 /组 ,1... 详细信息

目的 :复制一种新的荷瘤动物模型 ,同一小鼠皮下 ,不同部位荷 3种不同类型肿瘤 (S180、H2 2、EAC瘤株 ) ,继之以一种肿瘤抗原 (冻融S180细胞 )脉冲刺激的树突状细胞 (DC)免疫治疗 ,观察其效应。方法 :昆明小鼠随机分为 5组 ,6只 /组 ,1、2、3组分别荷单一瘤株S180、H2 2和EAC瘤细胞 ;4、5组荷以上 3种瘤株 ;所接种的 3种瘤细胞数均为 6× 10 6,接种部位二侧后腿腋下和背部 ,分别交替接种 3种瘤细胞株 ,其中每 2只接种部位相同 ,第 5组另接受肿瘤抗原 (冻融S180细胞 )脉冲刺激DC行免疫治疗。观察接种后瘤体大小和特异的淋巴细胞毒杀伤活性(CTL)。结果 :1～ 4组组间相比 ,单一荷瘤与复合荷瘤的相同瘤株在肿瘤生长速度上基本相同 (P >0 .0 5 ) ,4组荷瘤鼠生存期相近 (P >0 .0 5 )。与 1～ 4组荷同一瘤株鼠比较 ,脉冲DC免疫治疗鼠 (第 5组 ) ,S180、H2 2和EAC瘤株的增生速度明显减缓 ,荷瘤第 3周时 ,S180、H2 2增生减缓更为明显 (P <0 .0 1) ;EAC瘤株亦呈同样变化趋势 ,但幅度较小。CTL结果显示 ,T淋巴细胞对S180和H2 2瘤细胞株均有很强杀伤活性 (78% ,72 % ) ,而对EAC瘤株杀伤活性较弱 (34% )。结论 :同一小鼠体内同时荷 3种移植瘤株即一体多瘤动物模型可行 ;

关键词：树突状细胞 S180骨肉瘤 H22肝细胞癌 Ehrlich腹水癌肿瘤免疫治疗小鼠

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树突状细胞对去脾小鼠荷S180瘤的治疗效果

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郑州大学学报（医学版） 2002年第2期37卷 150-152页

作者：赵明耀杨洪艳黄幼田郑智敏董子明郑州大学基础医学院病理生理学教研室郑州450052

目的 :观察在无脾状态下小鼠荷S180骨肉瘤时 ,对脉冲树突状细胞 (dendriticcell,DC)的治疗反应 ,初步探讨脾脏与DC在抗肿瘤免疫中的关系。方法 :33只昆明小鼠 ,分为手术对照组、去脾组、去脾 +DC治疗组 3个大组 ,每大组内 5只皮下荷瘤 ,... 详细信息

目的 :观察在无脾状态下小鼠荷S180骨肉瘤时 ,对脉冲树突状细胞 (dendriticcell,DC)的治疗反应 ,初步探讨脾脏与DC在抗肿瘤免疫中的关系。方法 :33只昆明小鼠 ,分为手术对照组、去脾组、去脾 +DC治疗组 3个大组 ,每大组内 5只皮下荷瘤 ,6只腹腔荷瘤。实验开始 8周后 ,每只皮下荷瘤鼠均于右后腿腋下注射S180 2× 10 6,腹腔荷瘤鼠每只腹腔注射S180 1× 10 6。用冻融S180细胞冲击致敏DC后 ,腹腔注射脉冲致敏的DC每只 4× 10 4,1周后重复 1次。检测皮下瘤体大小和称重。结果 :DC对去脾腹腔荷S180小鼠的免疫治疗效果显示 ,3组间肿瘤腹水增长速度和死亡时间接近 ,差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ;DC对去脾皮下荷S180小鼠的免疫治疗效果显示 ,去脾组肿瘤发生率与手术对照组相比差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,但多数鼠 (4/ 5 )死亡时间短于对照组 ;去脾 +DC治疗组鼠荷瘤生存期明显延长 ,80 % (4/ 5 )荷瘤生存时间超过 6 0d ,而手术对照组和去脾组鼠分别为 4 0 % (2 / 5 )和 2 0 % (1/ 5 )。结论 :去脾小鼠荷瘤生存时间缩短 ;DC对去脾后一定时间内的皮下荷S180小鼠可介导抗肿瘤免疫反应。

关键词：树突状细胞脾脏 S180骨肉瘤免疫治疗动物实验

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同池分隔培养NS1骨髓瘤细胞对树突状细胞的影响

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郑州大学学报（医学版） 2002年第2期37卷 144-147页

作者：赵明耀杨洪艳郑智敏黄幼田陈小兵马俊芬董子明郑州大学基础医学院病理生理学教研室郑州450052

目的 :观察同一孔池中培养 ,NS1骨髓瘤细胞对树突状细胞 (DC)的影响。方法 :用不同孔径微小池分隔法 ,同池培养骨髓瘤NS1与骨髓DC。分别设为①无微小池DC孔 ,② 3μm微小池DC孔 ,③ 3μm微小池DC +NS1孔 ,④ 8μm微小池DC孔 ,⑤ 8μm微... 详细信息

目的 :观察同一孔池中培养 ,NS1骨髓瘤细胞对树突状细胞 (DC)的影响。方法 :用不同孔径微小池分隔法 ,同池培养骨髓瘤NS1与骨髓DC。分别设为①无微小池DC孔 ,② 3μm微小池DC孔 ,③ 3μm微小池DC +NS1孔 ,④ 8μm微小池DC孔 ,⑤ 8μm微小池DC +NS1孔各 3孔。每个培养孔底均有生长 3周的DC ,铺满孔底 ,每孔5× 10 5,仅③、⑤孔微小池内加入NS11× 10 4,每 2d换 1次培养液 ,同池共育 4 0d ,观测DC数目和形态改变 ;共育 7d时 ,做体外细胞毒性T淋巴细胞杀伤活性检测。结果 :与NS1骨髓瘤细胞同一孔池中培养的DC的数目减少 ,形态改变 ,抗原递呈功能下降。结论 :同一孔池中培养 ,NS1骨髓瘤细胞抑制DC的增殖和功能。

关键词：树突状细胞 NS1骨髓瘤细胞肿瘤免疫同池分隔培养细胞增殖

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