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白纹伊蚊唾液蛋白rAlb-34kDa-1促进Raw264.7细胞免疫应答及DENV-2的复制

中国热带医学 2025年

作者：旷晓元肖秋秋吴文诗牟小会吴家红贵州医科大学基础医学院人体寄生虫学教研室贵州省微生物组与传染性疾病防控重点实验室贵州省安顺市人民医院生殖医学科

目的探讨白纹伊蚊唾液蛋白rAlb-34kDa-1对巨噬细胞（Raw264.7）的免疫调控作用及对Raw264.7细胞中2型登革病毒（Denguevirustype2，DENV-2）复制的影响。方法将原核表达质粒pET32a(+)-rAlb-34kDa-1转入到大肠埃希菌（***）BL21（DE3）... 详细信息

目的探讨白纹伊蚊唾液蛋白rAlb-34kDa-1对巨噬细胞（Raw264.7）的免疫调控作用及对Raw264.7细胞中2型登革病毒（Denguevirustype2，DENV-2）复制的影响。方法将原核表达质粒pET32a(+)-rAlb-34kDa-1转入到大肠埃希菌（***）BL21（DE3）后，按实验室前期建立的表达纯化条件获取唾液蛋白并通过SDS-PAGE及WesternBlot（WB）方法鉴定；以CCK8法分析rAlb-34kDa-1蛋白对Raw264.7细胞的毒性。将0.02 、0.20和2.0μg/mL浓度rAlb-34kDa-1作用Raw264.7细胞6、12和24 h，采用实时荧光定量逆转录PCR（Real-timequantitativereversetranscriptionPCR，qRT-PCR）检测细胞中白细胞介素-1β（Interleukin-1β，IL-1β）、白细胞介素-6（Interleukin-6，IL-6）、肿瘤坏死因子-α(Tumornecrosisfactor-α，TNF-α)、趋化因子配体2（Chemokineligand2，CCL2）、干扰素-β（Interferon-β，IFN-β）、干扰素刺激基因15（InterferonStimulatedGene15，ISG15）的表达，运用酶联免疫吸附实验（Enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）检测细胞培养上清IL-6和TNF-α的分泌；免疫荧光法观察rAlb-34kDa-1作用Raw264.7细胞后p65进入细胞核的情况，分析rAlb-34kDa-1蛋白是否通过NF-κB信号通路实现对Raw264.7细胞的免疫调控；按分组（DENV-2作用组、唾液蛋白+DENV-2共孵育组）加不同的处理因素作用6、12和24 h后收集细胞，利用qRT-PCR检测细胞内DENV-2的mRNA表达量及运用流式细胞术（FCM）检测不同处理因素作用24h细胞内J2（dsRNA）的荧光强度。结果 SDS-PAGE及WB结果显示成功获得rAlb-34kDa-1蛋白且经CCK8法分析该蛋白对Raw264.7细胞无毒性；0.2μg/mL和2.0μg/mL的rAlb-34kDa-1均能诱导Raw264.7细胞中IL-1β、IL-6、TNF-α、CCL2、IFN-β、ISG15的表达；rAlb-34kDa-1作用Raw264.7细胞1 h后显著增强Raw264.7细胞核内的p65的荧光强度；rAlb-34kDa-1与DENV-2作用于Raw264.7细胞12 h时，2 μg/mL的rAlb-34kDa-1显著增强细胞中DENV-2的mRNA表达量。作用24 h时，0.02μg/mL、0.2μg/mL、2μg/mL的rAlb-34kDa-1均能增强Raw264.7细胞中DENV-2的mRNA表达量，2μg/mL的rAlb-34kDa-1与DENV-2共孵育于Raw264.7细胞24h后细胞内J2的荧光信号显著增强；结论 rAlb-34kDa-1蛋白能调节小鼠Raw264.7细胞免疫应答，促进DENV-2在Raw264.7细胞中复制。

关键词：白纹伊蚊 rAlb-34kDa-1蛋白 2型登革病毒免疫调控

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基于网络药理、分子对接和分子动力学模拟探讨蛇床子治疗牙周炎伴骨质疏松的作用机制

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华西口腔医学杂志 2025年第2期43卷 249-261页

作者：冯苗苗徐小苒李宁丽杨铭真翟远坤开封市牙周组织工程重点实验室河南大学口腔医学院开封475001

目的联合使用网络药理学、分子对接和分子动力学模拟技术探讨蛇床子治疗牙周炎伴骨质疏松的活性成分及潜在靶点,并探讨其可能的作用机制。方法通过TCMSP数据库、SwissTargetPrediction数据库并结合文献报道筛选蛇床子的主要化学成分及... 详细信息

目的联合使用网络药理学、分子对接和分子动力学模拟技术探讨蛇床子治疗牙周炎伴骨质疏松的活性成分及潜在靶点,并探讨其可能的作用机制。方法通过TCMSP数据库、SwissTargetPrediction数据库并结合文献报道筛选蛇床子的主要化学成分及作用靶点;采用多种数据库预测牙周炎和骨质疏松的作用靶点;利用Venny 2.1获取蛇床子与牙周炎和骨质疏松的交集靶点;采用STRING数据库构建交集靶点的蛋白相互作用网络(PPI)图并使用Cytoscape 3.9.1软件构建活性成分−交集靶点网络,对其进行拓扑分析筛选关键靶点和核心活性成分;基于Metascape平台对交集靶点进行基因本体论(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析;选取节度点(degree)值排名前5位的核心靶点和核心活性成分,使用Discovery Studio 2019软件对配体和受体进行分子对接,并将结果可视化;使用Gromacs2022.3进行分子动力学模拟,以评估核心活性成分和关键靶点之间相互作用的稳定性。结果筛选得到蛇床子的20个潜在活性成分,蛇床子治疗牙周炎伴骨质疏松的作用靶点116个;对116个交集靶点进行GO和KEGG通路富集分析发现,蛇床子可能通过磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶、晚期糖基化终产物-糖基化终末产物受体等信号通路发挥治疗作用;分子对接结果发现核心活性成分与关键靶点能够较好地结合,分子动力学模拟进一步验证了香叶木素-AKT1复合体稳定性。结论本研究揭示蛇床子通过多成分、多靶点、多途径的特点治疗牙周炎伴骨质疏松的潜在分子药理机制,为后续药物开发研究及临床应用提供理论基础。

关键词：蛇床子牙周炎骨质疏松网络药理学分子对接分子动力学模拟

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胰岛CD68、CD22阳性细胞表达及血清IL-12、IL-4水平的改变对1型糖尿病小鼠的影响

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免疫学杂志 2014年第12期30卷 1048-1052页

作者：李容瑢梁文妹张璞李占淳贵阳医学院组织学与胚胎学教研室 550004

目的探讨1型糖尿病(T1DM)小鼠胰岛表达CD68、CD22的改变,血清白介素-12(IL-12)、白介素-4(IL-4)水平的变化及可能的机制。方法正常雄性C57BL/6J小鼠104只,随机分为正常对照组、盐水对照组及实验组。小剂量多次注射链脲佐菌素(MLD-STZ)建... 详细信息

目的探讨1型糖尿病(T1DM)小鼠胰岛表达CD68、CD22的改变,血清白介素-12(IL-12)、白介素-4(IL-4)水平的变化及可能的机制。方法正常雄性C57BL/6J小鼠104只,随机分为正常对照组、盐水对照组及实验组。小剂量多次注射链脲佐菌素(MLD-STZ)建立1型糖尿病小鼠模型,分别于第3、7、10、14、21、28天测空腹血糖,取胰尾组织及血清,通过免疫组化SABC法、酶联免疫吸附法(ELISA)及形态计量法进行研究。结果与正常及盐水对照组相比较,实验组小鼠胰岛数目减少,胰岛面积减小。实验组小鼠胰岛CD68阳性细胞的面数密度(NA)于第3天起明显高于正常对照组和盐水对照组(P<0.01),但第10天的NA在实验组相对较低。实验组胰岛CD22阳性细胞的NA值于第3天即高于正常对照组和盐水对照组(P<0.01),至第7天最高。血清ELISA结果显示,实验组小鼠血清IL-12水平自第7天开始增高(P<0.05);而血清IL-4水平与正常及盐水对照组相比有所降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 CD68及CD22阳性细胞在T1DM早期即浸润胰岛,有可能通过抗原递呈等作用促进了T1DM的发生。实验组小鼠血清IL-12增高,IL-4减少,提示Th1/Th2细胞失衡,推测是引发T1DM的重要因素之一。

关键词： CD68阳性细胞 CD22阳性细胞白介素-12 白介素-4 1型糖尿病

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生动医路,化歌而行——生化歌曲的作品创作及其在教学中的应用探索

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生命的化学 2025年第3期45卷 522-528页

作者：许志臻陈姗钟丹何凤田黄刚陆军军医大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室重庆400038

生物化学与分子生物学(简称生化)在医学和生命科学中的重要性不言而喻。由于该课程内容复杂抽象,教与学的难度均较高。教师们一直致力于通过多样化的教学手段和方法提升教学效果。近年来,将知识点融入歌曲在生化教学中的应用越来越多,... 详细信息

生物化学与分子生物学(简称生化)在医学和生命科学中的重要性不言而喻。由于该课程内容复杂抽象,教与学的难度均较高。教师们一直致力于通过多样化的教学手段和方法提升教学效果。近年来,将知识点融入歌曲在生化教学中的应用越来越多,有助于激发学生学习兴趣、促进创新思考、增强学习成效。本文分析了近年来全国大学生生化歌曲大赛的作品特征,并探讨了生化歌曲在教学中的应用实践,以期为进一步提高生化教学质量提供参考和借鉴。

关键词：生物化学与分子生物学生化歌曲生化教学

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小鼠肾血管球滤过膜发育的电镜研究

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解剖学报 2005年第3期36卷 317-319页

作者：王灵均郭敏陈河杭州师范学院医学院组织学与胚胎学教研室杭州310012 锦州医学院组织学与胚胎学教研室锦州121001

目的研究发育中小鼠血管球滤过膜的变化。方法应用透射电镜观察胚胎和新生小鼠血管球滤过膜的超微结构。结果在肾小体的发育过程中,足细胞形状明显变薄,足突数量逐渐增多,其形状逐渐窄小,足突间裂孔和裂孔膜出现;足细胞下、内皮细胞下... 详细信息

目的研究发育中小鼠血管球滤过膜的变化。方法应用透射电镜观察胚胎和新生小鼠血管球滤过膜的超微结构。结果在肾小体的发育过程中,足细胞形状明显变薄,足突数量逐渐增多,其形状逐渐窄小,足突间裂孔和裂孔膜出现;足细胞下、内皮细胞下先后出现基膜,而后两种基膜融合形成一层较厚的基膜。随着毛细血管袢的不断增生,在足细胞下方出现新合成的环状或袋状的基膜片段;内皮细胞形状也明显变薄,出现大量内皮孔。结论在小鼠肾小体的发育过程中,足细胞和内皮细胞逐渐分化成熟,基膜最早来源于足细胞,随后内皮也参与合成基膜,发育晚期基膜的合成和更新主要由足细胞来完成。

关键词：血管球滤过膜发育超微结构透射电镜小鼠

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甘油蔗糖液对哺乳动物桑椹胚的渗透反应及冻存效果研究

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解剖学报 1998年第3期29卷 307-311,I018页

作者：王燕蓉刘斌宁夏医学院组织学胚胎学教研室北京医科大学组织学胚胎学系

为了提供快速冷冻前胚胎发生部分脱水的科学依据，我们观察了家兔桑椹胚在冷冻保护液中的体积变化。当桑椹胚置于仅含３．０ｍｏｌ／Ｌ或４．０ｍｏｌ／Ｌ甘油液中，桑椹胚立即皱缩，２ｍｉｎ时体积为等渗时体积的５８．９％或５９．６... 详细信息

为了提供快速冷冻前胚胎发生部分脱水的科学依据，我们观察了家兔桑椹胚在冷冻保护液中的体积变化。当桑椹胚置于仅含３．０ｍｏｌ／Ｌ或４．０ｍｏｌ／Ｌ甘油液中，桑椹胚立即皱缩，２ｍｉｎ时体积为等渗时体积的５８．９％或５９．６％，１０ｍｉｎ时桑椹胚体积达到等渗时的９０．８％或７６．９％，将这些桑椹胚接着移入含３．０ｍｏｌ／Ｌ或４．０ｍｏｌ／Ｌ甘油加０．２５ｍｏｌ／Ｌ蔗糖保护液中，桑椹胚再次发生皱缩及膨大变化，１０ｍｉｎ后，桑椹胚体积为等渗体积的８０．８％或８１．９％。在这种脱水状态下将桑椹胚进行超快速冻存，解冻后有７３．６８％或８０．５６％在体外发育至囊胚。将经３．０ｍｏｌ／Ｌ甘油及３．０ｍｏｌ／Ｌ甘油加０．２５ｍｏｌ／Ｌ蔗糖预处理的小鼠桑椹胚超快速冻存后，有９４．１％可在体外发育。结果表明：冷冻前桑椹胚的脱水状态有助于超快速冻存的成功进行。

关键词：哺乳动物桑椹胚甘油蔗糖液渗透反应冻存

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4-[4″-(2″,2″,6″,6″-四甲基-1″-哌啶氮氧自由基)氨基]-4′-去甲表鬼臼毒素对K562/ADM细胞的抑制作用

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中国药理学与毒理学杂志 2007年第2期21卷 107-112页

作者：陈焱齐社宁兰州大学基础医学院组织学与胚胎学教研室甘肃兰州730000

目的比较4-[4”-（2”，2”，6”，6”．四甲基-1”-哌啶氮氧自由基）氨基]4’-去甲表鬼臼毒素（GP-7）对多药耐药人慢性粒细胞白血病K562的多柔比星耐药株细胞（K562／ADM细胞）的抑制作用是否优于依托泊苷。方法以依托泊苷和K562细胞... 详细信息

目的比较4-[4”-（2”，2”，6”，6”．四甲基-1”-哌啶氮氧自由基）氨基]4’-去甲表鬼臼毒素（GP-7）对多药耐药人慢性粒细胞白血病K562的多柔比星耐药株细胞（K562／ADM细胞）的抑制作用是否优于依托泊苷。方法以依托泊苷和K562细胞为对照，用不同浓度GP-7处理K562／ADM细胞不同时间，MTT比色法测定细胞增殖，流式细胞仪测定细胞周期和细胞凋亡率，普通光学显微镜观察细胞凋亡形态，琼脂糖凝胶电泳观察细胞DNA凋亡性降解。结果8～128mol·L^-1GP-7处理48h或64μmol·L^-1GP-7处理24～72h，GP-7对K562／ADM细胞的增殖抑制呈剂量依赖性（r=0．947，P〈0．05）和时间依赖性（r=0．999，P〈0．01）。GP-7及依托泊苷对K562／ADM的IC∞分别为（45．9±1．8）及（68．7±4．6）***·L^-1；64μmol·L^-1GP-7作用48h可使G2／M期细胞明显增多，相同情况下依托泊苷则使S期细胞明显增多；GP-7可引起K562／ADM和K562细胞凋亡，但其引起的K562／ADM和K562细胞凋亡率与依托泊苷无明显差异；GP-7可引起K562／ADM和K562细胞典型的凋亡形态学变化和DNA凋亡性降解，但GP-7引起的K562／ADM细胞DNA凋亡性降解弱于K562细胞；128及256μmol·L^-1GP-7或依托泊苷处理K562／ADM和K562细胞48h，GP-7诱导DNA凋亡性降解的作用强于依托泊苷，但32和64μmol·L^-1时作用则相反。结论GP-7可抑制多药耐药白血病细胞株K562／ADM的增殖，诱导细胞凋亡。GP-7抑制多药耐药白血病细胞株K562／ADM的作用优于依托泊苷。

关键词：鬼臼毒素白血病髓样慢性细胞凋亡抗药性多药

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单个流体包裹体成分激光剥蚀原位分析方法及其在矿床学中的应用

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大地构造与成矿学 2025年第1期49卷 130-141页

作者：高振丽杨武斌屈潘中国科学院广州地球化学研究所矿物学与成矿学重点实验室/广东省矿物物理与材料研究开发重点实验室广东广州510640

流体包裹体是矿物晶体生长过程中或生长后被捕获的微小珠滴,可以直接保存有关古流体的物理和化学信息,被广泛应用于矿床学研究。单个流体包裹体激光剥蚀分析能够原位测量流体包裹体中的多种元素组成,是有效检测成矿流体组成的重要分析手... 详细信息

流体包裹体是矿物晶体生长过程中或生长后被捕获的微小珠滴,可以直接保存有关古流体的物理和化学信息,被广泛应用于矿床学研究。单个流体包裹体激光剥蚀分析能够原位测量流体包裹体中的多种元素组成,是有效检测成矿流体组成的重要分析手段,目前主要有LA-ICP-MS、LIBS和LA-ICP-AES等方法,其中以LA-ICP-MS的优势最为明显。本文对流体包裹体原位分析过程中包裹体选择策略、包裹体剥蚀方法、检测测量方法及其定量计算原理等方面的研究进展进行综述,并认为光谱和质谱的联用分析技术可以有效地提高分析精确度和准确度,是未来单个流体包裹体原位分析应该重点发展的方向。同时,总结了近年来单个流体包裹体成分分析在矿床学研究中的重要应用和贡献,包括成矿流体的来源、成矿元素的迁移和沉淀过程。

关键词：流体包裹体微区分析激光剥蚀电感耦合等离子质谱仪激光诱导击穿光谱仪

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人胎中后期腭扁桃体组织结构特征及其CD20和CD3阳性细胞的表达

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免疫学杂志 2011年第4期27卷 297-300页

作者：胡蓉苏敏黄悦李红许庭良姜俸蓉贵阳医学院组织学与胚胎学教研室 550004

目的从形态学角度探讨人胎中后期腭扁桃体组织结构特征及其CD20和CD3阳性细胞的表达情况。方法收集6～10月龄因故终止妊娠人胎腭扁桃体25例,用组织学常规H-E染色显示其组织结构,免疫组织化学SP法染色显示阳性细胞并用BioMiaspro图象分... 详细信息

目的从形态学角度探讨人胎中后期腭扁桃体组织结构特征及其CD20和CD3阳性细胞的表达情况。方法收集6～10月龄因故终止妊娠人胎腭扁桃体25例,用组织学常规H-E染色显示其组织结构,免疫组织化学SP法染色显示阳性细胞并用BioMiaspro图象分析软件计数。结果自6月龄起,人胎早期形成的腭扁桃体雏形逐渐完善,固有层增厚,弥散淋巴组织和初级淋巴小结增多,已有大量淋巴细胞表达CD20或CD3。至8月龄起,腭扁桃体隐窝上皮内始见毛细血管浸润。邻片对照显示,CD20阳性细不仅大量分布于淋巴小结,且在弥散淋巴组织和隐窝上皮内也较多;CD3阳性细胞则主要分布于弥散淋巴组织,淋巴小结和隐窝上皮内皆较少。细胞计数显示6～10月龄人胎腭扁桃体,2种阳性细胞数量随胎龄增加逐渐增多(P<0.05),但CD20阳性细胞占绝大多数(P<0.05)。结论 8月龄起,人胎腭扁桃体形态结构基本成熟;人胎腭扁桃体具有潜在的CD20和CD3合成和释放能力,对胎儿免疫功能的建立和健全发挥着重要作用。

关键词： CD20 CD3 免疫组织化学腭扁桃体人胎

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人乳腺癌表皮生长因子受体2低表达的病理特征及动态变化分析

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包头医学院学报 2025年第2期41卷 69-74页

作者：王梦琪白雪峰赵志英包头医学院人体解剖学教研室内蒙古包头014040 包头市肿瘤医院病理科

目的:研究人乳腺癌表皮生长因子受体2(human epithelial growth factor receptor-2,HER2)低表达的病理特征,通过RT-qPCR检测HER2的表达水平,追踪从穿刺活检到接受新辅助化疗后HER2表达的演变,探索其新辅助化疗的疗效。方法:选取2019年1... 详细信息

目的:研究人乳腺癌表皮生长因子受体2(human epithelial growth factor receptor-2,HER2)低表达的病理特征,通过RT-qPCR检测HER2的表达水平,追踪从穿刺活检到接受新辅助化疗后HER2表达的演变,探索其新辅助化疗的疗效。方法:选取2019年1月-2022年12月包头市肿瘤医院收治的293例浸润性乳腺癌患者(HER2阴性型134例,HER2低表达型159例),分别应用FISH及RT-qPCR检测两组患者HER2表达水平。结果:与HER2阴性组相比,HER2低表达组在雌激素受体(estrogen receptor,ER)、孕激素受体(progesterone receptor,PR)、Miller-Payne(MP)分级、P53及淋巴结转移差异具有统计学意义(P<0.05);与年龄(P=0.731)差异无统计学意义;FISH检测结果显示两组数据显著重叠;RT-qPCR检测mRNA表达量,两组差异具有统计学意义(P<0.001);采用ROC曲线明确最佳阈值为184.18;RT-qPCR与IHC相比,两种检测方法的一致性为0.502,属中等水平;新辅助化疗前后,HER2不一致的发生率为39.8%;HER2状态与获得pCR的概率之间存在密切相关(P=0.005)。结论:乳腺癌HER2低表达与阴性的病理特征不同。RT-qPCR检测HER2 mRNA的表达量可作为IHC检测HER2低表达的补充技术。HER2的表达在新辅助治疗后表现出高度不稳定性。此外,HER2低表达乳腺癌患者的新辅助化疗的疗效较差。

关键词：乳腺癌人类表皮生长因子受体2低表达病理特征动态变化

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