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中国毒理学会第七次全国毒理学大会暨第八届湖北科技论坛

作者：王惠惠薛鹏朱佳玉富景奇侯永永徐苑苑杨蓓赵锐张强屈卫东皮静波中国医科大学公共卫生学院环境毒理学研究室复旦大学公共卫生学院环境卫生学教研室中国医科大学基础医学院组织与胚胎学教研室中国医科大学法医学院法医病理学教研室美国哈姆纳健康科学研究院

【目的】环境化学污染物种类繁多,且暴露场景复杂多变,导致环境化学品暴露危害评价日趋困难。为突破这一瓶颈,以"21世纪毒性测试"为代表的基于关键信号通路检测的体外测试和计算机模拟相结合的毒性测试新思路日益受到重视。... 详细信息

【目的】环境化学污染物种类繁多,且暴露场景复杂多变,导致环境化学品暴露危害评价日趋困难。为突破这一瓶颈,以"21世纪毒性测试"为代表的基于关键信号通路检测的体外测试和计算机模拟相结合的毒性测试新思路日益受到重视。氧化应激和氧化损伤是大量结构各异的环境污染物的共同毒性作用机制之一,且参与包括恶性肿瘤在内的多种疾病的发生和发展。因此,识别、确定和研究环境中的氧化应激物对于有效防治环境暴露相关疾患十分重要。转录因子NRF2(Nuclear factor E2-related factor 2)是细胞适应性抗氧化反应的核心调控因子之一,在维持细胞氧化-还原稳态、抑制氧化损伤及炎症反应、调节细胞代谢和分化等方面起关键作用。应对氧化应激源,NRF2通过抗氧化反应元件ARE(Antioxidant Response Element)正向调控许多抗氧化酶和解毒酶的基因转录,从而提高细胞的防御和生存能力。由于大量抗氧化酶、二相解毒酶及多药耐药转运蛋白的基础和诱导性表达很大程度上受控于NRF2-ARE信号通路,因此,NRF2-ARE信号通路是机体内最重要的防御机制。而NRF2活化则是适应性抗氧化反应的关键步骤,也是评价细胞或机体发生氧化应激最为准确且敏感的指标之一。【材料和方法】本研究首先应用NRF2-ARE荧光素酶报告基因稳转细胞株构建氧化应激物高通量筛选平台;继而构建相应的系统确证平台,包括应用RT-qPCR技术系统检测ARE依赖基因的mRNA水平和应用流式细胞仪检测细胞内活性氧水平。【结果】本研究应用一组已知的NRF2-ARE激动剂和抑制剂进行了筛选平台和确证平台的系统验证,并应用筛选平台完成了对近千种单一组分化合物的筛选测试;同时,应用确证平台对关键阳性发现进行系统检测。【结论】研究结果初步提示,以NRF2-ARE为基础的筛选和确证平台可以有效地甄别环境污染物中的氧化应激物,进而为相关化学品安全评价提供依据。

关键词： NRF2 环境暴露氧化应激抗氧化反应安全评价

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Nrf2在胰岛β细胞急性内质网应激及细胞损伤中的作用及其机制

Nrf2在胰岛β细胞急性内质网应激及细胞损伤中的作用及其机制

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中国毒理学会第七次全国毒理学大会暨第八届湖北科技论坛

作者：富景奇崔琪李璐王惠惠赵锐杨蓓董坚侯永永徐苑苑皮静波中国医科大学公共卫生学院环境毒理学研究室中国医科大学法医学院法医病理学教研室中国医科大学基础医学院组织与胚胎学教研室武汉科技大学生物医学研究院

【目的】转录因子Nrf2(Nuclear factor E2-relatedfactor2)是调控适应性抗氧化反应的核心调控因子,在对抗氧化损伤、解毒和维持细胞氧化-还原稳态中起关键作用。本研究组前期研究表明,Nrf2可保护胰岛β细胞免受急性氧化损伤。除氧化应激... 详细信息

【目的】转录因子Nrf2(Nuclear factor E2-relatedfactor2)是调控适应性抗氧化反应的核心调控因子,在对抗氧化损伤、解毒和维持细胞氧化-还原稳态中起关键作用。本研究组前期研究表明,Nrf2可保护胰岛β细胞免受急性氧化损伤。除氧化应激外,内质网应激也是1型和2型糖尿病中胰岛β细胞损伤和功能障碍的共同机制之一。在内质网应激条件下,胰岛β细胞内的未折叠蛋白反应(Unfolded Protein Response,UPR)被激活,起到保护细胞免受内质网应激损伤的作用。本研究采用稳定沉默Nrf2的胰岛β细胞系MIN6作为研究对象,研究Nrf2在急性内质网应激引起的胰岛β细胞损伤中的作用及其机制。【材料和方法】应用慢病毒负载shRNA稳定转染技术获得Nrf2稳定沉默(Nrf2-KD)和空白对照MIN6胰岛β细胞(Scr)。将Nrf2-KD和Scr细胞急性暴露于内质网应激刺激物毒胡萝卜素(Thapsigargin,TG)或衣霉素(Tunicamycin,TUN),继而检测细胞活力,细胞凋亡,ATP生成和内质网应激标志物及其未折叠蛋白反应等。【结果】通过对细胞活力,细胞凋亡和ATP生成的检测发现,Nrf2-KD MIN6细胞比Scr细胞对TG和TUN诱导的急性内质网应激导致的细胞损伤更敏感。检测内质网应激及其介导的UPR发现,Nrf2-KD细胞在内质网应激条件下BIP、CHOP蛋白表达水平明显低于Scr细胞,提示Nrf2-KD细胞中UPR的降低可能是Nrf2-KD细胞对急性内质网应激更敏感的原因。【结论】Nrf2调节的UPR在胰岛β细胞处于急性内质网应激条件下起到关键保护作用,这种保护作用是由Nrf2调控UPR关键蛋白BIP、CHOP实现的。结合前期研究结果,Nrf2调节的适应性反应,包括适应性抗氧化反应和未折叠蛋白反应,在胰岛β细胞防御急性氧化应激和急性内质网应激中起到重要保护作用。

关键词： Nrf2 胰岛β细胞内质网应激未折叠蛋白反应

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容量激活性氯离子通道在低氧高二氧化碳处理的大鼠PASMCs的表达及其与MAPK通路的关系

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中国病理生理杂志 2014年第1期30卷 25-29页

作者：黎关龙黄林静何金波马迎春陈海娥应磊汪洋王万铁温州医科大学基础医学院病理生理学教研室浙江温州325035 浙江省医学科学院卫生学研究所毒理学研究室浙江杭州310013

目的:探讨容量激活性氯离子通道(CLC3)在低氧高二氧化碳处理的大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)中的表达变化及其与MAPK信号通路的关系。方法:酶消化法取雄性SD大鼠PASMCs进行原代培养,采用小鼠抗大鼠α-平滑肌肌动蛋白免疫荧光细胞化学法... 详细信息

目的:探讨容量激活性氯离子通道(CLC3)在低氧高二氧化碳处理的大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)中的表达变化及其与MAPK信号通路的关系。方法:酶消化法取雄性SD大鼠PASMCs进行原代培养,采用小鼠抗大鼠α-平滑肌肌动蛋白免疫荧光细胞化学法进行细胞鉴定;复制低氧高二氧化碳模型,采用免疫印迹法检测CLC3蛋白的表达;采用RT-PCR技术测定CLC3 mRNA水平的表达。结果:(1)与对照组比较,低氧高二氧化碳组PASMCs CLC3 mRNA和蛋白表达量均显著上调(均P<0.01);(2)与低氧高二氧化碳组比较,ERK抑制剂U0126+低氧高二氧化碳组PASMCs CLC3 mRNA和蛋白表达量均显著下调(均P<0.01);p38抑制剂SB203580+低氧高二氧化碳组PASMCs CLC3 mRNA和蛋白表达量均明显上调(均P<0.01);p38激活剂茴香霉素+低氧高二氧化碳组PASMCs CLC3 mRNA和蛋白表达水平均显著下降(P<0.05和P<0.01)。结论:低氧高二氧化碳可上调大鼠PASMCs CLC3 mRNA和蛋白的表达;ERK1/2通路介导了低氧高二氧化碳诱导的大鼠PASMCs CLC3表达,而p38 MAPK通路活化则下调低氧高二氧化碳诱导的CLC3 mRNA和蛋白表达。

关键词：低氧高碳酸血症容量激活性氯离子通道 p38 MAPK通路 ERKl 2通路大鼠

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容量激活性氯离子通道在大鼠低氧性PASMCs中的表达及与p38MAPK通路的关系

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医学研究杂志 2014年第8期43卷 83-86页

作者：黄林静黎关龙郑梦晓马迎春金可可王万铁温州医科大学基础医学院病理生理学教研室 325035 浙江省医学科学院卫生学研究所毒理学研究室杭州310013 温州医科大学缺血-再灌注损伤研究所 325035

目的探讨容量激活性氯离子通道(CLC3)在大鼠低氧性肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)中mRNA和蛋白表达的变化以及其与p38MAPK信号通路的关系。方法取10只雄性SD大鼠,用酶消化法获得PASMCs并且进行原代培养,用小鼠抗大鼠SMα-actin免疫荧光细胞... 详细信息

目的探讨容量激活性氯离子通道(CLC3)在大鼠低氧性肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)中mRNA和蛋白表达的变化以及其与p38MAPK信号通路的关系。方法取10只雄性SD大鼠,用酶消化法获得PASMCs并且进行原代培养,用小鼠抗大鼠SMα-actin免疫荧光细胞化学的方法进行鉴定。经培养鉴定的PASMCs随机分为:常氧组(N组,n=6),低氧组(H组,n=6),DMSO对照组(D组,n=6),SB203580干预组(SB组,n=6),Anisomycin干预组(A组,n=6),用免疫印迹技术检测CLC3蛋白的表达,半定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术测定CLC3 mRNA水平的表达。结果与N组比较,H组PASMCs中CLC3 mRNA和蛋白的表达量均显著上调(P均<0.01);与D组比较,SB组CLC3 mRNA和蛋白的表达均上调(P均<0.01),A组mRNA的表达明显下调(P<0.01),蛋白的表达轻微下调(P>0.05)。结论低氧可上调大鼠PASMCs中CLC3 mRNA和蛋白的表达;p38MAPK通路抑制剂SB203580能上调PASMCs中CLC3 mRNA和蛋白的表达;p38MAPK通路激活剂Anisomycin可下调PASMCs中CLC3 mRNA和蛋白的表达。

关键词：低氧容量激活性氯离子通道 p38MAPK 大鼠

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钙激活性氯离子通道在大鼠低氧高二氧化碳性PASMCs中的表达及与MAPK通路的关系

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中国细胞生物学学报 2013年第9期35卷 1321-1327页

作者：黄林静黎关龙何金波马迎春陈丹应磊汪洋王万铁温州医科大学基础医学院病理生理学教研室温州325035 浙江省医学科学院卫生学研究所毒理学研究室杭州310013

采用酶消化法取雄性SD大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)进行原代培养,采用小鼠抗大鼠SMα-actin免疫荧光细胞化学法进行细胞鉴定;复制低氧高二氧化碳模型,采用免疫印迹法检测钙激活性氯离子通道(calc... 详细信息

采用酶消化法取雄性SD大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)进行原代培养,采用小鼠抗大鼠SMα-actin免疫荧光细胞化学法进行细胞鉴定;复制低氧高二氧化碳模型,采用免疫印迹法检测钙激活性氯离子通道(calcium activated chloride channel,CLCA2)蛋白的表达;采用半定量逆转录–聚合酶链反应(RT-PCR)技术测定CLCA2 mRNA水平的表达。结果显示:与正常组比较,低氧高二氧化碳组PASMCs中CLCA2 mRNA和蛋白表达水平均明显上调(P<0.01);与低氧高二氧化碳组比较,U0126组和SB203580组PASMCs中CLCA2 mRNA和蛋白表达水平均明显上调(P<0.01);茴香霉素(Anisomycin)组PASMCs中CLCA2 mRNA和蛋白表达水平均显著下调(P<0.05和P<0.01)。研究表明,低氧高二氧化碳可上调大鼠PASMC中CLCA2 mRNA和蛋白的表达;ERK1/2通路抑制剂(U0126)、P38MAPK通路抑制剂(SB203580)均可上调PASMCs中CLCA2 mRNA和蛋白的表达;MAPK通路激活剂(Anisomycin)能下调PASMCs中CLCA2 mRNA和蛋白的表达。

关键词：低氧高二氧化碳钙激活性氯离子通道 P38MAPK ERK1/2 大鼠

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对氨基水杨酸钠对亚慢性染锰大鼠基底前脑胆碱能神经细胞的影响

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环境与职业医学 2013年第6期30卷 461-464页

作者：蒙浩洋李少军唐方萍黄艳妮罗海兰陈静雯邓祥发姜岳明广西医科大学公共卫生学院卫生毒理学教研室广西530021 广西医科大学基础医学院人体解剖学教研室广西530021

[目的]探讨对氨基水杨酸钠(PAS-Na)对亚慢性染锰大鼠基底前脑胆碱能神经细胞的影响。[方法]48只雄性SD大鼠被随机分为对照Ⅰ、Ⅱ组,染锰Ⅰ、Ⅱ组,PAS-Na预防(预防)组,PAS-Na治疗(治疗)组,每组8只。染锰组、预防组、治疗组大鼠每日腹腔... 详细信息

[目的]探讨对氨基水杨酸钠(PAS-Na)对亚慢性染锰大鼠基底前脑胆碱能神经细胞的影响。[方法]48只雄性SD大鼠被随机分为对照Ⅰ、Ⅱ组,染锰Ⅰ、Ⅱ组,PAS-Na预防(预防)组,PAS-Na治疗(治疗)组,每组8只。染锰组、预防组、治疗组大鼠每日腹腔注射氯化锰(MnCl2.4H2O 15mg/kg),每周5d,对照组腹腔注射等容量生理盐水,预防组在染锰同时每日背部皮下注射PAS-Na(200mg/kg),连续12周。13周开始,治疗组每日背部皮下注射PAS-Na(200mg/kg),同时染锰Ⅱ组、对照Ⅱ组背部皮下注射等容量生理盐水至18周。采用水迷宫实验检测大鼠学习记忆能力,免疫组化染色观察胆碱乙酰转移酶(ChAT)阳性神经元形态及数量,检测基底前脑ChAT蛋白活性。[结果]12周后,染锰组逃避潜伏期、游泳路程均比对照Ⅰ组长,预防组逃避潜伏期、游泳路程均较染锰组短(P<0.05)。染锰组基底前脑垂直支臂核(vDB)/水平支臂核(hDB)ChAT阳性细胞数较对照Ⅰ组少,预防组vDB/hDB ChAT阳性细胞数较染锰组多(P<0.05);染锰组大鼠基底前脑组织ChAT蛋白活性较对照Ⅰ组低,预防组较之回升(P<0.05)。18周后,染锰组逃避潜伏期、游泳路程都比对照组长,治疗组逃避潜伏期、游泳路程比染锰组短(P<0.05)。染锰组vDB/hDB ChAT阳性细胞数较对照组少,治疗组vDB ChAT阳性细胞数较染锰Ⅱ组多(P<0.05)。[结论]PAS-Na对亚慢性染锰引起大鼠基底前脑ChAT阳性细胞减少、ChAT蛋白活性降低和学习记忆障碍可能有拮抗作用。

关键词：对氨基水杨酸钠锰学习记忆基底前脑胆碱能神经细胞

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五倍子酸对人纤维肉瘤HT1080的抑制作用

五倍子酸对人纤维肉瘤HT1080的抑制作用

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中国解剖学会2013年年会

作者：王丽萍石卓牛凤兰郑州大学组织学与胚胎学教研室吉林大学基础医学院药理学教研室吉林大学公共卫生学院卫生毒理学教研室

五倍子酸(gallic acid,GA)是一种广泛存在于植物的多酚类化合物,药理作用广泛,其在抗肿瘤方面的研究逐渐引起人们的关注。本文以不同浓度五倍子酸干预人纤维肉瘤HT1080为实验组,无药组作对照,作用48 h后应用MTT法检测GA体外抑瘤活性;丫... 详细信息

五倍子酸(gallic acid,GA)是一种广泛存在于植物的多酚类化合物,药理作用广泛,其在抗肿瘤方面的研究逐渐引起人们的关注。本文以不同浓度五倍子酸干预人纤维肉瘤HT1080为实验组,无药组作对照,作用48 h后应用MTT法检测GA体外抑瘤活性;丫啶橙染色后用荧光显微镜观察不同浓度GA对人纤维肉瘤细胞HT1080的形态影响;应用免疫组织化学方法检测GA对HT1080细胞Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。GA作用48 h后,HT1080细胞受

关键词：五倍子酸人纤维肉瘤 HT1080 抑制作用

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对氨基水杨酸钠对锰中毒大鼠学习记忆和海马神经发生的影响

对氨基水杨酸钠对锰中毒大鼠学习记忆和海马神经发生的影响

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中国毒理学会第六届全国毒理学大会

作者：蒙浩洋唐方萍黄艳妮李少军罗海兰区仕燕邓祥发姜岳明广西医科大学公共卫生学院卫生毒理学教研室广西医科大学基础医学院人体解剖学教研室

目的观察对氨基水杨酸钠（PAS-Na）对锰中毒大鼠学习记忆能力和海马神经发生水平的影响。方法 40只健康成年雄性SD大鼠被随机分为对照组和染锰组。染锰组、每日腹腔注射（ip）MnCl·4HO 15 mg·kg,对照组ip等容量生理盐水,每周5... 详细信息

目的观察对氨基水杨酸钠（PAS-Na）对锰中毒大鼠学习记忆能力和海马神经发生水平的影响。方法 40只健康成年雄性SD大鼠被随机分为对照组和染锰组。染锰组、每日腹腔注射（ip）MnCl·4HO 15 mg·kg,对照组ip等容量生理盐水,每周5 d,连续6周。然后,将染锰组分为染锰组、低、中、高PAS-Na（L,M和H-PAS）治疗组,L,M和H-PAS治疗组每日分别背部皮下注射（sc）PSA-Na 100,200或300 mg·kg,对照组、染锰组背部sc等容量生理盐水,每周用药4 d,停药3 d,连续4周。采用Morris水迷宫系统检测大鼠学习记忆能力,免疫组化检测5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）标记的神经发生细胞数量。结果染锰组逃避潜伏期、游泳路程均比对照组长,平台穿越次数比对照组少（P<0.01）。各PAS-Na治疗组逃避潜伏期、游泳路程均较染锰组短,M-和H-PAS治疗组平台穿越次数比染锰组多（P<0.05）。染锰组海马BrdU阳性细胞数目低于对照组,M-和H-PAS治疗组海马BrdU阳性细胞数目高于染锰组（P<0.01）。结论锰暴露能减弱成年大鼠学习记忆能力,降低海马神经发生水平。PAS-Na可以改善锰中毒大鼠的学习记忆能力,促进其海马神经发生。

关键词：海马神经发生 PAS 锰中毒学习记忆能力对氨基水杨酸钠

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基于双荧光素酶报告基因的DNA损伤与修复检测系统的建立与应用

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癌变．畸变．突变 2013年第6期25卷 461-464,469页

作者：张荣牛玉杰樊龙刚石磊王茜王秀荣河北医科大学公共卫生学院卫生毒理学教研室河北石家庄050017 河北医科大学公共卫生学院劳动卫生与环境卫生学教研室河北石家庄050017 河北医科大学基础医学院免疫教研室河北石家庄050017

目的:建立一种能够同时对环境致癌物所致HepG2细胞DNA损伤和细胞对损伤DNA的修复能力进行快速检测的系统。方法:5μmol/L氯化镉体外损伤质粒pTK-RL,质粒pgadd153-luc和体外受损的质粒pTK-RL共转染到HepG2细胞中,以16种已知致癌物或3种... 详细信息

目的:建立一种能够同时对环境致癌物所致HepG2细胞DNA损伤和细胞对损伤DNA的修复能力进行快速检测的系统。方法:5μmol/L氯化镉体外损伤质粒pTK-RL,质粒pgadd153-luc和体外受损的质粒pTK-RL共转染到HepG2细胞中,以16种已知致癌物或3种无遗传毒性的非致癌物刺激细胞,利用双荧光素酶检测方法同时检测DNA损伤和细胞的修复能力;双荧光素酶检测系统检测居民区、垃圾焚烧厂和农田3个不同污染区土壤中非挥发性有机提取物对DNA的损伤作用和细胞对该损伤的修复能力;彗星实验检测DNA的损伤。结果:双荧光素酶报告基因检测系统均可检出已知环境致癌物对DNA损伤与修复能力的影响,非致癌物均未检测到DNA损伤作用和对细胞DNA修复能力的影响;3个不同污染区土壤中非挥发性有机提取物均可诱导DNA损伤并抑制细胞对DNA损伤的修复能力,强度为居民区>垃圾焚烧厂>农田土壤。结论:在本研究条件下建立了可同时检测环境致癌物DNA损伤与细胞修复能力的双荧光素酶报告基因检测系统并可用于环境污染区检测。

关键词： DNA损伤 DNA修复宿主细胞恢复活性试验双荧光素酶报告基因致癌物质

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成人多代谢异常与家族史的多重对应分析

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中华流行病学杂志 2012年第3期33卷 260-264页

作者：刘莉平智广李琳琳杨永利李春阳张梅喜郑州大学基础医学院组织学与胚胎学教研室 450001 郑州大学公共卫生学院卫生统计学教研室 450001 郑州大学毒理学教研室 450001 郑州大学流行病学教研室 450001

目的探讨多种代谢异常症状的聚集情况及其与家族史的关系。方法采用随机整群抽样方法，以河南省某县为研究现场对成年常住居民进行问卷调查、体格检查和生化检查，对高血压、高脂血症、糖尿病和冠心病等多种代谢性疾病的聚集情况及其与... 详细信息

目的探讨多种代谢异常症状的聚集情况及其与家族史的关系。方法采用随机整群抽样方法，以河南省某县为研究现场对成年常住居民进行问卷调查、体格检查和生化检查，对高血压、高脂血症、糖尿病和冠心病等多种代谢性疾病的聚集情况及其与家族史的对应关系进行多重对应分析。结果共调查3901人，其中男性1428人（36．6％）、女性2473人（63．4％），平均年龄（32．8±6．3）岁。父母亲代谢异常疾病的多重对应分析显示，第一维度和第二维度的Cronbach’s α分别为0．547、O．387，在两个维度的特征根分别为1．971和1．535。调查对象与父母亲代谢异常疾病的多重对应分析显示，第一维度和第二维度的Cronbach’s α分别为0．598、0．457，在两个维度的特征根分别为2．263和1．743。调查对象及其父母亲各自的多种代谢异常均存在聚集现象；多种代谢异常在调查对象与其父母之间及父母双方之间无明显的聚集状态，但x2检验提示部分类别之间可能存在微弱关联（父母之间多种代谢异常有统计学意义的列联系数分布范围为0．04～0．11，父亲与调查对象之间为0．04—0．08，母亲与调查对象之间为0．04～0．11）；与单纯性肥胖相比，中心性肥胖与其他代谢异常症状聚集出现的情况更明显。结论调查对象及其父母亲均存在多种代谢症状伴随出现的现象，中心性肥胖与其他代谢异常症状聚集出现的情况更明显。家族史对后代是否廉名什谢异常影响并不大。

关键词：多代谢异常家族史多重对应分析代谢综合征

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